[精选]任务1-2-1谷氨酸生产菌.pptx

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1、1-2谷氨酸生产菌谷氨酸生产菌1 12 23 34 4 谷氨酸生产菌谷氨酸生产菌国内谷氨酸生产菌特性比较国内谷氨酸生产菌特性比较谷氨酸生产菌在发酵过程中的形态变化谷氨酸生产菌在发酵过程中的形态变化谷氨酸发酵的代谢控制育种策略谷氨酸发酵的代谢控制育种策略5 5 6 6 菌种的扩大培养及种子的质量要求菌种的扩大培养及种子的质量要求 菌种的保藏与复壮菌种的保藏与复壮一、谷氨酸生产菌种类与特征一、谷氨酸生产菌种类与特征一现有谷氨酸生产菌的分类一现有谷氨酸生产菌的分类 现有谷氨酸生产菌主要是棒状杆菌属、短杆菌属、现有谷氨酸生产菌主要是棒状杆菌属、短杆菌属、小杆菌属及节杆菌属中的细菌。小杆菌属及节杆菌属中

2、的细菌。1.1.棒状杆菌属棒状杆菌属CorynebacteriumCorynebacterium直直到到微微弯弯的的杆杆菌菌，一一端端膨膨大大呈呈棒棒状状，折折断断分分裂裂形形成成“八八字字形形或或栅栅状状排排列列。葡葡萄萄糖糖发酵产酸，发酵产酸，G G+2 2 短杆菌属短杆菌属BrevibacteriumBrevibacterium 短的不分枝直杆菌。短的不分枝直杆菌。多数从葡萄糖发酵产酸，多数从葡萄糖发酵产酸，不发酵乳糖。不发酵乳糖。G G+3 3 小杆菌属小杆菌属MicrobacteriumMicrobacterium 形态与棒状杆菌相似。形态与棒状杆菌相似。发酵葡萄糖产酸弱，主发酵葡萄

3、糖产酸弱，主要产乳酸。要产乳酸。G G+4 4 节杆菌属节杆菌属ArthrobacteriumArthrobacterium 培养过程中，细胞形态变化较大培养过程中，细胞形态变化较大球球菌菌 杆杆菌菌，杆杆菌菌 球菌。球菌。G G+G G-,G G-G G+能液化明胶，能液化明胶，从碳水化合物从碳水化合物产酸极少或不产酸极少或不产酸。产酸。二谷氨酸生成菌的主要特征二谷氨酸生成菌的主要特征1 1细胞形态球形、棒状以及短杆状。细胞形态球形、棒状以及短杆状。2 2G G+，无芽孢、无鞭毛，不能运动。，无芽孢、无鞭毛，不能运动。3 3需氧型、生物素缺陷型微生物。需氧型、生物素缺陷型微生物。4 4脲酶强

4、阳性脲酶强阳性5 5不分解淀粉、纤维素、油脂、酪蛋白不分解淀粉、纤维素、油脂、酪蛋白以及明胶。以及明胶。6 6发酵中菌体发生明显的形态变化，同发酵中菌体发生明显的形态变化，同时发生细胞膜渗透性的变化。时发生细胞膜渗透性的变化。7 7COCO2 2固定反响酶系活力强。固定反响酶系活力强。8 8异柠檬酸裂解酶活力弱，乙醛酸循环异柠檬酸裂解酶活力弱，乙醛酸循环弱。弱。9 9-酮戊二酸氧化能力微弱。酮戊二酸氧化能力微弱。1010NADPH2NADPH2进入呼吸链能力弱。进入呼吸链能力弱。1111柠檬酸合成酶、乌头酸梅、异柠檬柠檬酸合成酶、乌头酸梅、异柠檬酸脱氢酶以及谷氨酸脱氢酶活力强。酸脱氢酶以及谷氨

5、酸脱氢酶活力强。1212能利用醋酸，不能利用石蜡。能利用醋酸，不能利用石蜡。1313具有向环境中泄露谷氨酸的能力。具有向环境中泄露谷氨酸的能力。1414不分解利用谷氨酸，并能耐高浓度不分解利用谷氨酸，并能耐高浓度的谷氨酸，产谷氨酸的谷氨酸，产谷氨酸5%5%以上。以上。二、国内谷氨酸生产菌特性比较二、国内谷氨酸生产菌特性比较 1 1、形态特征、形态特征 短短杆杆至至小小棒棒状状，有有时时微微弯弯曲曲，两两端端钝钝圆圆，不不分分枝，呈多种形态。枝，呈多种形态。单个、成对及单个、成对及“V V字形排列。字形排列。G+G+。胞内有横隔。不运动。无芽孢。胞内有横隔。不运动。无芽孢。一北京棒杆菌一北京棒杆

