肿瘤标志物1学习.pptx

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1、肿瘤是一类严重危害人类健康的疾肿瘤是一类严重危害人类健康的疾病。病。为了提高对肿瘤的早期检测、鉴别诊为了提高对肿瘤的早期检测、鉴别诊断、疗效观察以及预后判断，人们从肿瘤断、疗效观察以及预后判断，人们从肿瘤细胞的化学特性、细胞病理、免疫反应和细胞的化学特性、细胞病理、免疫反应和基因表达产物等诸多方面寻找各种特异性基因表达产物等诸多方面寻找各种特异性强、灵敏度高的肿瘤标志物。肿瘤标志物强、灵敏度高的肿瘤标志物。肿瘤标志物的研究对肿瘤的诊断有极其重要的意义。的研究对肿瘤的诊断有极其重要的意义。第1页/共69页一、肿瘤标志物的概念所谓肿瘤标志物，指在肿瘤发生和增殖过程所谓肿瘤标志物，指在肿瘤发生和增殖

2、过程中，由肿瘤细胞合成、释放，存在于组织、中，由肿瘤细胞合成、释放，存在于组织、细胞或体液中，反映肿瘤存在和生长的一类细胞或体液中，反映肿瘤存在和生长的一类物质。物质。通过对这类物质的分析，能帮助人们通过对这类物质的分析，能帮助人们从正常组织中区别肿瘤或测定肿瘤细胞核、从正常组织中区别肿瘤或测定肿瘤细胞核、细胞质以及对细胞膜上的特性进行分析，以细胞质以及对细胞膜上的特性进行分析，以此作为辨认肿瘤细胞的标志。此作为辨认肿瘤细胞的标志。第2页/共69页理想的肿瘤标志物应该具有下列条件：理想的肿瘤标志物应该具有下列条件：1.标志物的含量变化应与肿瘤的生长、标志物的含量变化应与肿瘤的生长、消退、转移有

3、直接的定性或定量的比例关系。消退、转移有直接的定性或定量的比例关系。2.标志物应具有较高的特异性，能比较标志物应具有较高的特异性，能比较明显地区别于正常人群和良性肿瘤。明显地区别于正常人群和良性肿瘤。3.能在临床上尚未确定肿瘤前检测出来。能在临床上尚未确定肿瘤前检测出来。4.检测这类标志物的方法简便，易推广，检测这类标志物的方法简便，易推广，而且成本较低。而且成本较低。第3页/共69页二、肿瘤标志物的分类二、肿瘤标志物的分类肿瘤标志物的分类常用的有两种：其一按肿瘤标志物的分类常用的有两种：其一按肿瘤标志物的来源肿瘤标志物的来源以及它的特异性，可分为两大以及它的特异性，可分为两大类。类。1.1.

4、肿瘤特异性标志物肿瘤特异性标志物 是一种肿瘤所产生的是一种肿瘤所产生的特异性物质。例如前列腺特异性抗原特异性物质。例如前列腺特异性抗原（PSA）就就是前列腺肿瘤所产生的特异性标志物质，只有患是前列腺肿瘤所产生的特异性标志物质，只有患前列腺癌时，前列腺癌时，PSA才会显著性升高。才会显著性升高。2.2.肿瘤辅助标志物肿瘤辅助标志物 由一类组织类型相似而由一类组织类型相似而性质不同的肿瘤产生，其含量有较大的变化。这性质不同的肿瘤产生，其含量有较大的变化。这类标志物往往易同良性肿瘤或正常组织发生混淆。类标志物往往易同良性肿瘤或正常组织发生混淆。第4页/共69页 第二是按肿瘤标志物本身的化学特第二是按

5、肿瘤标志物本身的化学特性，可分为以下几类：性，可分为以下几类：1.肿瘤胚胎性抗原标志物肿瘤胚胎性抗原标志物 AFP 2.糖类标志物糖类标志物 CA19-9 3.酶类标志物酶类标志物 PAP 4.激素类标志物激素类标志物 HCG 5.蛋白质类标志物蛋白质类标志物 2m 6.基因类标志物基因类标志物 ras第5页/共69页三、肿瘤标志物的临床应用三、肿瘤标志物的临床应用 近年来，肿瘤标志物在临床上已得近年来，肿瘤标志物在临床上已得到较广泛的应用，到较广泛的应用，目前主要应用于：目前主要应用于：1.肿瘤的普查；肿瘤的普查；2.肿瘤高危人群的筛选；肿瘤高危人群的筛选；3.肿瘤的诊断和鉴别诊断；肿瘤的诊

6、断和鉴别诊断；4.肿瘤监测；肿瘤监测；5.肿瘤分类、分期、定位；肿瘤分类、分期、定位；6.肿瘤治疗。肿瘤治疗。第6页/共69页第二节第二节 肿瘤标志物的测定肿瘤标志物的测定一、胚胎性抗原标志物的测定一、胚胎性抗原标志物的测定在人类发育过程中，许多原本只在在人类发育过程中，许多原本只在胚胎期才具有蛋白类物质，应随胎儿的出胚胎期才具有蛋白类物质，应随胎儿的出生而逐渐停止合成和分泌，但因某种因素生而逐渐停止合成和分泌，但因某种因素的影响，特别是肿瘤状态时，会使得机体的影响，特别是肿瘤状态时，会使得机体一些一些“关闭关闭”的基因激活，出现了返祖现的基因激活，出现了返祖现象，而重新开启并重新生成和分泌这

