药物的鉴别实验.pptx

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1、会计学1药物的鉴别实验药物的鉴别实验 l药物的鉴别试验药物的鉴别试验 l 药物的杂质检查药物的杂质检查 l 药物定量分析与分析方法验证药物定量分析与分析方法验证药品检验工作的基本规律药品检验工作的基本规律 Basic regularity of drug inspection第一节第一节 药物鉴别试验的定义与目的药物鉴别试验的定义与目的第1页/共59页定义：定义：根据药物的分子结构、理化性质，采用物理、化根据药物的分子结构、理化性质，采用物理、化学或生物学方法来学或生物学方法来判断判断药物的药物的真伪真伪。目的：目的：不是对未知物进行定性分析，而是不是对未知物进行定性分析，而是证实证实贮藏在有

2、贮藏在有标签容器中的药物是否为其所收载的标签容器中的药物是否为其所收载的药物药物。意义：意义：它是药品质量检验工作中的它是药品质量检验工作中的首项任务首项任务，只有在，只有在药物鉴别无误的情况下，进行药物的杂质检查、含量药物鉴别无误的情况下，进行药物的杂质检查、含量测定等分析才有意义测定等分析才有意义第2页/共59页性状项和物理常数确认性状项和物理常数确认 鉴别项下规定的试验鉴别项下规定的试验 原原料料药药鉴鉴别别 制制剂剂鉴鉴别别第二节第二节 鉴别试验的项目鉴别试验的项目第3页/共59页一、性状一、性状药物的性状反映了药物特有的物理性质药物的性状反映了药物特有的物理性质,包括外包括外观、溶解

3、度、物理常数。观、溶解度、物理常数。1.外观：外观：指药品的外表感观和色泽，包括药物的聚集指药品的外表感观和色泽，包括药物的聚集状态、晶型、色泽以及臭、味等性质。状态、晶型、色泽以及臭、味等性质。第4页/共59页例子：例子：CHP2010中盐酸异丙嗪的性状描述：中盐酸异丙嗪的性状描述：本品为白色或乳白色结晶性粉末；有微臭，味极本品为白色或乳白色结晶性粉末；有微臭，味极苦；有引湿性；遇光渐变色；水溶液显酸性反应。苦；有引湿性；遇光渐变色；水溶液显酸性反应。盐酸异丙嗪片的性状描述：本品为糖衣片，除去盐酸异丙嗪片的性状描述：本品为糖衣片，除去包衣后显白色。包衣后显白色。色泽色泽晶型晶型聚集状聚集状态

4、态气味气味其它其它第5页/共59页2.2.溶解度：溶解度：一定程度上反映了药品的纯度一定程度上反映了药品的纯度。药品在不药品在不同溶剂中的溶解性能用同溶剂中的溶解性能用“极易溶解、易溶、溶解、略极易溶解、易溶、溶解、略溶、微溶、极微溶解、几乎不溶或不溶溶、微溶、极微溶解、几乎不溶或不溶”来描述。来描述。3.3.物理常数：物理常数：是检定药品质量的重要指标，用于药是检定药品质量的重要指标，用于药品鉴别，反映其纯杂程度。它包括：品鉴别，反映其纯杂程度。它包括：熔点熔点、馏程馏程、相对密度相对密度、凝点凝点、比旋度比旋度、折光率折光率、黏度黏度和和吸收系吸收系数数等。等。第6页/共59页熔熔点点固体

5、熔化成液体的温度固体熔化成液体的温度 熔融同时分解的温度熔融同时分解的温度 自初熔至全熔的一段温度自初熔至全熔的一段温度 物理常数物理常数（1 1）熔点）熔点ChP(2010)ChP(2010)规定规定第7页/共59页法定测定方法：法定测定方法：毛细管测定法，分三法：毛细管测定法，分三法：第一法：测定易粉碎的固体药品第一法：测定易粉碎的固体药品第二法：测定不易粉碎的固体药品第二法：测定不易粉碎的固体药品第三法：测定凡士林或其他类似物质第三法：测定凡士林或其他类似物质第8页/共59页（2 2）比旋度）比旋度 在一定波长与温度下，偏振光透过长在一定波长与温度下，偏振光透过长1dm1dm且每且每1m

