研究生平台课医用化学试剂.pptx

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1、会计学1研究生平台课医用化学试剂研究生平台课医用化学试剂常用化学常用化学试剂的分的分类化学化学试剂的的级别化学化学试剂的配制的配制缓冲溶液冲溶液有机溶有机溶剂的的应用用危危险化学化学药品的品的标志志化学化学试剂的安全使用的安全使用化学化学实验绿色化概述色化概述溶液的溶液的组成量度成量度水的水的质量要求量要求容量容量仪器的使用器的使用常用的冰常用的冰盐冷却冷却剂缓冲溶液的冲溶液的组成成缓冲溶液的冲溶液的 pH 值常用的常用的缓冲体系冲体系缓冲溶液的冲溶液的选择有机溶有机溶剂的极性的极性生物大分子溶液配制中溶生物大分子溶液配制中溶剂的的选择有机溶有机溶剂在沉淀大分子物在沉淀大分子物质中的中的应用用

2、第1页/共56页一、常用化学试剂的分类一、常用化学试剂的分类1 1、无机试剂、无机试剂(1)溶剂溶剂:包括各种酸类、碱类包括各种酸类、碱类(2)分离试剂：如硫化物、碳酸盐、氢氧化物分离试剂：如硫化物、碳酸盐、氢氧化物(3)检验试剂：如氧化剂、还原剂检验试剂：如氧化剂、还原剂(4)辅助试剂：缓冲试剂等辅助试剂：缓冲试剂等 2 2、有机试剂、有机试剂(1)(1)分析试剂分析试剂:有机沉淀剂、显色剂、络合剂等。有机沉淀剂、显色剂、络合剂等。(2)(2)辅辅助助试试剂剂，用用于于溶溶解解和和萃萃取取的的有有机机溶溶剂剂；用用于于调调节节溶液溶液pHpH值的缓冲剂；抗凝剂；层析剂等。值的缓冲剂；抗凝剂；

3、层析剂等。第2页/共56页(1)(1)按按生生物物体体组组织织中中所所含含有有的的或或代代谢谢过过程程中中所所产产生生的的物物质来分类质来分类,例如蛋白质、核酸、糖类、脂类等。例如蛋白质、核酸、糖类、脂类等。(2)(2)按按在在生生物物学学研研究究中中的的用用途途来来分分类类，如如电电泳泳试试剂剂、免免疫试剂、培养基、生化标准品等。疫试剂、培养基、生化标准品等。3、生化试剂、生化试剂生生化化试试剂剂(B.R.)(Biochemical(B.R.)(Biochemical reagent)reagent):指指有有关关生生命命科科学学研研究究的的生生物物材材料料或或有有机机化化合合物物，以以及及

4、临临床床诊诊断断、医医学学研研究究用用的的试试剂剂。由由于于生生命命科科学学面面广广、发发展展快快，因因此该类试剂品种繁多、性质复杂。此该类试剂品种繁多、性质复杂。第3页/共56页二、实验室常用试剂的级别二、实验室常用试剂的级别级别级别 一级试剂一级试剂 二级试剂二级试剂 三级试剂三级试剂 四级试剂四级试剂我国标准我国标准 优级纯优级纯 分析纯分析纯 化学纯化学纯 实验试剂实验试剂 英文标志英文标志标签颜色标签颜色G.R.A.R.C.P.L.R.绿绿红红蓝蓝黄黄GuaranteedAnalyticalChemicalLaboratoryreagentreagentpurereagent第4页/

5、共56页试剂选用原则：试剂选用原则：兼兼顾试验精密度与精密度与试验成本成本G.R.：适用于精密的分析实验和科学研究，适用于精密的分析实验和科学研究，可可 作基准物质作基准物质C.P.：适用于要求较高的化学实验和要求不高适用于要求较高的化学实验和要求不高 的分析实验的分析实验A.R.：用于一般科学研究和要求较高的定量、定用于一般科学研究和要求较高的定量、定 性分析实验性分析实验B.R.:根据说明使用根据说明使用L.R.：用于要求不高的一般化学实验用于要求不高的一般化学实验第5页/共56页其他常见试剂标识缩写其他常见试剂标识缩写BP(BritishPharmacopoeia)：英国药典：英国药典B

6、S(BiologicalStain)：生物染色剂：生物染色剂EP(ExtraPure)：特纯：特纯FCP(Forchromatographypurpose)：层析用：层析用FMP(Formicroscopicpurpose)：显微镜用：显微镜用GC(Gaschromatography)：气相色谱：气相色谱HPLC(HighPerformanceLiquidchromatography)：高效液相色谱：高效液相色谱Ind(Indicator)：指示剂：指示剂PT(Primaryreagent)：基准试剂：基准试剂SP(Spectrumpure)：光谱纯：光谱纯TLC(ThinLayerchrom

7、atography)：薄层色谱：薄层色谱UV(Ultravioletpure)：分光纯、光学纯、紫析分光光度纯：分光纯、光学纯、紫析分光光度纯第6页/共56页三、化学试剂的配制三、化学试剂的配制（一）溶液的组成量度（一）溶液的组成量度(组成标度；浓度组成标度；浓度)一定量溶液或溶剂中所含溶质的量。一定量溶液或溶剂中所含溶质的量。定义：定义：质量浓度质量浓度质量分数质量分数物质的量浓度物质的量浓度体积分数体积分数分子浓度分子浓度第7页/共56页1 1、物质的量浓度、物质的量浓度(count-of-substanceconcentrationofB)定义：定义：B的物质的量的物质的量(nB)除以混

