生物化学实验07 血清胆固醇的定量测定-磷硫铁法电子课件 .pptx

《生物化学实验07 血清胆固醇的定量测定-磷硫铁法电子课件 .pptx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《生物化学实验07 血清胆固醇的定量测定-磷硫铁法电子课件 .pptx（9页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、生物化学实验07 血清胆固醇的定量测定-磷硫铁法电子课件 生物化学实验技术生物化学实验技术血清胆固醇的定量测定（磷硫铁法）实验类型：综合性实验类型：综合性实验类型：综合性实验类型：综合性教学时数：教学时数：教学时数：教学时数：3 3生物化学实验技术一、实验目的一、实验目的掌握掌握磷硫铁法测定血清胆固醇的原理和方磷硫铁法测定血清胆固醇的原理和方法。法。生物化学实验技术二、实验二、实验原理原理血清血清经无水乙醇处理，蛋白质被沉淀，胆固经无水乙醇处理，蛋白质被沉淀，胆固醇及其酯溶解在无水乙醇。在乙醇提取液中，加醇及其酯溶解在无水乙醇。在乙醇提取液中，加磷硫铁试剂，胆固醇及其酯与试剂形成比较稳定磷硫铁

2、试剂，胆固醇及其酯与试剂形成比较稳定的紫红色化合物，此物质在的紫红色化合物，此物质在560nm波长处有特征波长处有特征吸收峰，可用比色法作胆固醇的定量测定。正常吸收峰，可用比色法作胆固醇的定量测定。正常血清中胆固醇的含量有随年龄增大而增加的趋势，血清中胆固醇的含量有随年龄增大而增加的趋势，其平均正常值在其平均正常值在110220mg/100mL。胆固醇胆固醇含量在含量在400mg/100mL内，与内，与A（或（或OD）值呈良好线性关系。）值呈良好线性关系。生物化学实验技术三、仪器与试剂三、仪器与试剂1、10三氯化铁三氯化铁溶液溶液2、磷硫铁、磷硫铁试剂试剂3、胆固醇标准储、胆固醇标准储液液4、

3、胆固醇、胆固醇标准溶液标准溶液生物化学实验技术四、实验内容四、实验内容吸取吸取血清血清0.1mL于干燥离心管，先加无水于干燥离心管，先加无水乙醇乙醇0.4mL，摇匀后再加无水乙醇，摇匀后再加无水乙醇2.0mL，摇匀，摇匀，10分钟后离心（分钟后离心（3000rpm，5min），），上清夜备上清夜备用用。生物化学实验技术取取干燥试管干燥试管3支，编号，按下表加入试剂。支，编号，按下表加入试剂。硫磷铁试剂须沿管壁缓缓加入，与乙醇液分成硫磷铁试剂须沿管壁缓缓加入，与乙醇液分成两层，立即迅速振摇两层，立即迅速振摇20次次，冷却，冷却至至室温后室温后，于，于560nm进行比进行比色。色。管号管号/试剂试

4、剂测定管测定管标准管标准管空白管空白管乙醇抽提液乙醇抽提液1.0mL胆固醇标准液胆固醇标准液1.0mL无水乙醇无水乙醇1.0mL磷硫铁试剂磷硫铁试剂1.0mL1.0mL1.0mLA(OD)生物化学实验技术五、结果与五、结果与计算计算1、通过、通过制作标准曲线来求得血清胆固醇的含制作标准曲线来求得血清胆固醇的含量。量。2、因、因胆固醇含量在胆固醇含量在400mg/100mL内，与内，与A（或（或OD）值呈良好线性关系，可由吸光值）值呈良好线性关系，可由吸光值A的比值的比值求其含量求其含量A2/A1=C2/C1，本实验即用此法。，本实验即用此法。生物化学实验技术3、如按方法、如按方法1使用血清为样品，亦可根据线性使用血清为样品，亦可根据线性关系计算：关系计算：血清血清胆固醇胆固醇（mg/100mL）=(A2/A1)0.08(100/0.04)=(A2/A1)200A2=标准液吸光值；标准液吸光值；A1=样品液吸光样品液吸光值值