维生素B的测定.pptx

《维生素B的测定.pptx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《维生素B的测定.pptx（21页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、会计学1维生素维生素B的测定的测定n n 维生素B1 1，又称硫胺。分子式C1212H1717ClN4 4OS。它是人体必需的13种维生素之一，是一种水溶性维生素，属于维生素B族，为无色结晶体，溶于水，在酸性溶液中很稳定，在碱性溶液中不稳定，易被氧化和受热破坏。第1页/共21页测定意义测定意义n n 由于人体不能自行合成维生素B1，必须从食物中摄取。因此，人体需依赖食物提供足够的维生素B1，测定各种食品维生素B1含量多少将对食品营养价值评价十分重要。如果由于食物摄入量不足，或因食物的加工、运输、储存、烹饪不当，使维生素B1受到破坏或损失，都会造成维生素B1的缺乏。因此，食品中的维生素B1测定对

2、指导食品加工、保存、膳食营养配比等都有一定的意义。第2页/共21页n n 维生素B1是人体能量代谢，特别是糖代谢所必需的，故人体对它的需要量通常与摄取的热量有关。当人体的能量主要来源于糖类时，维生素B1的需要量最大。n n 成人的建议每日摄取量是1015mg。妊娠、哺乳期每天摄取1516mg；在生病、生活紧张、接受手术时，要增加必要用量。第3页/共21页n n 来源简介n n n n 维生素B1广泛存在于天然食物中，含量较丰富的有：动物内脏(肝、心及肾)、肉类、豆类、花生及精细加工的谷物类。谷物类是我国人民的主食，也是维生素B1的主要来源。但过分去除麸皮与糠，维生素B1损失很多，烹调加碱可使维

3、生素B1损失增高。第4页/共21页n n 维生素维生素B1B1的测定方法：的测定方法：n n 分光光度法分光光度法;n n HPLC HPLC法法;n n 荧光分光光度法等。荧光分光光度法等。第5页/共21页分光光度法分光光度法n n分光光度法是将维生素B1生成游离型后，与重氮化试剂对氨基苯乙酮反应，生成紫红色色素，移至二甲苯中测定其浓度。n n本法灵敏度差，只适用于食品中维生素B1含量高的试样。第6页/共21页高效液相色谱法高效液相色谱法n n把维生素B1衍生化后导入高效液相色谱仪，经柱分离，通荧光检测器测定。n n本法适用于体系复杂的样品，干扰严重时采用此法。第7页/共21页荧光法荧光法n

4、 n 这里我们主要介绍荧光法n n n n 参考GB/T 5009.84-2003 食品中硫胺素(维生素B1)的测定n n第8页/共21页方法原理方法原理n n试样在酸性溶液中加热，提取维生素试样在酸性溶液中加热，提取维生素B1B1，经蛋白，经蛋白分解酶处理，使维生素分解酶处理，使维生素B1B1成为游离型。再经层析成为游离型。再经层析柱纯化，去除荧光淬灭物质，同时浓缩，用碱性柱纯化，去除荧光淬灭物质，同时浓缩，用碱性铁氰化钾溶液将其氧化成硫色素，在紫外线下，铁氰化钾溶液将其氧化成硫色素，在紫外线下，硫色素发出荧光，再给定的条件下以及没有其他硫色素发出荧光，再给定的条件下以及没有其他物质干扰时，

5、此荧光之强度与硫色素量成正比即物质干扰时，此荧光之强度与硫色素量成正比即与溶液中维生素与溶液中维生素B1B1量成正比。量成正比。第9页/共21页操作步骤操作步骤n n1.1.样品处理样品处理n n 样品采集后用匀浆机打成匀浆于低温冰箱中冷冻保存，用时将样品采集后用匀浆机打成匀浆于低温冰箱中冷冻保存，用时将其解冻后使用。其解冻后使用。第10页/共21页 2.2.样品提取样品提取样品提取样品提取第11页/共21页3.3.净化净化净化净化n na.a.脱脂棉铺于盐基交换管的交脱脂棉铺于盐基交换管的交换柱底部，再加约换柱底部，再加约1g1g活性人造活性人造浮石使之达到交换柱的浮石使之达到交换柱的1/3

6、1/3高高度。度。n nb.b.用移液管加入提取液用移液管加入提取液2060ml2060ml。n nc.c.加入约加入约10ml10ml热蒸馏水冲洗交热蒸馏水冲洗交换柱，弃去洗液，重复三次。换柱，弃去洗液，重复三次。n nd.d.加入加入20ml50g/L20ml50g/L酸性酸性Kcl,Kcl,收集收集此液于此液于25ml25ml刻度试管内。凉至刻度试管内。凉至室温，用室温，用250g/L250g/L酸性酸性KclKcl定容定容至至25ml25ml，即为净化液。，即为净化液。第12页/共21页n n n n 做空白试验做空白试验n n 重复上述操作，将重复上述操作，将20ml20ml维生素维

7、生素B1B1标准使用液加入标准使用液加入盐基交换管以代替试样提取液，即得到标准净化液。盐基交换管以代替试样提取液，即得到标准净化液。第13页/共21页4.4.氧化氧化氧化氧化n n 将将5ml5ml试样试样净化液分别净化液分别加入加入A A、B B两两个反应瓶；个反应瓶；n n 同时将同时将5ml5ml标准净化液标准净化液分别加入分别加入A1A1、B1B1两个反应两个反应瓶中。瓶中。Maizel-Gerson 反应瓶第14页/共21页氧化流程氧化流程氧化流程氧化流程反应瓶要同时振摇，准确计时90s.第15页/共21页5 5、测定、测定、测定、测定n n 荧光测定条件：激发波长365nm；发射波

8、长435nm；激发波狭缝5nm；发射波狭缝5nm。依次测定下列荧光强度：a.样品空白荧光强度（样品反应瓶A）；b.标准空白荧光强度（标准反应瓶A1）；c.样品荧光强度（样品反应瓶B）；d.标准荧光强度（标准反应瓶B1）；第16页/共21页6.6.计算计算计算计算n n式中：X样品中硫胺素含量，mg/100g；U样品荧光强度；Ub样品空白荧光强度；S标准荧光强度；Sb标准空白荧光强度；c硫胺素标准工作液浓度，g/ml；V用于净化的硫胺素标准工作液体积，ml；V1样品水解后定容之体积，ml；V2样品用于净化的提取液体积，ml；m样品质量，g；第17页/共21页试剂作用试剂作用试剂作用试剂作用n n

9、1、蛋白分解酶：用于试样的蛋白分解。n n2、盐酸：水解样品。n n3、氯化钾：该热溶液可从盐基交换管中的浮石里解析出维生素B1。n n4、铁氰化钾碱性溶液：氧化游离的维生素B1，生成硫色素。n n5、正丁醇：溶解紫外荧光物质硫色素试剂。第18页/共21页注意事项注意事项注意事项注意事项 n n 1、加热酸性Kcl时不能使其沸腾，热Kcl滤速较快，而不沸则是使其不至因过饱和而在洗涤中结晶析出阻塞交换柱。n n 2、紫外线会分解破坏维生素B1，所以维生素B1形成后要快速测定。n n 3、氧化中加铁氰化钾是整个实验的关键，对每个样品所加试剂的次序、快慢、振摇时间等都必须尽量一致，尤其是用正丁醇提取硫色素时必须保证准确振摇90s。第19页/共21页n 谢谢！第20页/共21页