8、合物的体积（除以混合物的体积（V）公式：公式：CB=世世界界卫生生组织建建议：在在医医学学上上表表示示体体液液的的组成成标度度时，凡凡是是相相对分分子子质量量已已知知的的物物质，都都应使使用用物物质的的量的量的浓度。度。VnBSI单位：单位：mol.m-3;常用单位：常用单位：mol.L-1,mmol.L-1第8页/共56页 100ml正常人的血清中含正常人的血清中含326mgNa+离子，离子，计算血清中计算血清中Na+离子的浓度。离子的浓度。解：解：Na+离子的摩尔质量是离子的摩尔质量是23g.mol-1。c(Na+)=想一想一想一想一想想想想-1+=+=0.14mol.L-1第9页/共56

9、页2、质量浓度、质量浓度(massconcentrationofB)定义：定义：B的质量的质量(mB)除以混合物的体积。除以混合物的体积。公式：公式：B B =例：例：100ml生理氯化钠溶液中含生理氯化钠溶液中含0.9gNaCl，计算生理氯计算生理氯化钠的质量浓度。化钠的质量浓度。解：解：(NaCl)(NaCl)=9g.L-1SI单位：单位：kg.m-3;常用单位：常用单位：g.L-1,mg.L-1第10页/共56页3、质量分数、质量分数(mass fraction of B)定义：定义：B的质量的质量(mB)与混合物的质量与混合物的质量(m)之比。之比。公式：公式：B B =例：将例：将5

10、00g蔗糖溶于水配成蔗糖溶于水配成850g糖浆，计算此糖浆中糖浆，计算此糖浆中蔗糖的质量分数。蔗糖的质量分数。解：解：蔗糖蔗糖=0.588（单位为（单位为1）第11页/共56页4、体积分数、体积分数(volumefractionofB)公式：公式：B B =例例：20oC时时，将将70ml乙乙醇醇与与30ml水水混混合合，得得到到96.8ml乙醇溶液，计算所得乙醇溶液中乙醇的体积分数。乙醇溶液，计算所得乙醇溶液中乙醇的体积分数。解：解：(C2H5OH)=定义：混合前定义：混合前B的体积的体积(VB)与混合前各组分体积的与混合前各组分体积的总和总和(V )之比。之比。*=0.70=70%=（单位

11、为（单位为1）第12页/共56页5、分子浓度、分子浓度(molecularconcentrationofB)定义：定义：B的分子数的分子数(NB)除以混合物的体积除以混合物的体积(V)。公式：公式：CB=例如，我国成年男性和成年女性血液中红细胞的例如，我国成年男性和成年女性血液中红细胞的分子浓度分别为：分子浓度分别为：4.510125.51012L-1；3.810124.61012L-1SI单位：单位：m-3;常用单位：常用单位：L-1第13页/共56页6、渗透浓度及其在医学上的意义、渗透浓度及其在医学上的意义定义：渗透浓度是指溶液中能产生渗透效应的溶质的定义：渗透浓度是指溶液中能产生渗透效应

12、的溶质的微粒（分子或离子）浓度总合。微粒（分子或离子）浓度总合。例：生理盐水的质量浓度为例：生理盐水的质量浓度为9g.L-1,则其渗透浓度：则其渗透浓度：cos=c(Na+)+c(Cl-)=2c(NaCl)=2 (NaCl)/M(NaCl)(NaCl)/M(NaCl)=(2=(29g.L-1)/58.5g.mol-1=0.308mol.L-1=308mmol.L-1以正常人血浆的渗透浓度以正常人血浆的渗透浓度(280320mmol.L320mmol.L-1-1)为为标准，标准，将医用溶液分为：将医用溶液分为：等渗溶液：等渗溶液：280320mmol.L320mmol.L-1-1低渗溶液：低渗溶

13、液：小于小于280mmol.Lmmol.L-1-1（溶血）（溶血）高渗溶液：高渗溶液：大于大于320mmol.L20mmol.L-1-1 （质壁分离）（质壁分离）第14页/共56页（二）水的质量要求（二）水的质量要求3)内毒素（内毒素（Endotoxin）革兰氏阴性细菌的脂多糖细胞壁碎片，又称之为革兰氏阴性细菌的脂多糖细胞壁碎片，又称之为“热原热原”，单位，单位cuf/ml。1、评价水质的常用指标评价水质的常用指标1)电阻率（电阻率（electricalresistivity）衡衡量量实实验验室室用用水水导导电电性性能能的的指指标标，单单位位为为M.cm，随随着着水水内内无无机机离离子子的的减

14、减少少电电阻阻加加大大则则数数值值逐逐渐渐变变大大，实实验验室室超超纯纯水水的标准：电阻率为的标准：电阻率为18.2M.cm。2)总有机碳（总有机碳（TotalOrganicCarbon，TOC）水中碳的的浓度，反映水中氧化的有机化合物的含量，单位水中碳的的浓度，反映水中氧化的有机化合物的含量，单位为为ppm或或ppb。第15页/共56页2、实验室常用的水的种类实验室常用的水的种类1)蒸馏水（蒸馏水（DistilledWater）将将普普通通水水经经蒸蒸馏馏、冷冷凝凝得得到到的的水水。蒸蒸二二次次的的叫叫重重蒸蒸水水，三三次次的的叫叫三三蒸蒸水水。蒸蒸馏馏水水能能去去除除自自来来水水内内大大部