6、l1ml中中含有旋光性物质含有旋光性物质1g1g的溶液时测得的旋光度。的溶液时测得的旋光度。作用：反映手性药物特性及其纯度的主要指标，用作用：反映手性药物特性及其纯度的主要指标，用以区别药品、检查纯度或测定制剂的含量。以区别药品、检查纯度或测定制剂的含量。维生素维生素C的比旋度测定：的比旋度测定：20.521.5例子例子手性手性第9页/共59页吸收系数：吸收系数：在给定的波长、溶剂、温度条件下，吸在给定的波长、溶剂、温度条件下，吸光物质在光物质在单位浓度、单位液层厚度单位浓度、单位液层厚度时的吸收度。时的吸收度。（3 3）吸收系数）吸收系数摩尔吸收系数摩尔吸收系数 溶液浓度溶液浓度1mol/L

7、 1mol/L 百分吸收系数百分吸收系数 溶液浓度溶液浓度1%1%（g/mlg/ml）不仅可以用来考察原料药的质量，还是不仅可以用来考察原料药的质量，还是UV测定含量的依据测定含量的依据第10页/共59页依依 据据：某一类药物组成中的阴离子和阳离子的特殊某一类药物组成中的阴离子和阳离子的特殊反应或典型的有机官能团反应。反应或典型的有机官能团反应。中国药典附录收载一般鉴别试验中国药典附录收载一般鉴别试验：丙二酰脲类、托烷生物碱类、芳香第一胺类丙二酰脲类、托烷生物碱类、芳香第一胺类 有机氟化物类、无机金属盐类、有机酸盐有机氟化物类、无机金属盐类、有机酸盐 无机酸盐无机酸盐二、一般鉴别试验二、一般鉴

8、别试验第11页/共59页是证实是证实某一种药物某一种药物的依据，它是根据的依据，它是根据每一种每一种药物化药物化学结构的学结构的差异差异及其所引起的物理化学及其所引起的物理化学特性特性的的不同不同，选用某些特有的灵敏定性反应，来鉴别药物真伪。选用某些特有的灵敏定性反应，来鉴别药物真伪。三、专属鉴别试验三、专属鉴别试验例子例子:同属同属巴比妥类巴比妥类使溴褪色使溴褪色硫化铅沉淀硫化铅沉淀第12页/共59页第三节第三节 鉴别方法鉴别方法一、化学鉴别法一、化学鉴别法二、光谱鉴别法二、光谱鉴别法三、色谱法三、色谱法四、显微鉴别法四、显微鉴别法五、生物学法五、生物学法第13页/共59页 包括包括包括包括

9、呈色法、沉淀法、呈现荧光法、生呈色法、沉淀法、呈现荧光法、生呈色法、沉淀法、呈现荧光法、生呈色法、沉淀法、呈现荧光法、生成气体法、衍生物制备法成气体法、衍生物制备法成气体法、衍生物制备法成气体法、衍生物制备法及及及及特异焰色法。特异焰色法。特异焰色法。特异焰色法。优点：操作简便、快速、实验成本低，应用广优点：操作简便、快速、实验成本低，应用广优点：操作简便、快速、实验成本低，应用广优点：操作简便、快速、实验成本低，应用广缺点：专属性差缺点：专属性差缺点：专属性差缺点：专属性差一、化学鉴别法一、化学鉴别法第14页/共59页1.1.呈呈色色反反应应鉴鉴别别法法 指指供供试试品品溶溶液液中中加加入入

10、适适当当的的试试剂剂溶溶液液，在在一一定定条条件件下下进进行行反反应应，生生成成易易于于观观测测的的有色产物。有色产物。（1 1）三氯化铁呈色反应：）三氯化铁呈色反应：用于酚羟基或水解后产生酚羟基用于酚羟基或水解后产生酚羟基 （2 2）异羟肟酸铁反应：）异羟肟酸铁反应：多用于芳酸及其酯类、酰胺类多用于芳酸及其酯类、酰胺类 （3 3）茚三酮呈色反应：）茚三酮呈色反应：用于结构中含有脂肪氨基药物用于结构中含有脂肪氨基药物 （4 4）重氮化）重氮化-偶合显色反应：偶合显色反应：用于芳伯氨基或潜在芳伯氨基用于芳伯氨基或潜在芳伯氨基 （5 5）氧化还原显色反应及其它颜色反应）氧化还原显色反应及其它颜色反

