食品毒理学一般毒性 (2)幻灯片.ppt

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1、食品毒理学一般毒性食品毒理学一般毒性食品毒理学一般毒性食品毒理学一般毒性第1页，共54页，编辑于2022年，星期三一、实验动物的选择一、实验动物的选择实实验验动动物物是是指指经经人人工工培培育育，对对其其携携带带微微生生物物实实行行控控制制，遗遗传传背背景景明明确确，来来源源清清楚楚，可可用用于于科科学学研究的动物。研究的动物。第一节第一节化学物毒性评价的实验基础化学物毒性评价的实验基础第2页，共54页，编辑于2022年，星期三 以选择哺乳动物为主。可采用以选择哺乳动物为主。可采用23种，啮齿类和非啮种，啮齿类和非啮齿类。常用大鼠齿类。常用大鼠(rat(rat）、小鼠（）、小鼠（mousemo

2、use）、豚鼠、家兔和）、豚鼠、家兔和狗，尤以大鼠使用很多。狗，尤以大鼠使用很多。Wistar Wistar 大鼠大鼠豚鼠豚鼠第3页，共54页，编辑于2022年，星期三对化合物的毒性反应及代谢过程与人相似对化合物的毒性反应及代谢过程与人相似自然寿命不太长自然寿命不太长易于饲养和实验操作易于饲养和实验操作经济并易于获得经济并易于获得（一）物种选择（一）物种选择 种类选择的依据：种类选择的依据：第4页，共54页，编辑于2022年，星期三（二）品系选择（二）品系选择 品品系系指指计计划划交交配配的的办办法法获获得得的的起起源源于于共共同同祖祖先先的的一一群群动动物物。同同一一品品系系的的动动物物具具

3、有有共共同同的的遗遗传传来来源源、相相似似的外貌特征、独特的生物学特性及稳定的遗传性能。的外貌特征、独特的生物学特性及稳定的遗传性能。1 1、近交系动物、近交系动物指采用连续指采用连续20代以上兄妹交配或亲子交配而培育的纯代以上兄妹交配或亲子交配而培育的纯品系动物。遗传上高度一致，基因纯合度可达品系动物。遗传上高度一致，基因纯合度可达98.6-99.8%。第5页，共54页，编辑于2022年，星期三 对放射线耐受性强，淋巴细胞白血病发病率对放射线耐受性强，淋巴细胞白血病发病率6，化学致癌物质不能诱发乳腺癌和卵巢囊肿，对结核化学致癌物质不能诱发乳腺癌和卵巢囊肿，对结核杆菌有感受性。杆菌有感受性。可

4、用于营养与肝癌发生率关系的研究，对鼠可用于营养与肝癌发生率关系的研究，对鼠伤寒沙门氏菌伤寒沙门氏菌C5C5有抵抗力，对酒精过敏。也可有抵抗力，对酒精过敏。也可作为许多瘤株的宿主。作为许多瘤株的宿主。乳腺癌自发率低，肺癌发病率为乳腺癌自发率低，肺癌发病率为2626，网状细，网状细胞瘤胞瘤8 8，血管瘤，血管瘤6 6，淋巴肉瘤，淋巴肉瘤4545，乳腺癌，乳腺癌3 3，对放射线极为敏感。，对放射线极为敏感。第6页，共54页，编辑于2022年，星期三特点：特点：a.实验结果比较准确，可以避免遗传组成不同或个体实验结果比较准确，可以避免遗传组成不同或个体差异太大等所引起的误差。差异太大等所引起的误差。b

5、.实验结果的平均性较一致。每组仅用较少数的动物，实验结果的平均性较一致。每组仅用较少数的动物，即能看出显著性来。即能看出显著性来。c.实验结果的重复性较大。实验结果的重复性较大。e.易于获得预期结果。易于获得预期结果。f.近交衰退。近交衰退。第7页，共54页，编辑于2022年，星期三2 2、突变系动物、突变系动物 在在生生长长繁繁殖殖过过程程中中，通通过过自自然然突突变变或或人人工工定定向向突突变变的的方方法法，使使其其某某基基因因发发生生突突变变并并丧丧失失原原有有的的正正常常功功能能。这这种种突突变变的的基基因因可可以以世世代代相相传传并并保保持持遗遗传传基基因因特特性性的的品品系系动物，