15、部分分的的污污染染物物，但但挥挥发发性性的的杂杂质质无无法法去去除除，如如二二氧氧化化碳碳、氨氨、二二氧氧化化硅硅以以及及一一些些有有机机物物。新新鲜鲜的的蒸蒸馏馏水水是是无无菌菌的的，但但储储存存后后细细菌菌易易繁繁殖殖；此此外外，储存的容器塑形物质会析出造成二次污染。储存的容器塑形物质会析出造成二次污染。2)去离子水（去离子水（DeionizedWater）应用离子交换树脂去除水中的阴离子和阳离子后得到的水。应用离子交换树脂去除水中的阴离子和阳离子后得到的水。水中仍然存在可溶性的有机物，可以污染离子交换柱从而降低水中仍然存在可溶性的有机物，可以污染离子交换柱从而降低其功效，去离子水存放后也

16、容易引起细菌的繁殖。其功效，去离子水存放后也容易引起细菌的繁殖。第16页/共56页3)反渗水（反渗水（ReverseosmosisWater）水水分分子子在在压压力力的的作作用用下下通通过过反反渗渗透透膜膜，水水中中的的杂杂质质被被反反渗渗透透膜膜截截留留排排出出。反反渗渗水水克克服服了了蒸蒸馏馏水水和和去去离离子子水水的的许许多多缺缺点点，利利用用反反渗渗透透技技术术可可以以有有效效的的去去除除水水中中的的溶溶解解盐盐、胶胶体体、细细菌菌、病病毒毒、细细菌菌内内毒毒素素和和大大部部分分有有机机物物等等杂杂质质，反反渗渗透透膜膜质量对反渗水的质量影响很大。质量对反渗水的质量影响很大。4)超纯水

17、（超纯水（Ultra-puregradewater）采取综合技术制得，其标准是水电阻率为采取综合技术制得，其标准是水电阻率为18.2M-cm。超纯水在超纯水在TOC、细菌、内毒素等指标方面并不相同，要根据、细菌、内毒素等指标方面并不相同，要根据实验的要求来确定，如细胞培养则对细菌和内毒素有要求，实验的要求来确定，如细胞培养则对细菌和内毒素有要求，而而HPLC则要求则要求TOC低。低。第17页/共56页特性指标特性指标特性指标特性指标一级一级一级一级二级二级二级二级三级三级三级三级pH(pH(2525oC)C)-5.05.07.57.5电导率电导率电导率电导率(S/cm,25S/cm,25oC)

18、C)0.10.1 1.01.0 5.05.0电阻率电阻率电阻率电阻率(M(M.cm,25.cm,25oC)C)1010 1.01.0 0.20.2吸光度吸光度吸光度吸光度(254nm,1cm)0.0010.0010.010.01-可氧化物可氧化物可氧化物可氧化物(mg/L)(mg/L)-0.080.080.400.40蒸发残渣蒸发残渣蒸发残渣蒸发残渣(mg/L)(mg/L)(10525)(10525)-1.01.02.02.0可溶性硅可溶性硅(以以SiO2计计,mg/L)0.010.010.020.02-附附1中国国家实验室用水规格中国国家实验室用水规格GB6682-92标准标准第18页/共5

19、6页附附2中国国家实验室用水中国国家实验室用水GB6682-2000标准标准特性指标特性指标特性指标特性指标一级一级一级一级二级二级二级二级三级三级三级三级pH(pH(2525oC)C)-5.05.07.57.5电导率电导率电导率电导率(mS/m,25(mS/m,25oC)C)0.010.010 0.1 10.0.5 5电阻率电阻率电阻率电阻率(M(M.cm,25.cm,25oC)C)1010 1.01.0 0.20.2吸光度吸光度吸光度吸光度(254nm,1cm)0.0010.0010.010.01-可氧化物可氧化物可氧化物可氧化物(mg/L)(mg/L)-0.080.080.400.40蒸

20、发残渣蒸发残渣蒸发残渣蒸发残渣(mg/L)(mg/L)(10525)(10525)-1.01.02.02.0可溶性硅可溶性硅(以以SiO2计计,mg/L)0.010.010.020.02-第19页/共56页附附3中国实验室用水国家标准中国实验室用水国家标准GB6682-2008名称名称名称名称一级一级一级一级二级二级二级二级三级三级三级三级pHpH范围范围范围范围(2525oC)C)-5.05.07.57.5电导率电导率电导率电导率(mS/m,25(mS/m,25oC)C)0.010.010 0.1 10.0.5 5比电阻比电阻比电阻比电阻(M(M.cm,25.cm,25oC)C)1010 1

21、.01.0 0.20.2可氧化物可氧化物可氧化物可氧化物(mg/L)(mg/L)-0.080.080.400.40吸光度吸光度吸光度吸光度(254nm,1cm光程光程)0.0010.0010.010.01-蒸发残渣蒸发残渣蒸发残渣蒸发残渣(mg/L)(mg/L)(1052)(1052)-1.01.02.02.0可溶性硅可溶性硅(以以SiO2计计,mg/L)0.010.010.020.02-第20页/共56页特性指标特性指标特性指标特性指标 级级级级级级级级级级级级pHpH6.06.07.07.06.06.07.07.06.06.07.07.0电导率电导率电导率电导率(S/cm,25S/cm,2