7、些胚象，而重新开启并重新生成和分泌这些胚胎、胎儿期的蛋白。胎、胎儿期的蛋白。第7页/共69页胚胎类肿瘤标志物胚胎类肿瘤标志物名名 称称 性性 质质 相相 关关 肿肿 瘤瘤 甲胎蛋白甲胎蛋白 糖蛋白糖蛋白70ku 肝细胞、胚细胞（非精原细胞瘤）肝细胞、胚细胞（非精原细胞瘤）-癌胚抗原癌胚抗原 80ku 结肠结肠 癌胚铁蛋白癌胚铁蛋白 糖蛋白糖蛋白600ku 肝肝 癌胚抗原癌胚抗原 糖蛋白糖蛋白22ku 结肠、直肠、胰腺、肺、乳腺结肠、直肠、胰腺、肺、乳腺 胰癌胚抗原胰癌胚抗原 糖蛋白糖蛋白40ku 胰腺胰腺 鳞状细胞抗原鳞状细胞抗原 糖蛋白糖蛋白44-48ku 肺、皮肤、头和颈部肺、皮肤、头和颈

8、部 组织多肽抗原组织多肽抗原 细胞角蛋白细胞角蛋白8.18.19 乳腺、结肠乳腺、结肠 这类蛋白虽然与肿瘤组织不一定都具有特定的相关性，但与肿瘤的发生存在着内在的联系，故被作为一种较为常见的肿瘤标志物。第8页/共69页 （一）甲胎蛋白（一）甲胎蛋白（AFPAFP）AFP主要是由胎肝细胞和卵黄囊合成的主要是由胎肝细胞和卵黄囊合成的单一多聚体肽链的糖蛋白。其分子量平均为单一多聚体肽链的糖蛋白。其分子量平均为70ku，含糖含糖4。AFP在电场中泳动于在电场中泳动于-球蛋球蛋白区，是胎儿血清中的主要蛋白质。白区，是胎儿血清中的主要蛋白质。1964年年Tatarinov发现肝癌患者血清中检测到发现肝癌患

9、者血清中检测到AFP。【参考范围】成人血浆参考范围】成人血浆AFP浓度低于浓度低于25g/L。第9页/共69页【临床意义】【临床意义】AFP是原发性肝癌的是原发性肝癌的最灵敏、最特异的肿瘤标志物，最灵敏、最特异的肿瘤标志物，80%以以上的原发性肝癌患者血清上的原发性肝癌患者血清AFP明显增高，明显增高，AFP检测诊断肝癌的标准为：检测诊断肝癌的标准为：血清血清AFP测定结果大于测定结果大于500g/L持续持续4周；周；AFP含量有不断增高者；含量有不断增高者；血清血清AFP测定结果大于测定结果大于200g/L持续持续8周。周。第10页/共69页 肝癌患者血清肝癌患者血清AFP含量变化的速率和含

10、量变化的速率和程度与肿瘤组织分化程度高低有一定相关程度与肿瘤组织分化程度高低有一定相关性，分化程度较高的肿瘤性，分化程度较高的肿瘤AFP含量常大于含量常大于200g/L。血清血清AFP含量的检测对其它肿瘤的监含量的检测对其它肿瘤的监测亦有重要临床价值。如睾丸癌、畸胎瘤、测亦有重要临床价值。如睾丸癌、畸胎瘤、胃癌、胰腺癌等患者血清胃癌、胰腺癌等患者血清AFP含量可以升含量可以升高。高。第11页/共69页 （二）癌胚抗原（二）癌胚抗原（CEACEA）癌胚抗原是癌胚抗原是1965年年Gold和和Freedman首先从胎儿及结肠癌组织中发现的，首先从胎儿及结肠癌组织中发现的，CEA是是一种分子量为一种

11、分子量为22ku的多糖蛋白复合物，的多糖蛋白复合物，45为蛋白质。一般情况下，为蛋白质。一般情况下，CEA是由胎儿胃是由胎儿胃肠道上皮组织、胰和肝的细胞所合成，通常肠道上皮组织、胰和肝的细胞所合成，通常在妊娠前在妊娠前6个月内个月内CEA含量增高，出生后血含量增高，出生后血清中含量很低。清中含量很低。【参考范围】【参考范围】成人血清成人血清2.5g/L。第12页/共69页【临床意义】【临床意义】当当CEA大于大于60g/L时，可时，可见于结肠癌、直肠癌、胃癌和肺癌。见于结肠癌、直肠癌、胃癌和肺癌。CEA值升高，表明有病变残存或进展。如肺癌、值升高，表明有病变残存或进展。如肺癌、乳腺癌、膀胱癌和

12、卵巢癌患者血清乳腺癌、膀胱癌和卵巢癌患者血清CEA量量会明显升高，大多显示为肿瘤浸润，其中会明显升高，大多显示为肿瘤浸润，其中约约70为转移性癌。一般来说，手术切除为转移性癌。一般来说，手术切除后后6周，周，CEA水平恢复正常，否则提示有水平恢复正常，否则提示有残存肿瘤，若残存肿瘤，若CEA浓度持续不断升高，或浓度持续不断升高，或其数值超过正常其数值超过正常5-6倍者均提示预后不良。倍者均提示预后不良。第13页/共69页二、糖类抗原标志物的测定二、糖类抗原标志物的测定 肿瘤标志物相关物质是指由肿瘤细胞表肿瘤标志物相关物质是指由肿瘤细胞表面的抗原物质或者是肿瘤细胞所分泌的物面的抗原物质或者是肿瘤

