非禽源外源病毒检测课件药典宣贯用发企业.ppt

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1、非禽源外源病毒检测课件药典宣贯用发企业1、外源病毒、外源病毒污污染的主要来源染的主要来源2、外源病毒、外源病毒检验检验的主要材料的主要材料3、2021年版年版?中国中国兽药兽药典典?非禽源外源病毒非禽源外源病毒检验检验的的新新变变化及关化及关键键点解析点解析4、非禽源外源病毒、非禽源外源病毒检测实检测实例展示例展示 红细红细胞吸附性外源病毒胞吸附性外源病毒检测检测 致致细细胞病胞病变检查变检查法法 荧荧光抗体光抗体检查检查法法5、病毒室可提供的、病毒室可提供的标标准物准物质质及及检测试剂检测试剂盒盒6、关于相关、关于相关问题问题的回的回应应1 外源病毒污染的主要来源 1.1 种毒种毒 (包括原

2、始种毒、根底种毒、包括原始种毒、根底种毒、生产种毒生产种毒种毒在疫苗生产的作用至关重要，在种毒在疫苗生产的作用至关重要，在某种程度上它是疫苗内在质量和属性某种程度上它是疫苗内在质量和属性特点的决定因素。如果种毒污染了外特点的决定因素。如果种毒污染了外源病毒，通过逐级培养放大作用，必源病毒，通过逐级培养放大作用，必然会影响到疫苗的质量。然会影响到疫苗的质量。因此，生物制品生产中使用的种毒必因此，生物制品生产中使用的种毒必须来源清楚，历史背景明确，并建立须来源清楚，历史背景明确，并建立严格的种毒种子批制度，强调对种毒严格的种毒种子批制度，强调对种毒的外源病毒检测工作。的外源病毒检测工作。如某企业产

3、品检验时提供的检验强如某企业产品检验时提供的检验强毒污染了高致病性毒污染了高致病性PRRSV。1.2 生产原辅材料生产原辅材料 指培养繁殖疫苗病毒所需的原辅指培养繁殖疫苗病毒所需的原辅材料，主要包括：材料，主要包括：细胞原代细胞、传代细胞，如细胞原代细胞、传代细胞，如PK15细胞污染细胞污染PCV1鸡胚如污染鸡胚如污染ALV、REV、CIAV等等动物组织如生产猪瘟组织毒疫苗的动物组织如生产猪瘟组织毒疫苗的兔脾淋、肌肉或实质脏器等污染了兔兔脾淋、肌肉或实质脏器等污染了兔瘟病毒瘟病毒牛血清牛血清 如如BVDV污染污染其他：如胰酶、血浆等其他：如胰酶、血浆等检验项目检验项目检测结果检测结果普通胚源普

4、通胚源SPFSPF胚源胚源阳性阳性/批数批数阳性率阳性率(%)(%)阳性阳性/批数批数阳性率阳性率(%)(%)阳性阳性/批数批数阳性率阳性率(%)(%)ALVALV24/11124/11121.621.621/7321/7328.828.83/383/387.97.9REVREV8/2038/2033.93.9/8/2038/2033.93.9CIAVCIAV9/1109/1108.28.28/778/7710.410.41/33(1/33(进口苗）进口苗）3 3合计合计41/42441/4249.79.729/15029/15019.319.312/27412/2744.44.41.3 生产

5、环境及操作过程造成污染生产环境及操作过程造成污染 良好的生产环境和标准的操作程良好的生产环境和标准的操作程序是生产合格产品的必要条件。生产企序是生产合格产品的必要条件。生产企业实施业实施GMP管理就是创造良好生产条件管理就是创造良好生产条件的重要手段，也是生产生物制品的必要的重要手段，也是生产生物制品的必要条件。如清场不彻底，空调系统故障，条件。如清场不彻底，空调系统故障，共用区域管理不标准等共用区域管理不标准等 1.4 人为添加违规成分人为添加违规成分 如在疫苗中违规添加未经批准的如在疫苗中违规添加未经批准的流行毒株或不同血清型的毒株等。流行毒株或不同血清型的毒株等。2 外源病毒污染主要检查