22、5oC)C)0.10.12.02.05.010100.50.50.20.2硅酸盐硅酸盐硅酸盐硅酸盐(mg/L)(mg/L)0.010.010.010.010.010.01重金属重金属重金属重金属(mg/L)(mg/L)0.010.010.010.010.010.01附附4美国病理学会（美国病理学会（CAPCAP）生化试剂及生化检验用水标准）生化试剂及生化检验用水标准第21页/共56页附附5美国临床实验室标准化委员会美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）等级纯水标准等级纯水标准级别级别级别级别 级级级级级级级级级级级级微生物含量微生物含量微生物含量微生物含量(最大每毫升菌落最大每毫升菌落最大每

23、毫升菌落最大每毫升菌落)101010103 3未定未定未定未定硅硅硅硅(mgSiO(mgSiO2 2/L/L，最大量微粒，最大量微粒，最大量微粒，最大量微粒)0.050.050.10.11.01.0电阻率电阻率电阻率电阻率(M(M.cm,25.cm,25oC)C)10102.02.01.01.0微粒微粒微粒微粒0.20.2 mm微孔膜过滤微孔膜过滤微孔膜过滤微孔膜过滤-有机物质有机物质有机物质有机物质活性炭过滤活性炭过滤活性炭过滤活性炭过滤-第22页/共56页级别级别用途用途NCCLS级级原子吸收、荧光、酶、高灵敏度层析、电泳、原子吸收、荧光、酶、高灵敏度层析、电泳、参比液、缓冲液、电解质参比

24、液、缓冲液、电解质级级一般实验检验，玻璃器皿冲洗一般实验检验，玻璃器皿冲洗级级玻璃器皿洗涤，要求不高的定性试验玻璃器皿洗涤，要求不高的定性试验CAP级级原子吸收、酶、电解质、无机元素、缓冲液、原子吸收、酶、电解质、无机元素、缓冲液、参比液参比液级级一般实验室检验、血液学、微生物检验等一般实验室检验、血液学、微生物检验等级级普通定性测定、尿液检验、组织切片、寄生普通定性测定、尿液检验、组织切片、寄生虫、器皿洗涤虫、器皿洗涤一级水：基本上不含有溶解或胶态离子杂质及有机物一级水：基本上不含有溶解或胶态离子杂质及有机物二级水：可含有微量的无机、有机或胶态杂质二级水：可含有微量的无机、有机或胶态杂质三级

25、水：适用一般实验室实验工作三级水：适用一般实验室实验工作水的分级标准及用途水的分级标准及用途第23页/共56页1.专门的纯水机或超纯水机；专门的纯水机或超纯水机；2.去离子水重蒸；去离子水重蒸；3.二次或三次重蒸水；二次或三次重蒸水；4.市场上瓶装的纯净水或蒸馏水；市场上瓶装的纯净水或蒸馏水；不不管管采采用用何何种种途途径径，配配制制流流动动相相应应用用新新鲜鲜水水，水水质质越越高高放放置置时时间间越越短短。理理想想的的HPLC用用水水应应为为18.2.cm的的超超纯纯水水，并并通过通过0.22um的滤膜，除去热源、有机物、无机离子及空气等。的滤膜，除去热源、有机物、无机离子及空气等。HPLC

26、用水选择：用水选择：第24页/共56页（三）容量仪器的使用（三）容量仪器的使用锥形瓶锥形瓶 烧杯烧杯 刻度试管刻度试管 容量瓶容量瓶 量筒、量杯量筒、量杯移液管（吸量管）（单刻度、多刻度）移液管（吸量管）（单刻度、多刻度）滴定管（酸式、碱式）滴定管（酸式、碱式）移液抢（移液器）移液抢（移液器）(Pipette)第25页/共56页碱碱式式量筒量筒酸酸式式第26页/共56页容量瓶容量瓶碘瓶、锥形瓶碘瓶、锥形瓶吸量吸量管管烧杯烧杯第27页/共56页移液抢（移液器）移液抢（移液器）(Pipette)Note:使用注意事项使用注意事项 第28页/共56页铬铬 酸酸 洗洗 液液 的的 配配 置置：称称 取

27、取 重重 铬铬 酸酸 钾钾 适适 量量（35g），加加入入一一定定体体积积的的水水（175ml），加加热热溶解，将浓硫酸（溶解，将浓硫酸（300ml）缓缓滴入。）缓缓滴入。Note:A浓硫酸遇水放热，防止飞溅伤人。浓硫酸遇水放热，防止飞溅伤人。B可重复使用，直至颜色变绿。可重复使用，直至颜色变绿。第29页/共56页盐类分子式盐类分子式100g碎冰中加入盐碎冰中加入盐的克数的克数可达到的最低温度可达到的最低温度（oC）NH4Cl25-15NaNO350-18NaCl33-21CaCl2.6H2O100-29CaCl2.6H2O143-55（四）常用的冰盐冷却剂（四）常用的冰盐冷却剂第30页/共5

