细胞工程本科简化.pptx

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1、会计学1细胞工程本科简化细胞工程本科简化一一.概念概念人工条件下，高密度大量培养基因人工条件下，高密度大量培养基因工程、细胞融合或转化所形成的工程、细胞融合或转化所形成的有用动物细胞，生产珍贵药品的有用动物细胞，生产珍贵药品的技术，为细胞工程不可缺少的一技术，为细胞工程不可缺少的一部分。部分。培养基培养基-与实验室基本一致，常与实验室基本一致，常采用无血清培养基采用无血清培养基第1页/共12页二二.培养技术种类培养技术种类:n1.悬浮培养法悬浮培养法-适于肿瘤细胞、适于肿瘤细胞、杂交瘤细胞、血液及淋巴细胞杂交瘤细胞、血液及淋巴细胞.n 2.固定化培养法固定化培养法-适于正常组织适于正常组织细胞

2、、二倍体细胞细胞、二倍体细胞.n 3.微载体培养法微载体培养法-由上述二法发由上述二法发展而来，具有悬浮培养固定化培养展而来，具有悬浮培养固定化培养优点，适于正常组织细胞、二倍体优点，适于正常组织细胞、二倍体细胞细胞.第2页/共12页一一)悬浮培养法悬浮培养法n n1.概念概念-细胞在培养液中呈悬细胞在培养液中呈悬浮状态生长繁殖的培养方法浮状态生长繁殖的培养方法n n 2.特点特点:n n1)-适于培养肿瘤细胞、杂交瘤适于培养肿瘤细胞、杂交瘤细胞、血液细胞、淋巴细胞细胞、血液细胞、淋巴细胞 n n2)可连续测定细胞浓度，连续可连续测定细胞浓度，连续收集部分细胞进行移殖继代培收集部分细胞进行移殖

3、继代培养养 n n3)移殖继代无需消化分散，免移殖继代无需消化分散，免受伤害受伤害 4)细胞收率高细胞收率高第3页/共12页二二)固定化培养法固定化培养法 n n1.1.概念概念 -将细胞限制或固定在特定空将细胞限制或固定在特定空将细胞限制或固定在特定空将细胞限制或固定在特定空间位置的培养技术间位置的培养技术间位置的培养技术间位置的培养技术.n n 2.2.优点优点 :n n1)细胞生长密度高，细胞生长密度高，n n2)细胞损伤低，细胞损伤低，n n3)易更换培养液易更换培养液;n n 4)易分离细胞和培养液，易分离细胞和培养液，n n5)产物浓度高，易分离纯化产物浓度高，易分离纯化n n3

4、方法方法:n n1)吸附法吸附法-中空纤维膜，陶瓷，中空纤维膜，陶瓷，硅胶硅胶n n2)包埋法包埋法-琼脂，琼脂糖，胶琼脂，琼脂糖，胶原原第4页/共12页三三)微载体培养法微载体培养法n n1概念概念-将细胞吸附于微载体将细胞吸附于微载体表面，在培养液中进行悬浮培表面，在培养液中进行悬浮培养，使细胞在养，使细胞在微载体表面微载体表面长成单层的培养方法长成单层的培养方法.n n2 优点优点:n n1)比表面积大比表面积大 n n2)细胞生长均一细胞生长均一 n n3)占用空间小，培养基利用率高占用空间小，培养基利用率高 n n4)重复性好，放大易，重复性好，放大易，n n5)易收获，易检测易收获

5、，易检测第5页/共12页微载体培养系统微载体培养系统n n原理：利用固体小颗粒作为载体，细胞附着之，通过连续搅拌悬浮于培养液中。n n微载体是由天然葡萄糖聚合物（葡聚糖）或者各种合成的聚合物组成的。目前商品化的有Cytodex，biocarrier，gelibead，和DEAEcellose等。第6页/共12页n n3 3 微载体选择条件微载体选择条件微载体选择条件微载体选择条件 :n n1)1)不含毒害细胞成分不含毒害细胞成分不含毒害细胞成分不含毒害细胞成分 n n2)2)有一定亲水性，与细胞相容性好有一定亲水性，与细胞相容性好有一定亲水性，与细胞相容性好有一定亲水性，与细胞相容性好 n n