6、的材料2.1 种毒：种毒：包括根底种毒、生产种毒、工作种毒包括根底种毒、生产种毒、工作种毒2.2 细胞细胞：包括原代细胞、传代细胞包括原代细胞、传代细胞2.3 制品制品1活疫苗活疫苗：指病毒性活疫苗指病毒性活疫苗2其它生物制品其它生物制品：如用于治疗目的的抗血清、如用于治疗目的的抗血清、用作生产原材料的血清等用作生产原材料的血清等.3 2021年版?中国兽药典?非禽源外源病毒检验的新变化及关键点解析 与2005年版?中国兽药典?相比，2021年版中“非禽源外源病毒检验的新变化可归纳为“三个明确，三个调整。三个明确：1、明确了外源病毒检验时细胞种类的选择原那么2、明确了外源病毒检验时接种样品的剂

7、量3、明确了样品接种后细胞的最少培养时间和最少继代次数三个调整：1、调整了非禽源外源病毒检验三种方法的层次关系2、调整了荧光抗体检测法每种细胞及制品应选择的荧光抗体种类3、调整了红细胞吸附性外源病毒检验中使用红细胞的类别“三个明确1、明确了细胞的选择原那么、明确了细胞的选择原那么旧版：绿猴肾旧版：绿猴肾Vero传代细胞和相应的敏感细胞。传代细胞和相应的敏感细胞。2021版：版：1绿猴肾绿猴肾Vero传代细胞；传代细胞；2疫苗靶动物疫苗靶动物的胚胎细胞，或新生动物细胞，或细胞系。的胚胎细胞，或新生动物细胞，或细胞系。表表1 不同非禽源细胞及其制品外源病毒检验法选用的细胞不同非禽源细胞及其制品外源

8、病毒检验法选用的细胞见下页见下页2、明确了接种样品的剂量、明确了接种样品的剂量旧版：未明确规定接种量。旧版：未明确规定接种量。2021版：至少版：至少1.0ml疫苗制品至少含疫苗制品至少含10头份。当待检验的头份。当待检验的疫苗病毒不感染选用的细胞或不使选用细胞产生细胞病变疫苗病毒不感染选用的细胞或不使选用细胞产生细胞病变且不引起红细胞吸附时，不需用血清中和，检验时接种剂且不引起红细胞吸附时，不需用血清中和，检验时接种剂量达量达10头份及以上。头份及以上。制苗用细胞来源制苗用细胞来源或疫苗靶动物或疫苗靶动物荧光抗体检查法荧光抗体检查法 致细胞病变检查法致细胞病变检查法和红细胞吸附性外源病和红细

9、胞吸附性外源病毒检验毒检验 待检外源待检外源选用细胞选用细胞猪猪BVDV牛睾丸细胞或牛睾丸细胞或BT或或MDBK（1*）Vero、PK15或或STPPVPK15或或STCSFVPK15或或ST牛牛BVDV牛睾丸细胞或牛睾丸细胞或BT或或MDBKVero、牛睾丸细胞或、牛睾丸细胞或BT或或MDBKBTV（*2）羊羊BVDV牛睾丸细胞或牛睾丸细胞或BT或或MDBKVero、绵羊睾丸细胞或、绵羊睾丸细胞或山羊肾细胞山羊肾细胞BTV（*2）犬犬BVDV牛睾丸细胞或牛睾丸细胞或BT或或MDBKVero、MDCK、CRFK或或F81RVVero或或BHK21CPVCRFK或或F81马马BVDV牛睾丸细胞或

10、牛睾丸细胞或BT或或MDBKVero、马源敏感细胞、马源敏感细胞马传染性贫血病毒马传染性贫血病毒马源敏感细胞（马源敏感细胞（*3）表表1 不同非禽源细胞及其制品外源病毒检验法选用的细胞不同非禽源细胞及其制品外源病毒检验法选用的细胞注：注：*1对于猪瘟活疫苗荧光抗体检测法中对对于猪瘟活疫苗荧光抗体检测法中对BVDV的检验应选择的检验应选择BT或或MDBK细胞。细胞。*2牛、绵羊和山羊牛、绵羊和山羊制品如污染制品如污染BTV，可引起，可引起Vero或绵羊睾丸细胞的或绵羊睾丸细胞的CPE，通过致细胞病变检查法检出外源，通过致细胞病变检查法检出外源BTV。*3马传染性马传染性贫血病毒暂无相关活疫苗。贫