28、6页 生物缓冲物质生物缓冲物质（Biologicalbuffersubstance）：）：用用于于生生物物学学和和生生物物化化学学方方面面在在分分离离、分分析析、合合成成等等研研究究中中调调节节、控控制制以以及及减减少少在在其其它它化化学学反反应应中中发发生生的的氢氢离离子子浓浓度度的的变变化化。生生物物缓缓冲冲物物质质的的质质量量要要求求严严格格，如如pH值值约约在在68之之间间；在在水水系系中中要要有有较较好好的的溶溶解解性性；对对生生物物膜膜要要较较无无渗渗透透性性；受受浓浓度度、温温度度以以及及介介质质中中离离子子的的影影响响要要极极小小；干干燥燥或或溶溶液液状状态态有有极极好好的的稳

29、稳定定性性，能能抗抗酶酶或或非非酶酶的的降降解解；对对可可见见光光和和紫紫外外光光有有极极小小的的吸吸收值等。收值等。四、缓四、缓 冲冲 溶溶 液液（一）缓冲溶液的定义及原理（一）缓冲溶液的定义及原理：1.1.定义：能抵抗外加少量强酸、强碱或稀释作用，定义：能抵抗外加少量强酸、强碱或稀释作用，而本身而本身 pH pH 值基本不发生变化的溶液。值基本不发生变化的溶液。第31页/共56页以以CH3COOHCH3COONa为例：为例：CH3COOH+H2OH3O+CH3COO-2.缓冲原理及缓冲溶液的组成缓冲原理及缓冲溶液的组成共轭酸：抵抗外来碱（共轭酸：抵抗外来碱（CH3COOH）共轭碱：抵抗外来

30、酸（共轭碱：抵抗外来酸（CH3COONa）3.缓冲溶液对生化试验的意义缓冲溶液对生化试验的意义 生生物物体体内内细细胞胞的的生生长长和和活活动动需需要要一一定定的的pHpH值值，酸酸度度的的改改变变会会引引起起与与代代谢谢有有关关的的酸酸碱碱电电离离平平衡衡移移动动，从从而而影影响响细细胞胞的的生生物物活活性性。为为了了在在实实验验室室准准确确模模拟拟体体内内生生物物环环境境，必必须须保保持持体外生化反应过程与体内环境具有完全相同的体外生化反应过程与体内环境具有完全相同的pHpH值。值。第32页/共56页（二）缓冲溶液的（二）缓冲溶液的 pH 值值2、pH 值的测定：值的测定：pH 值试纸值试

31、纸 广泛试纸广泛试纸 1-14、9-14；精密试纸精密试纸 1.4-3.0、5.4-7.0、8.0-10.0等等pH 计计 标准缓冲溶液校正标准缓冲溶液校正 使用重蒸水或去离子水使用重蒸水或去离子水 1、pH 值的计算：值的计算：pH=pKa+lg第33页/共56页（三）缓冲溶液的配制（三）缓冲溶液的配制基本原则：基本原则：1.选择合适的缓冲对，尽可能接近弱酸的选择合适的缓冲对，尽可能接近弱酸的pKa。2.总浓度要适当。总浓度要适当。3.缓冲成分不能与样品反应；考虑毒性影响。缓冲成分不能与样品反应；考虑毒性影响。4.计算、配制、验证。计算、配制、验证。第34页/共56页1.磷酸盐缓冲液磷酸盐缓

32、冲液优优点点：浓浓度度范范围围大大；pH范范围围宽宽；pH受受温温度度影影响响小小；缓冲液稀释后缓冲液稀释后pH变化小变化小(稀释十倍后稀释十倍后pH的变化小于的变化小于0.1)。缺缺点点：易易与与钙钙离离子子、镁镁离离子子及及其其他他重重金金属属离离子子生生成成沉沉淀淀；会会抑抑制制某某些些生生物物化化学学过过程程(如如对对某某些些酶酶的的催催化化作作用用产产生生某某种种程程度的抑制度的抑制)。2.Tris（三羟甲基氨基甲烷）缓冲液（三羟甲基氨基甲烷）缓冲液优优点点：可可用用于于配配制制pH范范围围由由酸酸性性到到碱碱性性的的大大范范围围pH值值的的缓缓冲冲液液；对对生生物物化化学学过过程程

33、干干扰扰很很小小，不不与与钙钙、镁镁离离子子及及重重金金属离子发生沉淀。属离子发生沉淀。缺缺点点：pH值值受受溶溶液液浓浓度度影影响响较较大大（稀稀释释十十倍倍pH值值的的变变化化大大于于0.1）；温温度度变变化化对对缓缓冲冲液液pH值值的的影影响响很很大大，需需在在使使用用温度下进行配制和使用。温度下进行配制和使用。易吸收空气中的易吸收空气中的CO2。（四）常用缓冲体系（四）常用缓冲体系第35页/共56页例：配制例：配制100mLTris-盐酸缓冲溶液盐酸缓冲溶液(0.05mol/L,25oC)。方法：方法：50mL0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液与三羟甲基氨基甲烷溶液与xmL0.1mo

34、l/L盐酸混匀后，加水稀释到盐酸混匀后，加水稀释到100mL。(M=121.14)pHx/mLpHx/mLpHx/mL7.1045.77.8034.58.5014.77.2044.77.9032.08.6012.47.3043.48.0029.28.7010.37.4042.08.1026.28.808.57.5040.38.2022.98.907.07.6038.58.3019.99.005.77.7036.68.4017.2第36页/共56页体系名称体系名称体系名称体系名称缓冲对缓冲对缓冲对缓冲对pHpH值范围值范围值范围值范围磷酸盐缓冲溶液磷酸盐缓冲溶液磷酸盐缓冲溶液磷酸盐缓冲溶液磷酸氢

