植物学实验教程.pdf
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1、 SHNU 生命与环境科学学院生命与环境科学学院 植物学教研室植物学教研室 2007 年年 2 月月 植物学实验教程植物学实验教程 i 前前 言言 植物学是生物科学中的一门基础课程,是其他与植物相关课程的基础,植物学实验也是生物学专业的一门基础性实验课程,开好植物学实验对提高学生的专业水平,培养对生物专业的兴趣和爱好具有重要的意义。传统的植物学实验强调验证和巩固课堂教学所获得的理论知识,忽视了对学生基本能力的培训和对学生学习兴趣的激发,不利于提高学生的独立分析和综合研究能力。本教程是在参考多种植物学教材和实验指导的基础上,依据我校新修订的植物学实验教学大纲的要求,结合本地区自然状况及我校教学的
2、实际情况,并总结了我们多年来的教学和科研经验编写而成。编写的基本原则是注重培养学生的基本实验技能,发挥学生的创造性,激发学生的学习兴趣,培养学生的独立进行实验和研究的能力。尤其是在种子植物形态结构方面进行了较大改革,选择一种植物为对象,同时观察其根茎叶的形态和结构,突出营养器官之间的相互联系与过渡。本教程注重实验材料的代表性和普适性,力争使本书成为能力培养型的实验指导。本书的实验设计分为基本技能实验、观察验证性实验、研究性实验和综合性实验四种类型。基本技能实验基本技能实验侧重于培养学生的基本实验技能,如使用显微镜的技能,绘图的技能,制作植物切片的技能、编写花程式、绘制花图式、编制检索表等,该类
3、型实验通常与观察验证性实验相结合,但侧重点有所不同。观察验证性实验观察验证性实验主要侧重于培养学生的理论和实践相结合的能力,能够把理论上学到的知识通过实践的方法加以验证,多数实验属于这种类型。研究性实验研究性实验主要培养学生进行科学研究的能力,针对某一问题进行实验设计,得出研究成果,并提交研究报告。综合性实验综合性实验是综合运用所学的知识进行问题的总结和分析,设计研究课题,进行科学研究或调查,得出研究结果,并进行讨论和分析,它主要培养学生的综合研究能力。全书共设计了 21 个实验,每次实验 2-3 学时,由于实验数量较多,教师可根据实际情况进行选择或合并。本教程可作为高等师范院校或综合性院校植
4、物学专业学生的实验指导,也可供农、林、医药院校相关专业的教师或学生的参考。因编者水平有限,纰漏和错误在所难免,请专家、老师和同学批评指正。编者 2007 年 2 月 ii 实验室管理制度实验室管理制度 1.实验室是进行科学实验,培养严谨求实作风,启发思维创新的场所,必须持严肃科学的态度。2.实验室必须保持清洁,仪器设备要摆放整齐、安全规范。4.凡进入实验室工作学习的人员必须着装整洁,服从本室工作人员的管理,遵守实验室的规章制度;借用的实验仪器在实验结束后清点归还。5.实验前需进行认真准备,明确实验目的,掌握实验的基本原理、实验方法、操作步骤等,了解有关仪器设备的配置、性能,熟悉操作规程及安全注
5、意事项。6.科学实验中应规范操作、细致观察、如实记录并及时整理实验数据,完成实验报告。7.爱护实验材料,不得损坏永久装片,不将实验材料随意丢弃。8.爱护仪器设备设施及其它物品,严格按操作规程使用仪器,发现设备故障或其它异常情况时应立即采取应急措施并及时报告。9.实验结束后将物品归还原处,打扫室内卫生,废弃物倒入指定地点,注意关闭仪器设备、关闭电源、关水,关门窗。iii 目目 录录 前 言 实验一 植物学实验的基本研究方法 1 实验二 植物细胞的基本结构与代谢产物 7 实验三 植物细胞有丝分裂 10 实验四 植物的组织 13 实验五 藻类代表植物的观察 16 实验六 菌物和地衣代表植物的观察 1