13、细胞所分泌的物质，这类物质含糖量高，故又称为糖类抗质，这类物质含糖量高，故又称为糖类抗原（原（carbohydrate antigen，CA）。）。这类这类标志物出现为临床肿瘤的诊断带来方便，标志物出现为临床肿瘤的诊断带来方便，糖类抗原标志物产生可分为两大类，即糖类抗原标志物产生可分为两大类，即高高分子粘蛋白类分子粘蛋白类和和血型类抗原血型类抗原。第14页/共69页糖类高分子粘蛋白抗原肿瘤标志物糖类高分子粘蛋白抗原肿瘤标志物 名名 称称性性 质质 癌癌 肿肿 常用单克隆抗体常用单克隆抗体 CA125 糖蛋白糖蛋白200ku 卵巢、子宫内膜卵巢、子宫内膜 OC125 CA15-3 糖蛋白糖蛋白4

14、00ku 乳腺、卵巢乳腺、卵巢 DF3和和115D3 CA549 高分子量糖蛋白高分子量糖蛋白 乳腺、卵巢乳腺、卵巢 BC4E549 BC4n154 CA27.29 高分子量糖蛋白高分子量糖蛋白 乳腺乳腺 B27.29 DU-PAN-2 粘蛋白粘蛋白100-500ku 胰腺、卵巢、胃胰腺、卵巢、胃 DU-PAN-2 第15页/共69页血型类抗原肿瘤标志物血型类抗原肿瘤标志物名名 称称性性 质质 癌癌 肿肿 常用单克隆抗体常用单克隆抗体 CA19-9 唾液酸化唾液酸化Lexa 胰腺、胃肠、胰腺、胃肠、肝肝 116NS19-9 CA19-5 唾液酸化唾液酸化Lea和和Leag 胃肠、卵巢胃肠、卵巢

15、 116NS19-5 CA50 唾液酸化唾液酸化Lea 胰腺、胃肠、胰腺、胃肠、结肠结肠 Colo-50 CA72-4 唾液酸化唾液酸化Tn 卵巢、乳腺、卵巢、乳腺、胃肠、结肠胃肠、结肠 B27.3.cc49 CA242 唾液酸化唾液酸化CHO 结肠、直肠、结肠、直肠、胰腺胰腺 C242 第16页/共69页 这类抗原标志物的命名是没有规律的，有些是这类抗原标志物的命名是没有规律的，有些是肿瘤细胞株的编号，有些是抗体的物质编号，常用肿瘤细胞株的编号，有些是抗体的物质编号，常用检测方法是单克隆抗体法。检测方法是单克隆抗体法。（一）（一）CA19-9 CA19-9是是1979年年Koprowski等

16、用结肠癌细胞等用结肠癌细胞免疫小鼠，并与骨髓瘤杂交所得免疫小鼠，并与骨髓瘤杂交所得116NS19-9单克隆单克隆抗体，它是一种分子量为抗体，它是一种分子量为5000ku的低聚糖类肿瘤的低聚糖类肿瘤相关糖类抗原，其结构为相关糖类抗原，其结构为Lea血型抗原物质与唾液血型抗原物质与唾液酸酸Lexa的结合物。的结合物。【参考范围】【参考范围】血清血清CA19-9含量为含量为216U/ml（RIA法）。法）。第17页/共69页 【临床意义】【临床意义】CA19-9是胰腺癌和结、是胰腺癌和结、直肠癌的标志物。血清直肠癌的标志物。血清CA19-9阳性临界值阳性临界值为为37U/ml。胰腺癌患者胰腺癌患者8

17、5以上为阳性。肿瘤以上为阳性。肿瘤切除后切除后CA19-9浓度会下降，如再上升，则浓度会下降，如再上升，则可表示复发。结直肠癌、胆囊癌、胆管癌、可表示复发。结直肠癌、胆囊癌、胆管癌、肝癌和胃癌的阳性率也会很高，若同时检测肝癌和胃癌的阳性率也会很高，若同时检测CEA和和AFP可进一步提高阳性检测率。良性可进一步提高阳性检测率。良性疾患时如胰腺炎和黄疸，疾患时如胰腺炎和黄疸，CA19-9浓度也可浓度也可增高，但往往呈增高，但往往呈“一过性一过性”，而且其浓度多，而且其浓度多低于低于120U/ml，必须加以鉴别。必须加以鉴别。第18页/共69页 （二）（二）CA125 CA125是一种大分子多聚糖蛋

18、白，是重要的是一种大分子多聚糖蛋白，是重要的卵卵巢癌巢癌相关抗原。分子量为相关抗原。分子量为200ku，加热至加热至100时时CA125的活性破坏。的活性破坏。【参考范围】【参考范围】血清血清CA12535.0U/ml（RIA法）。法）。【临床意义】【临床意义】CA125是是上皮性卵巢癌上皮性卵巢癌和和子宫内膜子宫内膜癌癌的标志物。当卵巢癌复发时，在临床确诊前几个月的标志物。当卵巢癌复发时，在临床确诊前几个月便可呈现便可呈现CA125增高，尤其卵巢癌转移患者的血清增高，尤其卵巢癌转移患者的血清CA125更明显高于参考值。动态观察血清更明显高于参考值。动态观察血清CA125浓浓度有助于卵巢癌的预

19、后评价和治疗控制，经治疗后，度有助于卵巢癌的预后评价和治疗控制，经治疗后，CA125含量可明显下降，若不能恢复至正常范围，含量可明显下降，若不能恢复至正常范围，应考虑有残存肿瘤的可能。应考虑有残存肿瘤的可能。第19页/共69页 （三）（三）CA15-3 CA15-3是一种是一种乳腺癌乳腺癌相关抗原，于相关抗原，于1984年由年由Kufu和和Hilkens等人发现，等人发现，CA15-3分子量为分子量为400ku，分子结构尚未清楚。分子结构尚未清楚。【参考范围】【参考范围】血清血清CA15-328U/ml（RIA法）。法）。【临床意义】【临床意义】乳腺癌乳腺癌患者患者CA15-3明显升高，也明显

