医学专题—缺血修饰白蛋白测21665.ppt
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1、缺血修饰缺血修饰(xish)(xish)白蛋白测定白蛋白测定试剂的基本知识试剂的基本知识第一页,共四十一页。必须必须(bx)(bx)理解的基础知识理解的基础知识n n缺血修饰(xish)(xish)白蛋白测定试剂盒组成及使用;n n什么是缺血修饰白蛋白;n n什么是白蛋白-钴结合试验;n n白蛋白-钴结合试验与缺血修饰白蛋白的内在联系;n n缺血修饰白蛋白与心肌缺血的内在联系以及心肌缺血与急性冠状动脉综合征的相互关系;第二页,共四十一页。缺血修饰缺血修饰(xish)(xish)白蛋白测定试剂盒白蛋白测定试剂盒n n缺血修饰白蛋白测定试剂是用于急性心肌缺血辅助诊断的体外诊断试剂,能够在各种全自动
2、、半自动生化分析仪上使用(sh(sh yng)yng),为液体双试剂,由长沙颐康科技开发有限公司生产;n n缺血修饰白蛋白的英文:缺血修饰白蛋白的英文:Ischemia Modifierd Albumin,Ischemia Modifierd Albumin,简简称称IMAIMA;n n液体双试剂的组成:液体双试剂的组成:R1 R1:Co2+Co2+、缓冲液、稳定剂等、缓冲液、稳定剂等 R2:DTT、缓冲液、稳定剂等第三页,共四十一页。缺血修饰缺血修饰(xish)(xish)白蛋白(白蛋白(IMA)的概念)的概念n n血清白蛋白(HSA)氨基末端序列为人类所特有,是过渡金属包括铜、钴和镍离子(
3、lz(lz)主要的结合位点,组织缺血时释放的产物使循环血液中的部分HSA 氨基末端结合位点改变,与金属离子(lz(lz)结合能力 下降,这部分发生了改变的HSA 就称为 IMA。IMA 在血液中浓度升高就提示发生了组织缺血。第四页,共四十一页。缺血修饰缺血修饰(xish)(xish)白蛋白(白蛋白(IMA)的形成机制)的形成机制n n冠状动脉缺血时IMA 产生的确切机制尚不清楚,各种观点尚有矛盾,但已定位在HSA 氨基末端N-天门冬氨酸(A sp)-丙氨酸(A la)-组氨酸(H is)-赖氨酸(L ys)序列的变化上。n n当冠脉局部血液和氧供减少当冠脉局部血液和氧供减少,组织细胞进行无氧代
4、谢组织细胞进行无氧代谢,代代谢产物乳酸堆积谢产物乳酸堆积,导致酸中毒导致酸中毒,局部微环境局部微环境pH pH 值下降值下降,致致使使Cu2+Cu2+从循环蛋白的结合位点释放从循环蛋白的结合位点释放(shfng)(shfng),在还原剂作用在还原剂作用下转化为下转化为Cu1+,Cu1+Cu1+,Cu1+与氧反应生成超氧自由基与氧反应生成超氧自由基,后者岐后者岐化为过氧化氢化为过氧化氢(H2O 2)(H2O 2)和氧。和氧。H2O 2 H2O 2 可通过可通过Fenton Fenton 反应形反应形成羟自由基成羟自由基,羟自由基损害羟自由基损害HSA,HSA,使使N N 基末段序列的基末段序列的
5、2 2 4 4 个氨基酸发生个氨基酸发生N N 乙酰化或缺失乙酰化或缺失,转化为转化为IMA IMA。第五页,共四十一页。IMA 的检测(ji(ji n c)n c)方法n nIMAIMA测定方法:比色测定法测定方法:比色测定法IMA IMA 检测是以心肌缺血可引起检测是以心肌缺血可引起HSA HSA 的的N N 末端发生变化及其与末端发生变化及其与Co(LL)Co(LL)结合迅速减少为前提结合迅速减少为前提,采用白蛋白采用白蛋白-钴结合实验测定白蛋白与外源性钴结合实验测定白蛋白与外源性Co(LL)Co(LL)结合的能结合的能力间接测定力间接测定IMA IMA 含量,所以叫白蛋白结合钴试验(含