6、9 实验七 苔藓植物代表类型的观察 21 实验八 蕨类植物代表类型的观察 25 实验九 双子叶草本植物营养器官的形态和结构 27 实验十 双子叶木本植物形态解剖构造的观察 30 实验十一 单子叶植物形态解剖构造的观察 33 实验十二 种子植物营养器官及其变态的观察 36 实验十三 种子植物生殖器官的形成及发育 42 实验十四 种子植物生殖器官的形态结构类型 46 实验十五 裸子植物代表植物的观察 50 实验十六 被子植物分类(一)52 实验十七 被子植物分类(二)55 实验十八 被子植物分类(三)59 实验十九 校园植物调查报告 61 实验二十 植物标本的采集、制作、鉴定方法 62 实验二十一
7、 植物生物学研究报告 67 -1-实验一实验一 植物学实验的基本研究方法植物学实验的基本研究方法 植物学主要是研究植物的形态、结构、分类和生活史特征的一门科学,其基本的研究方法包括各种切片的制作和显微镜观察;记录植物形态结构的方法则包括生物绘图、照相等方法。对于生物专业本专科生而言,只要学会临时封片、徒手切片、显微镜使用和生物绘图技术就足够了。本实验的核心是掌握显微镜的使用方法和生物绘图方法,了解植物制片的过程和方法。一、实验目的一、实验目的 1.培养学生掌握植物学研究的基本方法、养成良好的实验习惯、打下良好的实验基础。2.了解显微镜的基本结构,工作原理,并掌握其使用方法。3.了解常用的植物制
8、片技术。4.掌握生物绘图的基本方法。5.通过观察生物材料(洋葱表皮细胞)来熟悉和掌握显微镜的使用、临时封片制作和生物绘图技术等。二、实验用仪器和试剂:二、实验用仪器和试剂:显微镜、刀片、摄子、解剖针、载玻片、盖玻片、培养皿、滴管。三、实验材料:三、实验材料:洋葱鳞叶,洋葱表皮细胞永久封片,橡皮树叶片。四、实验内容四、实验内容(一)显微镜的构造和使用(一)显微镜的构造和使用 1.显微镜的结构及各部分的作用:显微镜的结构及各部分的作用:普通生物显微镜由 3 部分构成,即:机械装置,用于固定材料和观察方便;照明系统,包括光源和聚光器;光学放大系统,由物镜和目镜组成,是显微镜的主体(图 1.1)。图图
9、 1.1 普通光学显微镜的基本构造普通光学显微镜的基本构造(1)机械装置机械装置 镜镜 座座:位于显微镜的底部,用来支持显微镜的其它部分,稳定镜身;镜镜 臂臂:连接镜座和其它部分的结构,也是用手握镜的部位;载物台载物台:放置载玻片或标本的平台。中央有通光孔,简单的显微镜载物台两旁各有一个压片夹,用于固定所观察的载玻片;高级显微镜的载物台上通常安装有载玻片推进器,可使载玻片或标本前后左右移动。镜镜 筒筒:上端装目镜,下端有转换器,在转换器上装有物镜。物镜转换器物镜转换器:位于镜筒下端,圆盘状,上面通常有 5 个圆孔,用于安装物镜。调焦螺旋调焦螺旋:有粗细之分。粗调焦螺旋(又称粗调),转动时镜筒或
10、载物台升降的幅度大,用于低倍物镜和粗调焦时使用;细调焦螺旋(又称细调),转动时镜筒或载物台升降的幅度小,用于高倍物镜和细调焦时使用。(2)照明系统照明系统 反光镜反光镜/集光器集光器:简单的光学显微镜,依靠反光镜反射自然光或灯光来提供光源;高级的光-2-学显微镜,自身都配备了集光器,内有电光源,可通过调节电流的强弱和光圈的大小来调节光线的强弱和视野的大小。遮光器遮光器/聚光器聚光器:简单的光学显微镜,遮光器上面有大小不等的圆孔,叫光圈。每个光圈都可以对准载物台上的通光孔,用来调节光线的强弱:大光圈:光线强,视野亮;小光圈:光线弱,视野暗。高级的光学显微镜,可通过调节聚光器内虹彩光圈(孔径光阑)