20、升高，也是监测乳腺癌患者术后复发的最佳指标，当是监测乳腺癌患者术后复发的最佳指标，当CA15-3大于大于100U/ml时，可认为有转移性病变，其含量的变时，可认为有转移性病变，其含量的变化与治疗结果密切相关。肺癌、胃肠癌、卵巢癌及化与治疗结果密切相关。肺癌、胃肠癌、卵巢癌及宫颈癌患者的血清宫颈癌患者的血清CA15-3也可升高，应予以鉴别，也可升高，应予以鉴别，特别要排除部分妊娠引起的含量升高。特别要排除部分妊娠引起的含量升高。第20页/共69页 （四）（四）CA50 CA50是是1983年年Lindholm等从抗人等从抗人结、直肠癌结、直肠癌Colo-205细胞株的一系列单克细胞株的一系列单克

21、隆抗体中筛选出来的，对结、直肠癌有强隆抗体中筛选出来的，对结、直肠癌有强烈反应。所能识别的抗原称烈反应。所能识别的抗原称CA50。CA50存在于细胞膜内，其抗原决定簇为唾液酸存在于细胞膜内，其抗原决定簇为唾液酸Lea血型物质与唾液酸血型物质与唾液酸-N-四氧神经酰胺。四氧神经酰胺。【参考范围】【参考范围】血清血清CA5020U/ml（RIA法）。法）。第21页/共69页 【临床意义】【临床意义】CA50是是胰腺胰腺和和结、直肠结、直肠癌癌的标志物，因的标志物，因CA50广泛存在胰腺、胆囊、广泛存在胰腺、胆囊、肝、胃、结直肠、膀胱、子宫，当细胞恶变肝、胃、结直肠、膀胱、子宫，当细胞恶变时，由于糖

22、基转化酶的失活或胚胎期才能活时，由于糖基转化酶的失活或胚胎期才能活跃的某些转化酶被激活，造成细胞表面糖类跃的某些转化酶被激活，造成细胞表面糖类结构性质改变而形成结构性质改变而形成CA50，因此，它又是因此，它又是一种普遍的肿瘤标志相关抗原。所以在多种一种普遍的肿瘤标志相关抗原。所以在多种恶性肿瘤中可检出不同的阳性率。恶性肿瘤中可检出不同的阳性率。第22页/共69页三、酶类抗原标志物的测定三、酶类抗原标志物的测定酶及同工酶是最早出现和使用的肿瘤标酶及同工酶是最早出现和使用的肿瘤标志物之一。在肿瘤标志酶中根据来源可将其志物之一。在肿瘤标志酶中根据来源可将其分为两类：分为两类：1.组织特异性酶：组织

23、特异性酶：因组织损伤或变化而因组织损伤或变化而使储存在细胞中的酶释放，如前列腺特异性使储存在细胞中的酶释放，如前列腺特异性抗原等；抗原等；2.非组织特异性酶非组织特异性酶：主要是肿瘤细胞代：主要是肿瘤细胞代谢加强。特别是无氧酵解增强。谢加强。特别是无氧酵解增强。第23页/共69页酶类肿瘤标志物酶类肿瘤标志物名名 称称 分子量及同工酶分子量及同工酶 相相 关关 肿肿 瘤瘤 醛缩酶醛缩酶 160ku 3个个 肝肝 碱性磷酸酶碱性磷酸酶 95ku 7个个 骨、肝、白血病、肉瘤、卵巢等骨、肝、白血病、肉瘤、卵巢等 淀粉酶淀粉酶 45ku 胰腺等胰腺等 谷胱甘肽转移酶谷胱甘肽转移酶 80ku 多种多种

24、肝、胃、结肠肝、胃、结肠 肌酸激酶肌酸激酶 83ku 4个个 前列腺、肺、结肠、卵巢等前列腺、肺、结肠、卵巢等-谷氨酰转移酶谷氨酰转移酶 90ku 12个个 肝肝 乳酸脱氢酶乳酸脱氢酶 135ku 5个个 肝、淋巴瘤、白血病肝、淋巴瘤、白血病 神经原特异性烯醇神经原特异性烯醇化酶化酶 73ku 2个个 肺（小细胞）、神经母细胞瘤、肺（小细胞）、神经母细胞瘤、类癌、黑色素瘤、嗜铬细胞瘤类癌、黑色素瘤、嗜铬细胞瘤 5-核苷酸酶核苷酸酶 6区带区带 肝肝-L岩藻糖苷酶岩藻糖苷酶 230ku 8个个 肝肝 核糖核酸酶核糖核酸酶 2个个 卵巢、肺、大肠等卵巢、肺、大肠等 第24页/共69页 在酶标志物分

25、析中，肿瘤标志同工酶可分在酶标志物分析中，肿瘤标志同工酶可分为三大类型：为三大类型：异位型同工酶：异位型同工酶：指某种瘤组织指某种瘤组织改变了自己的分泌特性，而去分泌表达了其它改变了自己的分泌特性，而去分泌表达了其它成年组织的同工酶的类型；成年组织的同工酶的类型；胚胎型同工酶：胚胎型同工酶：某些组织在肿瘤状态时，使酶的同工酶谱退化某些组织在肿瘤状态时，使酶的同工酶谱退化到胚胎时未分化状态，而分泌出大量的胚胎期到胚胎时未分化状态，而分泌出大量的胚胎期的同工酶，这种变化往往与肿瘤的恶性程度成的同工酶，这种变化往往与肿瘤的恶性程度成正比；正比；胎盘型同工酶：胎盘型同工酶：有些肿瘤组织会分泌有些肿瘤组

