医学专题一土壤中分解尿素的细菌的分离与计数.ppt

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1、课题课题(kt)(kt)(kt)(kt)2 2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数专题专题2 2微生物的培养微生物的培养(piyng)(piyng)(piyng)(piyng)与应用与应用第一页，共三十八页。一、课题一、课题(kt)(kt)(kt)(kt)背景背景1 1、尿素尿素(nio s)(nio s)(nio s)(nio s)的利的利用用 尿素尿素是一种重要的是一种重要的农业氮肥农业氮肥。尿素。尿素不能直接不能直接被农被农作物作物吸收吸收。土壤中的细菌将尿素。土壤中的细菌将尿素分解成氨分解成氨之后才能之后才能(cinng)(cinng)(cinng)(cin

2、ng)被植物利用。被植物利用。2 2、细菌利用尿素的原因、细菌利用尿素的原因 土壤中的细菌分解尿素是因为它们土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶能合成脲酶CO(NHCO(NH2 2)2 2脲酶脲酶+H+H2 2OO+CO+CO2 22NH2NH3 3第二页，共三十八页。3 3、常见、常见(chn jin)(chn jin)(chn jin)(chn jin)的分解尿素的微生物的分解尿素的微生物(异养需异养需氧型氧型)芽孢杆菌芽孢杆菌(gnjn)(gnjn)(gnjn)(gnjn)、小、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，

3、某些真菌和放线菌。某些真菌和放线菌。硝化细菌、固氮菌、根瘤菌：硝化细菌、固氮菌、根瘤菌：硝化细菌硝化细菌固氮菌固氮菌根瘤菌根瘤菌代谢方式代谢方式自养需氧型自养需氧型异养需氧型异养需氧型异养需氧型异养需氧型能量来源能量来源NH3有机物有机物豆科植物的有机物豆科植物的有机物转换过程转换过程将将NH3转变成转变成NO2-、NO3-固氮酶催化机理总反应式为：固氮酶催化机理总反应式为：N2+8e-+8H+16MgATP+16H2O2NH3+H2+16MgADP+16Pi在固氮酶的作用下，在固氮酶的作用下，根瘤中的菌体将分子根瘤中的菌体将分子态氮转化为氨态氮态氮转化为氨态氮（同左）（同左）第三页，共三十八

4、页。4 4、课题、课题(kt)(kt)(kt)(kt)目的目的从土壤中分离出能够分解尿素从土壤中分离出能够分解尿素(nio s)(nio s)(nio s)(nio s)的细菌的细菌统计统计(tngj)(tngj)(tngj)(tngj)每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌一一.研究思路研究思路.筛选菌株筛选菌株.统计菌落数目统计菌落数目.设置对照设置对照第四页，共三十八页。1 1、实例、实例(shl)(shl)(shl)(shl)：启示：启示：寻找寻找目的菌种目的菌种时要根据时要根据(gnj)(gnj)(gnj)(gnj)它对它对生存环境生存环境的的 要求

5、，到相应的环境中去寻找。要求，到相应的环境中去寻找。原因：原因：因为因为(yn wi)(yn wi)(yn wi)(yn wi)热泉温度热泉温度707080800 0C C，淘汰了绝大，淘汰了绝大多多 数微生物只有数微生物只有TaqTaq细菌被筛选出来。细菌被筛选出来。DNADNA多聚酶链式反应多聚酶链式反应是一是一种在体外将种在体外将少量少量DNADNA大量大量复制复制的技术，此项技术要的技术，此项技术要求使用求使用耐高温耐高温（93930 0C C）的的DNADNA聚合酶聚合酶。第五页，共三十八页。2、实验室中微生物的筛选、实验室中微生物的筛选(shixun)(shixun)原理：原理：人

6、为提供有利于目的菌株生长的条件人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、包括营养、温度、pH等等)，同时，同时(tngsh)(tngsh)抑抑制或阻止其他微生物生长。制或阻止其他微生物生长。第六页，共三十八页。15.0g15.0g琼脂琼脂1.0g1.0g尿素尿素10.0g10.0g葡萄糖葡萄糖0.2g0.2gMgSOMgSO447H7H2 2OO2.1g2.1gNaHNaH2 2POPO4 41.4g1.4gKHKH2 2POPO4 43 3、土壤中分解尿素的细菌土壤中分解尿素的细菌土壤中分解尿素的细菌土壤中分解尿素的细菌(xjn)(xjn)(xjn)(xjn)的分离与计数所需培养基：