11、血病毒暂无相关活疫苗。中国兽医药品监察所3 3、明确了最少培养时间和最少继代次数、明确了最少培养时间和最少继代次数旧版：连传旧版：连传2 2代，每代代，每代7 7日。日。20212021版：样品接种细胞后总培养时间应不少于版：样品接种细胞后总培养时间应不少于1414日，培日，培养期间应至少继代养期间应至少继代1 1次，在满足总原那么的根底上，规定次，在满足总原那么的根底上，规定了采用不同方法最终检验时所用的细胞应培养的最少时了采用不同方法最终检验时所用的细胞应培养的最少时间，即荧光抗体检查法使用的细胞应培养间，即荧光抗体检查法使用的细胞应培养5 57 7日，致细日，致细胞病变和红细胞吸附性外源

12、病毒检验使用的细胞应至少胞病变和红细胞吸附性外源病毒检验使用的细胞应至少培养培养7 7日。日。鉴于以上原那么和要求，外源病毒检验时采用鉴于以上原那么和要求，外源病毒检验时采用传代细胞应该是首选，但具体的细胞传代过程培养时传代细胞应该是首选，但具体的细胞传代过程培养时间、传代次数应根据细胞的生长特性而定。间、传代次数应根据细胞的生长特性而定。“三个调整1 1、调整了三种检验方法的层次关系、调整了三种检验方法的层次关系旧版：荧光抗体检查法、绿猴肾旧版：荧光抗体检查法、绿猴肾Vero)Vero)细胞传代法同细胞传代法同时做荧光抗体检查、致细胞病变和红细胞吸附试验、时做荧光抗体检查、致细胞病变和红细胞

13、吸附试验、致细胞病变和红细胞吸附性的检验。致细胞病变和红细胞吸附性的检验。20212021年版：在明确细胞种类选择的前提下，将年版：在明确细胞种类选择的前提下，将20052005年版年版中中“致细胞病变检查法和红细胞吸附性外源病毒检验致细胞病变检查法和红细胞吸附性外源病毒检验一项拆分为两个并列的检验工程，保存了荧光抗体检查一项拆分为两个并列的检验工程，保存了荧光抗体检查法，删除了法，删除了“绿猴肾绿猴肾VeroVero传代细胞检查法，传代细胞检查法，而而在细胞选择项中明确了在细胞选择项中明确了VeroVero细胞为必选细胞，使得非禽细胞为必选细胞，使得非禽源外源病毒检验的层次关系更趋清晰，防止

14、了检验工程源外源病毒检验的层次关系更趋清晰，防止了检验工程间的穿插，便于理解和执行。间的穿插，便于理解和执行。2 2、调整了红细胞吸附性外源病毒检验使用红细胞的种类、调整了红细胞吸附性外源病毒检验使用红细胞的种类旧版：豚鼠红细胞旧版：豚鼠红细胞+人人“O“O型红细胞型红细胞+鸡红细胞鸡红细胞20212021年版：豚鼠红细胞年版：豚鼠红细胞+鸡红细胞鸡红细胞3、调整了应选择的、调整了应选择的荧光抗体荧光抗体种类：种类：中国兽医药品监察所细胞来源细胞来源旧版旧版2010年版年版猪源细胞猪源细胞BVDV、PRV、PPV、HCVBVDV、PPV、HCV牛源细胞牛源细胞BVDV、BTVBVDV、BTV羊