26、织会分泌出某些原属胎盘阶段的同工酶谱。出某些原属胎盘阶段的同工酶谱。第25页/共69页 （一）前列腺特异性抗原（一）前列腺特异性抗原（PSA）PSA是是1979由由Wang等从前列腺组织等从前列腺组织中分离出来的丝氨酸蛋白酶，分子量中分离出来的丝氨酸蛋白酶，分子量34ku，PSA仅存在于前列腺上皮组织和精液内，仅存在于前列腺上皮组织和精液内，具有糜蛋白酶样和胰蛋白酶的活性，具有糜蛋白酶样和胰蛋白酶的活性，PSA具具有高度的组织特异性。有高度的组织特异性。【参考范围】【参考范围】男性：男性：2.5g/L（RIA法、法、ElA法）。法）。第26页/共69页 【临床意义】【临床意义】PSA是是前列腺

27、癌前列腺癌的特的特异性标志物，也是目前少数器官特异性肿异性标志物，也是目前少数器官特异性肿瘤标志物之一。前列腺癌是男性泌尿系统瘤标志物之一。前列腺癌是男性泌尿系统的主要囊性肿瘤，前列腺癌患者血清的主要囊性肿瘤，前列腺癌患者血清PSA明显增高，放疗后疗效显著者，明显增高，放疗后疗效显著者，50%以上以上2个月内血清个月内血清PSA降至正常。故降至正常。故PSA测定测定可作为监测前列腺癌病情变化和疗效的重可作为监测前列腺癌病情变化和疗效的重要指标。要指标。第27页/共69页 （二）前列腺酸性磷酸酶（二）前列腺酸性磷酸酶（PAP）PAP是前列腺分泌的一种含有两条肽链是前列腺分泌的一种含有两条肽链的糖

28、蛋白酶，分子量的糖蛋白酶，分子量102ku，含糖量含糖量13%。在在pH5.0的酸性环境中活性最强，能水解各的酸性环境中活性最强，能水解各种有机磷酸酯。种有机磷酸酯。【参考范围】【参考范围】4U/L（RIA、ELISA法）法）【临床意义】【临床意义】测定测定PAP诊断前列腺癌的诊断前列腺癌的特异性比特异性比PSA高，可达高，可达96%。但灵敏度较。但灵敏度较PSA低，低，PAP和和PSA联合使用可提高诊断的联合使用可提高诊断的阳性率。阳性率。第28页/共69页 （三）神经原特异性烯醇化酶（三）神经原特异性烯醇化酶（NSE）烯醇化酶是催化糖原酵解途径的酶。由烯醇化酶是催化糖原酵解途径的酶。由3个

29、不同的亚基个不同的亚基、，组成组成5种二聚体形式的种二聚体形式的同工酶同工酶、。亚基同工酶存亚基同工酶存在于神经原和神经内分泌组织，称为在于神经原和神经内分泌组织，称为NSE。NSE的分子量为的分子量为78ku。细胞癌变时，细胞增细胞癌变时，细胞增殖周期加快，细胞内的殖周期加快，细胞内的NSE释放入血增多。释放入血增多。【参考范围】【参考范围】0.6-5.4g/L。第29页/共69页 【临床意义】【临床意义】NSE是是神经母细胞瘤神经母细胞瘤和和小细小细胞肺癌胞肺癌的标记物。的标记物。NSE作为神经母细胞瘤的标志作为神经母细胞瘤的标志物，对该病的早期诊断具有较高的临床应用价值。物，对该病的早期

30、诊断具有较高的临床应用价值。小细胞肺癌（小细胞肺癌（SCLC）是一种恶性程度高的神经是一种恶性程度高的神经内分泌系统肿瘤，约占肺癌的内分泌系统肿瘤，约占肺癌的25%30%，它可，它可表现神经内分泌细胞的特性，有过量的表现神经内分泌细胞的特性，有过量的NSE表达，表达，比其它肺癌和正常对照高比其它肺癌和正常对照高5-10倍以上。倍以上。SCLC患患者血清者血清NSE检出的阳性率可高达检出的阳性率可高达65%-100%，目，目前已公认为前已公认为NSE可作为可作为SCLC高特异性、高灵敏高特异性、高灵敏性的肿瘤标志物。性的肿瘤标志物。第30页/共69页 （四）（四）-L岩藻糖苷酶（岩藻糖苷酶（AF

31、U）AFU是存在于血清中的一种溶酶体酸性水解是存在于血清中的一种溶酶体酸性水解酶，分子量酶，分子量230ku，广泛分布于人体组织细胞、血广泛分布于人体组织细胞、血液和体液中。液和体液中。【参考范围】【参考范围】32490mol/L（化学法）。化学法）。【临床意义】【临床意义】AFU是是原发性肝癌原发性肝癌的一种新的诊的一种新的诊断标志物，广泛分布于人体组织细胞、血液和体液断标志物，广泛分布于人体组织细胞、血液和体液中，原发性肝癌患者血清中，原发性肝癌患者血清AFU活力显著高于其它各活力显著高于其它各类疾患。类疾患。第31页/共69页 目前，目前，AFU升高的机制不甚明了，可能有升高的机制不甚明

