实验RNA的定量(教育精品).ppt
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1、 RNA的定量测定的定量测定 苔黑酚苔黑酚(3,5-(3,5-二二羟基甲苯基甲苯)法法 一、实验目的：1、学习RNA定量测定方法2、熟练722型分光光度计使用方法当RNA水解后产生的核糖与浓盐酸作用生成醛糖，后者再与3.5二羟基甲苯作用产生绿色化合物。此绿色化合物在670nm有最大光吸收，且光吸收值与浓度成正比。浓HCl 核糖 100 Fe3+绿色化合物绿色化合物 二、实验原理三、试剂、苔黑酚（，二羟基甲苯）溶液配成6 mg/mL的乙醇（95）溶液、三氯化铁的浓盐酸溶液0.2g 三氯化铁溶于400mL浓盐酸中、RNA标准溶液配成0.523 mg/mL的RNA溶液。四、实验步骤、标准曲线的确制作
2、012345RNA标准液/mL00.2 0.40.60.8 1蒸馏水/mL1.21.00.80.60.40.2FeCl3 浓HCl液/mL222222苔黑酚/mL0.20.20.20.20.20.2取出冷却后670nm比色测定样品管空白管12RNA样品水解液0.5mL0.5mL蒸馏水 0.7mL 0.7mL1.2mLFeCl3 浓HCl液2mL2mL2mL苔黑酚：0.2mL0.2mL0.2mLOD670nmA1A2A32、样品的测定、沸水浴加热15min、用蒸馏水定容至10mL、测定光密度值、记录每个样品的光密度值五、计算=m样=查标准曲线得RNA的质量100测定时用的样品的体积酵母样品中RNA的总质量每克酵母中含有RNA的质量m样酵母样品的质量理论上单位:mg/g六、思考本方法的原理及注意事项本方法的原理及注意事项
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