15、源细胞羊源细胞BVDV、BTVBVDV、BTV犬源细胞犬源细胞RVBVDV、RV、CPV马源细胞马源细胞马传染性贫血病毒马传染性贫血病毒BVDV、马传染性贫血病、马传染性贫血病毒毒检验时需重点说明的几个问题 1、关于样品处理问题 取样品23瓶。对毒种或活疫苗进展检验时，将样品混合，其中疫苗制品1ml稀释液中应至少含10头份另有规定除外，8000g离心10min后取上清备用；对细胞培养面积需大于75cm2进展检验时，经3次冻融后混合作为检品。毒种和活疫苗样品的具体处理如下：1不需进展血清中和的条件：如毒种或疫苗病毒不感染所选用的细胞或对所选用的细胞不产生细胞病变和不引起红细胞吸附时，不进展血清中

16、和。2血清中和不完全时：需要中和的样品，选择单特异性血清进展中和，如对检品中病毒中和不完全时，可用效价更高的血清重做。3特殊情况的处理：根据病毒特性，适当对毒种或疫苗进展稀释，但接种量最低不得低于1头份如对于宠物类单剂量活疫苗。不同疫苗处理方法见表2下页。表表2 2 常见疫苗样品处理方法常见疫苗样品处理方法疫苗种类疫苗种类荧光抗体检测法荧光抗体检测法致细胞病变检查法致细胞病变检查法和红细胞吸附性外源病毒检验和红细胞吸附性外源病毒检验猪瘟活疫苗猪瘟活疫苗不中和不中和不中和不中和猪繁殖与呼吸综合征活疫苗猪繁殖与呼吸综合征活疫苗中和中和中和中和高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗高致病性猪繁殖与呼吸综合

17、征活疫苗中和中和中和中和猪乙型脑炎活疫苗猪乙型脑炎活疫苗中和中和中和中和猪伪狂犬病活疫苗猪伪狂犬病活疫苗中和中和中和中和狂犬病活疫苗（狂犬病活疫苗（FLury株）株）不中和不中和中和中和犬瘟热、腺病毒病、细小病毒病、副流犬瘟热、腺病毒病、细小病毒病、副流感病毒感病毒2型呼吸道感染四联活疫苗型呼吸道感染四联活疫苗中和中和中和中和犬瘟热、细小病毒病二联活疫苗犬瘟热、细小病毒病二联活疫苗中和中和中和中和山羊痘活疫苗山羊痘活疫苗中和中和中和中和水貂犬瘟热活疫苗水貂犬瘟热活疫苗中和中和中和中和狐狸脑炎活疫苗（狐狸脑炎活疫苗（CAV-2C株）株）中和中和中和中和小反刍兽疫活疫苗小反刍兽疫活疫苗中和中和中和

18、中和犬细小病毒活疫苗犬细小病毒活疫苗中和中和中和中和2、关于荧光抗体检查法的阳性对照病毒的选择问题、关于荧光抗体检查法的阳性对照病毒的选择问题可采用可采用FA或或IFA方法，参考毒种和检测试剂请联系菌种保方法，参考毒种和检测试剂请联系菌种保藏室。中监所目前提供可检测藏室。中监所目前提供可检测BVDV、CSFV、PPV三种病三种病毒的毒的3种种IFA检测试剂盒检测试剂盒200头份头份/盒，约可检盒，约可检10批疫苗。批疫苗。制苗细胞来源制苗细胞来源或疫苗靶动物或疫苗靶动物待检外源病毒待检外源病毒选用细胞选用细胞阳性对照参考毒株阳性对照参考毒株所有靶动物所有靶动物BVDVMDBK、BT或牛睾丸细胞

19、 Oregon C24V株、NADL株猪猪PPVPK15或STNADL-2株、7909株CSFVPK15或STThiverval株（法国）牛、绵羊和山牛、绵羊和山羊羊BTVVero或绵羊睾丸细胞暂无犬犬RVVero或BHK21CVS-11株CPVCRFK或F81CPV-DD株马源细胞马源细胞EIAVVero或驴白细胞暂无3、关于禽源材料制备的非禽用制品的外源病毒检测如猪伪狂犬病毒活疫苗等 按非禽源细胞及其制品外源病毒检验方法执行。4其它非禽源外源病毒检测方法的应用 研发单位在产品申报注册时，采用的其它方法进展的外源病毒检测，经农业部兽药评审委员会评定，认可通过的其它外源病毒检测方法，仍可作为该

