液相色谱分离法.pptx

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1、会计学1液相色谱分离法液相色谱分离法洗脱洗脱tI第1页/共10页色谱分离法色谱分离法色谱分离法色谱分离法 色谱分离法是利用待分离组分在不相混容的两色谱分离法是利用待分离组分在不相混容的两相中分配的差异而进行分离，其中一相为固定相，相中分配的差异而进行分离，其中一相为固定相，另一相为流动相，当流动相对固定相作相对移动另一相为流动相，当流动相对固定相作相对移动时，待分离组分就在两相之间反复进行分配，由时，待分离组分就在两相之间反复进行分配，由于不同物质的分配系数不同，造成其迁移速率的于不同物质的分配系数不同，造成其迁移速率的差别，从而得到分离差别，从而得到分离。第2页/共10页色谱法色谱法固定相固

2、定方式固定相固定方式固定相、流动相状态固定相、流动相状态柱柱色色谱谱法法纸纸色色谱谱法法气气相相色色谱谱法法液液相相色色谱谱法法分分配配色色谱谱法法吸吸附附色色谱谱法法离离子子交交换换色色谱谱法法薄薄层层色色谱谱法法分离机理分类分离机理分类凝凝胶胶色色谱谱法法第3页/共10页二、液固吸附柱色谱二、液固吸附柱色谱法法 当试液加在色谱柱上方后，待分离组分就被吸附当试液加在色谱柱上方后，待分离组分就被吸附在柱的上端，再用流动相从柱的上方进行淋洗。如在柱的上端，再用流动相从柱的上方进行淋洗。如A A、B B两组分，假定固定相对两组分，假定固定相对A A的吸附大于的吸附大于B B，A A先吸先吸附在固定

3、向上而后才是附在固定向上而后才是B B，当进行洗脱时，经过解，当进行洗脱时，经过解吸，吸附，由于吸，吸附，由于A A比比B B从固定相解吸进入流动相较困从固定相解吸进入流动相较困难，使难，使A A下行速度较慢，经过相同时间，在色谱柱下行速度较慢，经过相同时间，在色谱柱上的位置就会出现上的位置就会出现A A比比B B高。从而达到分离。高。从而达到分离。第4页/共10页对洗脱剂的要求对洗脱剂的要求:1.1.对组分的溶解度足够大对组分的溶解度足够大 2.2.不与试样组分和吸附剂发生化学不与试样组分和吸附剂发生化学反应反应3.3.粘度小粘度小,易流动易流动 4.4.有足够的纯度有足够的纯度第5页/共1

4、0页三、纸色谱三、纸色谱 以滤纸以滤纸 为载体为载体被吸附于滤纸上的被吸附于滤纸上的水为水为 固定固定相相有机溶剂有机溶剂(展开剂展开剂)为流动相为流动相分离的实质是分离的实质是分配比不同分配比不同的各组分在的各组分在滤纸上滤纸上迁移速度不同迁移速度不同。（分配比大的。（分配比大的组分较易进入有机相而较难进入水相，组分较易进入有机相而较难进入水相，故随流动相上升的速度较快。）故随流动相上升的速度较快。）第6页/共10页取一大小适宜的滤纸条取一大小适宜的滤纸条取一大小适宜的滤纸条取一大小适宜的滤纸条在滤纸条的下端点上标准和试样在滤纸条的下端点上标准和试样在滤纸条的下端点上标准和试样在滤纸条的下端

5、点上标准和试样放在色谱筒中展开放在色谱筒中展开放在色谱筒中展开放在色谱筒中展开取出，标记前沿，凉干取出，标记前沿，凉干取出，标记前沿，凉干取出，标记前沿，凉干着色，分析着色，分析着色，分析着色，分析固定相：固定相：固定相：固定相：滤纸上的滤纸上的滤纸上的滤纸上的H H2 2OO流动相流动相流动相流动相：展开剂展开剂展开剂展开剂第7页/共10页溶剂前沿溶剂前沿组分斑点组分斑点ab原点原点用比移值用比移值Rf表示某组分在表示某组分在滤纸上的迁移情况滤纸上的迁移情况Rf=Rf取值范围取值范围 01原点至斑点中心的距离原点至斑点中心的距离原点至溶剂前沿的距离原点至溶剂前沿的距离abRf0.02时，可采

6、用时，可采用纸色谱进行分离。纸色谱进行分离。特点：特点：测量需要量小，灵敏，分离测量需要量小，灵敏，分离效果好，效果好，但只适用于分离分配比但只适用于分离分配比 不同的物质不同的物质。第8页/共10页4.纸上层析法分离纸上层析法分离A和和B时时,A和和B的比移值分的比移值分别为别为Rf(A)=0.45,Rf(B)=0.67,为使分离后两斑为使分离后两斑点中心距离为点中心距离为3cm,层析用纸条长度至少应层析用纸条长度至少应是是 。10.用纸上层析法分离用纸上层析法分离A和和B时，时，A和和B的比移值的比移值分别为分别为Rf(A)=0.45,Rf(B)=0.67。为使分离后两。为使分离后两斑点中心之间的距离为斑点中心之间的距离为2.2 cm，层析用纸条长，层析用纸条长度最少应该是度最少应该是 cm。14cm10第9页/共10页