6、称为突变系动物。动物，称为突变系动物。无胸腺裸鼠无胸腺裸鼠第8页，共54页，编辑于2022年，星期三3 3、杂交群动物、杂交群动物指两个不同近交系之间有目的地进行交配所产生的第指两个不同近交系之间有目的地进行交配所产生的第一代动物。一代动物。特点：特点：a.a.具有纯系动物基本相似的遗传均质性。个体间遗传变具有纯系动物基本相似的遗传均质性。个体间遗传变异很小。异很小。b.b.表现双亲的显性性状表现双亲的显性性状 c.c.对各种实验结果重复性好对各种实验结果重复性好d.d.具有杂种优势具有杂种优势 e.e.国际上分布广国际上分布广第9页，共54页，编辑于2022年，星期三4 4、封闭群动物、封闭

7、群动物指在指在5年以上不从外部引进新血缘，仅由同一品系年以上不从外部引进新血缘，仅由同一品系的动物在固定场所保存繁殖的动物群。个体间具有一的动物在固定场所保存繁殖的动物群。个体间具有一定程度的遗传学差异。封闭群动物个体间差异的大小，定程度的遗传学差异。封闭群动物个体间差异的大小，取决于祖代的来源取决于祖代的来源。第10页，共54页，编辑于2022年，星期三（三）微生物控制的选择（三）微生物控制的选择1 1、无菌动物无菌动物germfreeanimal,GF 指指体体内内外外均均无无任任何何微微生生物物和和寄寄生生虫虫的的动动物物。经经人人工工剖腹产净化培育而来。剖腹产净化培育而来。2 2、悉生

8、动物、悉生动物 gnotobioticanimal,GN 指指体体内内带带有有已已知知微微生生物物的的动动物物。是是经经人人工工有有计计划划地地将将已知菌投入动物体内。已知菌投入动物体内。第11页，共54页，编辑于2022年，星期三第12页，共54页，编辑于2022年，星期三3、无特定病原体动物、无特定病原体动物specificpathogenanimal,SPF指指体体内内无无特特定定的的微微生生物物和和寄寄生生虫虫的的动动物物。即即无无传传染染病病的动物，容许携带非特定微生物。的动物，容许携带非特定微生物。SPF动物群的建立，其原种必须来源于无菌动物动物群的建立，其原种必须来源于无菌动物或

9、悉生动物才能保证。或悉生动物才能保证。4 4、清洁动物、清洁动物 Cleananimal,CL 也也称称最最低低限限度度疾疾病病动动物物，动动物物体体内内外外不不携携带带人人畜畜共共患患疾疾病的病原体或动物传染病病原体。病的病原体或动物传染病病原体。第13页，共54页，编辑于2022年，星期三（四）个体选择（四）个体选择1、年龄、年龄取决于实验类型。取决于实验类型。急性实验急性实验成年动物成年动物亚慢性、慢性实验亚慢性、慢性实验较年幼或初断乳动物。较年幼或初断乳动物。在在实实际际工工作作中中常常以以动动物物体体重重粗粗略略判判断断动动物物的的年年龄龄。各组动物的年龄应尽可能保持一致。各组动物的

10、年龄应尽可能保持一致。第14页，共54页，编辑于2022年，星期三2、性别、性别不同性别的实验动物对化学物毒性的敏感程度有时会不同性别的实验动物对化学物毒性的敏感程度有时会不同。不同。一般选用雌雄两性一般选用雌雄两性。3、生理状态、生理状态一般选用一般选用未产未孕未产未孕的雌性动物。雌雄分养。的雌性动物。雌雄分养。4、健康状况、健康状况应选用健康动物。一般试验前检疫观察应选用健康动物。一般试验前检疫观察57天天第15页，共54页，编辑于2022年，星期三二、常用染毒方法二、常用染毒方法（一）经口染毒（一）经口染毒1 1、灌胃、灌胃 是是将将液液态态受受试试化化合合物物或或固固态态、气气态态化化

11、合合物物溶溶于于某某种种溶溶剂剂中中，配配制制成成一一定定浓浓度度，装装入入注注射射器器等等定定量量容容器器，经经过过导管注入胃内。导管注入胃内。优点优点：剂量准确：剂量准确缺点缺点：工作量大；可能损伤食道或误入气管；与人的接触：工作量大；可能损伤食道或误入气管；与人的接触方式差异很大。方式差异很大。第16页，共54页，编辑于2022年，星期三2 2、吞咽胶囊、吞咽胶囊 将将一一定定剂剂量量受受试试化化合合物物装装入入药药用用胶胶囊囊内内，强强制制放放到到动动物物的的后后咽咽部部迫迫使使动动物物咽咽下下。家家兔兔及及猫猫、狗狗等大动物可用此法。等大动物可用此法。优优点点：剂剂量量准准确确，尤尤