35、二钠磷酸氢二钠磷酸氢二钠磷酸氢二钠磷酸二氢钠磷酸二氢钠磷酸二氢钠磷酸二氢钠磷酸二氢钠磷酸二氢钠磷酸二氢钠磷酸二氢钠磷酸二氢钾磷酸二氢钾磷酸二氢钾磷酸二氢钾磷酸氢二钠磷酸氢二钠磷酸氢二钠磷酸氢二钠氢氧化钠氢氧化钠氢氧化钠氢氧化钠5.85.8 8.08.04.94.9 8.28.210.910.9 12.012.0Tris-Tris-盐酸缓冲溶液盐酸缓冲溶液盐酸缓冲溶液盐酸缓冲溶液三羟甲基氨基甲烷三羟甲基氨基甲烷三羟甲基氨基甲烷三羟甲基氨基甲烷盐酸盐酸盐酸盐酸7.17.1 9.09.0硼砂盐酸缓冲溶液硼砂盐酸缓冲溶液硼砂盐酸缓冲溶液硼砂盐酸缓冲溶液硼砂硼砂硼砂硼砂盐酸盐酸盐酸盐酸8.08.0 9.

36、19.1巴比妥钠盐酸缓冲溶液巴比妥钠盐酸缓冲溶液巴比妥钠盐酸缓冲溶液巴比妥钠盐酸缓冲溶液巴比妥钠巴比妥钠巴比妥钠巴比妥钠盐酸盐酸盐酸盐酸6.86.8 9.69.6甘氨酸盐酸缓冲溶液甘氨酸盐酸缓冲溶液甘氨酸盐酸缓冲溶液甘氨酸盐酸缓冲溶液甘氨酸甘氨酸甘氨酸甘氨酸盐酸盐酸盐酸盐酸2.22.2 3.63.6邻苯二甲酸氢钾盐酸缓冲溶液邻苯二甲酸氢钾盐酸缓冲溶液邻苯二甲酸氢钾盐酸缓冲溶液邻苯二甲酸氢钾盐酸缓冲溶液邻苯二甲酸氢钾邻苯二甲酸氢钾邻苯二甲酸氢钾邻苯二甲酸氢钾盐酸盐酸盐酸盐酸2.22.2 3.83.8柠檬酸柠檬酸钠缓冲溶液柠檬酸柠檬酸钠缓冲溶液柠檬酸柠檬酸钠缓冲溶液柠檬酸柠檬酸钠缓冲溶液柠檬酸柠檬

37、酸柠檬酸柠檬酸柠檬酸钠柠檬酸钠柠檬酸钠柠檬酸钠3.03.0 6.66.6第37页/共56页体液的体液的pHpH值值胃液：胃液：1.01.03.03.0唾液：唾液：6.0 6.0 7.57.5乳汁：乳汁：6.6 6.6 7.67.6脊椎液：脊椎液：7.3 7.3 7.57.5血液：血液：7.35 7.35 7.457.45尿液：尿液：4.8 4.8 7.57.5第38页/共56页五、有机溶剂的应用五、有机溶剂的应用实验室常用有机溶剂的极性强弱顺序：实验室常用有机溶剂的极性强弱顺序：石油醚石油醚 苯苯苯苯 氯仿氯仿氯仿氯仿 乙醚乙醚乙醚乙醚 乙酸乙酯乙酸乙酯乙酸乙酯乙酸乙酯 丙酮丙酮丙酮丙酮 乙醇

38、乙醇乙醇乙醇 甲醇甲醇甲醇甲醇亲水性成分：亲水性成分：蛋白质、单糖及低聚糖、黏液质、氨基酸、水溶性有蛋白质、单糖及低聚糖、黏液质、氨基酸、水溶性有机酸、苷类、水溶性色素和生物碱机酸、苷类、水溶性色素和生物碱亲脂性成分：油脂、脂溶性色素、挥发油、非水溶性亲脂性成分：油脂、脂溶性色素、挥发油、非水溶性有机酸、游离生物碱有机酸、游离生物碱（一）有机溶剂的极性（一）有机溶剂的极性第39页/共56页（二）生物大分子溶液配制中溶剂的选择（二）生物大分子溶液配制中溶剂的选择基本原则：基本原则：1.极性物质易溶于极性溶剂，非极性物质易溶于非极性溶剂。极性物质易溶于极性溶剂，非极性物质易溶于非极性溶剂。2.碱性

39、物质易溶于酸性溶剂，酸性物质易溶于碱性溶剂。碱性物质易溶于酸性溶剂，酸性物质易溶于碱性溶剂。3.温度升高，溶解度加大。温度升高，溶解度加大。4.远离等电点的远离等电点的pH值，溶解度增加。值，溶解度增加。Note:使目的产物溶解度增加的同时保持生物活性。使目的产物溶解度增加的同时保持生物活性。第40页/共56页应用实例：应用实例：蛋白质和酶的提取蛋白质和酶的提取1.水提水提1)盐浓度（即离子强度）盐浓度（即离子强度）“盐盐溶溶”现现象象：少少量量离离子子的的活活动动，减减少少了了偶偶极极分分子子之之间间极极性性基团的静电吸引力，增加了溶质和溶剂分子间相互作用力。基团的静电吸引力，增加了溶质和溶