20、产品认可的外源病毒检测方法。如，猪伪狂犬病活疫苗HB-98株、水貂犬瘟热活疫苗等。4 非禽源外源病毒检测实例展示 红细胞吸附性病毒检测猪PPV感染PK15猪猪PPV感染感染PK15细胞吸附红细胞细胞吸附红细胞(豚鼠豚鼠+鸡鸡)现象现象(右图右图)和正常和正常PK15细胞对照细胞对照(左图左图)CAV 红细胞吸附试验 CPIV红细胞吸附试验 正常细胞对照犬腺病毒和犬副流感病毒感染犬腺病毒和犬副流感病毒感染NLDK细胞细胞4.2 4.2 致细胞病变检查法致细胞病变检查法4.2.1 4.2.1 常见细胞病变常见细胞病变CPE)CPE)特点：特点：1 1细胞的折光率增强，形态逐渐变圆，感染细胞细胞的折

21、光率增强，形态逐渐变圆，感染细胞由局部感染扩展到整个单层，细胞死亡、脱落。如：肠由局部感染扩展到整个单层，细胞死亡、脱落。如：肠道病毒、伪狂犬病毒等。道病毒、伪狂犬病毒等。2 2细胞聚集成丛，类似葡萄串状，细胞之间常有细细胞聚集成丛，类似葡萄串状，细胞之间常有细丝状细胞间桥连接，细胞变圆或膨大。如大多数腺病毒。丝状细胞间桥连接，细胞变圆或膨大。如大多数腺病毒。3 3细胞融合形成多核巨细胞，又称为合胞体。如副细胞融合形成多核巨细胞，又称为合胞体。如副粘病毒。粘病毒。4 4胞浆中有空泡形成。如呼肠孤病毒、胞浆中有空泡形成。如呼肠孤病毒、SV40SV40等。等。BVDV C24V株感染株感染MDBK

22、细胞细胞CPE(右图右图,200X)和正常和正常MDBK细胞对照细胞对照(左图左图,200XBVDV C24V株感染牛睾丸细胞CPE(右图，100X)和正常牛睾丸细胞(左图,100X)PRRS 病毒感染病毒感染Mark 145细胞细胞CPE(右图右图,100X)和正常和正常Mark 145细胞对照细胞对照(左图左图,100X4.2.2 4.2.2 合胞体合胞体SyncytiaSyncytia:是病毒感染后导致感染细胞是病毒感染后导致感染细胞及相邻细胞胞膜融合的产物，表现为假设干细胞相邻的细及相邻细胞胞膜融合的产物，表现为假设干细胞相邻的细胞膜消失，形成多核的巨细胞。融合形成的融合桥可允许胞膜消

23、失，形成多核的巨细胞。融合形成的融合桥可允许病毒亚单位核衣壳、核酸等通过。如病毒亚单位核衣壳、核酸等通过。如BRSVBRSV、IBRVIBRV等。等。呼吸道合胞体呼吸道合胞体I型病毒感染型病毒感染Vero细胞细胞4.2.3 4.2.3 包涵体包涵体 ：细胞感染病毒后，出现于细胞浆和细胞核：细胞感染病毒后，出现于细胞浆和细胞核内的特殊构造。在光学显微镜下可见。多为圆形、卵圆形内的特殊构造。在光学显微镜下可见。多为圆形、卵圆形或不定形。一般是由完整的病毒颗粒或尚未装配的病毒亚或不定形。一般是由完整的病毒颗粒或尚未装配的病毒亚基聚集而成；少数那么是宿主细胞对病毒感染的反响产物，基聚集而成；少数那么是