6、菌AS1299AS1299的形态和生理特征的形态和生理特征2 2、培养特征、培养特征普通肉汁琼脂平板：菌落圆形，普通肉汁琼脂平板：菌落圆形，24h24h白白色，色，48h48h淡黄色，中央隆起，外表湿润、淡黄色，中央隆起，外表湿润、光滑，有光泽，边缘整齐且呈半透明状，光滑，有光泽，边缘整齐且呈半透明状，无黏性，不产生水溶性色素。无黏性，不产生水溶性色素。3 3、生理特征、生理特征 对氧的要求：好氧及兼性厌氧。与温度的关系：菌株2637 培养生长良好，不耐高温，41 生长较弱。pH的影响：Ph510均能生长，最适 pH67.5。复原硝酸盐：反映强烈。石蕊牛奶培养：7d后微产碱。不水解淀粉，不分解

7、纤维素。对尿素的耐力，2.6%以上生长受抑制。脲酶试验：强阳性反响。产酸物质的测定：G、果糖、甘露糖、蔗糖、麦芽糖迅速产酸。生长因素试验：生物素是必需生长因素。硫胺素明显促生长。二钝齿棒杆菌二钝齿棒杆菌AS1542AS1542的形态和生理特征的形态和生理特征1 1、形态特征形态特征 短杆至棒状，有时微弯曲，两端钝短杆至棒状，有时微弯曲，两端钝圆，不分枝。单个、成对及圆，不分枝。单个、成对及“V V字形排字形排列。列。折断分裂。折断分裂。G G+。胞内有横隔。不运动。无芽孢。胞内有横隔。不运动。无芽孢。2 2、培养特征培养特征普通肉汁琼脂平板：菌落圆形，近草黄色，普通肉汁琼脂平板：菌落圆形，近草

8、黄色，外表湿润、光滑，无光泽，边缘顿齿状，较薄，外表湿润、光滑，无光泽，边缘顿齿状，较薄，半透明，无黏性，不产生水溶性色素。半透明，无黏性，不产生水溶性色素。对氧的要求：兼性厌氧。与温度的关系：菌株2037 培养生长良好，不耐高温，42 不生长。pH的影响：pH69生长良好，pH10生长微弱，pH45已不能生长。复原硝酸盐：反映强烈。石蕊牛奶培养：7d后微产碱。水解淀粉，不分解纤维素。对尿素的耐力，2.6%以上生长受抑制。脲酶试验：强阳性反响。产酸物质的测定：G、果糖、甘露糖、蔗糖、麦芽糖、水杨苷、七叶灵等迅速产酸。生长因素试验：生物素是必需生长因子。3 3、生理特征、生理特征三天津短杆菌三天

9、津短杆菌T613T613的形态和生理特征的形态和生理特征典型的短杆状，有时微弯曲，两端稍典型的短杆状，有时微弯曲，两端稍钝圆，不分枝。单个、成对及钝圆，不分枝。单个、成对及“V V字形排列。折断分裂。字形排列。折断分裂。G G+。不运动。无芽孢。不运动。无芽孢。1 1、形态特征、形态特征2 2、培养特征、培养特征 普通肉汁琼脂平板：菌落圆形，浅普通肉汁琼脂平板：菌落圆形，浅黄色，黄色，外表湿润、光滑，隆起，边缘外表湿润、光滑，隆起，边缘整齐，较薄，半透明，无黏性，不产生整齐，较薄，半透明，无黏性，不产生水溶性色素。水溶性色素。3 3、生理特征、生理特征 对氧的要求：好氧及兼性厌氧。与温度的关系

