药物分析抗生素.pptx

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1、会计学1药物分析抗生素药物分析抗生素原料及制剂（原料）(*/1967）青霉素类36（13）10.31.83头孢菌素类44（16）12.62.24氨基糖苷类38（14）10.91.93四环素类18（6）5.20.92大环内酯类43（11）12.42.19其他（）169（61）48.68.59总计（）348（124）17.69中国药典（2005 年版二部）收载抗生素类药物第1页/共34页1 概述概述抗生素？抗菌药物？抗微生物药物？一、概念第2页/共34页二、分类二、分类二、分类二、分类n n按抗菌谱分按抗菌谱分n n按化学结构分按化学结构分n n按作用机制分按作用机制分n n综合分类综合分类第3页

2、/共34页三、常规分析项目三、常规分析项目n（一）性状（一）性状n（二）（二）鉴别试验鉴别试验 理化方法、生物学方法。理化方法、生物学方法。n（三）（三）检查检查 影响产品稳定性的指标影响产品稳定性的指标 控制杂质的指标控制杂质的指标 与临床安全性密切相关的指标与临床安全性密切相关的指标n（四）（四）效价测定效价测定（抗生素有效成分含量）（抗生素有效成分含量）微生物检定法、理化方法微生物检定法、理化方法第4页/共34页效价测定方法效价测定方法微生物检定法微生物检定法以抗生素对微生物的以抗生素对微生物的抑抑制或杀伤程度为指制或杀伤程度为指标来衡量抗生素效价标来衡量抗生素效价理化方法理化方法根据抗

3、生素的分子结根据抗生素的分子结构特点，利用其特有构特点，利用其特有的化学或物理化学性的化学或物理化学性质进行测定质进行测定特点特点适用于提纯的、化学适用于提纯的、化学结构已明确的抗生素。结构已明确的抗生素。操作简便、省时、方操作简便、省时、方法准确、一定专属性法准确、一定专属性特点特点灵敏度高；测定原理灵敏度高；测定原理与临床应用的要求一与临床应用的要求一致；适用范围广致；适用范围广.操作步骤繁多，测定操作步骤繁多，测定时间长时间长,误差较大误差较大.第5页/共34页2 2 -内酰胺类抗生素内酰胺类抗生素-内酰胺抗生素的发现内酰胺抗生素的发现 Alexander Fleming 发现接种青霉菌

4、的培养物可产生抑制金黄色葡萄球菌生长的物质，1929年，他在英国圣玛丽医院宣读一篇论文，引入“青霉素”(Penicilin)名称并论述该物质具有非常明确的抗菌活性。1941年临床证实青霉素对多种细菌感染有效。Fleming 发现青霉素发现青霉素头孢菌素C是Abraham于1948年发现。第6页/共34页n化学结构与性质化学结构与性质n鉴别试验鉴别试验n化学法、光谱法、色谱法化学法、光谱法、色谱法n特殊杂质检查特殊杂质检查n聚合物、有关物质和异构体、吸收度聚合物、有关物质和异构体、吸收度n含量测定含量测定n碘量法；硝酸汞电位滴定法；可见碘量法；硝酸汞电位滴定法；可见-紫外分紫外分光光度法；光光度

5、法；HPLC法法基本内容第7页/共34页一、化学结构与性一、化学结构与性质质n n（一）（一）典型药物的结构典型药物的结构n n1.1.青霉素族和头孢菌素族青霉素族和头孢菌素族青霉素族和头孢菌素族青霉素族和头孢菌素族基本结构基本结构基本结构基本结构 青霉素族青霉素族青霉素族青霉素族 头孢菌素族头孢菌素族头孢菌素族头孢菌素族 第8页/共34页青霉素青霉素Penicilins头孢菌素头孢菌素Cephalosporins(1)强酸性强酸性(2)旋光性旋光性(3)UV吸收吸收(3)如有共轭如有共轭系统则有系统则有UV吸吸收，否则没有收，否则没有（4）-内酰胺内酰胺环的不稳定性环的不稳定性2.青霉素类和