24、宿主细胞对病毒感染的反响产物，不含病毒粒子。不含病毒粒子。有的位于细胞质中如天花病毒包涵体有的位于细胞质中如天花病毒包涵体有的位于细胞核中如疱疹病毒有的位于细胞核中如疱疹病毒或细胞质、细胞核中都有如麻疹病毒或细胞质、细胞核中都有如麻疹病毒有的还具有特殊名称，如天花病毒包涵体叫顾氏有的还具有特殊名称，如天花病毒包涵体叫顾氏GuarnieriGuarnieri小体，狂犬病毒包涵体叫内基氏小体，狂犬病毒包涵体叫内基氏NegriNegri小小体。体。包涵体观察4.3 荧光抗体检查法荧光抗体检查法免疫荧光技术中荧光抗体染色具有三种根本免疫荧光技术中荧光抗体染色具有三种根本方法，即直接法方法，即直接法(F

25、A)、间接法、间接法(IFA)、抗补、抗补体法。最常用的是直接法和间接法。一般来体法。最常用的是直接法和间接法。一般来说，说，FA法步骤少，特异性高，但敏感性较低；法步骤少，特异性高，但敏感性较低；IFA法步骤多，非特异性相对增多，单敏感法步骤多，非特异性相对增多，单敏感性可提高性可提高510倍。倍。荧光抗体染色常用固定剂：荧光抗体染色常用固定剂：180%或或100%冷丙酮：绝大局部病毒固定冷丙酮：绝大局部病毒固定使用。使用。2冷甲醇冷甲醇/丙酮：，配制时体积比丙酮：，配制时体积比1:1。(3)95%或或100%乙醇：对可溶性蛋白抗原的固乙醇：对可溶性蛋白抗原的固定定,特别是切片样品。特别是切

26、片样品。4四氯化碳：较常用于病毒抗原及其它微四氯化碳：较常用于病毒抗原及其它微生物抗原的固定。生物抗原的固定。5810%福尔马林：对脂多糖抗原较适合，福尔马林：对脂多糖抗原较适合，因为这类抗原可溶于乙醇、丙酮等有机溶剂。因为这类抗原可溶于乙醇、丙酮等有机溶剂。固定时间：一般为室温固定时间：一般为室温515分钟，易失活病分钟，易失活病毒毒4 3060分钟，或分钟，或-20固定固定12小时以上。小时以上。常见荧光素吸收波长及荧光颜色常见荧光素吸收波长及荧光颜色荧光色素名称荧光色素名称最大发射广波长最大发射广波长（nm）最大吸收峰波长最大吸收峰波长（nm）荧光颜色荧光颜色FITC异硫氰酸荧光素520

27、530495黄绿色荧光RB200罗丹明595600570桔红色荧光TMRITC四甲基异硫氰酸罗丹明620550桔红色荧光猪瘟病毒间接免疫荧光IFACSFV Thiverval株感染PK15 72小时PPVPPV感染感染STST细胞细胞7272小时左小时左100X100X，右，右200X)200X)猪细小病毒病毒间接免疫荧光IFA BVDV间接免疫荧光IFA)BVDV(C24V株，株，10-2)感染感染MDBK细胞细胞 72小时，小时，100X BVDV(C24V株，10-2)感染MDBK细胞 72小时,200X)BVDV直接免疫荧光FA)BVDV感染MDBK细胞200XBVDV感染MDBK细胞

28、200X)BVDV感染BT细胞RV感染BHK21细胞犬细小病毒GD/2021株感染F81细胞FABTV感染BHK21细胞5 病毒室可提供的检验用标准物质和检测试剂5.1 外源病毒检测用参考毒种外源病毒检测用参考毒种试剂名称试剂名称规格规格用途用途制备组制备组猪瘟病毒（猪瘟病毒（Thiveral株）株）0.5ml/支外源病毒检验等猪病组猪细小病毒（猪细小病毒（NADL-2株）株）0.5ml/支外源病毒检验、中和试验等猪病组猪细小病毒（猪细小病毒（7909株）株）0.5ml/支外源病毒检验、中和试验等猪病组牛病毒性腹泻病毒牛病毒性腹泻病毒Oregon C24V株（株（AV69）0.5ml/支外源病