11、应第15页/共59页2.2.沉淀生成反应鉴别法沉淀生成反应鉴别法 （1 1）与重金属离子的沉淀反应）与重金属离子的沉淀反应 （2 2）与硫氰化铬铵（雷氏盐）的沉淀反应）与硫氰化铬铵（雷氏盐）的沉淀反应 （3 3）其它沉淀反应。）其它沉淀反应。多用于生物碱及其盐，具有芳香环的有机碱多用于生物碱及其盐，具有芳香环的有机碱及其盐。及其盐。第16页/共59页常用的荧光发射形式：常用的荧光发射形式：（1 1）药物本身可在可见光下发射荧光；）药物本身可在可见光下发射荧光；（2 2）药物溶液加硫酸后，在可见光下发射荧光；）药物溶液加硫酸后，在可见光下发射荧光；（3 3）药物和溴反应后，于可见光下发射出荧光；

12、）药物和溴反应后，于可见光下发射出荧光；3.3.荧光反应鉴别法荧光反应鉴别法（4 4）药药物物和和间间苯苯二二酚酚反反应应后后，发发射射出出荧荧光光及及药药物物经其它反应后，发射荧光。经其它反应后，发射荧光。第17页/共59页（一）（一）UVUV法法二、光谱鉴别法二、光谱鉴别法在在紫外紫外紫外紫外-可见吸收光谱中，常以吸收谱带可见吸收光谱中，常以吸收谱带可见吸收光谱中，常以吸收谱带可见吸收光谱中，常以吸收谱带最大吸收位置处波长最大吸收位置处波长最大吸收位置处波长最大吸收位置处波长maxmaxmaxmax和该波长下的摩尔和该波长下的摩尔和该波长下的摩尔和该波长下的摩尔吸光系数吸光系数吸光系数吸光

13、系数maxmaxmaxmax来表征化合物的吸收特征。来表征化合物的吸收特征。来表征化合物的吸收特征。来表征化合物的吸收特征。第18页/共59页 美法仑 测定测定maxmax，或同时测定，或同时测定minmin；测定一定浓度的供试液在测定一定浓度的供试液在maxmax处的处的A A 规定规定和和E E 规定规定 和和A A1 1/A/A2 2 经化学处理后，测定其反应产物的经化学处理后，测定其反应产物的吸收光谱特性。吸收光谱特性。12pChPChP采用对比法采用对比法,在满足仪器要求的前提下在满足仪器要求的前提下,与文献与文献值对比值对比,常用方法有五种：常用方法有五种：第19页/共59页UVU

14、V光谱通常只有少数吸收峰，如不同的化合光谱通常只有少数吸收峰，如不同的化合物有物有相同的发色团或结构相似相同的发色团或结构相似，则它们的，则它们的UVUV吸收吸收光谱可能相似，具有相同的光谱可能相似，具有相同的maxmaxmaxmax和和和和minminminmin，但是在一定波长处，不同的化合物吸收系数但是在一定波长处，不同的化合物吸收系数E E1cm1cm1%1%常常不同，所以规定一定波长处的吸收度常常不同，所以规定一定波长处的吸收度（或吸收系数）与不同波长吸收度的比值，不仅（或吸收系数）与不同波长吸收度的比值，不仅提高了方法的专属性，实际上也检验了供试品的提高了方法的专属性，实际上也检验

15、了供试品的纯度。纯度。第20页/共59页如：三唑仑，用无水乙醇制成每如：三唑仑，用无水乙醇制成每1mL1mL含含5g5g的溶液，的溶液，照分光光度法测定，在照分光光度法测定，在221nm221nm有最大吸收。有最大吸收。如：地蒽酚，取供试液，照分光光度法测定，于如：地蒽酚，取供试液，照分光光度法测定，于240nm240nm400nm400nm的波长范围测定吸收度，在的波长范围测定吸收度，在257nm257nm、289nm289nm、356nm356nm处有最大吸收；在处有最大吸收；在257nm257nm与与289nm289nm的的吸收度比值应为吸收度比值应为1.061.061.101.10；在