6、头孢菌素类青霉素类和头孢菌素类理化性质理化性质第9页/共34页-内酰胺环的不稳定性内酰胺环的不稳定性n见见P313青霉素青霉素降解反应降解反应（分解分解、分子重排分子重排）强酸性强酸性 中强酸中强酸、弱酸弱酸 碱性碱性或或青霉素酶青霉素酶完全水解 （pH=2）（pH=4）分子 重排 D-青霉胺青霉胺 青霉酸青霉酸 青霉烯酸青霉烯酸 青霉噻唑酸青霉噻唑酸 青霉醛青霉醛 二氧化碳二氧化碳 脱羧青霉噻唑酸脱羧青霉噻唑酸 D-青霉胺青霉胺 青霉醛青霉醛 金属离子金属离子(铅、铜、铅、铜、汞汞、银、银);催化作用催化作用 第10页/共34页 鉴别试验鉴别试验沉淀反应沉淀反应A.在稀盐酸中生成白色沉淀在稀

7、盐酸中生成白色沉淀B.重氮化重氮化-偶合反应或与三硝基苯酚偶合反应或与三硝基苯酚 反应反应(结晶析出结晶析出)光谱法光谱法UV、IR、NMR色谱法色谱法TLC、HPLC呈色反应呈色反应 1.羟肟酸铁反应羟肟酸铁反应a.茚三酮反应茚三酮反应 b.裴林试剂反应裴林试剂反应a.重氮苯磺酸重氮苯磺酸 b.变色酸变色酸-硫酸硫酸c.H2SO4-HNO3 d.铜盐铜盐2.类似肽键反应类似肽键反应3.其它呈色反应其它呈色反应焰色反应焰色反应(钠、钾盐钠、钾盐)二、鉴别试验第11页/共34页分光光度法分光光度法 n n红外吸收光谱法红外吸收光谱法*-内酰胺类抗生素内酰胺类抗生素共有特征峰共有特征峰-内酰胺内酰

8、胺羰基羰基伸缩振动：伸缩振动：1750 1800 cm-1仲酰胺氨基、羰基仲酰胺氨基、羰基伸缩振动：伸缩振动：3300 cm-1，1525 cm-1，1680 cm-1 羧酸离子羧酸离子的伸缩振动：的伸缩振动：1600 cm-1，1410 cm-1供试品的红外吸收光谱供试品的红外吸收光谱 标准对照品图谱标准对照品图谱n紫外分光光度紫外分光光度法法 max和水解产物的max第12页/共34页呈色反应呈色反应H+FeNH4（SO4）21.羟肟酸铁反应羟肟酸铁反应第13页/共34页a.茚三酮反应茚三酮反应 b.裴林试剂反应裴林试剂反应2.类似肽键反应类似肽键反应(-CONH-,-氨基酸结构氨基酸结构

9、）呈色反应呈色反应a.重氮苯磺酸重氮苯磺酸(-C6H5-OH)b.变色酸变色酸-硫酸硫酸 c.H2SO4-HNO3 d.铜盐铜盐3.其它呈色反应其它呈色反应第14页/共34页沉淀反应沉淀反应盐盐盐盐(无机盐、有机胺盐性质无机盐、有机胺盐性质无机盐、有机胺盐性质无机盐、有机胺盐性质)n n1.在稀盐酸中产生沉淀的反应在稀盐酸中产生沉淀的反应 青霉素钾青霉素钾青霉素钾青霉素钾(钠钠钠钠)盐水溶液盐水溶液盐水溶液盐水溶液 稀盐酸稀盐酸稀盐酸稀盐酸2 2 2 2滴滴滴滴 白色沉淀白色沉淀白色沉淀白色沉淀 (溶于过量盐酸、乙醚、醋酸戊酯、乙醇、氯仿溶于过量盐酸、乙醚、醋酸戊酯、乙醇、氯仿溶于过量盐酸、乙

10、醚、醋酸戊酯、乙醇、氯仿溶于过量盐酸、乙醚、醋酸戊酯、乙醇、氯仿)n n2.有机胺盐的特殊反应有机胺盐的特殊反应n n(1)(1)重氮化重氮化重氮化重氮化-偶合反应偶合反应偶合反应偶合反应 普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素 红色沉淀红色沉淀红色沉淀红色沉淀n n(2)(2)与三硝基苯酚的反应与三硝基苯酚的反应与三硝基苯酚的反应与三硝基苯酚的反应 苄星青霉素苄星青霉素苄星青霉素苄星青霉素 +苦味酸苦味酸苦味酸苦味酸 结晶结晶结晶结晶 重结晶测熔点重结晶测熔点重结晶测熔点重结晶测熔点 （二苄基乙二胺（二苄基乙二胺（二苄基乙二胺（二苄基乙二胺 +青霉素）青霉素）青霉素）青霉素