29、毒检验、中和试验等牛羊病组牛病毒性腹泻病毒牛病毒性腹泻病毒NADL株（株（AV67）0.5ml/支外源病毒检验、中和试验等牛羊病组狂犬病病毒弱毒株（狂犬病病毒弱毒株（CVS-11株）株）0.5ml/支外源病毒检验、中和试验等牛羊病组犬细小病毒（弱毒株）犬细小病毒（弱毒株）0.5ml/支外源病毒检验、中和试验等牛羊病组5.2 5.2 检测用阳性血清检测用阳性血清试剂名称试剂名称规格规格用途用途羊源伪狂犬病病毒阳性血清羊源伪狂犬病病毒阳性血清1ml/支外源病毒检验、鉴别检验、中和试验等。羊源伪狂犬病病毒阴性血清羊源伪狂犬病病毒阴性血清1ml/支鉴别检验等。牛牛源源病病毒毒性性腹腹泻泻/粘粘膜膜病病

30、病病毒毒阳阳性血清性血清1ml/支中和试验、试剂盒研制等。牛牛源源病病毒毒性性腹腹泻泻/粘粘膜膜病病病病毒毒阴阴性血清性血清1ml/支中和试验、试剂盒研制等。牛牛源源传传染染性性牛牛鼻鼻气气管管炎炎病病毒毒阳阳性血清性血清1ml/支中和试验、试剂盒研制等。牛牛源源传传染染性性牛牛鼻鼻气气管管炎炎病病毒毒阴阴性血清性血清1ml/支鉴别检验、试剂盒研制等。羊源山羊痘病毒阳性血清羊源山羊痘病毒阳性血清1ml/瓶外源病毒检验、鉴别检验等。羊源山羊痘病毒阴性血清羊源山羊痘病毒阴性血清1ml/瓶鉴别检验等。羊源小反刍兽疫病毒阳性血清羊源小反刍兽疫病毒阳性血清1ml/瓶外源病毒检验、鉴别检验等。羊源小反刍兽

31、疫病毒阴性血清羊源小反刍兽疫病毒阴性血清1ml/瓶鉴别检验等。犬源狂犬病标准阳性血清犬源狂犬病标准阳性血清1ml/瓶外源病毒检验、鉴别检验、中和试验等。犬源狂犬病阴性血清犬源狂犬病阴性血清1ml/瓶鉴别检验等。兔源狂犬病阳性血清兔源狂犬病阳性血清1ml/瓶外源病毒检验、鉴别检验、中和试验等。兔源狂犬病阴性血清兔源狂犬病阴性血清1ml/瓶鉴别检验等。犬源犬细小病毒阳性血清犬源犬细小病毒阳性血清1ml/瓶外源病毒检验、鉴别检验、中和试验等。犬源犬细小病毒阴性血清犬源犬细小病毒阴性血清1ml/瓶鉴别检验等。5.3 非禽源外源病毒检测荧光抗体试剂新增加非禽源外源病毒检测荧光抗体试剂新增加试剂名称试剂名

32、称规格规格用途用途制备组制备组猪细小病毒间接免疫荧光检测试剂盒猪细小病毒间接免疫荧光检测试剂盒200头份（约10批苗）外源病毒检验、鉴别检验等猪病组猪瘟病毒间接免疫荧光抗体检测试剂盒猪瘟病毒间接免疫荧光抗体检测试剂盒200头份（约10批苗）外源病毒检验、鉴别检验等猪病组牛病毒性腹泻牛病毒性腹泻/黏膜病病毒间接免疫荧光检测试剂盒黏膜病病毒间接免疫荧光检测试剂盒200头份（约10批苗）外源病毒检验、鉴别检验等猪病组FITC标记的牛传染性鼻气管炎病毒直接荧光抗体标记的牛传染性鼻气管炎病毒直接荧光抗体1ml/支外源病毒检验、鉴别检验等 牛羊病组FITC标记的牛病毒性腹泻标记的牛病毒性腹泻/黏膜病病毒直