12、其其适适用用于于易易挥挥发发、易易水解和有异味的化合物。水解和有异味的化合物。第17页，共54页，编辑于2022年，星期三3 3、喂饲、喂饲 将将化化合合物物拌拌入入饲饲料料和和水水中中，需需计计算算每每日日进进食食量量和和饮饮水量，折算摄入剂量。水量，折算摄入剂量。优点优点：符合人接触化合物的方式：符合人接触化合物的方式 缺缺点点：可可能能拒拒食食；挥挥发发性性化化合合物物可可使使摄摄入入量量下下降降，且且有有经经过过呼呼吸吸道道吸吸入入的的可可能能；化化合合物物易易水水解解或或与与食食物物中中的的化学成分起反应。化学成分起反应。第18页，共54页，编辑于2022年，星期三（二）经呼吸道染毒

13、（二）经呼吸道染毒1 1、静式吸入、静式吸入 在在固固定定体体积积的的密密闭闭容容器器中中，加加入入定定量量的的易易挥挥发发液液态态化化合合物物或或气气态态化化合合物物。将将动动物物置置于于其其中中，一一般般2h2h。尤尤其其是是适适用于小动物接触易挥发液态化合物的急性毒性研究。用于小动物接触易挥发液态化合物的急性毒性研究。优点优点：设备简单；操作方便；消耗化合物少：设备简单；操作方便；消耗化合物少缺点缺点：柜内空气组成、环境条件不稳定；化合物浓度难以：柜内空气组成、环境条件不稳定；化合物浓度难以恒定。恒定。第19页，共54页，编辑于2022年，星期三表表5-1实验动物最低需气量及不同体积染毒

14、柜应放置实验动物最低需气量及不同体积染毒柜应放置动物数关系动物数关系动物种动物种属属呼吸通气呼吸通气量量(L/小时小时)最低需气最低需气量量(L/小时小时)不同容积染毒柜放置动物数不同容积染毒柜放置动物数(只只)25L50L100L300L小小鼠鼠大大鼠鼠1.4510.182.4530.535610121512364056浓度计算：浓度计算：C=a.d/L10001000（mg/m3）a加入化合物量（加入化合物量（ml），），d比重，比重，L容积（容积（L）第20页，共54页，编辑于2022年，星期三2 2、动式吸入、动式吸入 染毒柜染毒柜空气流动空气流动 面面罩罩吸吸入入避避免免化化合合物物

15、经经皮吸入皮吸入 优点：剂量准确优点：剂量准确 缺缺点点：装装置置复复杂杂；消消耗耗大大；可可能造成污染能造成污染（三）经皮肤染毒（三）经皮肤染毒 用用于于研研究究化化合合物物经经皮皮肤肤吸吸收收的的毒毒性性作作用用及及化化合合物物对接触皮肤的局部作用（皮肤刺激和致敏）对接触皮肤的局部作用（皮肤刺激和致敏）第21页，共54页，编辑于2022年，星期三第二节第二节急性毒性及其评价方法急性毒性及其评价方法第22页，共54页，编辑于2022年，星期三一、急性毒性的概念一、急性毒性的概念 急急性性毒毒性性（acute acute toxicitytoxicity）是是指指机机体体(人人或或实实验验动动

16、物物)一一一一次次次次(或或24242424小小小小时时时时内内内内多多多多次次次次)接接接接触触触触外外外外来来来来化化化化合合合合物物物物之之之之后后后后所所所所引起的中毒效应。观察期可在引起的中毒效应。观察期可在引起的中毒效应。观察期可在引起的中毒效应。观察期可在1 17 7 7 7天。天。实实验验动动物物接接触触化化合合物物的的方方式式或或途途径径不不同同，“一一一一次次次次”的的的的含含含含义义义义也也也也有有有有所所所所不不不不同同同同。凡凡凡凡经经经经口口口口接接接接触触触触和和和和各各各各种种种种方方方方式式式式的的的的注注注注射射射射接接接接触触触触，“一一一一次次次次”是是

