细胞因子检测.pptx

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1、 第一节第一节 细胞因子检测概述细胞因子检测概述一、细胞因子的类型与作用特点二、细胞因子检测的特点与方法第1页/共39页 由非神经内分泌细胞产生的一大类与免疫应答活动密切相关的低分子蛋白与多肽。细胞因子第2页/共39页细胞因子的类型与作用特点细胞因子的类型与作用特点1、细胞因子的分类2、细胞因子的作用特点第3页/共39页以生物学作用进行划分的分类以生物学作用进行划分的分类白细胞介素（Interleukin）IL-1、IL-2、IL-18干扰素（Interferon）IFN-、IFN-、IFN-肿瘤坏死因子（Tumor necrosis factor）TNF-、TNF-集落刺激因子（Colony

2、-stimulating factor）M-CSF、G-CSF转化生长因子（Transforming growth factor）TGF-趋化因子（Chemokine）IL-8、GROs、MCP-1生长因子（Growth factor）EGF、FGF、IGF、PDGF第4页/共39页TNFsILsIFNsTGFsChemokinesCSFs各各类类细细胞胞因因子子间间关关系系第5页/共39页1、旁分泌（paracrine）、自分泌（autocrine）性2、多源与同源性3、高效性4、多效性（pleiotropy）5、丰余性（redundancy）6、协同性7、拮抗性8、网络性第6页/共39页细

3、胞因子检测的特点与方法细胞因子检测的特点与方法1、检测的特点2、检测的方法 第14页/共39页细胞因子检测的特点细胞因子检测的特点免疫原性较弱样品含量低样品具有时效性生物效应特异性差第15页/共39页细胞因子检测的方法细胞因子检测的方法免疫学检测方法抗原性检测细胞生物学检测方法生物活性检测分子生物学检测方法基因表达检测第16页/共39页 第二节第二节 细胞因子检测的方法与原理细胞因子检测的方法与原理一、细胞因子的细胞生物学检测二、细胞因子的免疫学检测三、细胞因子的分子生物学检测第17页/共39页细胞因子的细胞生物学检测细胞因子的细胞生物学检测1、检测方法与原理2、检测中的操作注意要点 第18页

4、/共39页检测方法与原理检测方法与原理细胞增殖或增殖抑制试验细胞病变抑制试验细胞毒试验细胞趋化试验第19页/共39页滤膜：计数受趋化细胞趋化因子细胞趋化试验原理示意趋化试验原理示意第20页/共39页检测中的操作注意要点检测中的操作注意要点靶细胞的选择与培养检测标本的制备显示检测结果第21页/共39页靶细胞的选择与培养靶细胞的选择与培养1、对所测的细胞因子有特异的敏感性2、易培养、保存、生物学特性稳定3、有良好的生长状态4、种属适配第22页/共39页各类细胞因子检测的常用靶细胞各类细胞因子检测的常用靶细胞细胞因子 实验系统 干扰因素IL-1 D10（M）增殖法 IL-2、IL-4 EL-4（M）

5、增殖法 IL-4 A352（H）增殖抑制法IL-2 CTLL（M）增殖法 IL-4IL-3 KG-1（H）增殖法 TF-1（H）增殖法 GN-CSF、IL-5 IL-6、EPOIL-4 CTLL（M）增殖法 IL-2IL-5 BCL-1（M）增殖法 IL-4第23页/共39页各类细胞因子检测的常用靶细胞各类细胞因子检测的常用靶细胞细胞因子 实验系统 干扰因素IL-6 B9（M）增殖法 IL-4、IL-11 BM60（H）增殖法 IL-7 Clone-IXN/2b（M）增殖法 IL-8 中性粒细胞（M、H）趋化法GM-CSF TF-1（H）增殖法 IL-3、IL-5 IL-6、IL-5TNF/L

6、929（M、H）细胞毒法IFN wish（H）病变保护法 IFN-、IFN-L929（M）病变保护法 IFN-、IFN-第24页/共39页检测标本的准备检测标本的准备1、分离特定的产生细胞2、对产生细胞进行诱导、激活3、选择适当的收集时间第25页/共39页显示检测结果显示检测结果1、细胞增殖状态的显示：放射性核素掺入法、胞内酶活性显示法 活细胞染色法 细胞荧光测定法2、细胞毒或细胞病变状态的显示 活细胞染色法 胞内酶活性显示法 DNA断片测定法第26页/共39页细胞因子的免疫学检测细胞因子的免疫学检测分泌型细胞因子的检测细胞内细胞因子的检测第27页/共39页ELISPOT第28页/共39页细胞

7、内细胞因子检测技术细胞内细胞因子检测技术激活膜抗原标记细胞内细胞因子标记第29页/共39页细胞因子的分子生物学检测细胞因子的分子生物学检测原位杂交技术Rt-PCR技术第30页/共39页 第三节第三节 常用细胞因子的检测方法常用细胞因子的检测方法一、IL-2的检测二、IFN-的检测三、TNF的检测第31页/共39页待检样品（细胞上清）指示细胞（CTLL-2）按不同稀释度加入37C，16-20小时加入3HTdR（1-5Ci）37C，4-6小时收集细胞测定白白细细胞胞介介素素-2 2的的测测定定示示意意图图第32页/共39页待检样品（细胞上清）指示细胞（L929）按不同稀释度加入37C，4小时37C

8、，24-48小时弃取上清，加入VSV观察细胞病变（镜检或比色）干干扰扰素素的的测测定定示示意意图图第33页/共39页肿肿瘤瘤坏坏死死因因子子的的测测定定示示意意图图待检样品（细胞上清）指示细胞（L929）按不同稀释度加入37C，24小时弃取上清，洗涤加入结晶紫染液，洗涤加入细胞裂解液，比色第34页/共39页 第四节第四节 细胞因子受体的检测细胞因子受体的检测一、细胞因子受体的类型二、细胞因子受体的检测第35页/共39页 细胞因子受体的类型细胞因子受体的类型膜型细胞因子受体分泌型细胞因子受体第36页/共39页细胞因子受体的检测方法细胞因子受体的检测方法膜型细胞因子受体的检测 配体检测法 抗体检测法分泌型细胞因子受体的检测 标记抗体检测法第37页/共39页本章小结本章小结1、细胞因子的作用特点与检测特点2、细胞因子检测的原理与方法3、常用的细胞因子检测4、细胞因子受体的检测第38页/共39页感谢您的观看！第39页/共39页