16、；在356nm356nm与与 289nm289nm的的吸收度比值应为吸收度比值应为0.900.900.940.94和和25252828和和21.521.523.523.5。如：甲砜霉素，取供试液，照分光光度法测定，在如：甲砜霉素，取供试液，照分光光度法测定，在266nm266nm、273nm273nm处有最大吸收；处有最大吸收；吸收系数吸收系数E E1cm 1cm 1%1%分别分别为为25252828和和21.521.523.523.5。第21页/共59页pUSPUSP采用对照品对比法采用对照品对比法如如:阿替洛尔的鉴别阿替洛尔的鉴别,本品本品50g/ml50g/ml的甲醇溶液的甲醇溶液显示的

17、紫外光谱图与同样条件下测得的对照标显示的紫外光谱图与同样条件下测得的对照标准品的紫外光谱图与一致。准品的紫外光谱图与一致。要求在相同的波长处有最大吸收、最小吸收、和要求在相同的波长处有最大吸收、最小吸收、和相同的吸收系数，或吸收比在规定的限度内。相同的吸收系数，或吸收比在规定的限度内。第22页/共59页pJPJP采用方法同采用方法同ChPChPpBPBP规定一定范围内仅有一个最大吸收或最小吸收规定一定范围内仅有一个最大吸收或最小吸收如盐酸吗啡的鉴别，取本品如盐酸吗啡的鉴别，取本品10mg10mg，加水稀释成，加水稀释成100ml100ml，于，于250-350nm250-350nm波长范围内测

18、定，显示在波长范围内测定，显示在285nm285nm处有一吸收峰，吸收系数为处有一吸收峰，吸收系数为4141。第23页/共59页注意事项注意事项（1 1）仪器的波长、吸收度精密度符合要求。）仪器的波长、吸收度精密度符合要求。（2 2）对吸收带很窄的样品，应考虑仪器狭缝对测定）对吸收带很窄的样品，应考虑仪器狭缝对测定结果的影响。结果的影响。（3 3）选择合适的溶剂。注意溶剂的吸收波长是否干）选择合适的溶剂。注意溶剂的吸收波长是否干扰。扰。（4 4）为了增加药物的溶解度或稳定性，或需要其在）为了增加药物的溶解度或稳定性，或需要其在PHPH条件中产生相应的特征吸收，常常在溶剂中加入条件中产生相应的特

19、征吸收，常常在溶剂中加入一定浓度的酸、碱或缓冲液一定浓度的酸、碱或缓冲液第24页/共59页(二二)IR)IR法法 在药物分析中，在药物分析中，IRIR光谱主要用于药物的鉴别光谱主要用于药物的鉴别和结构测定，有共价键的化合物，都有其特征的和结构测定，有共价键的化合物，都有其特征的IRIR光谱，光谱，除光学异构体及长链烷烃同系物外，几乎没除光学异构体及长链烷烃同系物外，几乎没有两种化合物具有完全相同的有两种化合物具有完全相同的IRIR光谱，光谱，IRIR特征吸特征吸收峰较多，具有收峰较多，具有“指纹性指纹性”。IRIR法主要用于组分单一、结构明确原料药的鉴别法主要用于组分单一、结构明确原料药的鉴别

20、注意注意第25页/共59页二、光谱鉴别法二、光谱鉴别法特征区指纹区第26页/共59页pCh.PCh.P采用采用标准图谱对照法。标准图谱对照法。按规定绘制供试品的按规定绘制供试品的IRIR图谱，然后与图谱，然后与药品药品红外光谱集红外光谱集中的对照品对比，对照关键谱带中的对照品对比，对照关键谱带的有无以及各谱带的相对强弱。的有无以及各谱带的相对强弱。pUSPUSP采用采用对照品法对照品法pJPJP两种方法都用两种方法都用pBPBP主要用标准图谱对照法主要用标准图谱对照法第27页/共59页如氯羟去甲安定的测定如氯羟去甲安定的测定取本品取本品,经干燥后用溴化钾压片测定经干燥后用溴化钾压片测定,其红外