11、的大小来调节光线的强弱。若将虹彩光圈放大,图像的亮度增高,分辨率增加,而反差减小;若将虹彩光圈缩小,图像亮度降低,分辨力下降,但反差增大。因此,在观察时要调节聚光器彩虹光圈以达到适当的反差和良好的分辨率。通常情况下,可通过调节光源和聚光器或配合调节以达到最佳观察效果。(3)光学放大系统光学放大系统 物物 镜镜:是显微镜最重要的光学部件,安装在物镜转换器上,规格通常有 4 倍(4)、10 倍(10)、20 倍(20)、40 倍(40)和 100 倍(100),其中 100 倍的为油镜,使用时物镜与盖玻片之间要加香柏油,以提高分辨率。物镜上的数字,表示镜头的主要性能参数,如 10 倍镜头上的数字有
12、:“10/0.25”和“160/0.17”。它们的含义是:“10”表示放大倍数,“0.25”表示镜口率(或称数值孔径,numeric aperture,数值越大分辨率越高);“160”为镜筒长度(mm),“0.17”为所要求的盖玻片厚度。齐焦齐焦:当用某一倍率的物镜观察图像清晰后,再转换另一倍率的物镜时,其成像应基本清晰,即齐焦。合轴合轴:物镜转换时,像的中心应在视野中央允许的范围内,即合轴。齐焦性能的优劣和合轴的程度是显微镜质量好坏的重要标志。目目 镜镜:装在镜筒的上端,规格通常 10、16倍等。放大倍数放大倍数:=目镜放大倍数物镜放大倍数的积。2.光学显微镜的成像原理光学显微镜的成像原理
13、显微镜的工作原理主要是根据透镜的成像原理进行设计制作的,即当物距 2f uf,成倒立的放大的实像;当物距 uf,成正立的放大的虚像。要放大的物体位于物镜的前方 2倍焦距和焦距之间,经过物镜的放大作用在目镜的焦点之内形成一个放大的倒置的实像,这个实像在目镜的同侧形成一个放大的虚像(图 1.2)。图图 1.2 显微镜的工作原理显微镜的工作原理 通过物镜、目镜等光学器件构成放大光路,使所得虚像 AB的距离恰好等于人眼的 明视距离250 毫米,获得将标本放大的虚像。(明视距离:明视距离:人眼的晶状体相当于焦距可调的凸透镜,视网膜便是光屏,也就是说人眼成像的像距基本一定,而通过晶状体调焦使物距不同的物体
14、成像。介于晶状体的调焦能力,物距小于 10cm 的物体是无法在视网膜上成清晰像的,即人眼看不清楚距眼睛 10cm 以内的物体,我们称之为“近点”,当物体物距为 25cm时,成的像最清晰,我们称“明视距离”。)光线反光镜遮光器/聚光器通光孔标本物镜(第一次放大成倒立实像)镜筒目镜(再放大成虚像)眼。3.光学显微镜的使用方法光学显微镜的使用方法(1)取镜和放置取镜和放置:取出显微镜时要右手握镜臂,左手握镜座;把显微镜置于实验台上,要小心轻放,放置于实验台中部略偏左的位置,以便于观察和绘图。-3-(2)对光:对光:转动转换器,使低倍镜对准通光孔(镜头和载物台间距离约 2 厘米);左眼注视目镜,转动反
15、光镜,直致见到一个圆形的明亮区域,叫做“视场”。视场的光线要均匀、明亮、不刺激眼睛。高级的显微镜下面是集光器,只需调节电流强度即可。(3)观察(先低后高):观察(先低后高):低倍镜观察(通常为 4物镜):A置标本于载物台上,用压片夹或推进器将载玻片固定,将所要观察的材料正对聚光器的中央。B转动粗调焦螺旋,使镜筒或者载物台升降,直至物像清晰。使用时要倍加小心,不能使物镜靠上载玻片,以免压坏玻璃片或损伤物镜。C用粗调焦螺旋调节看清物像后,再转动细调焦螺旋,使物像更加清晰,或调清楚所要观察的结构。高倍镜观察:低倍镜的视野较宽,在低倍镜下找到要观察的部位后,把它移到中央,转动转换器,换上高倍物镜,然后