10、：菌株2637 培养生长良好，75 处理10min不再生长。pH的影响：pH610生长良好，pH5生长微弱，pH4和pH11已不能生长。复原硝酸盐：反映强烈。不水解淀粉，不分解纤维素。对尿素的耐力，5%以上生长受抑制。脲酶试验：强阳性反响。产酸物质的测定：G、果糖、甘露糖、蔗糖、麦芽糖、水杨苷、七叶灵 生长因素试验：生物素是必需生长因子。硫胺素是促生长作用。四北京棒杆菌四北京棒杆菌73387338与钝齿棒与钝齿棒杆菌杆菌B9B9的比较的比较后提取容后提取容易，收率易，收率较高，质较高，质量较好量较好分泌色分泌色素较多素较多2.5 2.5 天津短杆菌天津短杆菌T613T613与钝齿与钝齿杆菌杆菌

11、B9B9的比较的比较 T613T613感染感染噬菌体时，噬菌体时，不能换用不能换用B9B9，调换，调换7338.7338.三、谷氨酸生产菌的筛选三、谷氨酸生产菌的筛选什么是筛选？什么是筛选？如何筛选？如何筛选？1.1.采样采样在哪采？如何采？2.2.别离别离别离什么？3.3.初筛初筛鉴别！4.4.复筛复筛产量！5.5.发酵实验发酵实验黄色短杆菌黄色短杆菌北京棒杆菌北京棒杆菌杆状细菌四、菌种选育四、菌种选育谷氨酸菌体的选育方法主要有五谷氨酸菌体的选育方法主要有五种，自然选育、诱变选育、杂交种，自然选育、诱变选育、杂交选育、代谢控制选育和基因工程选育、代谢控制选育和基因工程选育。选育。一自然选育一

12、自然选育以基因自发突变为基础。以基因自发突变为基础。有利于谷氨酸产生菌保持纯系良种，使谷氨酸生产有利于谷氨酸产生菌保持纯系良种，使谷氨酸生产具有相对稳定性，提高发酵水平。具有相对稳定性，提高发酵水平。缺点：菌体自身存在着修复机制和某些酶的校正作缺点：菌体自身存在着修复机制和某些酶的校正作用，使得自发突变率极低，导致选育耗时长、工作用，使得自发突变率极低，导致选育耗时长、工作量大、效率低。量大、效率低。也称自然别离，是指对微生物细胞群体不经过人工也称自然别离，是指对微生物细胞群体不经过人工处理而直接进行筛选的育种方法。处理而直接进行筛选的育种方法。二诱变选育二诱变选育 物理因素：紫外线、物理因素

13、：紫外线、60Co、X射线、射线、-射线、快中射线、快中子、子、-射线、射线、-射线、超声波、射线、超声波、He-Ne激光辐照、激光辐照、离子束等。离子束等。化学因素：氮芥、亚硝基胍、硫酸二乙酯、甲基磺化学因素：氮芥、亚硝基胍、硫酸二乙酯、甲基磺酸乙酯、亚硝基甲基脲、亚硝酸、酸乙酯、亚硝基甲基脲、亚硝酸、5-氟尿嘧啶、氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶等。溴尿嘧啶等。其它因素：生物诱导因子，如噬菌体诱发抗性突变其它因素：生物诱导因子，如噬菌体诱发抗性突变等。等。例：例：王岁楼；张一震；李志。谷氨酸高产菌王岁楼；张一震；李志。谷氨酸高产菌TZ-310TZ-310的诱变的诱变选育及其发酵的研究选育及其发酵的研

14、究。中国调味品中国调味品，19971997年年 0909期期。以天津短杆菌以天津短杆菌-为出发菌株，经为出发菌株，经射线、紫外线和硫酸二乙酯复合诱变并经高温驯化，射线、紫外线和硫酸二乙酯复合诱变并经高温驯化，获得一株琥珀酸和生物素双营养缺陷型突变株。该菌获得一株琥珀酸和生物素双营养缺陷型突变株。该菌株具有耐高糖、耐高谷氨酸、不分解利用株具有耐高糖、耐高谷氨酸、不分解利用及耐高温及耐高温的优点。的优点。原生质体融合就是将两个亲株的细胞壁分别通过酶解作原生质体融合就是将两个亲株的细胞壁分别通过酶解作用加以剥除，制得原生质体或原生质球，在高渗条件下用加以剥除，制得原生质体或原生质球，在高渗条件下混合