11、）（二苄基乙二胺苦味酸盐）（二苄基乙二胺苦味酸盐）（二苄基乙二胺苦味酸盐）（二苄基乙二胺苦味酸盐）第15页/共34页色谱法色谱法n n1.薄层色谱法薄层色谱法 青霉素、头孢菌素青霉素、头孢菌素青霉素、头孢菌素青霉素、头孢菌素 TLC TLC 鉴别鉴别鉴别鉴别 结果判定结果判定结果判定结果判定：供试品所显主斑点的颜色和位置应与对照品的：供试品所显主斑点的颜色和位置应与对照品的：供试品所显主斑点的颜色和位置应与对照品的：供试品所显主斑点的颜色和位置应与对照品的主斑点相同主斑点相同主斑点相同主斑点相同n n2.高效液相色谱法高效液相色谱法 在相同实验条件下，用高效液相色谱法分别测定在相同实验条件下，

12、用高效液相色谱法分别测定在相同实验条件下，用高效液相色谱法分别测定在相同实验条件下，用高效液相色谱法分别测定供试品和对照品的色谱图，其供试品和对照品的色谱图，其供试品和对照品的色谱图，其供试品和对照品的色谱图，其主峰主峰主峰主峰的的的的保留时间应保留时间应保留时间应保留时间应一致一致一致一致。第16页/共34页三、特殊杂质检查三、特殊杂质检查1.聚合物聚合物2.有关物质和异构体有关物质和异构体3.吸光度吸光度4.有机溶剂有机溶剂5.结晶性结晶性第17页/共34页1.聚合物聚合物Ch.p2005：青霉素V钾、青霉素钠、青霉素钾、头孢他啶、头孢拉啶、头孢曲松钠、头孢呋辛钠、头孢哌酮钠、头孢唑林钠、

13、头孢噻肟钠等主成分自身对照主成分自身对照面积归一化法面积归一化法限量法限量法自身对照外标法自身对照外标法原理原理：分子排阻色谱方法：第18页/共34页色谱法：通过与主成分色谱法：通过与主成分(或标准杂质或标准杂质)峰面峰面积比较（积比较（HPLC法）或斑点颜色深浅法）或斑点颜色深浅（TLC法）来控制杂质的量法）来控制杂质的量检查方法：检查方法：2.有关物质和异构体有关物质和异构体第19页/共34页2.有关物质和异构体有关物质和异构体*头孢呋辛酯头孢呋辛酯 异构体异构体异构体异构体A、异构体、异构体B、反式异、反式异构体、头孢呋辛酯构体、头孢呋辛酯3-异构体异构体*头孢氨苄头孢氨苄有关物质有关物

14、质-苯甘氨酸、苯甘氨酸、7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸氨基去乙酰氧基头孢烷酸（7-7-ADCA）第20页/共34页头孢呋辛钠头孢呋辛酯第21页/共34页7-ADCA 苯甘氨酸 头孢氨苄 cefalexin第22页/共34页色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以水-0.01mol/L醋酸钠溶液（用冰醋酸调节pH值至5.0）-甲醇（21:55:24）为流动相；检测波长为220nm 第23页/共34页第24页/共34页测定一定波长处杂质吸收度来测定一定波长处杂质吸收度来控制杂质量控制杂质量3.吸光度吸光度4.有机溶剂有机溶剂氨苄西林纳二氯甲烷（GC法）头孢哌酮钠丙酮（GC法）头孢硫脒残留溶剂（GC法

15、）头孢他啶砒啶（HPLC法）第25页/共34页第一法（偏光显微镜法）第二法（X射线粉末衍射法）5.结晶性结晶性第26页/共34页三、含量测定三、含量测定 Ch.p2005：青霉胺及其制剂：汞量法其它所有-内酰胺类抗生素含量测定均采用HPLC法微生物法微生物法Ch.p2005：磺苄西林钠及其制剂理化方法理化方法第27页/共34页 含量含量=?(1)碘量法碘量法青霉素或头孢菌素青霉素或头孢菌素 分子不消耗碘分子不消耗碘,其降其降解产物消耗碘解产物消耗碘A.OH-水解水解B.pH4.5.温度在温度在24 260C(3)UV-Vis法法A.硫醇硫醇汞盐法汞盐法B.酸水解法酸水解法C.羟肟酸比色法羟肟酸