17、是是指指指指在在在在瞬瞬瞬瞬间间间间将将将将受受受受试试试试化化化化合合合合物物物物输输输输入入入入实实实实验验验验动动动动物物物物的的的的体体体体内内内内。而而而而经经经经呼呼呼呼吸吸吸吸道道道道吸吸吸吸入入入入与与与与经经经经皮皮皮皮肤肤肤肤接接接接触触触触，“一一次次”是是指指在在一一个个特特定定的的期期间间内内实实验验动动物物持持续续地地接接触触受受试试化化合合物物的过程的过程 第23页，共54页，编辑于2022年，星期三实验目的实验目的1.求求出出受受试试化化合合物物对对一一种种或或几几种种实实验验动动物物的的致致死死剂剂量量(通通常常以以LD50为为主主要要参参数数)，以以初初步步

18、估估计计该该化化合合物物对对人人类类毒害的危险性。毒害的危险性。2.阐阐明明受受试试化化合合物物急急性性毒毒性性的的剂剂量量反反应应关关系系与与中中毒毒特征。特征。3.研研究究化化合合物物在在机机体体内内的的生生物物转转运运和和生生物物转转化化过过程程及及其动力学变化。也可用于研究急救治疗措施其动力学变化。也可用于研究急救治疗措施4.为亚急性、慢性实验设计提供依据为亚急性、慢性实验设计提供依据第24页，共54页，编辑于2022年，星期三二、急性毒性评价方法二、急性毒性评价方法（一）经典的急性致死性毒性试验（一）经典的急性致死性毒性试验1 1、实验动物、实验动物 选选用用成成年年健健康康动动物物

19、，常常用用大大鼠鼠和和小小鼠鼠。各各剂剂量量组组雌雌：雄雄1 1：1 1，出出生生2 23 3个个月月。数数量量10102020只只最最佳佳。大大动动物物每每组组6 6只只。实实验验前前至至少少观观察察一一周周，选选取其中健康动物，随机分组。取其中健康动物，随机分组。第25页，共54页，编辑于2022年，星期三2、染毒剂量设计、染毒剂量设计（1）查查阅阅文文献献：分分析析受受试试化化合合物物的的化化学学结结构构和和其其理理化化性性质质，依依此此查查阅阅文文献献，找找出出与与受受试试化化合合物物化化学学结结构构与与理理化化性性质质近近似似化化合合物物的的毒毒性性资资料料，并并以以其其LD50(L

20、C50)值值作作为为受受试试化合物的预期毒性中值。化合物的预期毒性中值。（2）试试验验：以以文文献献LD50为为中中值值，取取倍倍差差，设设34个个梯梯度，找出大致的度，找出大致的LD10-90的范围。的范围。第26页，共54页，编辑于2022年，星期三（3）正式试验）正式试验：I（logLD90logLD10）/（n-1）组距，即相邻两）组距，即相邻两个剂量组对数差或相邻组比值的对数值。一般设个剂量组对数差或相邻组比值的对数值。一般设57个剂量组。个剂量组。限量实验：限量实验：毒性较小的化学物若无法求得毒性较小的化学物若无法求得LD50，则进，则进行限量实验，单次染毒剂量行限量实验，单次染毒

21、剂量5g/kg（体重），食品毒理（体重），食品毒理学实验学实验15g/kg（体重）。（体重）。第27页，共54页，编辑于2022年，星期三3 3、观察、观察 一一般般要要求求计计算算两两周周内内的的总总死死亡亡数数。对对于于一一些些速速死死性性化化合合物物求求其其LD50(LC50)也也可可仅仅计计算算24小小时时的的死死亡亡率率。应应注注明明是是多多少少时时间间的的LD50值值，以以便便于于在在进进行行毒毒性性比比较较时时有共同的基础。有共同的基础。观察内容：观察内容：（1 1）死死亡亡情情况况（2 2）动动物物体体重重（3 3）中中毒毒反反应应症症状状（4 4）病理学检查）病理学检查第28

22、页，共54页，编辑于2022年，星期三4、LD50计算计算LD50是经统计学计算得到的毒性参数，并可报告其是经统计学计算得到的毒性参数，并可报告其95可信限。可信限。LD50(LC50)值是一个统计量，较少受实值是一个统计量，较少受实验动物个体易感性差异的影响，较为准确，因此是最验动物个体易感性差异的影响，较为准确，因此是最重要的急性毒性参数，也用来进行急性毒性分级。重要的急性毒性参数，也用来进行急性毒性分级。第29页，共54页，编辑于2022年，星期三直接回归法直接回归法 将剂量对数值与死亡率将剂量对数值与死亡率(概率单位概率单位)的关系，进的关系，进行直线回归，用最小二行直线回归，用最小二