15、，由聚乙二醇混合，由聚乙二醇PEG助融，促使原生质体凝集、助融，促使原生质体凝集、融合，两个基因组之间接触、交换、遗传重组，在再生融合，两个基因组之间接触、交换、遗传重组，在再生细胞中获得重组体。细胞中获得重组体。三杂交育种三杂交育种杂交育种杂交育种常规杂交常规杂交原生质体融合原生质体融合谷氨酸产生菌的前处理谷氨酸产生菌的前处理因为其有着特殊的细胞壁结构，对溶菌酶一般不因为其有着特殊的细胞壁结构，对溶菌酶一般不敏感。敏感。方法：参加方法：参加EDTA乙二胺四乙酸乙二胺四乙酸、甘氨酸、青霉素、甘氨酸、青霉素和和D-环丝氨酸等，这些物质可以使细胞壁变得疏环丝氨酸等，这些物质可以使细胞壁变得疏松，便

16、于溶菌酶处理。松，便于溶菌酶处理。如，李蒲兴等将如，李蒲兴等将6株谷氨酸产生菌以株谷氨酸产生菌以甘氨酸、青霉素和溶菌酶的不同组合甘氨酸、青霉素和溶菌酶的不同组合处理，对其原生质体形成进行比较，处理，对其原生质体形成进行比较，在最正确条件下，原生质体形成率可在最正确条件下，原生质体形成率可达达95100。张蓓等以谷氨酸产生菌天津短杆菌张蓓等以谷氨酸产生菌天津短杆菌T6-13为出发菌株，获得了具有目的遗传为出发菌株，获得了具有目的遗传标记寡霉素抗性标记寡霉素抗性Orm和氟乙酸抗性和氟乙酸抗性FEAr的突变株的突变株TN63和和TN115。然。然后，分别以后，分别以TN63和和TN115为亲株，通为

17、亲株，通过原生质体融合，获得了具有过原生质体融合，获得了具有Orm+FEAr标记的融合子标记的融合子FTN9108，其原，其原生质体融合频率为生质体融合频率为2.610-3。OrmFEAr+OrmFEArOrmFEAr四代谢控制选育四代谢控制选育 以诱变育种为基础，获得以诱变育种为基础，获得各种解除或绕过微生物正各种解除或绕过微生物正常代谢途径的突变株，从常代谢途径的突变株，从而人为地使有用产物选择而人为地使有用产物选择性地大量生成积累。性地大量生成积累。Glu产生菌产生菌诱变育种诱变育种突变株突变株代谢控制发酵代谢控制发酵大量积累大量积累Glu1.选育耐高糖、高谷氨酸的菌株选育耐高糖、高谷氨

18、酸的菌株 如选育在含如选育在含2030葡萄糖的平板上生长良好的葡萄糖的平板上生长良好的耐高糖突变株；耐高糖突变株；在含在含15 20味精的平板上生长良好的耐高谷氨味精的平板上生长良好的耐高谷氨酸突变株；酸突变株；在在20的葡萄糖加的葡萄糖加15味精的平板上生长良好的耐味精的平板上生长良好的耐高糖、耐高谷氨酸的菌株。高糖、耐高谷氨酸的菌株。2.选育能强化谷氨酸合成代谢、削弱或阻断选育能强化谷氨酸合成代谢、削弱或阻断支路代谢的菌株支路代谢的菌株1选育不分解利选育不分解利用谷氨酸的突变株用谷氨酸的突变株 选育在以谷氨酸为选育在以谷氨酸为唯一碳源培养基上唯一碳源培养基上不长或生长微弱的不长或生长微弱的

19、突变株突变株。谷氨酸谷氨酸谷氨酰胺鸟氨酸瓜氨酸精氨酸2选育强化选育强化CO2固定反响的突变株固定反响的突变株 a.选育以琥珀酸或苹果酸为唯一碳源，生长良好的选育以琥珀酸或苹果酸为唯一碳源，生长良好的菌株。因为细胞内碳代谢必须走四碳二羧酸的脱羧菌株。因为细胞内碳代谢必须走四碳二羧酸的脱羧反响，该反响与反响，该反响与C02固定反响是相同酶所催化，固定反响是相同酶所催化，C02固定反响相应地加强。固定反响相应地加强。b.选育氟丙酮酸敏感突变株。选育氟丙酮酸敏感突变株。因为氟丙酮酸是丙酮酸脱氢酶的抑制剂，即抑制因为氟丙酮酸是丙酮酸脱氢酶的抑制剂，即抑制丙酮酸向乙酰丙酮酸向乙酰CoA转化，相应地转化，相