16、比色法 (与羟胺作用与羟胺作用,在稀酸或中性溶在稀酸或中性溶液中加液中加Fe3+)生成生成红色络合物红色络合物,测测 A(4)HPLC法法(2)电位滴定电位滴定法（汞量法）法（汞量法）(青霉素类化合物的碱性水解产青霉素类化合物的碱性水解产物可与物可与Cu2+或或Hg2+形成稳定的形成稳定的络合物络合物)。Hg(NO3)2 滴定剂滴定剂第28页/共34页（一）碘量法（一）碘量法原理原理青霉素青霉噻唑二钠第1步第2步青霉噻唑二钠第29页/共34页碘量法碘量法 讨论讨论讨论讨论n n(1)(1)操作应严格遵守规定条件操作应严格遵守规定条件操作应严格遵守规定条件操作应严格遵守规定条件 影响因素多影响因

17、素多影响因素多影响因素多 水解条件水解条件水解条件水解条件;反应温度反应温度反应温度反应温度;缓冲液浓度缓冲液浓度缓冲液浓度缓冲液浓度;放置时间放置时间放置时间放置时间;加碘量加碘量加碘量加碘量;氧化氧化氧化氧化时间时间时间时间n n(2)(2)与碘作用与碘作用与碘作用与碘作用温度温度温度温度和和和和放置时间放置时间放置时间放置时间 室温不经水解的青霉素分子与碘不起作用室温不经水解的青霉素分子与碘不起作用室温不经水解的青霉素分子与碘不起作用室温不经水解的青霉素分子与碘不起作用,在在在在3838CC时能消耗碘时能消耗碘时能消耗碘时能消耗碘 温度不可过高温度不可过高温度不可过高温度不可过高,否则空

18、白试验失否则空白试验失否则空白试验失否则空白试验失去意义去意义去意义去意义.n n(3)(3)淀粉指示剂淀粉指示剂淀粉指示剂淀粉指示剂加入时间加入时间加入时间加入时间n n(4)(4)空白试验目的空白试验目的空白试验目的空白试验目的:消除供试品中可能存在的降解产消除供试品中可能存在的降解产消除供试品中可能存在的降解产消除供试品中可能存在的降解产物及其它能消耗碘的杂质的干扰物及其它能消耗碘的杂质的干扰物及其它能消耗碘的杂质的干扰物及其它能消耗碘的杂质的干扰.第30页/共34页硝酸汞电位滴定硝酸汞电位滴定法法n n青霉素青霉素 碱性条件碱性条件 水解水解 青霉噻唑酸青霉噻唑酸 水水解解 青霉胺青霉

19、胺 硝酸硝酸汞汞 定量定量反应反应 青霉素青霉素:硝酸汞硝酸汞=1:1（第二（第二个突跃）个突跃）n n优点优点：不需青霉素标准品作对照不需青霉素标准品作对照不需青霉素标准品作对照不需青霉素标准品作对照n n应用应用：中国药典（中国药典（中国药典（中国药典（20002000年版）收载的年版）收载的年版）收载的年版）收载的青霉素钠青霉素钠青霉素钠青霉素钠、普鲁普鲁普鲁普鲁卡因卡因卡因卡因 青霉素青霉素青霉素青霉素等采用本法测定含量等采用本法测定含量等采用本法测定含量等采用本法测定含量第31页/共34页可见紫外分光光度可见紫外分光光度法法n n硫醇汞盐法硫醇汞盐法：专属性强、快速、准确、易于掌专属性强、快速、准确、易于掌专属性强、快速、准确、易于掌专属性强、快速、准确、易于掌握握握握 青霉素青霉素青霉素青霉素 青霉烯酸硫醇汞盐青霉烯酸硫醇汞盐青霉烯酸硫醇汞盐青霉烯酸硫醇汞盐（max=325345nmmax=325345nm）第32页/共34页（四）高效液相色（四）高效液相色谱法谱法n nHPLC：一法多用一法多用 鉴别试验鉴别试验 杂质检查杂质检查 含量含量测定测定第33页/共34页