21、吸收图其红外吸收图谱谱,3440cm,3440cm-1-1,3220cm,3220cm-1-1,1695cm,1695cm-1-1,1614cm,1614cm-1-1,1324cm,1324cm-1 1,1132cm,1132cm-1-1,828cm,828cm-1-1波数附近有吸收。波数附近有吸收。第28页/共59页注意：注意：1.1.供试品的测试条件一定要与对照品一致。供试品的测试条件一定要与对照品一致。2.2.样品纯度应大于样品纯度应大于9898,应不含水分。应不含水分。3.3.适度研磨，适度研磨，2 25m5m为宜。为宜。4.4.盐酸盐样品制样时可采用氯化钾压片。盐酸盐样品制样时可采用

22、氯化钾压片。4.4.排除赋形剂的干扰。排除赋形剂的干扰。第29页/共59页制剂的红外鉴别制剂的红外鉴别(2005(2005版增版增)1.1.直接用有机溶剂提取。直接用有机溶剂提取。2.2.对于有机酸的碱盐或有机碱的酸盐，可以加酸对于有机酸的碱盐或有机碱的酸盐，可以加酸或碱使其游离。或碱使其游离。3 3对于有机酸品种，可以先加碱使主成分溶解，对于有机酸品种，可以先加碱使主成分溶解，过滤后再加酸使主成分游离并沉淀后测定过滤后再加酸使主成分游离并沉淀后测定4.4.辅料无干扰辅料无干扰,与原料药的标准图谱对照。与原料药的标准图谱对照。5.5.如辅料干扰无法完全排除如辅料干扰无法完全排除,在指纹区可规定

23、在指纹区可规定3-53-5个待测成分的特征吸收峰个待测成分的特征吸收峰,其误差应小于其误差应小于5 5。第30页/共59页（三）近红外光谱法（三）近红外光谱法(Near-Infrared spectrophotometry，NIR)波长在波长在750到到2000nm,下为波数下为波数第31页/共59页（四）原子吸收法四）原子吸收法(Atomic Absorption)利用原子蒸气可以吸收由该元素作为阴极的利用原子蒸气可以吸收由该元素作为阴极的空心阴极灯发出的特征谱线的特性，空心阴极灯发出的特征谱线的特性，根据供试溶根据供试溶液在特征谱线处的最大吸收和特征谱线的强度减液在特征谱线处的最大吸收和特

24、征谱线的强度减弱程度进行定性、定量分析。弱程度进行定性、定量分析。第32页/共59页（五）核磁共振（五）核磁共振（六）质谱鉴别法（六）质谱鉴别法第33页/共59页（七）（七）X X射线粉末衍射法射线粉末衍射法 一束准直的单色一束准直的单色X X射线照射旋转单晶或粉末晶体射线照射旋转单晶或粉末晶体时，便发生衍射。时，便发生衍射。结晶物质的鉴别可通过比较供试品结晶物质的鉴别可通过比较供试品与已知物质的与已知物质的X X射线粉末衍射图来完成。射线粉末衍射图来完成。鉴别依据：鉴别依据：衍射衍射射线的射线的衍射角，相对强度和面间距。衍射角，相对强度和面间距。第34页/共59页同质异晶现象：同质异晶现象：

25、化学结构相同的药物由于结晶条化学结构相同的药物由于结晶条件的差异，生成具有不同点阵结构的晶体。件的差异，生成具有不同点阵结构的晶体。药物多晶型分为药物多晶型分为稳定型：稳定型：熵值小、熔点高、化学结构稳定，但溶出熵值小、熔点高、化学结构稳定，但溶出速率和溶解度最小，生物利用度差。速率和溶解度最小，生物利用度差。亚稳型：亚稳型：不稳型：不稳型：第35页/共59页 可见，同一药物的不同晶型在密度、熔点、可见，同一药物的不同晶型在密度、熔点、溶解度、溶出速率、硬度等物理性质方面有溶解度、溶出速率、硬度等物理性质方面有显著差异，从而影响其显著差异，从而影响其稳定性、生物利用度、稳定性、生物利用度、毒副