20、应地CO2固定反响加强。固定反响加强。突变株对氟丙酮酸越敏感，效果越理想。突变株对氟丙酮酸越敏感，效果越理想。c.选育减弱乙醛酸循环的突变株。选育减弱乙醛酸循环的突变株。乙醛酸循环减弱不仅能使乙醛酸循环减弱不仅能使C02固定反响比例增大，固定反响比例增大，而且异柠檬酸也能高效率地转化为而且异柠檬酸也能高效率地转化为-酮戊二酸，再酮戊二酸，再生成谷氨酸。常见的该突变株有琥珀酸敏感型突生成谷氨酸。常见的该突变株有琥珀酸敏感型突变株和不分解利用乙酸的突变株。变株和不分解利用乙酸的突变株。3选育解除谷氨酸对谷氨酸脱氢酶反响调节的选育解除谷氨酸对谷氨酸脱氢酶反响调节的突变株突变株 有酮基丙二酸抗性突变株

21、、谷氨酸结构类似物抗性有酮基丙二酸抗性突变株、谷氨酸结构类似物抗性突变株和谷氨酰胺抗性突变株。突变株和谷氨酰胺抗性突变株。草酰乙酸草酰乙酸谷氨酸转氨酶谷氨酸转氨酶天冬氨酸天冬氨酸+-酮戊二酸酮戊二酸谷氨酸谷氨酸-酮戊二酸酮戊二酸NH3谷氨酸脱氢酶谷氨酸脱氢酶4选育强化能量代谢的突变株选育强化能量代谢的突变株 原因：使原因：使TCA循环前一段代谢加强，谷氨酸合成速循环前一段代谢加强，谷氨酸合成速率加快。率加快。a.选育呼吸链抑制剂抗性突变株选育呼吸链抑制剂抗性突变株 如可选育丙二如可选育丙二酸、氧化丙二酸、氰化钾、氰化钠抗性突变株来酸、氧化丙二酸、氰化钾、氰化钠抗性突变株来实现。实现。b.选育选

22、育ADP磷酸化抑制剂抗性突变株磷酸化抑制剂抗性突变株 如可选育如可选育2,4-二硝基酚、羟胺、砷、胍等抗性突变株来实二硝基酚、羟胺、砷、胍等抗性突变株来实现。现。c.选育抑制能量代谢的抗生素的抗性突变株选育抑制能量代谢的抗生素的抗性突变株 如如可选育缬氨霉素、寡霉素等抗性突变株来实现。可选育缬氨霉素、寡霉素等抗性突变株来实现。5其它遗传标记其它遗传标记 选育莽草酸缺陷型、抗嘌呤嘧啶类似物、抗核苷酸选育莽草酸缺陷型、抗嘌呤嘧啶类似物、抗核苷酸类抗生素、异亮氨酸缺陷、蛋氨酸缺陷、苯丙氨酸类抗生素、异亮氨酸缺陷、蛋氨酸缺陷、苯丙氨酸缺陷、缺陷、AEC抗性、抗性、AHV抗性、棕榈酰谷氨酸等突抗性、棕榈

23、酰谷氨酸等突变株，都可以不同程度地提高谷氨酸产量。变株，都可以不同程度地提高谷氨酸产量。3.选育能提高谷氨酸通透性的菌株选育能提高谷氨酸通透性的菌株 1选育生物素缺陷型菌株。选育生物素缺陷型菌株。2选育油酸缺陷型菌株。选育油酸缺陷型菌株。3选育甘油缺陷型菌株。选育甘油缺陷型菌株。4选育温度敏感型突变株选育温度敏感型突变株 突变位置发生在决定与谷氨酸分泌有密切关系的细胞膜突变位置发生在决定与谷氨酸分泌有密切关系的细胞膜结构的基因上，发生碱基的转换或颠换，一个碱基为另一结构的基因上，发生碱基的转换或颠换，一个碱基为另一个碱基所置换，这样为基因所控制的酶在高温下失活，导个碱基所置换，这样为基因所控制