23、乘法求出乘法求出a、b值。代入直值。代入直线方程：线方程：ya十十bX。式中，。式中，X为剂量对数值，为剂量对数值，y为死亡为死亡率的概率单位。利用此率的概率单位。利用此式即可求得受试化学物式即可求得受试化学物的的LD50及其及其95可信区可信区间。间。第30页，共54页，编辑于2022年，星期三%01234567890.2.672.953.123.253.363.453.523.593.66103.723.773.823.873.923.964.014.054.084.12204.164.194.234.264.294.334.364.394.424.45304.484.504.534.56

24、4.594.614.644.674.694.72404.754.774.804.824.854.874.904.924.954.97505.005.035.055.085.105.135.155.185.205.23605.252.285.315.335.365.395.415.445.475.50705.525.555.585.615.645.675.715.745.775.81805.845.885.925.955.996.046.086.136.186.23906.286.346.416.486.556.646.756.887.057.33百分率百分率-概率单位换算表概率单位换算表第31

25、页，共54页，编辑于2022年，星期三（二）急性毒性实验的其他方法（二）急性毒性实验的其他方法经典的急性毒性试验和经典的急性毒性试验和LD50的缺点：的缺点：消耗的动物量大消耗的动物量大获得的信息有限获得的信息有限测得的测得的LD50值实际上仅是近似值值实际上仅是近似值五种化合物的五种化合物的LDLD5050值的实验室间变异值的实验室间变异化合物化合物 范围范围(mg/kg)(mg/kg)比值比值(最大值最小值最大值最小值)五氯酚五氯酚 74 74620 8.38 620 8.38 水杨酸钠水杨酸钠 930 9302328 2.502328 2.50苯胺苯胺 479 4791169 2.441

26、169 2.44乙酰苯胺乙酰苯胺 723 7233060 4.233060 4.23氯化镉氯化镉 105 105482 4.59482 4.59第32页，共54页，编辑于2022年，星期三单次口服固定剂量试验法结果的评价单次口服固定剂量试验法结果的评价剂量剂量(mg/kg)试试验验结结果果存活数存活数2000mg/kg用用2000mg/kg试验试验2000.0用用500mg/kg试验试验该化合物无严重急性中毒的危险性该化合物无严重急性中毒的危险性1、固定剂量法、固定剂量法第33页，共54页，编辑于2022年，星期三2、急性毒性分级法、急性毒性分级法第34页，共54页，编辑于2022年，星期三3

27、.上、下移动法上、下移动法(updownmethod)或阶梯法或阶梯法 第二个动物接受化学物的剂量由第一只动物染毒第二个动物接受化学物的剂量由第一只动物染毒后的反应决定，如果动物死亡，则下一个剂量降低；后的反应决定，如果动物死亡，则下一个剂量降低；如果动物存活则下一个剂量增高，但是实验需要选如果动物存活则下一个剂量增高，但是实验需要选择一个比较合适的剂量范围，使得大部分的动物所择一个比较合适的剂量范围，使得大部分的动物所接受的化学物剂量都会在真正的平均致死剂量左右。接受的化学物剂量都会在真正的平均致死剂量左右。第35页，共54页，编辑于2022年，星期三三、急性毒性分级三、急性毒性分级目前国际

28、上对外源化学物急性毒性分级的标准不统一。目前国际上对外源化学物急性毒性分级的标准不统一。外源化学物急性毒性分级外源化学物急性毒性分级(WHO)(WHO)毒性分毒性分级级大鼠一次经大鼠一次经口口LDLD5050(mg/kg)(mg/kg)6 6只大鼠吸入只大鼠吸入4 4小时小时死亡死亡2 24 4只只的浓度的浓度(ppm)(ppm)兔经皮兔经皮LDLD5050(mg/kg)(mg/kg)对人可能致死剂量对人可能致死剂量单位体重单位体重（g/kg g/kg）总重总重(g/60kg(g/60kg)剧毒剧毒高毒高毒中等毒中等毒低毒低毒微毒微毒1 11 1505050050050000500001010