26、反应及疗效。毒副反应及疗效。第36页/共59页第37页/共59页药物多晶型现象的研究已经成为控制药品质量及药物多晶型现象的研究已经成为控制药品质量及设计新药剂型的重要内容。设计新药剂型的重要内容。采用的方法：采用的方法：一、熔点法一、熔点法二、二、IRIR法法三、热分析法三、热分析法四、四、X X射线粉末衍射法射线粉末衍射法第38页/共59页 利用不同物质在不同色谱条件下，产生各自利用不同物质在不同色谱条件下，产生各自的特征色谱行为（的特征色谱行为（RfRf值或保留时间）进行鉴别试值或保留时间）进行鉴别试验。验。三、色谱鉴别法三、色谱鉴别法(1)TLC(1)TLC法法（2 2）高效液相色谱法）

27、高效液相色谱法（3 3）气相色谱法）气相色谱法第39页/共59页(一一)薄层色谱鉴别法薄层色谱鉴别法(Thin-Layer Chromatography)优点优点:设备简单、操作方便、灵敏度高设备简单、操作方便、灵敏度高操作操作:铺板铺板 点样点样 显色显色方法：方法：1.1.采用与对照品溶液同浓度，在同一采用与对照品溶液同浓度，在同一薄层板上点样。薄层板上点样。要求供试品色谱能显要求供试品色谱能显示与对照品一致的斑点。示与对照品一致的斑点。鉴别分离的依据：鉴别分离的依据：斑点的斑点的RfRf值；斑点值；斑点形状、颜色；以及整个色谱的指纹分形状、颜色；以及整个色谱的指纹分析。析。第40页/共5

28、9页2.2.采用采用供试品溶液与对照品溶液等体积混合，供试品溶液与对照品溶液等体积混合，应显示应显示单一、紧密单一、紧密的斑点。的斑点。第41页/共59页3.3.选用与供试品化学结构相似的药物对照品溶液选用与供试品化学结构相似的药物对照品溶液与供试品溶液的主斑点比较，两者值应不同。与供试品溶液的主斑点比较，两者值应不同。4.4.将（将（3 3）下两种溶液等体积混合，应显示两个）下两种溶液等体积混合，应显示两个清晰分离的斑点。清晰分离的斑点。第42页/共59页供试品溶液的制备：供试品溶液的制备：不同种类的溶剂对原点及分不同种类的溶剂对原点及分离后斑点的形状有影响离后斑点的形状有影响对照液的制备：

29、对照液的制备：对照液的浓度应尽量接近供试液对照液的浓度应尽量接近供试液的浓度。的浓度。点样：点样：点样量适当。原点超载时，展开剂绕行，点样量适当。原点超载时，展开剂绕行，使斑点脱尾使斑点脱尾展开：展开：展开缸预先饱和，可避免边缘效应展开缸预先饱和，可避免边缘效应。影响影响TLCTLC色谱的因素色谱的因素？第43页/共59页 7777版版药药典典收收载载270270中中成成方方和和复复方方制制剂剂中中，仅仅1 1种种采采用用TLCTLC鉴鉴别别；9090版版药药典典共共收收载载中中药药制制剂剂784784种种，其其中中160160个个品品种种采采用用了了TLCTLC鉴鉴别别，占占20.5%20.

30、5%；9595版版药药典典收收载载的的TLCTLC鉴鉴别别品品种种有有417417个个，占占收收载载总总数数的的（920920）45%45%，9595版版药药典典有有602602个个品品种种采采用用了了TLCTLC鉴鉴别别，占占收收载载总总数数的的（992992）60%60%，20002000版版药药典典有有15231523项采用了薄层鉴别法。项采用了薄层鉴别法。第44页/共59页一一 中药标准中不再使用颜色或沉淀的化学反应中药标准中不再使用颜色或沉淀的化学反应和光谱鉴别方法。和光谱鉴别方法。二二标准中大幅增加横切面或粉末显微鉴别。标准中大幅增加横切面或粉末显微鉴别。20052005年版药典共

31、收载显微鉴别年版药典共收载显微鉴别620620项；项；20102010年版仅新增显微鉴别就达年版仅新增显微鉴别就达633633项，项，三三 标准中大量使用专属性较强的薄层色谱标准中大量使用专属性较强的薄层色谱(TLC)(TLC)鉴别技术。鉴别技术。20052005年版药典共收载薄层年版药典共收载薄层色谱鉴别色谱鉴别15071507项；项；20102010年版药典仅新增薄层年版药典仅新增薄层色谱鉴别就达色谱鉴别就达24942494项。项。20102010版药典大幅增加符合中药特点的专属性鉴别版药典大幅增加符合中药特点的专属性鉴别第45页/共59页 中中国国药药典典8585版版对对中中药药材材的的

