【生物课件】微生物的培养技术及应用课件 高二下学期生物人教版选择性必修3.pptx
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1、1.1.消毒消毒使用较为温和的使用较为温和的物理、化学或生物物理、化学或生物等方法,杀死物等方法,杀死物体表面或内部一体表面或内部一部分微生物部分微生物。(1 1)概念:)概念:(2 2)消毒的方法:)消毒的方法:煮沸消毒法煮沸消毒法:巴氏消毒法巴氏消毒法:化学药剂消毒法化学药剂消毒法:酒精酒精氯气氯气 紫外线消毒法:紫外线消毒法:常用的消毒和灭菌方法常用的消毒和灭菌方法阅读教材阅读教材P10-P11P10-P11回答以下问题回答以下问题二、无菌二、无菌技术技术2.2.灭菌灭菌 (1 1)概念:)概念:指使用强烈的理化方法杀死物体内外指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有所有微生物微生物,包,包
2、括括芽孢和孢子芽孢和孢子。(2 2)灭菌的方法:)灭菌的方法:阅读教材阅读教材P10-P11P10-P11回答以下问题回答以下问题芽孢芽孢有些有些细菌在一定的条件下,细胞里面形细菌在一定的条件下,细胞里面形成一个椭圆形的成一个椭圆形的休眠体休眠体,叫做芽孢。,叫做芽孢。孢子孢子 细菌细菌、原生动物、真菌和植物等产生的、原生动物、真菌和植物等产生的一种有繁殖作用的一种有繁殖作用的无性生殖细胞无性生殖细胞。能直。能直接发育成新个体。接发育成新个体。原理:原理:高温蒸汽高温蒸汽破坏蛋白质、核酸等结构使其变性破坏蛋白质、核酸等结构使其变性优点:优点:操作简便,效果可靠,操作简便,效果可靠,可以杀灭所有
3、的生物,包括最耐热可以杀灭所有的生物,包括最耐热的某的某些微生物的休眠体。些微生物的休眠体。基本保持培养基的营养成分不被破坏。基本保持培养基的营养成分不被破坏。对象:对象:培养基培养基等等注:使用后的培养基必须灭菌注:使用后的培养基必须灭菌后后 才能丢弃,才能丢弃,以免污染环境。以免污染环境。湿热灭菌湿热灭菌:高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅内内100kPa100kPa、121 121 下下维持维持15-30min15-30min高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅(2)灭菌的方法:1 1.取桶加水取桶加水高压高压蒸汽灭菌的操作方法蒸汽灭菌的操作方法将内层将内层灭菌桶灭菌桶取出
4、,向外层锅内加水,取出,向外层锅内加水,水面水面与三角形与三角形搁架平齐搁架平齐。2.2.装入待灭菌的物品装入待灭菌的物品注意不要装得太挤,以免注意不要装得太挤,以免妨碍蒸汽流通妨碍蒸汽流通影响影响灭菌灭菌效果效果。3.3.加盖加盖,拧紧螺栓拧紧螺栓加盖加盖,并将盖上的并将盖上的排气软管排气软管插入插入内层灭菌桶内层灭菌桶的的排气排气槽内槽内。拧紧固定盖子的螺栓,注意拧紧固定盖子的螺栓,注意要同时旋紧相对的两个螺栓要同时旋紧相对的两个螺栓,使螺,使螺栓松紧一致,不漏气。栓松紧一致,不漏气。4.4.加热灭菌加热灭菌加热灭菌锅,加热灭菌锅,打开排气阀打开排气阀,等,等冷空气冷空气完全排完全排尽后,
5、关闭排尽后,关闭排气阀气阀。100kPa100kPa、温度温度121121下,保温保下,保温保压压1530min1530min。切断电源,让灭菌锅内温度自然下降,压力表切断电源,让灭菌锅内温度自然下降,压力表降到降到 “0 0”点,温度点,温度下降后,下降后,打开排气阀打开排气阀,旋开旋开固定固定螺栓螺栓,取出灭菌物品。,取出灭菌物品。5.5.降温取物降温取物判断下列叙述是否正确。判断下列叙述是否正确。A A、加水时,水面应与三角搁架平齐加水时,水面应与三角搁架平齐B B、高压蒸汽灭菌加盖时应按顺时针方向、高压蒸汽灭菌加盖时应按顺时针方向依次旋依次旋紧螺栓紧螺栓C C、高压蒸汽灭菌加热结束时,
6、打开放气阀高压蒸汽灭菌加热结束时,打开放气阀使压力表使压力表指针指针回到零后,开启锅盖回到零后,开启锅盖D D、加盖时,将排气软管插入内层灭菌桶的排气加盖时,将排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内槽内E E、加热时,待冷空气完全排尽后关上排气阀加热时,待冷空气完全排尽后关上排气阀对象对象:耐高温,需保持干燥的物品,耐高温,需保持干燥的物品,适用于适用于玻璃玻璃器皿器皿 (如试管、培养皿、吸管、注射器如试管、培养皿、吸管、注射器)金属金属器具器具 (如针头、如针头、镊子、剪刀等镊子、剪刀等)的灭菌的灭菌干热灭菌干热灭菌:干热灭菌箱干热灭菌箱内内160-170 160-170 下加热下加热2-3h2-