16、调节细调焦螺旋、光圈和反光镜(或光源),把物像调到最清晰。要使用 100物镜观察时,物镜与盖玻片之间要加香柏油,以提高分辨率;用油镜观察完毕后,转开油镜,必须用擦镜纸和二甲苯擦去镜头上的香柏油。4.显微镜使用练习:显微镜使用练习:使用显微镜时要注意的事项:一定要先低倍,后高倍;观察:先低后高。注意粗、细调焦螺旋的配合使用。注意显微镜的齐焦、同轴性能。注意聚光镜的孔径光阑对分辨率和反差的影响。(二)常用的植物制片技术(二)常用的植物制片技术 植物制片技术是观察植物内部形态结构的主要手段之一,常用的有徒手切片法、压片法、石蜡切片法和树脂切片法等。(1)临时封片临时封片:是植物学实验中最常用的观察植
17、物形态结构的方法之一。基本方法是:准备好载玻片、盖玻片,擦拭时要小心,以免弄碎玻片;在载玻片的中央滴一滴蒸馏水,用镊子或解剖针取植物材料置于水滴上,并使材料展开或分散均匀;盖上盖玻片,方法是用镊子夹住盖玻片的一边,另一边与水滴的边缘接触,然后慢慢放下盖玻片,这样可避免混入气泡。如盖玻片下水过多,可用吸水纸吸掉多余的水。做好的封片可直接放在显微镜下观察。练习:练习:撕取洋葱鳞叶的内表皮进行临时封片练习,注意盖盖玻片的方法。(2)徒手切片法徒手切片法:徒手球片法是植物学研究中一种常用的制片方法,基本方法是用左手的拇指和食指捏住材料,材料略高出指尖,以免切时伤及手指。右手握住刀片,通常使用锋利的双面
18、刀片,材料和刀片浸润清水,以减少磨察,切割时用臂力带动刀片自左前方向右后方做水平切割移动,割下许多切片后,用湿笔将切下的薄片轻轻移入盛水的培养皿中,从中挑选薄而透明的切片,放在载波片的水滴中,加上盖玻片制成临时制片进行观察。练习:练习:以橡皮树叶片为材料进行徒手切片练习,直至切出完整透明的薄片,然后放在显微镜下观察。(3)压片法压片法:也是植物学研究和实验中常用的制片技术,如斯取植物部分的表皮细胞进行压片观察。该法常还常应用于植物染色体的观察,通常要经过取材、预处理、固定、解离、染色、压片、镜检和封固等过程。(4)石蜡切片法石蜡切片法:时将材料包埋在石蜡中进行切片的一种制片方法,该方法能将材料
19、切成 10 微米左右的连续切片,是对植物材料进行光学显微镜研究的一种最常用方法。(5)离析法离析法 离析法的原理是用一些化学药品配成离析液,使细胞的胞间层溶解,因而细胞彼此分离,获得分散的、单个的完整细胞,以便观察不同组织的细胞形态和特征。离析液的种类很多,最常用的有铬酸硝酸离析液,是以 10%铬酸液和 10%硝酸液等量混合而成。适用于木质化的组织,如导管、管胞、纤维、石细胞等。方法如下:将植物材料切成小块或小条状,截面约 1 平方毫米,长约 1 厘米,放入小瓶中,加-4-入离析液,其量约为材料的 10 倍,盖紧瓶塞,放在 40左右的温箱中,约经 1-2 天。具体浸渍的时间依材料块的大小而定。
20、草本植物可不必加温。检查材料是否离析:以细胞间的胞间层溶解,细胞彼此能够分离为准。可取出材料少许,放在载玻片上的水滴中,加盖玻片,轻轻敲压,若材料分离表明浸渍时间已够。洗酸保存:倒去离析液,用清水浸洗已离析好的材料,直至没有任何黄色为止,转移至 70%酒精中保存备用。需要时,可按临时装片法制片观察,亦可制成永久性的玻片标本。除了上述常用的植物制片方法外,还有整体封固制片法,其与临时制片相似,不再赘述。(三)生物绘图(三)生物绘图 记录植物形态结构的方法包括绘图法、照相法(光镜 电镜 胶片 数码)、录像法等。其中绘图法是最常用的方法之一。1.生物绘图的特点生物绘图的特点 生物绘图是形象描述生物外