32、了，可能有以下几种原因：以下几种原因：1.肝细胞和肿瘤细胞的坏死使溶酶体大量肝细胞和肿瘤细胞的坏死使溶酶体大量释放入血；释放入血；2.正常肝细胞的变性坏死可使摄取和清除正常肝细胞的变性坏死可使摄取和清除糖苷酶的功能下降；糖苷酶的功能下降；3.肿瘤细胞合成糖苷酶的功能亢进；肿瘤细胞合成糖苷酶的功能亢进；4.肿瘤细胞可能分泌某种抑制因子，抑制肿瘤细胞可能分泌某种抑制因子，抑制肝细胞对糖苷酶的清除能力或释放某些刺激因肝细胞对糖苷酶的清除能力或释放某些刺激因子，促进肝细胞或肿瘤细胞本身合成糖苷酶。子，促进肝细胞或肿瘤细胞本身合成糖苷酶。第32页/共69页四、激素类抗原标志物的测定四、激素类抗原标志物的

33、测定当具有分泌激素功能的细胞癌变时，就当具有分泌激素功能的细胞癌变时，就会使所分泌的激素量发生异常。这称为会使所分泌的激素量发生异常。这称为正位正位激素异常激素异常。而在正常情况下不能生成激素的。而在正常情况下不能生成激素的那些细胞，转化为肿瘤细胞后所产生的激素，那些细胞，转化为肿瘤细胞后所产生的激素，或者是那些能产出激素的细胞癌变后，分泌或者是那些能产出激素的细胞癌变后，分泌出其它分泌细胞所产生的激素。出其它分泌细胞所产生的激素。称为异位激称为异位激素素。第33页/共69页激素类肿瘤标志物激素类肿瘤标志物激激 素素 性性 质质 相相 关关 肿肿 瘤瘤 儿茶酚胺类儿茶酚胺类 嗜铬细胞嗜铬细胞

34、促肾上腺皮质激素促肾上腺皮质激素 4.5ku 库欣综合征、肺（小细胞）库欣综合征、肺（小细胞）抗利尿激素抗利尿激素 肺（小细胞）、原发性类癌等肺（小细胞）、原发性类癌等 降钙素降钙素 3.5ku 甲状腺髓质甲状腺髓质 生长激素生长激素 21ku 垂体腺瘤、肾、肺垂体腺瘤、肾、肺 HGG 45ku 胚胎绒毛膜、睾丸（非精原细胞癌）胚胎绒毛膜、睾丸（非精原细胞癌）人胎盘催乳素人胎盘催乳素 22ku 滋养层、性腺、肺、乳腺滋养层、性腺、肺、乳腺 甲状旁腺素甲状旁腺素 肝、肾、乳腺、肺等肝、肾、乳腺、肺等 催乳素催乳素 22ku 垂体腺瘤、肾、肺垂体腺瘤、肾、肺 胰高糖素胰高糖素 3ku 胰高糖素瘤、

35、嗜铬细胞瘤胰高糖素瘤、嗜铬细胞瘤 第34页/共69页 （一）人绒毛膜促性腺激素（一）人绒毛膜促性腺激素（HCG）HCG是由胎盘滋养层细胞所分泌的一是由胎盘滋养层细胞所分泌的一类糖蛋白类激素类糖蛋白类激素，在正常妊娠妇女血中可，在正常妊娠妇女血中可以测出以测出HCG。HCG有有、两个亚基，两个亚基，-亚亚基的分子量约为基的分子量约为13000，-亚基的生物特亚基的生物特性与卵泡刺激素（性与卵泡刺激素（FSH）和黄体生成激素和黄体生成激素（LH）的的-亚基相同。亚基相同。-亚基的分子量约亚基的分子量约15000，-亚基为特异性链，可被单克隆亚基为特异性链，可被单克隆抗体检测，也是一个较好的标志物。

36、抗体检测，也是一个较好的标志物。第35页/共69页 （二）降钙素（二）降钙素（CT）CT是由甲状腺滤泡是由甲状腺滤泡C细胞分泌的一种细胞分泌的一种多肽激素，分子量多肽激素，分子量3.5ku。【参考范围】参考范围】100ng/L 【临床意义】临床意义】CT是是甲状腺髓样癌甲状腺髓样癌的肿的肿瘤标志物。肺癌、乳腺癌、胃肠道癌及嗜铬瘤标志物。肺癌、乳腺癌、胃肠道癌及嗜铬细胞瘤病人可因高血钙或异位分泌使血清细胞瘤病人可因高血钙或异位分泌使血清CT增高增高。第36页/共69页 （三）儿茶酚胺类及其衍生物（三）儿茶酚胺类及其衍生物儿茶酚胺类激素是由肾上腺髓质中的儿茶酚胺类激素是由肾上腺髓质中的一些交感神经

37、节纤维末梢终止髓质细胞一些交感神经节纤维末梢终止髓质细胞（又称嗜铬细胞）产生和分泌，包括肾上（又称嗜铬细胞）产生和分泌，包括肾上腺素（腺素（E）、）、去甲肾上腺素（去甲肾上腺素（NE）和多巴和多巴胺（胺（DA）等，它们既是激素又是神经递等，它们既是激素又是神经递质。质。第37页/共69页 1.变肾上腺素变肾上腺素变肾上腺素是儿茶酚变肾上腺素是儿茶酚胺的甲基化代谢产物，甲基化是在肝细胞胺的甲基化代谢产物，甲基化是在肝细胞微粒体中进行，而儿茶酚胺的形成是在肾微粒体中进行，而儿茶酚胺的形成是在肾上腺髓质的嗜铬细胞及交感神经末梢处形上腺髓质的嗜铬细胞及交感神经末梢处形成。成。【参考范围】【参考范围】0

