植物组织培养实验室的构建.pptx

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1、一、植物组织培养实验室设计一、植物组织培养实验室设计二、仪器和设备二、仪器和设备三、玻璃器皿和用具三、玻璃器皿和用具主要内容第一节第一节 实验室及基本设备实验室及基本设备第1页/共48页一、实验室设计一、实验室设计组织培养室主要包括：组织培养室主要包括：准备室准备室无菌操作室无菌操作室培养室培养室温温 室室第2页/共48页A Glimpse of Plant Tissue Culture第3页/共48页1、准备室所需器具的清洗、干燥和保存培养基的配制和灭菌生理生化测定等第4页/共48页2、无菌操作室也称接种室，是开展组织培养研究包括接种、继代、细胞融合等的场所。要求：干爽安静，清洁明亮，墙壁光

2、滑平整不易积污灰尘，地面平坦无缝便于清洗和灭菌。第5页/共48页3、培养室是将接种到培养瓶等器皿中的植物材料进行培养的场所。主要设备：空调机、培养架、灯光、除湿机、换气扇等。第6页/共48页 植物组织培养材料移到田间前，通常先移到温室进行练苗，待生根成活后，再移到大田。第7页/共48页二、仪器和设备二、仪器和设备（一）无菌操作设备 、烘箱：作用：干燥洗后的器皿 高温干热灭菌 测定培养物的干重时烘干培 养材料。第8页/共48页第9页/共48页2、灭菌锅类型：普通医用消毒锅 大的高压灭菌锅作用：培养基、水和各种用具的消毒第10页/共48页医用手提式灭菌锅 第11页/共48页不锈钢立式灭菌锅第12页

3、/共48页3、超净工作台陈列于操作室（接种室）内类型：垂直式和水平式作用：无菌操作第13页/共48页（二）药品贮存和配制仪器设备1、冰箱作用：低温保存材料，存放药品、培养基母液、激素、酶制剂。第14页/共48页2、天平陈列于制备室中作用：称取大量元素、微 量元素、酶制剂第15页/共48页3、酸度计陈列于制备室中作用：测定培养基及酶制剂的pH值PHS-802中文台式酸度计中文台式酸度计通用型或经济型酸度计通用型或经济型酸度计第16页/共48页（三）观察分析仪器设备显微镜类型：倒置显微镜 原生质体观察 普通显微镜 染色体和叶片气孔观察 荧光显微镜 细胞活力观察 电子显微镜 病毒检测、细胞器变化 体

4、视显微镜 形态分化的实体观察第17页/共48页第18页/共48页（四）培养设备1.空调作用：控制培养温度2.加湿器和去湿机控制培养室内湿度状况第19页/共48页3.定时器控制光照时间4.培养架盛放培养物第20页/共48页5.摇床和旋转床进行液体培养时用以改善气体状况第21页/共48页三、玻璃器皿及用具三、玻璃器皿及用具（一）玻璃器皿1.培养器皿培养用的：试管、三角瓶、培养皿等2.分注器类型：注射器式分注器、漏斗式分注器、量筒漏斗式分注器3.其他玻璃仪器烧杯、量筒、移液管、容量瓶、试剂瓶等第22页/共48页（二）.器械类1.镊子类型：枪式镊子（接种、转移）、尖头镊子（茎尖）2.剪刀类型：大剪刀、

5、小剪刀、弯头剪刀3.解剖刀类型：固定式和活动式4.接种针用来转移细胞或愈伤组织5.细菌过滤器用来去除细菌（高温的影响）第23页/共48页第24页/共48页第二节 基本操作主要内容：一、洗涤 二、灭菌 三、无菌操作第25页/共48页 一、洗涤一、洗涤（一）洗涤剂洗净法（二）超声波洗净法（三）重铬酸钾洗净法第26页/共48页 二、灭菌二、灭菌（一）器具的灭菌 1.干热灭菌法 2.湿热灭菌法（高压蒸气灭菌）（二）培养基的灭菌 1.湿热灭菌法（高压蒸气灭菌）2.过滤除菌法第27页/共48页 三、无菌操三、无菌操作作关灯（关灯（10 min）酒酒精精消消毒毒点燃酒精灯开始操作点燃酒精灯开始操作无菌操作步