21、部形态和内部结构的一种重要的科学记录方法,通常用点线图的形式来描绘。它与艺术绘图有很大的不同,生物绘图具有以下基本特征:生物绘图要具有科学性,能真实地反映生物的形态结构,不能缺失应具备的结构。比例要正确,绘制各种器官的长短和大小一定要按照实物的比例进行绘制,避免出现比例失调的现象。层次要分明,能正确地反映各个部位的明亮程度、颜色深浅或质地的疏密程度等。2.生物绘图的步骤生物绘图的步骤(1)细心观察:绘图前要对观察的对象(植物细胞、组织、器官或外形等)进行细致的观察,对各部分的位置、比例、特征等有完整的认识,充分利用所学的理论知识,能将正常的结构与偶然的、人为造成的假象区分开。(2)起稿(勾画轮
22、廓):是勾画轮廓的过程,要根据绘图纸的大小,绘图的数量,确定某个图在纸上的位置和大小,注意整体布局,避免图像过大或过小或偏斜,并注意留有引线和注字的位置。将会图纸放在显微镜的右侧,左眼观察显微镜图像,右眼看绘图纸绘图。先用软铅笔(HB)绘草图,确定观察对象的轮廓和结构。(3)定稿(落实整形):对草图进行修正和补充,用硬铅笔(2H 或 3H)将全图绘出。要求用点线图表示生物的形态和结构,要求用线条表示轮廓和各部分的界限,线条要均匀,光滑,不可时粗时细,不可时深时浅或时虚时实。用圆点表示观察各部位的明暗或颜色深浅。即“点点衬阴发”,点密表示背光、凹陷或色彩重的部位;点疏表示向光、突出或色彩轻的部位
23、;打点的方法是铅笔垂直向下打点,切忌采用艺术画的方法绘图。(4)标注名称 标注名称是用直线指明要标注的部位,标注相应的名称,一般可分为直接标注(直接写出各部分名称)和间接标注(先用 1、2、3、表示各个部分,然后在图的下方写出各标号的实际名称)。引指示线时要注意两点:1.指示的部位要典型,具有代表性;2.指示线要尽量引向图的右侧;3.要尽量避免指示线的迂回、交叉,以免混淆各部分结构。(5)核实绘图内容,保持画面整洁。用橡皮把轮廓线、虚线等轻轻擦掉,用纱布或脱脂棉除去碎屑。最后在图的下方写出本图名称。-5-图图 1.3 生物绘图示例生物绘图示例 (四)洋葱表皮细胞观察(四)洋葱表皮细胞观察 首先
24、在干净的载玻片中央加一滴蒸馏水,然后取洋葱鳞茎剥去外皮较老的鳞叶,用摄子撕取一小块鳞叶内表皮放在载玻片水滴上,用解剖针将其展平,再用摄子夹取一干净的盖玻片,将其一边放于载玻片上,和水面接触,另一边慢慢放下,以免产生气泡,妨碍观察。如水不足,沿盖玻片边缘滴加,如边缘水分过多,可用纱布拭去,这样做成临时装片后,就可放置显微镜下观察。先用低倍镜观察,再选择一个清晰的细胞用高倍镜仔细观察细胞形状及各部分构造,可见洋葱鳞片叶表皮细胞多数呈长方形,外为细胞壁细胞壁,内有无色细胞质和细胞核,圆形的细胞核内可见到个更小的折光较强的核仁。由于洋葱表皮细胞较为透明,故必须缩小虹彩光圈(聚光器光阑),避免光线过强,
25、看不清楚。然后,从盖玻片一边加入滴碘液,用吸水纸从盖玻片另一边吸去蒸馏水,使碘液透入材料中,这时细胞核细胞核染成黄褐色,细胞质细胞质染成浅黄色,液泡颜色较淡。-6-图图 1.4 洋葱表皮细胞洋葱表皮细胞 问题和思考:问题和思考:1.反光镜或集光器上的污点能否通过反射出现在视野中?载玻片上的污点能否出现在视野中?为什么?2.如何判断污点在何处(在载玻片、目镜或物镜上)。细胞质细胞核 细胞壁 液 泡-7-实验二实验二 植物细胞的基本结构与代谢产物植物细胞的基本结构与代谢产物 一、目的要求:一、目的要求:1.熟悉临时封片的方法。2.掌握光学显微镜下植物细胞的基本构造。3.了解植物细胞中普遍存在的几种
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