7、3h 灼烧灭菌灼烧灭菌:酒精灯火焰灼烧酒精灯火焰灼烧对象对象:接种工具接种工具如如接种环、接种针接种环、接种针,以,以及及接种接种过程过程中的试管口或瓶口中的试管口或瓶口等易被污等易被污染部位染部位两个方面:两个方面:消毒消毒:对操作的对操作的空间空间、操作者的、操作者的衣衣着和着和手手灭菌灭菌:培养细菌用的培养细菌用的培养基培养基与与培养皿培养皿玻棒玻棒、试管试管、烧瓶、吸管烧瓶、吸管和和接种接种环等环等还要注意:还要注意:避免已经灭菌的材料用具与周围物品接触;避免已经灭菌的材料用具与周围物品接触;为了避免周围环境微生物污染为了避免周围环境微生物污染,操作应在,操作应在超净工作台超净工作台并
8、并在酒精灯火焰旁进行在酒精灯火焰旁进行。思考:思考:无菌技术除用来防止实验室的培养物被其他无菌技术除用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外,还有什么作用外来微生物污染外,还有什么作用?无菌技术还能有效避免无菌技术还能有效避免操作者操作者被微生物感染。被微生物感染。(三)微生物的纯培养(三)微生物的纯培养由由单一个体单一个体繁殖所获得的繁殖所获得的微生物群体微生物群体称为称为纯纯培养物培养物,获得纯培养物的过程就是,获得纯培养物的过程就是纯培养纯培养。(1 1)概念:)概念:(2 2)内容:)内容:1 1)配制培养基)配制培养基2 2)灭菌)灭菌3 3)接种)接种4 4)分离)分离5 5)
9、培养)培养阅读P11回答酵母菌的纯培养酵母菌的纯培养分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成殖形成肉眼可见的肉眼可见的、有一定形态结构有一定形态结构的的子细胞群体子细胞群体,这就是这就是菌落菌落。1.1.菌落:菌落:2.2.纯培养:纯培养:采用采用平板划线法平板划线法和和稀释涂布平板法稀释涂布平板法将单个微生物将单个微生物分分散散在固体培养基上,之后得到的在固体培养基上,之后得到的单菌落单菌落一般是由单一般是由单个微生物形成的纯培养物。个微生物形成的纯培养物。3.3.原理:原理:微生物群微生物群分散分散或或稀释稀释单个细胞单个细胞单个菌
10、落单个菌落繁殖繁殖稀释涂布平板法稀释涂布平板法平板划线法平板划线法4.4.纯化培养方法:纯化培养方法:方法步骤1.1.制备培养基制备培养基1 1 1 1)配制培养基)配制培养基)配制培养基)配制培养基称取去皮马铃薯称取去皮马铃薯称取去皮马铃薯称取去皮马铃薯200g200g200g200g,切成小块,加水,切成小块,加水,切成小块,加水,切成小块,加水1000ml1000ml1000ml1000ml,加,加,加,加热煮沸至马铃薯软烂,用纱布过滤。向滤液中加入热煮沸至马铃薯软烂,用纱布过滤。向滤液中加入热煮沸至马铃薯软烂,用纱布过滤。向滤液中加入热煮沸至马铃薯软烂,用纱布过滤。向滤液中加入20g2
11、0g20g20g葡萄糖、葡萄糖、葡萄糖、葡萄糖、15-20g15-20g15-20g15-20g琼脂琼脂琼脂琼脂,用蒸馏水定容至,用蒸馏水定容至,用蒸馏水定容至,用蒸馏水定容至1000ml1000ml1000ml1000ml。(有时需(有时需(有时需(有时需调调调调pHpHpHpH)2 2 2 2)灭菌)灭菌)灭菌)灭菌将配制好的将配制好的将配制好的将配制好的培养基培养基培养基培养基转移到锥形瓶中,加棉塞,包上牛转移到锥形瓶中,加棉塞,包上牛转移到锥形瓶中,加棉塞,包上牛转移到锥形瓶中,加棉塞,包上牛皮纸,并用皮筋勒紧,再放入皮纸,并用皮筋勒紧,再放入皮纸,并用皮筋勒紧,再放入皮纸,并用皮筋勒
12、紧,再放入高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅中,在中,在中,在中,在压力为压力为压力为压力为100kPa100kPa100kPa100kPa、温度为、温度为、温度为、温度为121121121121的条件下,灭菌的条件下,灭菌的条件下,灭菌的条件下,灭菌15-15-15-15-30min30min30min30min。将。将。将。将5-85-85-85-8套套套套培养皿培养皿培养皿培养皿包成一包,用几层牛皮纸包包成一包,用几层牛皮纸包包成一包,用几层牛皮纸包包成一包,用几层牛皮纸包紧,放入紧,放入紧,放入紧,放入干热灭菌箱干热灭菌箱干热灭菌箱干热灭菌箱内,在内,在内,在内,