40、剂分子间相互作用力。“盐盐析析”现现象象：中中性性盐盐的的浓浓度度增增加加至至一一定定时时，蛋蛋白白质质的的溶溶解解度又逐渐下降，直至沉淀析出。度又逐渐下降，直至沉淀析出。通通常常使使用用0.02mol/L0.05mol/L缓缓冲冲液液或或0.09mol/L0.15mol/LNaCl溶溶液液提提取取蛋蛋白白质质和和酶酶。向向水水溶溶液液中中加加入入蔗蔗糖糖或或甘甘油油可可使使溶溶液液极极性性降降低低，增增加加离离子子强强度度（如如加加入入KCl、NaCl、NH4Cl或或(NH4)2SO4）可以增加溶液的极性。）可以增加溶液的极性。第41页/共56页 2)pH值值：溶溶剂剂的的pH应应在在蛋蛋白

41、白质质和和酶酶的的稳稳定定范范围围内内，通通常常选选择择偏偏离离等等电电点点的的两两侧侧。碱碱性性蛋蛋白白质质选选在在偏偏酸酸一一侧侧，酸酸性性蛋蛋白白质质选选在在偏偏碱碱的的一一侧侧。例例如如胰胰蛋蛋白白酶酶为为碱碱性性蛋蛋白白质质，常常用用稀稀酸酸提提取取，而而肌肌肉肉甘甘油油醛醛-3-磷磷酸酸脱脱氢氢酶酶属属酸酸性性蛋蛋白白质质，则则常常用用稀稀碱碱来提取。来提取。3)温温度度：为为防防止止具具有有活活性性的的蛋蛋白白质质和和酶酶变变性性和和降降解解，提提取时一般在取时一般在05的低温操作。的低温操作。4)防防止止体体系系自自身身存存在在蛋蛋白白酶酶或或核核酸酸酶酶的的降降解解作作用用：

42、采采用用加加入入抑抑制制剂剂或或调调节节提提取取液液的的pH、离离子子强强度度或或极极性性等等方方法法使使这这些些水水解解酶酶失失去去活活性性。例例如如在在提提取取DNA时时加加入入EDTA络络合合DNA酶酶活活化所必须的化所必须的Mg2+。第42页/共56页2.混合溶剂提取混合溶剂提取有有些些蛋蛋白白质质和和酶酶既既溶溶于于稀稀酸酸、稀稀碱碱，又又能能溶溶于于含含有有一一定定比比例例的的有有机机溶溶剂剂的的水水溶溶液液中中，采采用用稀稀有有机机溶溶液液提提取取可可以以防防止止水水解解酶酶的的破坏，并兼有除去杂质提高纯化效果的作用。破坏，并兼有除去杂质提高纯化效果的作用。例例如如，胰胰岛岛素素

43、可可溶溶于于稀稀酸酸、稀稀碱碱和和稀稀醇醇溶溶液液，但但易易被被组组织织中中与与其其共共存存的的糜糜蛋蛋白白酶酶水水解解，因因而而采采用用6.8乙乙醇醇溶溶液液并并用用草草酸酸调调溶溶液的液的pH=2.53.0，进而从三个方面抑制了糜蛋白酶的水解活性：，进而从三个方面抑制了糜蛋白酶的水解活性：6.8的乙醇可以使糜蛋白酶暂时失活；的乙醇可以使糜蛋白酶暂时失活；草酸可以除去激活糜蛋白酶的草酸可以除去激活糜蛋白酶的Ca2+；pH=2.53.0是是糜糜蛋蛋白白酶酶不不宜宜作作用用的的pH值值。以以上上条条件件对对胰胰岛岛素素的的溶溶解解和和稳稳定定性性都都没没有有影影响响，却却可可除除去去一一部部分分

44、在在稀稀醇醇与与稀稀酸酸中不溶解的杂蛋白。中不溶解的杂蛋白。第43页/共56页（三）有机溶剂在沉淀大分子物质中的应用（三）有机溶剂在沉淀大分子物质中的应用1.基本原理基本原理向向溶溶液液中中加加入入有有机机溶溶剂剂能能减减小小体体系系的的极极性性，使使带带电电溶溶质质分分子子（如如蛋蛋白白质质分分子子）更更易易互互相相吸吸引引而而凝凝集集，从从而而发发生生沉沉淀淀。同同时时，由由于于使使用用的的有有机机溶溶剂剂与与水水互互溶溶，它它们们在在溶溶解解于于水水的的同同时时从从蛋蛋白白质质分分子子周周围围的的水水化化层层中中夺夺走走了了水水分分子子，破破坏坏了了蛋蛋白白质质分分子子的的水水膜膜，因而

45、发生沉淀作用。因而发生沉淀作用。第44页/共56页2.有机溶剂沉淀法的优、缺点有机溶剂沉淀法的优、缺点(1)优优点点：分分辨辨能能力力比比盐盐析析法法高高，即即一一种种蛋蛋白白质质或或其其他他溶溶质质只在一个比较窄的有机溶剂浓度范围内沉淀；沉淀不用脱盐。只在一个比较窄的有机溶剂浓度范围内沉淀；沉淀不用脱盐。(2)缺缺点点：是是对对某某些些具具有有生生物物活活性性的的大大分分子子容容易易引引起起变变性性失失活，操作需在低温下进行。活，操作需在低温下进行。3.有机溶剂沉淀的影响因素有机溶剂沉淀的影响因素(1)温度：通常温度越低，得到的蛋白质活性越高。温度：通常温度越低，得到的蛋白质活性越高。(2)