7、的分离与计数所需培养基：的分离与计数所需培养基：的分离与计数所需培养基：从物理性质从物理性质(wl xngzh)(wl xngzh)(wl xngzh)(wl xngzh)看此培养基属于哪类？从功能上看此培养基属于哪类？从功能上属于哪类培养基？属于哪类培养基？固体固体(gt)(gt)(gt)(gt)培养基培养基在此培养基中哪些作为碳源、氮源？在此培养基中哪些作为碳源、氮源？碳源：碳源：葡萄糖、尿素葡萄糖、尿素氮源：氮源：尿素尿素选择培养基选择培养基唯一氮源唯一氮源第七页，共三十八页。思考思考2该培养基对微生物该培养基对微生物（具有（具有(jyu)，不具有，不具有(jyu)）选择作用。如果具有）

8、选择作用。如果具有(jyu)，其，其选择机制是选择机制是。具有具有(jyu)只有能够只有能够(nnggu)以尿素作为氮源的微生以尿素作为氮源的微生物才能在该培养基上生长物才能在该培养基上生长第八页，共三十八页。培养基的培养基的氮源为尿素氮源为尿素，只有能合成，只有能合成脲酶脲酶的微生物才能的微生物才能(cinng)(cinng)(cinng)(cinng)分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长繁殖，而受由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长繁殖，而受到抑制，所以用此到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生培

9、养基就能够选择出分解尿素的微生物物。4 4、培养基选择、培养基选择(xunz)(xunz)(xunz)(xunz)分解尿素的微生物的原理分解尿素的微生物的原理选择培养基：选择培养基：在微生物学中，将允许在微生物学中，将允许特定特定(tdng)(tdng)种类的微生物生长种类的微生物生长，同时，同时抑制或阻止其他种类抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基微生物生长的培养基。第九页，共三十八页。几种几种(j zhn)(j zhn)常见选择培养基常见选择培养基1 1、加入加入加入加入(jir)(jir)青霉素的培养基青霉素的培养基青霉素的培养基青霉素的培养基分离酵母菌、霉菌分离酵母菌、霉菌分离酵母菌、

10、霉菌分离酵母菌、霉菌(mjn)(mjn)等真菌等真菌等真菌等真菌2 2、不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基分离固氮菌分离固氮菌分离固氮菌分离固氮菌3 3、不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基分离自养型微生物分离自养型微生物分离自养型微生物分离自养型微生物4 4、加入加入加入加入高浓度食盐的培养基高浓度食盐的培养基高浓度食盐的培养基高浓度食盐的培养基分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌第十页，共三十八页。1.1.间接计数法（间接计数法（活菌计数法活

11、菌计数法）（1 1）常用）常用(chn yn)(chn yn)(chn yn)(chn yn)方法：方法：每克样品中的菌落数每克样品中的菌落数(C(CV)MV)M其中，其中，C C代表某一稀释代表某一稀释(xsh)(xsh)(xsh)(xsh)度下平板上生长的平均菌落度下平板上生长的平均菌落数，数，V V代表涂布平板时所用的稀释液的体积代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)(ml)，M M代表代表稀释倍数。稀释倍数。当样品的稀释当样品的稀释(xsh)度足够高时，培养基表度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的液中的一

12、个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。多少活菌。（2）原理：）原理：稀释涂布平板法。稀释涂布平板法。.统计菌落数目：统计菌落数目：第十一页，共三十八页。注意事项注意事项:为了保证为了保证(bozhng)(bozhng)(bozhng)(bozhng)结果准确，一般选择菌落数在结果准确，一般选择菌落数在3030300300的平板上进行计数。的平板上进行计数。为使结果接近真实值可将为使结果接近真实值可将同一稀释度涂布至少同一稀释度涂布至少3 3个平板个平板，经涂布，培养计算出菌落平均数。，经涂布，培养计算出菌落平均数。统计的菌落数往往比活