13、在160-170160-170160-170160-170灭菌灭菌灭菌灭菌2h.2h.2h.2h.包器材包器材3 3)倒平板)倒平板倒平板的具体操作:倒平板的具体操作:倒平板的具体操作:倒平板的具体操作:3 3 3 3)倒平板)倒平板)倒平板)倒平板待培养基待培养基待培养基待培养基冷却至冷却至冷却至冷却至50505050左右左右左右左右时,在时,在时,在时,在酒精灯火焰附近倒平板酒精灯火焰附近倒平板酒精灯火焰附近倒平板酒精灯火焰附近倒平板。1.1.1.1.拔出锥形瓶的棉塞拔出锥形瓶的棉塞拔出锥形瓶的棉塞拔出锥形瓶的棉塞2.2.2.2.将将将将瓶口迅速通过火焰瓶口迅速通过火焰瓶口迅速通过火焰瓶口
14、迅速通过火焰3.3.3.3.用拇指和食指将培养皿用拇指和食指将培养皿用拇指和食指将培养皿用拇指和食指将培养皿打开打开打开打开一条稍大于瓶口的缝隙一条稍大于瓶口的缝隙一条稍大于瓶口的缝隙一条稍大于瓶口的缝隙,将培,将培,将培,将培养基倒入,养基倒入,养基倒入,养基倒入,立即立即立即立即盖上皿盖。盖上皿盖。盖上皿盖。盖上皿盖。4.4.4.4.等待培养皿等待培养皿等待培养皿等待培养皿冷却冷却冷却冷却后,将培后,将培后,将培后,将培养皿养皿养皿养皿倒过来放置倒过来放置倒过来放置倒过来放置。倒平板注意事项:倒平板注意事项:倒平板注意事项:倒平板注意事项:温度温度温度温度:50505050左右左右左右左右
15、操作操作操作操作:在酒精灯火焰:在酒精灯火焰:在酒精灯火焰:在酒精灯火焰附近附近附近附近冷凝后平板冷凝后平板冷凝后平板冷凝后平板倒置倒置倒置倒置1.1.培养基灭菌后,需要冷却到培养基灭菌后,需要冷却到5050左右时,才能用来倒平板。你左右时,才能用来倒平板。你用用什么办法来估计什么办法来估计培养基的温度?培养基的温度?可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶,感觉温度下降到刚刚不可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶,感觉温度下降到刚刚不烫手即可。烫手即可。2.2.在倒平板的过程中,如果不小心将培养基溅在在倒平板的过程中,如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间皿盖与皿底之间的的部位,这个平板还能用来培养微生物吗?
16、为什么?部位,这个平板还能用来培养微生物吗?为什么?最好不要用这个平板培养微生物。最好不要用这个平板培养微生物。防止空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。防止空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。问题讨论问题讨论将所倒平板放入将所倒平板放入2828的的恒温箱恒温箱中培养中培养24h24h,观察,观察是否有菌落是否有菌落存存在以确定是否被污染或灭菌是否彻底。在以确定是否被污染或灭菌是否彻底。5.5.怎么确定所倒平板怎么确定所倒平板未被杂菌污染未被杂菌污染?4.4.平板冷凝后,为什么要将平板倒置?平板冷凝后,为什么要将平板倒置?平板冷凝后,皿盖上会凝结水珠,将平板倒置,既平
17、板冷凝后,皿盖上会凝结水珠,将平板倒置,既可以防止皿盖可以防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染,又可以避免培养基中的水分过快上的水珠落入培养基造成污染,又可以避免培养基中的水分过快挥发。挥发。3.3.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰?为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰?答:通过灼烧灭菌,防止瓶口的微生物答:通过灼烧灭菌,防止瓶口的微生物污染培养基污染培养基。2.2.接种和分离酵母菌接种和分离酵母菌 通过通过接种环接种环在固体培养基表面在固体培养基表面连续划线连续划线的操作,将聚集的的操作,将聚集的菌种逐步稀释菌种逐步稀释分散分散到培养基表面。经过数次划线后培养可以分到培养基表面。经过数次划线后培养
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