29、10101001001000100010000100005 55 54444350350218021800.050.050.050.050.50.55 515150.10.13 33030252510001000第36页，共54页，编辑于2022年，星期三我国食品毒理急性毒性分级法我国食品毒理急性毒性分级法19941994急性毒性分级急性毒性分级 大鼠经口大鼠经口LDLD5050(mg/kg)(mg/kg)大致相当于体重为大致相当于体重为 70kg70kg人的致死剂量人的致死剂量6 6级级(极毒极毒)1 1 稍尝，稍尝，7 7滴滴5 5级级(剧毒剧毒)1 150 750 7滴滴1 1茶匙茶匙4

30、 4级级(中等毒中等毒)5151500 1500 1茶匙茶匙3535克克3 3级级(低毒低毒)5015015000 355000 35350350克克2 2级级(实际无毒实际无毒)5001500115000 35015000 35010501050克克1 1级级(无毒无毒)15000 15000 10501050克克第37页，共54页，编辑于2022年，星期三 课后作业课后作业o为什么用为什么用LDLD5050作为比较化合物急性毒性作为比较化合物急性毒性的指标？有何优缺点？如何克服？的指标？有何优缺点？如何克服？第38页，共54页，编辑于2022年，星期三第三节第三节亚慢性、慢性毒性及其评价亚

31、慢性、慢性毒性及其评价方法方法第39页，共54页，编辑于2022年，星期三一、亚慢性和慢性毒性试验的概念一、亚慢性和慢性毒性试验的概念亚慢性毒性亚慢性毒性(subchronictoxicity)是指实验动物连是指实验动物连续续(通常通常13个月个月)重复染毒外源化学物所引起的毒性重复染毒外源化学物所引起的毒性效应；效应；慢性毒性慢性毒性(chronictoxiciy)是指实验动物长期染是指实验动物长期染毒外源化学物所引起的毒性效应。一般是连续染毒毒外源化学物所引起的毒性效应。一般是连续染毒6个月至两年，甚至终生染毒。个月至两年，甚至终生染毒。第40页，共54页，编辑于2022年，星期三二、亚慢

32、性和慢性毒性试验的目的二、亚慢性和慢性毒性试验的目的1.确定受试物亚慢性和慢性毒性的确定受试物亚慢性和慢性毒性的效应谱效应谱,并发现在急性及亚急性并发现在急性及亚急性毒性试验中未发现的毒作用；毒性试验中未发现的毒作用；2.研究受试物亚慢性和慢性毒作用的研究受试物亚慢性和慢性毒作用的靶器官靶器官；3.研究受试物亚慢性和慢性毒性剂量研究受试物亚慢性和慢性毒性剂量-反应反应(效应效应)关系，确定其观察关系，确定其观察到到有害作用的最低剂量有害作用的最低剂量(LOAEL)和和未观察到有害作用的剂量未观察到有害作用的剂量(NOAEL)，提出此受试物的安全限量参考值；，提出此受试物的安全限量参考值；4.研

33、究受试物亚慢性和慢性毒性损害的研究受试物亚慢性和慢性毒性损害的可逆性可逆性；5.亚慢性毒性试验为慢性毒性试验的剂量设计及观察指标选择提供依亚慢性毒性试验为慢性毒性试验的剂量设计及观察指标选择提供依据；据；6.确定不同动物物种对受试物亚慢性和慢性毒效应的差异，确定不同动物物种对受试物亚慢性和慢性毒效应的差异，为将毒性研究结果外推到人提供依据。为将毒性研究结果外推到人提供依据。第41页，共54页，编辑于2022年，星期三三、亚慢性毒性和慢性毒性的评价方法三、亚慢性毒性和慢性毒性的评价方法（一）实验动物（一）实验动物一一般般要要求求两两种种实实验验动动物物，一一种种为为啮啮齿齿类类，另另一一种种为为

34、非非啮啮齿齿类类。实实验验动动物物最最好好为为纯纯系系甚甚至至同同窝窝动动物物均均匀匀分分布布于于各各剂剂量量组组。雌雌雄雄各各半半。亚亚慢慢性性实实验验每每组组20只只以以上上大大鼠鼠，慢慢性性实实验每组验每组40100只。只。亚亚慢慢性性毒毒性性试试验验动动物物的的体体重重(年年龄龄)应应较较小小，如如小小鼠鼠应应为为15g左右，大鼠左右，大鼠100g左右。左右。慢性毒性实验动物年龄应更小，大鼠和小鼠应为初断奶者慢性毒性实验动物年龄应更小，大鼠和小鼠应为初断奶者。第42页，共54页，编辑于2022年，星期三（二）染毒途径（二）染毒途径尽尽量量模模拟拟人人类类的的接接触触方方式式；应应与与预