13、菌的实际数目低。统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。第十二页，共三十八页。如何如何(rh)从平板上的菌落数推测出每克从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？样品中的菌落数？统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计计3个平板，计算出平板菌落数的平均值，然个平板，计算出平板菌落数的平均值，然后按课本旁栏的公式后按课本旁栏的公式(gngsh)(gngsh)进行计算进行计算教材教材(jioci)P22第十三页，共三十八页。2 2、显微镜直接、显微镜直接(zhji)(zhji)(zhji)(zhji)计数：计数：利用利用血球计数板血球计数板，在显微镜下计算一定

14、，在显微镜下计算一定(ydng)(ydng)(ydng)(ydng)容积容积里样品中微生物的数量。里样品中微生物的数量。.统计统计(tngj)(tngj)菌落数目：菌落数目：不能区分死菌与活菌；不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌的计数；不适于对运动细菌的计数；需要相对高的细菌浓度；需要相对高的细菌浓度；个体小的细菌在显微镜下难以观察；个体小的细菌在显微镜下难以观察；缺点缺点第十四页，共三十八页。实例实例(shl)分析分析P22你认为哪个你认为哪个(nge)同学的结果更接近真实同学的结果更接近真实值？值？你认为这两位同学的实验需要改进你认为这两位同学的实验需要改进吗？如果需要，如何改进？吗？如

15、果需要，如何改进？第十五页，共三十八页。实例实例(shl)分析分析P22第一同学只涂布了一个平板，第一同学只涂布了一个平板，没有设置没有设置重复组，因此结果重复组，因此结果(jigu)不具有说服力。不具有说服力。第二位同学考虑到设置重复组的问题，第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了三个平板，但是涂布了三个平板，但是其中其中1个平板的计个平板的计数结果与数结果与2个相差太远，说明在操作过程个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地中可能出现了错误，因此，不能简单地将将3个平板的计数值用来求平均值个平板的计数值用来求平均值。第十六页，共三十八页。设置对照的主要目的设置对照的主

16、要目的(md)(md)(md)(md)是排除实验组是排除实验组中非测试中非测试因素因素对实验结果的影响，提高实验结果的对实验结果的影响，提高实验结果的可信度可信度。（三）（三）.设置设置(shzh)(shzh)对照：对照：实例实例(shl)(shl)(shl)(shl)：教材：教材P23P23 原因：原因：土样不同土样不同 培培养养基基污污染染或或操操作作失失误误(或或者者是是混混入入了了其其他他的含氮物质的含氮物质)第十七页，共三十八页。小结：通过这个事例可以小结：通过这个事例可以(ky)(ky)看出，实验结果要看出，实验结果要有说服力，有说服力，对照的设置是必不可少的对照的设置是必不可少的

17、。方案一：由其他同学用与方案一：由其他同学用与A同学相同同学相同(xintn)(xintn)土样进行土样进行实验实验方案二：将方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明下进行培养，作为空白对照，以证明(zhngmng)(zhngmng)培养基培养基是否受到污染。是否受到污染。结果预测：如果结果与结果预测：如果结果与A同学一致，则证明同学一致，则证明A无误；如无误；如果结果不同，则证明果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基同学存在操作失误或培养基的配制有问题。的配制有问题。第十八页，共三十八页。菌落计数菌落计数配制土壤配制土

18、壤溶液溶液系列稀释系列稀释涂布平板涂布平板与培养与培养根据图示根据图示27填写以下实验填写以下实验(shyn)流程：流程：实验设计：实验设计：第十九页，共三十八页。实验的具体操作实验的具体操作 .土壤取样（微生物的天然培养基）土壤取样（微生物的天然培养基）从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm3cm左右，再取样（左右，再取样（3-8cm3-8cm），将样品装入事先准备），将样品装入事先准备(zhnbi)(zhnbi)好的信封中。好的信封中。取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。要灭菌。.制备培养基