6、骤紫外灯灭菌（紫外灯灭菌（30 min）第28页/共48页第三节 培养基主要内容：一、培养基的构成二、培养基的选择三、培养基的配制第29页/共48页一、培养基的构成（一）水分类型：蒸馏水、纯水、自来水作用：构成培养基的主要成分（二）无机盐类 类型：大量元素和微量元素 作用：提供植物生长所需营养元素 第30页/共48页（三）有机营养成分1糖类物质2维生素类3氨基酸类（四）植物生长调节剂 1生长素2细胞分裂素 3 赤霉素类第31页/共48页（五）天然有机添加物质 类型：椰子汁、酵母提取 物、番茄汁、香蕉泥 作用：提供有机营养（六）凝固剂 适用：固体培养基 类型：琼脂，明胶等（七）其他添加物 类型：

7、活性炭、Vc等 作用：防褐化第32页/共48页注意！培养基一定要调pH值。第33页/共48页二、培养基的选择（一）培养基的基本类型1.含盐量较高的培养基：种类：MS培养基、LS培养基、BL培养 基、ER培养基等。特点：无机盐浓度高，特别是硝酸根离子、钾离子和铵离子含量丰富。第34页/共48页2.硝酸钾含量较高的培养基类型：B5培养基、N6培养基、SH培养 基。特点：培养基的浓度较高，铵态氮含 量较低，但硝酸钾和盐酸硫胺素(VB1)含量较高。第35页/共48页3.中等无机盐含量的培养基类型：Nitsch培养基、Miller 培养基和H 培养基。特点：大量元素含量约为MS培养基的一 半，微量元素种

8、类少但含量较 高，维生素种类较多。第36页/共48页4.低无机盐含量培养基类型：White培养基、WS培养基、HE培 养基。特点：无机盐含量非常低，为MS培养基 的1/4左右，有机成分也很低。第37页/共48页（二）基本培养基的选择培养基：多数植物，但不适合生长缓慢、对无机盐类要求低的植物，尤其是不适合铵盐高会发生毒害的植物。第38页/共48页B5培养基：豆类、木本植物。N6培养基：适合植物的花药培养。特点：KNO3和(NH4)2SO4含量高，但不含元素钼。White培养基：应用较广，非常适合生根培 养和幼胚培养。WPM培养基：适合木本植物的培养。特点：氮含量比较低。注意！实际应用中要通过试验

9、筛选。第39页/共48页基本培养基对西洋杜鹃增殖的影响基本培养基对西洋杜鹃增殖的影响第40页/共48页三、培养基的配制（一）培养基母液的配制1.基本培养基母液类型：四液式（钙盐最后加入）、三液式、五液式（钙盐和铁盐单独配制）。成分：大量元素、微量元素、铁盐、有机成 分。贮藏：24冰箱内贮藏。倍数：10X、100X。标记：名称、配制倍数、日期等。第41页/共48页2.植物生长调节剂单位选择：mg/L、mol/L；110mmol/L配制方法：2,4D、NAA、IAA、IBA、GA3、ZT：先用少量95%酒精溶解后，加水定容。KT、6 BA：1mol/L的盐酸溶解后，加水定容。第42页/共48页（二

10、）培养基的配制步骤：步骤：取出母液；准备好用具。取出母液；准备好用具。取容器（搪瓷缸），加入取容器（搪瓷缸），加入1/32/3左右的蒸馏水，加热至沸腾；左右的蒸馏水，加热至沸腾；用移液管量取所需量的母液加入一只干净的烧杯中，用移液管量取所需量的母液加入一只干净的烧杯中，待琼脂完全溶解后加入待琼脂完全溶解后加入称取定量的琼脂和蔗糖加入上述煮沸的水中并不断搅拌，称取定量的琼脂和蔗糖加入上述煮沸的水中并不断搅拌，直到完全溶解。直到完全溶解。用用NaOH或稀或稀HCl调节调节pH值值高压灭菌，（高压灭菌，（121，15 min20min）冷却，取出，备用冷却，取出，备用第43页/共48页第四节 培养条

11、件1、光照条件 包括光照强度、时间长短、光照质量等 有的材料培养需要光，有的则不需光；不同的植物所需的光照强度也不一样。一般10005000 Lx/1216h/天第44页/共48页2、温度条件大多数植物2332，一般252。低于15 或高于35 对植物的生长不利。3、湿度条件培养容器中湿度100培养室的湿度一般70 80 的相对湿度。4、气体第45页/共48页思考题 1、一个正规的组织培养实验室应具备那些房间？2、组织培养常用的设备有哪些？各有何用途？3、组织培养的环境条件有哪些？第46页/共48页金花茶滤纸桥牡丹山茶在增殖蝴蝶兰试管苗开花情况非洲紫罗兰壮苗生跟第47页/共48页感谢您的观看！第48页/共48页