32、薄薄层层鉴鉴别别是是以以化化学学对对照照品品为为对对照照，要要求求供供试试品品色色谱谱能能显显示示与与对对照照品品一一致的斑点致的斑点.受受到到化化学学对对照照品品品品种种以以及及该该法法专专属属性性较较差差的的限限制制，因因此此在在9090版版中中增增加加了了对对照照品品药药材材的的薄薄层层鉴鉴别别，这这样样除除了了解解决决以以化化学学对对照照品品为为对对照照时时上上述述两两方方面面的的不不足足外外，对对照照品品药药材材的的TLCTLC图图谱谱还还可可以以给给出出比比单单体体化学对照品更多的信息。化学对照品更多的信息。第46页/共59页 在进行中成药的在进行中成药的TLCTLC鉴别时，必须在

33、同一薄层鉴别时，必须在同一薄层板上分别点上成药供试品（阳性），空白（阳性）板上分别点上成药供试品（阳性），空白（阳性），药材对照液，以及化学对照品，以便对在相同的，药材对照液，以及化学对照品，以便对在相同的色谱条件下得到的色谱图进行比较。色谱条件下得到的色谱图进行比较。第47页/共59页 一般规定按供试品含量测定项下的高效液相一般规定按供试品含量测定项下的高效液相色谱条件进行试验。色谱条件进行试验。要求供试品和对照品色谱峰要求供试品和对照品色谱峰的保留时间应一致的保留时间应一致。含量测定方法为。含量测定方法为内标法内标法时，时，可要求供试品溶液和对照品溶液色谱图中可要求供试品溶液和对照品溶液色

34、谱图中药物峰药物峰药物峰药物峰保留时间保留时间与与内标物峰的保留时间内标物峰的保留时间比值比值应相同。应相同。（三）气相色谱法（三）气相色谱法（二）高效液相色谱法（二）高效液相色谱法第48页/共59页五、生物学法五、生物学法 利用药效学和分子生物学等有关技术来利用药效学和分子生物学等有关技术来鉴定药物品质的方法。主要用于抗生素、鉴定药物品质的方法。主要用于抗生素、生化药物和中药的鉴别生化药物和中药的鉴别四、显微鉴别法四、显微鉴别法 主要用于中药及其制主要用于中药及其制剂的鉴别剂的鉴别第49页/共59页六、指纹图谱与特征图谱法六、指纹图谱与特征图谱法-中药鉴别新技术中药鉴别新技术定义：定义：中药

35、材或中药制剂经适当处理后，采用一中药材或中药制剂经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标定该中药材或定的分析手段，得到的能够标定该中药材或中药制剂特性的共有峰的图谱。中药制剂特性的共有峰的图谱。中药指纹图谱按获取方式分为：中药指纹图谱按获取方式分为：色谱色谱、光谱、其他、光谱、其他第50页/共59页色谱指纹图谱的基本属性：色谱指纹图谱的基本属性：pp整体性。整体性。整体性。整体性。将指纹图谱作为一个整体来分析和比较将指纹图谱作为一个整体来分析和比较将指纹图谱作为一个整体来分析和比较将指纹图谱作为一个整体来分析和比较它的综合特征以达到鉴别的目的。它的综合特征以达到鉴别的目的。它的综合特征以

36、达到鉴别的目的。它的综合特征以达到鉴别的目的。pp模糊性。模糊性。模糊性。模糊性。强调分析、比较指纹图谱的相似性，而强调分析、比较指纹图谱的相似性，而强调分析、比较指纹图谱的相似性，而强调分析、比较指纹图谱的相似性，而不是完全相同。不是完全相同。不是完全相同。不是完全相同。pp是一种综合的、量化的色谱鉴别手段是一种综合的、量化的色谱鉴别手段是一种综合的、量化的色谱鉴别手段是一种综合的、量化的色谱鉴别手段。第51页/共59页鉴别实验的新动向鉴别实验的新动向1.1.仪器方法用于药物鉴别的数量大大增加如仪器方法用于药物鉴别的数量大大增加如IRIR和和HPLCHPLC。英美采用的化学鉴别法和仪器鉴别法