24、的酶在高温下失活，导致细胞膜某些结构的改变。致细胞膜某些结构的改变。另一个特点是在生物素丰富的培养基上也能分泌出谷氨另一个特点是在生物素丰富的培养基上也能分泌出谷氨酸。酸。5其它突变型菌株其它突变型菌株抗药性、溶菌酶敏感型、二氨基庚二酸缺陷型、乙抗药性、溶菌酶敏感型、二氨基庚二酸缺陷型、乙酸缺陷型、棕榈酰谷氨酸敏感型突变株等，都能增酸缺陷型、棕榈酰谷氨酸敏感型突变株等，都能增强谷氨酸的通透性。强谷氨酸的通透性。五基因工程选育五基因工程选育 基因工程育种是指利用基因工程方法对产生菌株进基因工程育种是指利用基因工程方法对产生菌株进行改造而获得高产工程菌，或者是通过微生物间的行改造而获得高产工程菌，

25、或者是通过微生物间的转基因而获得新菌种的育种方法。转基因而获得新菌种的育种方法。载体系统载体系统：一般以质粒、噬菌体或转座子作为载体，尤以质粒为：一般以质粒、噬菌体或转座子作为载体，尤以质粒为多。多。受体系统受体系统：受体菌选用短杆菌属和棒杆菌属的野生菌或变异株。：受体菌选用短杆菌属和棒杆菌属的野生菌或变异株。供体菌株：供体菌株选择短杆菌属及棒杆菌属的野生菌或变异供体菌株：供体菌株选择短杆菌属及棒杆菌属的野生菌或变异株。株。工具酶：切割供体工具酶：切割供体DNA和载体和载体DNA的工具酶的工具酶限制性内切限制性内切核酸酶有许多种，核酸酶有许多种，Hind、Bcl I、Xba I和和Xam I效

26、果最好。效果最好。载体系统载体系统 受体系统受体系统 供体菌株供体菌株 工具酶工具酶 谷氨酸产生菌的许多关键酶的基因已被克隆，谷氨酸产生菌的许多关键酶的基因已被克隆，Ozaki等克等克隆了谷氨酸棒杆菌的分枝酸变位酶和预苯酸脱水酶基因，隆了谷氨酸棒杆菌的分枝酸变位酶和预苯酸脱水酶基因，通过质粒载体导回谷氨酸棒杆菌，产量提高了通过质粒载体导回谷氨酸棒杆菌，产量提高了50。周盛等从大肠杆菌周盛等从大肠杆菌E.coli k-12中通过中通过PCR克隆出磷酸果糖克隆出磷酸果糖激酶编码基因激酶编码基因pfkA，将其连到表达载体，连接构建成，将其连到表达载体，连接构建成重组质粒重组质粒pKu-1，转化谷氨酸

27、棒杆菌，转化谷氨酸棒杆菌B4，并得到表达；酶，并得到表达；酶活性测定说明活性测定说明pf-kA基因表达活力为基因表达活力为128.6o.86ug的蛋白。的蛋白。同时，转化子菌株对糖转化率比同时，转化子菌株对糖转化率比B4高高10.64，产酸率比，产酸率比B4高高17.1。五、菌种保藏与复壮五、菌种保藏与复壮保藏原理：挑选优良品种，抑制微生物的代谢活性，创造休眠环境。保藏要求：保持菌种优良特性，经济方便。保藏后使用前需再次检测和确定保藏菌种的形态学和生化特征如代谢产物的产生、酶活力、遗传特征及生化指标。一保藏方法1 低温冷冻保藏；2 转接培养或斜面传代保藏；3 矿物油保藏；4 土壤或陶瓷珠等载体

28、枯燥保藏。1 低温冷冻保藏-20以下冷冻，使微生物代谢活动停止以下冷冻，使微生物代谢活动停止分类：普通冷冻保藏分类：普通冷冻保藏-20 超低温冷冻保藏超低温冷冻保藏-60一一-80 冻干保藏冻干保藏 液氮冷冻保藏液氮冷冻保藏特点：简单有效特点：简单有效 培养物运输较困难培养物运输较困难超低温冷冻保藏超低温冷冻保藏-60-80超低温冰箱的冷冻速度一般控制在超低温冰箱的冷冻速度一般控制在1-2min。一些细菌和真菌菌种可保藏一些细菌和真菌菌种可保藏5年而活力不受影响。年而活力不受影响。冻干保藏冻干保藏 是通过在减压条件下使冻结的细胞悬液中的水分升华，使培养物枯燥。此是通过在减压条件下使冻结的细胞悬