38、.30-1.50mol/24h尿。尿。变肾上腺素浓度增高是变肾上腺素浓度增高是分泌型嗜铬细胞瘤分泌型嗜铬细胞瘤的主要标志物。的主要标志物。第38页/共69页 2.香草扁桃酸（香草扁桃酸（3-甲氧甲氧-4羟苦杏仁酸，羟苦杏仁酸，VMA）是肾上腺素和去甲肾上腺素经单胺氧是肾上腺素和去甲肾上腺素经单胺氧化酶（化酶（MAO）和儿茶酚胺和儿茶酚胺-O-甲基转移酶甲基转移酶（COMT）的作用下，甲基化和脱氨基的的作用下，甲基化和脱氨基的降解产物。降解产物。VMA主要是从尿中排出。主要是从尿中排出。【参考范围】【参考范围】成人成人5.0-35.0mol/24h 尿。尿。第39页/共69页 【临床意义】【临床

39、意义】常被认为是常被认为是神经母细胞神经母细胞瘤、神经节瘤和嗜铬细胞瘤瘤、神经节瘤和嗜铬细胞瘤的标志物。约的标志物。约有有70神经母细胞瘤患者均有神经母细胞瘤患者均有VMA增高，增高，在儿童的神经母细胞瘤患者中，在儿童的神经母细胞瘤患者中，VMA也是也是一项重要指标。一项重要指标。VMA又可作为嗜铬细胞瘤的诊断首选又可作为嗜铬细胞瘤的诊断首选标志物，但有时增高程度不稳定，宜同时标志物，但有时增高程度不稳定，宜同时测定尿中儿茶酚胺和变肾上腺素。测定尿中儿茶酚胺和变肾上腺素。第40页/共69页五、基因类标志物的测定五、基因类标志物的测定 随着分子生物学的理论和技术的发展，随着分子生物学的理论和技术

40、的发展，癌基因和抑癌基因的检测已成为肿瘤临床诊癌基因和抑癌基因的检测已成为肿瘤临床诊断新一代的标志物。断新一代的标志物。（一）癌基因类肿瘤标志物（一）癌基因类肿瘤标志物癌基因或肿瘤基因是指在自然或实验条癌基因或肿瘤基因是指在自然或实验条件下，具有潜在的诱导细胞恶性转化的基因。件下，具有潜在的诱导细胞恶性转化的基因。从目前的资料分析，引起细胞恶变功能的基从目前的资料分析，引起细胞恶变功能的基因已达因已达30余种。余种。第41页/共69页常见癌基因类肿瘤标志物常见癌基因类肿瘤标志物癌基因癌基因 细胞株或细胞株或原发肿瘤原发肿瘤 相相 关关 肿肿 瘤瘤 N-myc 细胞株细胞株 神经母细胞瘤、视网膜

41、母细胞瘤、肺癌神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、肺癌（小细胞）（小细胞）原发肿瘤原发肿瘤 神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、横纹神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤肌肉瘤 C-erb-2 原发肿瘤原发肿瘤 胃腺癌、肾腺癌、乳腺癌胃腺癌、肾腺癌、乳腺癌 N-ras 细胞株细胞株 胃腺癌胃腺癌 C-myc 细胞株细胞株 乳腺癌、胃腺癌、肺癌（巨细胞）乳腺癌、胃腺癌、肺癌（巨细胞）原发肿瘤原发肿瘤 急性粒细胞白血病、结肠腺癌急性粒细胞白血病、结肠腺癌 H-ras 细胞株细胞株 黑色瘤黑色瘤 原发肿瘤原发肿瘤 膀胱癌、皮肤鳞癌膀胱癌、皮肤鳞癌 K-ras 细胞株细胞株 结肠癌、骨肉瘤结肠癌、骨肉瘤 原发肿

42、瘤原发肿瘤 膀胱癌、胰腺癌、卵巢癌膀胱癌、胰腺癌、卵巢癌 第42页/共69页 1.ras基因家族及其表达产物基因家族及其表达产物 ras基因基因表达产物是由表达产物是由188个或个或189个氨基酸组成的个氨基酸组成的21ku蛋白质，故蛋白质，故ras基因编码产物为基因编码产物为p21ras蛋白。其本质为蛋白。其本质为G蛋白，具有蛋白，具有GTP酶活性，酶活性，可水解可水解GTP生成生成GDP。当机体发生肿瘤时，编码当机体发生肿瘤时，编码p21ras蛋白蛋白的第的第12、13及及61位氨基酸的核苷酸可以发位氨基酸的核苷酸可以发生点突变，突变型的生点突变，突变型的p21ras蛋白不具有蛋白不具有G

43、TP酶活化，无法使酶活化，无法使GTP水解为水解为GDP。另另外尚可在肿瘤中发现外尚可在肿瘤中发现p21ras蛋白表达过度。蛋白表达过度。第43页/共69页rasras基因检测的方法基因检测的方法（1）PCR-SSCP（单链构象多态性）、单链构象多态性）、DGGE（变性梯度凝胶电泳，）、变性梯度凝胶电泳，）、PCR-ASO（等位基因特异性寡核苷酸杂交，）和等位基因特异性寡核苷酸杂交，）和测序技术：探测点突变。测序技术：探测点突变。（2）免疫组织化学：用）免疫组织化学：用RAP-5单抗。单抗。（3）Southern印迹法及印迹法及Northern印迹印迹法。法。（4）ELISA法及法及Weste