33、接荧光抗体黏膜病病毒直接荧光抗体1ml/支外源病毒检验、鉴别检验等 牛羊病组FITC标记的蓝舌病直接荧光抗体标记的蓝舌病直接荧光抗体1ml/支外源病毒检验、鉴别检验等 牛羊病组FITC标记的狂犬病病毒直接荧光抗体标记的狂犬病病毒直接荧光抗体1ml/支外源病毒检验、鉴别检验等 牛羊病组FITC标记的犬腺病毒直接荧光抗体标记的犬腺病毒直接荧光抗体1ml/支外源病毒检验、鉴别检验等 牛羊病组FITC标记的犬冠状病毒直接荧光抗体标记的犬冠状病毒直接荧光抗体1ml/支外源病毒检验、鉴别检验等 牛羊病组FITC标记的犬瘟热病毒直接荧光抗体标记的犬瘟热病毒直接荧光抗体1ml/支外源病毒检验、鉴别检验等 牛羊

34、病组FITC标记的犬细小病毒直接荧光抗体标记的犬细小病毒直接荧光抗体1ml/支外源病毒检验、鉴别检验等 牛羊病组FITC标记的犬副流感病毒直接荧光抗体标记的犬副流感病毒直接荧光抗体1ml/支外源病毒检验、鉴别检验等 牛羊病组6 关于相关问题的回应1 1关于口蹄疫灭活疫苗的外源病毒检测：种毒必须做，成品不要求。目前关于口蹄疫灭活疫苗的外源病毒检测：种毒必须做，成品不要求。目前病毒室已有病毒室已有BTVBTV荧光抗体且致细胞病变检查法完全可检出荧光抗体且致细胞病变检查法完全可检出BTVBTV但缺但缺BTVBTV病毒病毒株，下一步拟考虑由标准物质研究室负责联系制备株，下一步拟考虑由标准物质研究室负责

35、联系制备BTVBTV阳性玻片。阳性玻片。2 2关于猪瘟活疫苗兔源外源病毒检验：中监所有阳性血清供给，且完关于猪瘟活疫苗兔源外源病毒检验：中监所有阳性血清供给，且完全可按照现行标准进展检验。全可按照现行标准进展检验。3 3关于非外源病毒检测关于非外源病毒检测SOPSOP及相应检测试剂问题：病毒室已新增相关检测荧光及相应检测试剂问题：病毒室已新增相关检测荧光抗体，且我所制定的抗体，且我所制定的SOPSOP已于已于20212021和和20212021年的两期培训班发各相关企业。年的两期培训班发各相关企业。4 4关于新生牛血清检测时标准品外源和细胞增殖试验用购置困难问题：关于新生牛血清检测时标准品外源

36、和细胞增殖试验用购置困难问题：中监所有相关标准品及检测试剂供给。中监所有相关标准品及检测试剂供给。5 5关于鸡传染性喉气管炎活疫苗外源病毒检测问题：如果确因阳性血清不关于鸡传染性喉气管炎活疫苗外源病毒检测问题：如果确因阳性血清不能完全中和的话，可按照鸡检查法进展检验。能完全中和的话，可按照鸡检查法进展检验。6 6关于鸡马立克氏病活疫苗关于鸡马立克氏病活疫苗CV1988/RispensCV1988/Rispens蚀斑计数时吸附与不吸附蚀斑计数时吸附与不吸附影响病毒效价问题：列为影响病毒效价问题：列为2021 2021 版药典考察工程，待试验结果再定。版药典考察工程，待试验结果再定。7 7关于鸭瘟活疫苗鉴别检验所需标准阳性血清和外源病毒检验问题：中国关于鸭瘟活疫苗鉴别检验所需标准阳性血清和外源病毒检验问题：中国兽药典已明确规定用鸡进展外源病毒检验兽药典已明确规定用鸡进展外源病毒检验 ，且中监所有阳性血清供给。，且中监所有阳性血清供给。8 8关于鸡痘活疫苗外源病毒检验问题：鸡痘活疫苗完全可以通过过滤后进关于鸡痘活疫苗外源病毒检验问题：鸡痘活疫苗完全可以通过过滤后进展相关检验，如果过滤难以实施，可按照鸡检查法进展。展相关检验，如果过滤难以实施，可按照鸡检查法进展。