6、3)3)比重略大于培养基，比重略大于培养基，比重略大于培养基，比重略大于培养基，1.031.05 1.031.05 n n4)4)直径直径直径直径4012040120微米，溶胀后微米，溶胀后微米，溶胀后微米，溶胀后6028060280，粒，粒，粒，粒度均匀，透明外表，比表面积大度均匀，透明外表，比表面积大度均匀，透明外表，比表面积大度均匀，透明外表，比表面积大 n n5)5)耐高温、高压耐高温、高压耐高温、高压耐高温、高压 n n6)6)不吸附培养基中成分不吸附培养基中成分不吸附培养基中成分不吸附培养基中成分 n n7)7)收获细胞或产品易收获细胞或产品易收获细胞或产品易收获细胞或产品易 n

7、n8)8)价廉，能重复使用价廉，能重复使用价廉，能重复使用价廉，能重复使用第7页/共12页三三 大规模动物细胞培养的问题及对策大规模动物细胞培养的问题及对策 n n1.1.细胞培养环境中抑制因素的积聚细胞培养环境中抑制因素的积聚细胞培养环境中抑制因素的积聚细胞培养环境中抑制因素的积聚-主要限制因素主要限制因素主要限制因素主要限制因素 n n1)氨离子的积累氨离子的积累:一是培养基，一是培养基，一是细胞代谢。一是细胞代谢。n n两者都涉及谷氨酰胺，两者都涉及谷氨酰胺，需要防需要防止培养基中止培养基中Gln自然分解，限制自然分解，限制Gln用量，用量，尽量去除培养基中的尽量去除培养基中的氨氨.n

8、n2)高浓度乳酸高浓度乳酸:降低培养基中降低培养基中葡萄糖葡萄糖浓度以减少乳酸产生浓度以减少乳酸产生,平衡葡萄糖和平衡葡萄糖和Gln的比例的比例n n3)CO2积聚积聚:控制通气参数，控制通气参数，平衡氧的输送及平衡氧的输送及CO2的去除的去除 第8页/共12页2 细胞死亡与凋亡细胞死亡与凋亡用用基因工程方法将基因工程方法将bcl-2基因基因-细胞细胞凋亡抑制基因凋亡抑制基因导入细胞中导入细胞中-众多研究者的选择众多研究者的选择第9页/共12页3 培养基与细胞系培养基与细胞系n n1.1.无血清培基无血清培基无血清培基无血清培基n n避免了血清的批次、质量、成分等对细胞避免了血清的批次、质量、

9、成分等对细胞避免了血清的批次、质量、成分等对细胞避免了血清的批次、质量、成分等对细胞培养造成的污染、毒性作用和不利于产品培养造成的污染、毒性作用和不利于产品培养造成的污染、毒性作用和不利于产品培养造成的污染、毒性作用和不利于产品纯化等不良影响。用于生产疫苗、单抗和纯化等不良影响。用于生产疫苗、单抗和纯化等不良影响。用于生产疫苗、单抗和纯化等不良影响。用于生产疫苗、单抗和各种生物活性蛋白等生物制品各种生物活性蛋白等生物制品各种生物活性蛋白等生物制品各种生物活性蛋白等生物制品.n n无血清培基成分的优化无血清培基成分的优化无血清培基成分的优化无血清培基成分的优化,维持高密度培养。维持高密度培养。维

10、持高密度培养。维持高密度培养。n n2.2.不同类型的细胞甚至不同的细胞系或细不同类型的细胞甚至不同的细胞系或细不同类型的细胞甚至不同的细胞系或细不同类型的细胞甚至不同的细胞系或细胞株胞株胞株胞株都有可能有各自的无血清培基构成。都有可能有各自的无血清培基构成。都有可能有各自的无血清培基构成。都有可能有各自的无血清培基构成。第10页/共12页4 对生物反应器更多培养状态参数的在线过程监对生物反应器更多培养状态参数的在线过程监控控n n1在生物反应器中，温度、在生物反应器中，温度、pH值、溶解氧的值、溶解氧的浓度监测浓度监测n n2 用亲和层析与在线取样系统偶联来进行在用亲和层析与在线取样系统偶联来进行在线蛋白含量测定线蛋白含量测定 n n3 在线反相色谱来监测重组蛋白的糖基化以在线反相色谱来监测重组蛋白的糖基化以了解产品的一致性了解产品的一致性 第11页/共12页