19、：制备培养基：制备以制备以尿素为唯一氮源尿素为唯一氮源的选择培养基。的选择培养基。第二十页，共三十八页。准备准备牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基和和选择培养基选择培养基将菌液稀将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，因此，目应明显多于选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白牛肉膏蛋白牛肉膏蛋白牛肉膏蛋白胨培养基胨培养基胨培养基胨培养基可以作为可以作为对照对照对照对照，用来判断选择培养基是否起到用来判断选择培养基是否起到用来判断选择培养基是否起到用来判断选择培养基是否起到了选择作用了选择作用了选择作用

20、了选择作用。由于初次实验，对于稀释的范围没有。由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了一个较为宽泛的范围：稀释倍数把握，因此选择了一个较为宽泛的范围：稀释倍数为为10103 310107 7。每个稀释度下需要。每个稀释度下需要3 3个个选择培养基，选择培养基，1 1个个牛肉膏蛋白胨培养基，因此共需要牛肉膏蛋白胨培养基，因此共需要1515个选择培养基，个选择培养基，5 5个牛肉膏蛋白胨培养基。此外，还需要准备个牛肉膏蛋白胨培养基。此外，还需要准备8 8个个灭菌灭菌(mi jn)(mi jn)的试管和的试管和1 1个个灭菌的移液管。灭菌的移液管。第二十一页，共三十八页。应在火焰旁称取土壤应

21、在火焰旁称取土壤应在火焰旁称取土壤应在火焰旁称取土壤(trng)(trng)(trng)(trng)10g10g10g10g。在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行分离不同的微生物采用不同的稀释度分离不同的微生物采用不同的稀释度原因：原因：不同微生物在土壤中含量不同不同微生物在土壤中含量不同目的目的(md)(md)(md)(md)：保证获得菌落数在保证获得菌落数在3030300300之间、适于计之间、适于计数的平板数的平板 三三 样品样品(yngp(

22、yngp(yngp(yngpn)n)n)n)的稀释的稀释第二十二页，共三十八页。为为什什么么分分离离不不同同的的微微生生物物要要采采用用不不同同的的稀稀释释度度？测测定定土土壤壤中中细细菌菌的的总总量量和和测测定定土土壤壤中中能能分分解解尿尿素素的的细细菌菌的的数量数量(shling)(shling)(shling)(shling)，选用的稀释范围相同吗？，选用的稀释范围相同吗？原原因因：土土壤壤中中各各类类微微生生物物的的数数量量（单单位位：株株/kg/kg）是是不不同同的的。例例如如在在干干旱旱土土壤壤中中的的上上层层(shngcng)(shngcng)(shngcng)(shngcng)

23、样样本本中中：好好氧氧及及兼兼性性厌厌氧氧细细菌菌数数约约为为2 2 185185万万，放放线线菌菌数数约约为为477477万，霉菌数约为万，霉菌数约为23.123.1万。万。结结论论：为为获获得得不不同同类类型型的的微微生生物物，就就需需要要按按不不同同的的稀稀释释度度进进行行分分离离，同同时时还还应应当当有有针针对对性性地地提提供供选选择择培养的条件。培养的条件。第二十三页，共三十八页。.取样取样(q(q(q(qyng)yng)yng)yng)涂布涂布实验时要实验时要对对培养皿作好培养皿作好标记标记。注明培。注明培养基类型养基类型(lixng)(lixng)、培养、培养时间、稀释时间、稀释

24、度、培养物度、培养物等。等。如果得到了如果得到了如果得到了如果得到了2 2 2 2个或个或个或个或2 2 2 2个以上个以上个以上个以上(yshng)(yshng)(yshng)(yshng)菌落数目在菌落数目在菌落数目在菌落数目在30300303003030030300的的的的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果同一稀释倍数的三个重复的如果同一稀释倍数的三个重复的如果同一稀释倍数的三个重复的如果同一稀释倍数的三个重复的

25、菌落数相差较大，表明实验不菌落数相差较大，表明实验不菌落数相差较大，表明实验不菌落数相差较大，表明实验不精确，需要重新实验精确，需要重新实验精确，需要重新实验精确，需要重新实验。第二十四页，共三十八页。.微生物的培养微生物的培养(piy(piy(piy(piyng)ng)ng)ng)与观察与观察 在菌落计数时，在菌落计数时，每隔每隔24h24h统计一次菌落数目统计一次菌落数目(shm)(shm)(shm)(shm)。选取选取菌落数目稳定时菌落数目稳定时的记录作为结果的记录作为结果，以防止，以防止 因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。培养培养(piyng)(p