46、样样品品浓浓度度：低低浓浓度度样样品品消消耗耗有有机机溶溶剂剂量量大大，样样品品回回收收率率低低，但但杂杂蛋蛋白白与与样样品品共共沉沉淀淀的的作作用用小小；高高浓浓度度样样品品节节省省有有机机溶溶剂，减少变性的危险，但杂蛋白的共沉淀作用大。剂，减少变性的危险，但杂蛋白的共沉淀作用大。(3)pH值：通常选在等电点附近。值：通常选在等电点附近。4.离离子子强强度度：通通常常溶溶液液中中盐盐浓浓度度不不超超过过5；乙乙醇醇用用量量不不超超过原蛋白质水溶液体积的倍。过原蛋白质水溶液体积的倍。第45页/共56页六、化学试剂的安全使用六、化学试剂的安全使用1、化学、化学试剂存放与保管存放与保管见见光光易易

47、分分解解试试剂剂(AgNO3、CHCl3、CCl4)：置置于于棕棕色瓶中。色瓶中。碱碱性性较较强强溶溶液液(NaOH、KOH、浓浓氨氨水水)：置置于于有有橡皮塞的玻璃瓶中。橡皮塞的玻璃瓶中。过过氧氧化化氢氢(H2O2)：见见光光易易分分解解且且易易被被玻玻璃璃中中的的微微量量金金属属元元素素催催化化分分解解，应应置置于于不不透透明明的的塑塑料料瓶瓶中中，必必要时用黑色纸罩住。要时用黑色纸罩住。第46页/共56页2 2、危险药品的分类、性质及管理、危险药品的分类、性质及管理 类别类别类别类别 实例实例实例实例 性质性质性质性质 注意事项注意事项注意事项注意事项 易爆品易爆品易爆品易爆品苦味酸、三

48、硝基甲苦味酸、三硝基甲苦味酸、三硝基甲苦味酸、三硝基甲苯、硝酸铵苯、硝酸铵苯、硝酸铵苯、硝酸铵遇高热、摩擦、遇高热、摩擦、遇高热、摩擦、遇高热、摩擦、撞击可能剧烈反撞击可能剧烈反撞击可能剧烈反撞击可能剧烈反应，放热量大应，放热量大应，放热量大应，放热量大存于阴凉、低矮处，存于阴凉、低矮处，存于阴凉、低矮处，存于阴凉、低矮处，轻拿轻放轻拿轻放轻拿轻放轻拿轻放易燃有机溶剂易燃有机溶剂易燃有机溶剂易燃有机溶剂丙酮、乙醚、甲醇、丙酮、乙醚、甲醇、丙酮、乙醚、甲醇、丙酮、乙醚、甲醇、乙醇、苯乙醇、苯乙醇、苯乙醇、苯沸点低、易挥发、沸点低、易挥发、沸点低、易挥发、沸点低、易挥发、遇明火燃烧遇明火燃烧遇明火

49、燃烧遇明火燃烧存放阴凉处，远离热存放阴凉处，远离热存放阴凉处，远离热存放阴凉处，远离热源，注意通风源，注意通风源，注意通风源，注意通风 易燃气体易燃气体易燃气体易燃气体氢气、乙炔、甲烷氢气、乙炔、甲烷氢气、乙炔、甲烷氢气、乙炔、甲烷撞击、受热易燃；撞击、受热易燃；撞击、受热易燃；撞击、受热易燃；与空气适当比例与空气适当比例与空气适当比例与空气适当比例混合爆炸混合爆炸混合爆炸混合爆炸 易燃固体易燃固体易燃固体易燃固体白磷、硫磺、红磷、白磷、硫磺、红磷、白磷、硫磺、红磷、白磷、硫磺、红磷、镁粉、铝粉等镁粉、铝粉等镁粉、铝粉等镁粉、铝粉等自燃（白磷）或自燃（白磷）或自燃（白磷）或自燃（白磷）或燃点低

50、燃点低燃点低燃点低单独存放于通风干燥单独存放于通风干燥单独存放于通风干燥单独存放于通风干燥处处处处第47页/共56页遇水燃烧物遇水燃烧物遇水燃烧物遇水燃烧物锂、钠、钾、锂、钠、钾、锂、钠、钾、锂、钠、钾、电石、锌粉电石、锌粉电石、锌粉电石、锌粉与水剧烈反应，与水剧烈反应，与水剧烈反应，与水剧烈反应，放出可燃性气体放出可燃性气体放出可燃性气体放出可燃性气体锂用石蜡密封；钠、钾锂用石蜡密封；钠、钾锂用石蜡密封；钠、钾锂用石蜡密封；钠、钾保存于煤油中；电石、保存于煤油中；电石、保存于煤油中；电石、保存于煤油中；电石、锌粉置干燥处锌粉置干燥处锌粉置干燥处锌粉置干燥处腐蚀性药品腐蚀性药品腐蚀性药品腐蚀性