29、液中的水分升华，使培养物枯燥。此法是微生物菌种长期保藏的最为有效的方法之一。法是微生物菌种长期保藏的最为有效的方法之一。特点：特点：冻干状态下一般可保藏冻干状态下一般可保藏10年不丧失活力。冻干后的菌株可常温保存，便于运年不丧失活力。冻干后的菌株可常温保存，便于运输。输。必须使用冷冻保护剂，常用脱脂乳、蔗糖等。必须使用冷冻保护剂，常用脱脂乳、蔗糖等。液氮冷冻保藏液氮冷冻保藏此法除适宜于一般微生物的保藏外，对一些用冷冻枯燥法都难以保存的微生物如支原体、衣原体、氢细菌、难以形成孢子的霉菌、噬菌体及动物细胞均可长期保藏，而且性状不变异。缺点是缺点是需要特殊设备 2传代保藏传代保藏斜面培养基，平行传代

30、，普通冰箱，三个月以下保存，供试验用。斜面培养基，平行传代，普通冰箱，三个月以下保存，供试验用。3矿物油保藏矿物油保藏将琼脂斜面培养物直立浸入矿物油中于将琼脂斜面培养物直立浸入矿物油中于46下保藏，简便有效，下保藏，简便有效，可用于丝状真菌、酵母、细菌和放线菌的保藏。特别用于难以冷冻可用于丝状真菌、酵母、细菌和放线菌的保藏。特别用于难以冷冻枯燥的丝状真菌和难以在固体培养基上形成孢子的担子菌。枯燥的丝状真菌和难以在固体培养基上形成孢子的担子菌。保存时间保存时间12年。年。4载体保藏载体保藏麦壳，砂土灭菌后可用作载体,培养好的微生物细胞或孢子用无菌水制成悬浮液,注入灭菌的沙土管中混合均匀，或直接将

31、成熟孢子刮下接种于灭菌的沙土管中，使微生物细胞或孢子吸附在沙土载体上，将管中水分抽干后熔封管口或置枯燥器中于46或室温进行保存的一种菌种保藏方法。多用于产抗生素菌种。保藏时间210年。二菌种衰退二菌种衰退二菌种衰退二菌种衰退衰退：菌种在培养或保藏过程中，由于自发突变的存在，出现某 些原有优良生产性状的劣化、遗传标记的丧失等现象，称为菌种的衰退。衰退的表现：生长，代谢产品衰退的原因：保藏不妥，连续传代，回复突变等防止衰退的方法：合理培养条件，减少传代次数复壮：使衰退的菌种回复原来的性状。纯种别离：平板划线、稀释平板法、涂布法通过寄主体内生长进行复壮：对寄生性菌株淘汰已衰退个体：不良理化条件，淘汰

32、弱菌株狭义的复壮狭义的复壮是指在菌种已发生衰退的情况下，通过纯种别离和生产性能测定等方法，从衰退的群体中找出未衰退的个体，以到达恢复该菌原有典型性状的措施；广义的复壮广义的复壮是指在菌种的生产性能未衰退前就有意识的经常进行纯种的别离和生产性能测定工作，以期菌种的生产性能逐步提高。实际上是利用自发突变正变不断地从生产中选种。三菌种的复壮纯种别离：平板划线法、涂布法、倾注法、单细胞挑纯种别离：平板划线法、涂布法、倾注法、单细胞挑取法等。取法等。通过寄主体内生长进行复壮如通过寄主体内生长进行复壮如杀螟杆菌的杀螟杆菌的复壮；复壮；淘汰已衰退的个体采用比较剧烈的理化条件进行处理，淘汰已衰退的个体采用比较

33、剧烈的理化条件进行处理，以杀死生命力较差的已衰退个体。以杀死生命力较差的已衰退个体。联合复壮，用高剂量的紫外线辐射和低剂量的亚硝基胍联合复壮，用高剂量的紫外线辐射和低剂量的亚硝基胍联合处理联合处理菌种的复壮措施菌种的复壮措施菌种的复壮措施菌种的复壮措施MOMODA POWERPOINTLorem ipsum dolor sit amet,consectetur adipiscing elit.Fusce id urna blandit,eleifend nulla ac,fringilla purus.Nulla iaculis tempor felis ut cursus.感感 谢谢 您您 的的 下下 载载 观观 看看专家告诉