26、iyng)(piyng)(piyng)不同微生物往往需要不同培养不同微生物往往需要不同培养(piyng)(piyng)(piyng)(piyng)温温度。度。细菌：细菌：30303737培养培养1 12d2d 放线菌：放线菌：25252828培养培养5 57d7d 霉菌：霉菌：25252828的温度下培养的温度下培养3 34d4d。第二十五页，共三十八页。当菌落数目稳定时，选取菌落数在当菌落数目稳定时，选取菌落数在3030300300的平板进行计数的平板进行计数(j sh)(j sh)。在同一稀释度下，。在同一稀释度下，至少对至少对3 3个平板进行重复计数，然后求出平均个平板进行重复计数，然后

27、求出平均值值，并根据平板所对应的稀释度计算出样品，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。中细菌的数目。第二十六页，共三十八页。微生物的培养微生物的培养(piy(piy(piy(piyng)ng)ng)ng)与观察与观察第二十七页，共三十八页。（六）鉴定（六）鉴定：筛选后必鉴定：筛选后必鉴定 鉴别培养基鉴别培养基：加入某种指示剂或化学加入某种指示剂或化学药品，不影响微生物的生存药品，不影响微生物的生存酚红培养基：酚红培养基：鉴定分解尿素的细菌。鉴定分解尿素的细菌。原理：脲酶催化原理：脲酶催化(cu hu)(cu hu)尿素分解成氨尿素分解成氨培养基碱性增强培养基碱性增强 酚红变红酚红变

28、红脲酶阳脲酶阳性性第二十八页，共三十八页。三、操作三、操作(cozu)(cozu)提示提示 无菌操作无菌操作(cozu)(cozu)做好标记做好标记(bioj)(bioj)制定计划制定计划 第二十九页，共三十八页。课题成果课题成果(chnggu)与评价与评价 （一）培养（一）培养(piyng)(piyng)物中是否有杂菌污染物中是否有杂菌污染以及选择培养以及选择培养(piyng)(piyng)基是否筛选出菌落基是否筛选出菌落 对照的培养对照的培养对照的培养对照的培养(piyng)(piyng)皿在培养皿在培养皿在培养皿在培养(piyng)(piyng)过程中没有过程中没有过程中没有过程中没有菌

29、落生长菌落生长菌落生长菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染。，说明培养基没有被杂菌污染。牛肉膏培牛肉膏培牛肉膏培牛肉膏培养基的菌落数目明显大于选择培养基的数目养基的菌落数目明显大于选择培养基的数目养基的菌落数目明显大于选择培养基的数目养基的菌落数目明显大于选择培养基的数目，说明，说明选择培养基已筛选出一些菌落。选择培养基已筛选出一些菌落。第三十页，共三十八页。如果学生选取的是同一种土样，统计的结果应该如果学生选取的是同一种土样，统计的结果应该接近。如果结果相差太远，需要接近。如果结果相差太远，需要(xyo)(xyo)进一步分析产生进一步分析产生差异的原因。差异的原因。（二）样品的稀释操作（二）样

30、品的稀释操作(cozu)是否成功是否成功 如果得到了如果得到了2 2个或个或2 2个以上菌落数目在个以上菌落数目在3030300300的的平板，则说明稀释操作比较成功平板，则说明稀释操作比较成功(chnggng)(chnggng)，并能够进行，并能够进行菌落的计数。菌落的计数。（三）重复组的结果是否一致（三）重复组的结果是否一致第三十一页，共三十八页。1.水中大肠杆菌数目的检测（水中大肠杆菌数目的检测（P26）伊红美蓝培养基伊红美蓝培养基2.空气中微生物总数的检测空气中微生物总数的检测3.牛奶中细菌的分离牛奶中细菌的分离(fnl)(fnl)与计数与计数4.土壤中真菌（或放线菌）的分离与计数土壤