37、的条目英美采用的化学鉴别法和仪器鉴别法的条目比约比约1:21:2。3.3.制剂广泛采用红外鉴别法制剂广泛采用红外鉴别法,采取提取分离后采取提取分离后再压片绘制图谱。再压片绘制图谱。第52页/共59页第四节第四节鉴别实验条件及方法验证鉴别实验条件及方法验证鉴别试验鉴别试验应该是应该是在规定条件下完在规定条件下完成的，否则鉴别成的，否则鉴别试验的结果是不试验的结果是不可信的。可信的。影影响响因因素素主主要要有有l溶液的浓度溶液的浓度l溶液的温度溶液的温度l溶液的酸碱度溶液的酸碱度l试验时间试验时间l干扰物质等干扰物质等第53页/共59页 主要指被鉴别药物的浓度，及所用试剂的浓主要指被鉴别药物的浓度

38、，及所用试剂的浓度。由于鉴别试验多采用观测沉淀、颜色或各种度。由于鉴别试验多采用观测沉淀、颜色或各种光学参数的变化，来判定结果，而药物和有关试光学参数的变化，来判定结果，而药物和有关试剂的浓度会直接影响上述的各种变化，必须严格剂的浓度会直接影响上述的各种变化，必须严格规定溶液的浓度。规定溶液的浓度。（一）溶液的浓度（一）溶液的浓度 温度对化学反应的影响很大，一般温度每升温度对化学反应的影响很大，一般温度每升高高1010，可使反应速度增加，可使反应速度增加2-42-4倍。倍。（二）溶液的温度（二）溶液的温度第54页/共59页 许多鉴别反应都需要在一定酸碱度的条件下许多鉴别反应都需要在一定酸碱度的

39、条件下才能进行。溶液酸碱度的作用，在于能使各反应才能进行。溶液酸碱度的作用，在于能使各反应物有足够的浓度处于反应活化状态，使反应生成物有足够的浓度处于反应活化状态，使反应生成物处于稳定和易于观测的状态。物处于稳定和易于观测的状态。（三）溶液的酸碱度（三）溶液的酸碱度 有机化合物的化学反应和无机化合物不同，有机化合物的化学反应和无机化合物不同，一般反应速度较慢。因此，使鉴别反应完成，需一般反应速度较慢。因此，使鉴别反应完成，需要一定时间要一定时间（四）试验时间（四）试验时间第55页/共59页（五）鉴别试验的验证（五）鉴别试验的验证1 1、专属性、专属性其他成分存在的情况下，采用的鉴别方法能否正其

40、他成分存在的情况下，采用的鉴别方法能否正确地鉴别出被测物的特性。确地鉴别出被测物的特性。2 2、耐用性、耐用性 测定条件发生小的变动时，测定结果手动的影响测定条件发生小的变动时，测定结果手动的影响程度。程度。第56页/共59页习题习题2.2.中国药典采用中国药典采用IRIR法鉴别药物的方法是什么法鉴别药物的方法是什么?3.3.下列哪种鉴别方法的专属性最强下列哪种鉴别方法的专属性最强?A.UV B.HPLC C.GC A.UV B.HPLC C.GC D.TLC E.IR D.TLC E.IR4.4.用用UVUV法鉴别药物时法鉴别药物时,常采用核对吸收波长的方法常采用核对吸收波长的方法.影响本实验结果的条件有影响本实验结果的条件有A.A.仪器波长的准确率仪器波长的准确率 B.B.供试品溶液的浓度供试品溶液的浓度C.C.溶剂的种类溶剂的种类 D.D.吸收池的厚度吸收池的厚度 E.E.供试品的纯供试品的纯度度第57页/共59页5.5.影响影响RfRf值的因素有值的因素有A.A.组分的结构和性质组分的结构和性质 B.B.薄层板的性质薄层板的性质C.C.展开剂的性质展开剂的性质 D.D.展开剂蒸气饱和程度展开剂蒸气饱和程度E.E.点样方式点样方式第58页/共59页