35、预期期进进行行慢慢性性毒毒理理试验的接触途径相一致。试验的接触途径相一致。染染毒毒时时间间每每日日应应定定时时，以以维维持持动动物物血血液液中中浓浓度度稳定。稳定。常常用用的的染染毒毒途途径径是是经经胃胃肠肠道道、经经呼呼吸吸道道和和皮皮肤肤染染毒。毒。第43页，共54页，编辑于2022年，星期三（三）染毒期限（三）染毒期限工工业业接接触触毒毒物物：亚亚慢慢性性毒毒性性13个个月月，慢慢性性毒毒性性6个月个月环环境境毒毒物物：亚亚慢慢性性毒毒性性36个个月月，慢慢性性毒毒性性12个月以上个月以上如如果果慢慢性性毒毒性性实实验验与与致致癌癌实实验验结结合合，染染毒毒期期限限最最好是接近或等于终生

36、染毒。好是接近或等于终生染毒。第44页，共54页，编辑于2022年，星期三动物研究期限相当于寿命期动物研究期限相当于寿命期()和人染毒的时间和人染毒的时间物物种种研究期限研究期限(月月)相当于寿命期相当于寿命期()研究期限研究期限(月月)相当于人相当于人(月月)13612241361224大大鼠鼠4.112.025.0499934101202404808兔兔1.44.59.018.36123672145289狗狗0.822.54.99.8206.5204081162猪猪0.822.54.99.8206.5204081162猴猴0.551.63.36.6134.5132761107第45页，共5

37、4页，编辑于2022年，星期三（四）剂量分组（四）剂量分组至少至少3个剂量组和个剂量组和1个对照组。个对照组。高高剂剂量量组组：出出现现较较明明显显的的毒毒性性效效应应，死死亡亡率率小小于于10或无死亡或无死亡中中剂剂量量组组：轻轻微微毒毒性性，即即观观察察到到最最低低有有害害作作用用剂量（剂量（LOAEL）低低剂剂量量组组：不不出出现现中中毒毒反反应应，即即未未观观察察到到有有害害作作用用剂量（剂量（NOAEL）第46页，共54页，编辑于2022年，星期三亚亚慢慢性性毒毒性性实实验验：可可参参考考两两个个数数值值，一一是是以以急急性性毒毒性性的的阈阈剂剂量量为为亚亚慢慢性性试试验验的的最最高

38、高剂剂量量；一一是是以以此此化化合合物物LD50的的1/20 1/5为为最最高剂量。高剂量。慢性毒性实验：慢性毒性实验：剂量的选择可参考三组数据。剂量的选择可参考三组数据。1、亚亚慢慢性性NOAEL或或其其1/5 1/2剂剂量量为为慢慢性性毒毒性性试试验验的的最最高高剂剂量量，以以这这一一阈阈剂剂量量的的1/50 1/10为为慢慢性性毒毒性性试试验验的的预预计计阈阈剂剂量量组组，并并以以其其1/100为为预计的慢性无作用剂量组预计的慢性无作用剂量组2、亚慢性试验的亚慢性试验的LOAEL的的1/2、1/4、1/8分三组分三组3、急急性性毒毒性性的的LD50剂剂量量为为出出发发点点，即即以以LD5

39、0的的1/10剂剂量量为为慢慢性性试试验验的的最最高高剂剂量量。以以LD50的的1/100为为预预计计慢慢性性阈阈剂剂量量，以以LD50的的1/1000为预计的无作用剂量组。为预计的无作用剂量组。第47页，共54页，编辑于2022年，星期三（五）观察指标（五）观察指标1、中中毒毒症症状状：每每日日观观察察动动物物有有无无中中毒毒症症状状和和程程度度，外观和行为有无异常外观和行为有无异常2、体重、体重：每周称重一次：每周称重一次3、食食物物利利用用率率：记记录录每每日日饲饲料料消消耗耗量量，计计算算食食物物利利用用率率（每摄入（每摄入100g饲料所增长的体重克数）。饲料所增长的体重克数）。4、实