44、rn印迹法。印迹法。第44页/共69页ras基因家族与肿瘤的关系肿瘤类型肿瘤类型 临临 床床 意意 义义 乳腺癌乳腺癌 c-Ha-ras基因基因mRNA水平升高与恶性肿瘤进展期中水平升高与恶性肿瘤进展期中p21ras水平相关水平相关 结直肠癌结直肠癌 50的肿瘤出现的肿瘤出现c-Ki-ras 基因点突变基因点突变 肺癌肺癌 20-30肿瘤出现肿瘤出现ras基因家族成员点突变，其中基因家族成员点突变，其中c-Ki-rad基因点突变与预后不良相关基因点突变与预后不良相关 胰腺癌胰腺癌 90左右的肿瘤出现左右的肿瘤出现c-Ki-ras基因点突变基因点突变 胃癌胃癌 在恶性肿瘤中在恶性肿瘤中p21表达

45、水平明显升高，表达水平明显升高，c-Ha-ras基因编基因编码第码第12位氨基酸突变与肿瘤转移及预后不良相关位氨基酸突变与肿瘤转移及预后不良相关 髓性白血病髓性白血病 10-50的肿瘤中出现的肿瘤中出现c-N-ras基因突变基因突变 膀胱癌膀胱癌 部分病例可出现部分病例可出现c-Ha-ras基因点突变及基因点突变及p21ras表达过度表达过度 第45页/共69页 2.myc基因家族及其表达产物基因家族及其表达产物 1997年年Duesbery等发现等发现myc癌基因癌基因与禽类与禽类MC29病毒具有相似性。病毒具有相似性。Myc基因家基因家族共有族共有6成员：成员：C-myc、N-myc、L-

46、myc、P-myc、R-myc及及B-myc。其中其中C-myc、N-myc及及L-myc与一些人类肿瘤相关。当与一些人类肿瘤相关。当机体发生肿瘤时，机体发生肿瘤时，myc基因家族成员可以基因家族成员可以发生染色体基因易位、基因扩增以及表达发生染色体基因易位、基因扩增以及表达过度。过度。第46页/共69页mycmyc基因检测的方法基因检测的方法（1）标准细胞核型分析：基因易位。）标准细胞核型分析：基因易位。（2）原位杂交：）原位杂交：ELISA法。法。（3）Southern印迹法及印迹法及Northern印迹印迹法。法。（4）RT-PCR方法。方法。第47页/共69页mycmyc基因家族成员与

47、肿瘤的关系基因家族成员与肿瘤的关系肿瘤种类肿瘤种类 临临 床床 意意 义义 神经母细胞瘤神经母细胞瘤 在在20的肿瘤中有的肿瘤中有N-myc基因扩增基因扩增 乳腺癌乳腺癌 6-57的肿瘤中可见的肿瘤中可见c-myc基因扩增。基因扩增。c-myc基因基因mRNA水平升高与预后不良相关水平升高与预后不良相关 结直肠癌结直肠癌 10-20的肿瘤中可见的肿瘤中可见c-myc基因扩增基因扩增 小细胞肺癌小细胞肺癌 30肿瘤可见肿瘤可见L-myc基因过度表达基因过度表达 宫颈癌宫颈癌 c-myc过度表达与预后不良相关过度表达与预后不良相关 第48页/共69页 （二）抑癌基因（二）抑癌基因机体中有一类对正常

48、细胞增殖起负调节作用的机体中有一类对正常细胞增殖起负调节作用的基因称为抑癌基因。当这类基因丢失、失活或变异基因称为抑癌基因。当这类基因丢失、失活或变异时，往往会促使细胞失控而呈恶性生长。时，往往会促使细胞失控而呈恶性生长。常见抑癌基因类肿瘤标志物常见抑癌基因类肿瘤标志物抑癌基因抑癌基因 染染 色色 体体 相相 关关 肿肿 瘤瘤 RB 13q14 视网膜母细胞瘤、骨肉瘤、乳腺癌、视网膜母细胞瘤、骨肉瘤、乳腺癌、肺癌肺癌 WT1 11p13 Wilms肿瘤肿瘤 NF-1 17q11.1q 神经纤维瘤神经纤维瘤 DCC 13q21.3 结肠癌结肠癌 P53 17p21-1q 肺癌、结肠癌、胃癌肺癌、

49、结肠癌、胃癌 Erb-B-2 7p 乳腺癌乳腺癌 第49页/共69页 1.1.RBRB基因及其表达产物基因及其表达产物 1986年年Friend等成功地克隆了等成功地克隆了RB基因。基因。RB基因定位于第基因定位于第13号染色体的号染色体的13q14区，共有区，共有27个个外显子，外显子，26个内含子，个内含子，DNA长度约长度约200kb。其编其编码的蛋白质产物为码的蛋白质产物为p110。当机体发生肿瘤时，当机体发生肿瘤时，RB基因的主要变化形式基因的主要变化形式有：缺失、突变、甲基化、表达失活及与病毒和有：缺失、突变、甲基化、表达失活及与病毒和细胞癌蛋白结合引起功能性失活。细胞癌蛋白结合引

50、起功能性失活。第50页/共69页RBRB基因检测的方法基因检测的方法（1）PCR-SSCP、DGGE、PCR-ASO及测序及测序技术：检测点突变。技术：检测点突变。（2）PR-PCR、PCR。（3）PCR-RFLP限制片段长度多态性。限制片段长度多态性。RBRB基因与肿瘤的关系基因与肿瘤的关系（1）RB基因突变约见于基因突变约见于40的视网膜母细胞的视网膜母细胞瘤。瘤。（2）RB基因还与成骨细胞肉瘤、软组织肉瘤、基因还与成骨细胞肉瘤、软组织肉瘤、小细胞肺癌、乳腺癌、前列腺癌、食管癌、卵巢癌小细胞肺癌、乳腺癌、前列腺癌、食管癌、卵巢癌及膀胱癌有关及膀胱癌有关 第51页/共69页2.2.p53p5