31、中真菌（或放线菌）的分离与计数相关相关(xinggun)(xinggun)连连接：接：第三十二页，共三十八页。相关相关(xinggun)(xinggun)连连接：接：空气中微生物总数空气中微生物总数空气中微生物总数空气中微生物总数(zngsh)(zngsh)的检测的检测的检测的检测第三十三页，共三十八页。本课题本课题(kt)(kt)(kt)(kt)知识小结知识小结:第三十四页，共三十八页。1.1.对细菌群体生长规律测定的正确的表述是（对细菌群体生长规律测定的正确的表述是（）A.A.在液体培养基上进行在液体培养基上进行 B.B.至少接种一种细菌至少接种一种细菌 C.C.接种一个细菌接种一个细菌

32、D.D.及时补充消耗的营养物质及时补充消耗的营养物质 2.2.使用选择培养基的目的是（使用选择培养基的目的是（）A.A.培养细菌培养细菌 B.B.培养真菌培养真菌 C.C.使需要的微生物大量繁殖使需要的微生物大量繁殖 D.D.表现某微生物的特定性状与其他表现某微生物的特定性状与其他(qt)(qt)微生物加以区别微生物加以区别3.3.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是()()A.CO A.CO2 2和和N N2 2 B.B.葡萄糖和葡萄糖和NHNH3 3 C.COC.CO2 2和尿素和尿素 D.D.葡萄糖和尿素葡萄糖和尿素实践实践(shjin)(

33、shjin)训练训练A A C CD D第三十五页，共三十八页。4.4.下列说法不正确的是（下列说法不正确的是（）A.A.科学家从科学家从70708080度热泉中分离到耐高温的度热泉中分离到耐高温的TaqDNATaqDNA聚合酶聚合酶 B.B.统计某一稀释度的统计某一稀释度的5 5个平板的菌落数依次为个平板的菌落数依次为M1M1、M2M2、M3M3、M4M4、M5M5，以，以M3M3作为该样品菌落数的估计值作为该样品菌落数的估计值 C.C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度实验结果的影响，提高实验

34、结果的可信度 D.D.同其他生物环境相比同其他生物环境相比(xin b)(xin b)，土壤中的微生物数量最大，种，土壤中的微生物数量最大，种类最多。类最多。5.5.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中加入为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中加入（）（）A.A.较多的氮源物质较多的氮源物质 B.B.较多的碳源物质较多的碳源物质 C.C.青霉素类药物青霉素类药物 D.D.高浓度食盐高浓度食盐B BC C第三十六页，共三十八页。（09，宁夏，宁夏，15分）分）（1）在大肠杆菌培养过程中，除考虑）在大肠杆菌培养过程中，除考虑(kol)营养条件外，还要考虑营养条件外，还要考虑(kol)

35、_、_和和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、_、_等优等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。点，因此常作为遗传学研究的实验材料。（2）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行_（消毒、灭菌）；操作者的双手需要进行清洗和（消毒、灭菌）；操作者的双手需要进行清洗和_；静止空气中的；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能_。（3）若用稀释涂

36、布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的_。（4）通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步）通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的的_。（5）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是采用的检测方法是_。（6）若用大肠杆菌进行实验，使用

37、过的培养基及其培养物必须经过）若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过_处理后处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。才能丢弃，以防止培养物的扩散。答案答案:（1）温度）温度 酸碱度酸碱度 易培养易培养 生活周期短生活周期短 （2）灭菌）灭菌 消毒消毒 损伤损伤(snshng)DNA的结构的结构 （3）比例合适）比例合适 （4）鉴定）鉴定(或分类或分类)（5）将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时）将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间间,观察培养基上是否有菌落产生观察培养基上是否有菌落产生.（6）灭菌）灭菌第三十七页，共三十八页。内容(nirng)总结课题2。将NH3转变成NO2-、NO3-。固氮酶催化机理总反应式为：N2+8e-+8H+16MgATP+16H2O2NH3+H2+16MgADP+16Pi。DNA多聚酶链式反应是一种在体外将少量DNA大量复制的技术，此项技术要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。为了保证结果准确，一般选择(xunz)菌落数在30300的平板上进行计数。（六）鉴定：筛选后必鉴定第三十八页，共三十八页。