40、验室检查、实验室检查（1）血液学检查）血液学检查（2）尿液检查）尿液检查（3）血液生化检查）血液生化检查第48页，共54页，编辑于2022年，星期三5、病理及病理组织学检查、病理及病理组织学检查凡凡是是在在实实验验过过程程中中死死亡亡的的动动物物均均应应及及时时解解剖剖检检查查，实实验验结结束束后后所所有有动动物物都都要要杀杀死死检检查查。慢慢性性毒毒性性实实验验在在实实验验中中期进行一次检查。期进行一次检查。（1）系统解剖系统解剖：包括肉眼观察：包括肉眼观察动物固定在解剖板上，解剖颈部(颌下腺、腮腺、局部淋巴结等)取一侧乳腺及腹部皮肤；开腹并扩展切口(胰、脾、生殖器官、肾、肾上腺、直肠、胃、

41、十二指肠、空肠、回肠、肠系膜淋巴结、肝脏等)开胸(舌、喉、气管、甲状腺、甲状旁腺、食管、心、肺、胸腺)剥离左后肢(肌肉、坐骨神经、股骨)；头皮、耳；开颅(颅神经、脑组织、垂体)；暴露脊髓(取出脊髓)第49页，共54页，编辑于2022年，星期三（2）脏器系数）脏器系数：也称脏体比值，是指某个脏器的湿重与：也称脏体比值，是指某个脏器的湿重与单位体重的比值，通常以单位体重的比值，通常以100g或或1g体重计。体重计。此指标的意此指标的意义是实验动物在不同年龄期，其各脏器与体重之间重量义是实验动物在不同年龄期，其各脏器与体重之间重量比值有一定规律；若受试化合物使某个脏器受到损害，比值有一定规律；若受试

42、化合物使某个脏器受到损害，则此比值就会发生改变。脏体比值是一个灵敏、有效和则此比值就会发生改变。脏体比值是一个灵敏、有效和经济的指标。经济的指标。（3）组织病理学检查）组织病理学检查：系统解剖时发现的异常组织：系统解剖时发现的异常组织要进行详细的组织病理学检查，必要时还需进行组织要进行详细的组织病理学检查，必要时还需进行组织化学或电镜检查。化学或电镜检查。第50页，共54页，编辑于2022年，星期三6、特异性指标、特异性指标（六）结果分析（六）结果分析对对污污染染组组和和对对照照组组数数据据根根据据统统计计学学方方法法处处理理，看看是是否否有有显显著著差差异异、剂剂量量效效应应关关系系和和时时

43、间间效效应应关关系系。以以及及各项指标之间的相关性。各项指标之间的相关性。第51页，共54页，编辑于2022年，星期三第四节第四节皮肤局部毒作用皮肤局部毒作用及其评价方法及其评价方法第52页，共54页，编辑于2022年，星期三一、皮肤局部毒性一、皮肤局部毒性（1）皮皮肤肤原原发发性性刺刺激激：接接触触某某种种化化学学物物后后产产生生的的局局部部可可逆性炎症，包括水肿和红斑。逆性炎症，包括水肿和红斑。（2）皮皮肤肤变变态态反反应应：皮皮肤肤对对化化学学物物产产生生的的免免疫疫源源性性反反应应，主主要要表表现现时时红红斑斑和和水水肿肿。可可发发生生于于接接触触部部位位以以外外的皮肤。的皮肤。（3）

44、光光刺刺激激反反应应和和光光变变态态反反应应：化化学学物物单单独独与与皮皮肤肤接接触触无无作作用用，经经特特定定波波长长光光照照后后引引起起有有害害作作用用（4）皮肤癌皮肤癌（5）皮肤色素异常）皮肤色素异常（6）对对皮皮肤肤附附件件的的损损害害：如如毛毛发发脱脱落落、痤痤疮疮、汗汗腺腺损害等。损害等。第53页，共54页，编辑于2022年，星期三操作：局部封闭涂皮法操作：局部封闭涂皮法1、诱诱导导处处理理：试试验验前前24h背背部部左左侧侧去去毛毛诱诱导导浓浓度度受受试试物物0.5ml涂涂布布玻玻璃璃纸纸覆覆盖盖，无无刺刺激激胶胶布布固固定定，持续持续6h第第7、14d同样方法重复一次同样方法重复一次2、激激发发处处理理：最最后后一一次次诱诱导导后后14d，激激发发浓浓度度受受试试物物0.5ml涂涂布布右右侧侧脱脱毛毛区区，固固定定6h后后洗洗去去，24、48h后后观观察皮肤反应，评分察皮肤反应，评分第54页，共54页，编辑于2022年，星期三