6、量,所以叫白蛋白结合钴试验(ACBACB试验),试验),n nACBACB试验已通过了美国国家药品和食品管理局认证,这是试验已通过了美国国家药品和食品管理局认证,这是FDAFDA自自19941994年批准肌钙蛋白的测定试验之后,首次批准的一个用来年批准肌钙蛋白的测定试验之后,首次批准的一个用来评价心肌缺血的生化试验项目评价心肌缺血的生化试验项目 。n n试剂盒全世界目前有两个生产厂家:试剂盒全世界目前有两个生产厂家:美国局部缺血技术公司(美国局部缺血技术公司(IschemiaTechnoiogies,Denver IschemiaTechnoiogies,Denver,Colorado,USA
7、,Colorado,USA)长沙长沙(chn(chn sh)sh)颐康科技有限公司颐康科技有限公司第六页,共四十一页。IMA 的检测(ji(ji n c)n c)原理 正常白蛋白以活性形式存在,加入钴试剂后,Co2+与白蛋白N-末端结合,溶液中存在的游离Co2+浓度较低;而心肌缺血患者血清标本中含有较多的IMA,加入同等量的钴试剂后,由于IMA 与Co2+的结合能力降低,溶液中存在较高浓度的游离Co2+,加入二巯基苏糖醇(DTT)试剂后可与游离试剂后可与游离Co2+Co2+产生络合反应产生络合反应,生成生成红褐色产物,在红褐色产物,在470nm 470nm 处测定处测定(cdng)(cdng)
8、吸光度大小吸光度大小,其吸光度其吸光度与与Co2+Co2+浓度成正比,吸光度高者表示血清中存在较多的浓度成正比,吸光度高者表示血清中存在较多的IMAIMA。与标准品进行比较,即可计算出样本中。与标准品进行比较,即可计算出样本中ACBACB的值。的值。第七页,共四十一页。IMAIMA检测标本检测标本检测标本检测标本(biobn)(biobn)采集与处理采集与处理采集与处理采集与处理 受检者的准备:受检者的准备:病人空腹病人空腹12h12h,不饮酒,不饮酒24 h24 h后采集血样后采集血样;如果病人服用抗凝血药物,血液在如果病人服用抗凝血药物,血液在3030分分钟内不能凝固,结果解释应慎重。血清
9、应通过物理方法尽快与血细胞分离。推荐时间最长不要超钟内不能凝固,结果解释应慎重。血清应通过物理方法尽快与血细胞分离。推荐时间最长不要超过过2 2小时小时;静脉采血静脉采血:除非是卧床的病人,一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布,除非是卧床的病人,一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布,会影响测试项目的浓度。在采血前至少应静坐会影响测试项目的浓度。在采血前至少应静坐5 5分钟,一般从肘静脉取血,使用止血带的时分钟,一般从肘静脉取血,使用止血带的时间不超过间不超过1 1分钟,穿刺分钟,穿刺(chunc)(chunc)成功后立即松开止血带。成功后立即松开止血带。标本处理标本处理
10、 :血样采集后,应在室温下凝集后离心分离血清,血清样本应不溶血。测:血样采集后,应在室温下凝集后离心分离血清,血清样本应不溶血。测试必须在血液提取后试必须在血液提取后2.52.5小时内完成;如果测试不能在小时内完成;如果测试不能在2.52.5小时内完成,必须立即在小时内完成,必须立即在-20-20或更低温度下冷冻血清(分离凝块和红细胞),从血液提取到冷冻的时间应或更低温度下冷冻血清(分离凝块和红细胞),从血液提取到冷冻的时间应在在1 1小时以内;解冻冻结的样品需在小时以内;解冻冻结的样品需在2 28 8或室温下进行,通过低速涡流混匀器或或室温下进行,通过低速涡流混匀器或轻轻颠倒充分混合,测试必
11、须在样品解冻后轻轻颠倒充分混合,测试必须在样品解冻后1.51.5小时内获得,不得含有小时内获得,不得含有EDTAEDTA、枸、枸橼酸钠等鳌合剂的抗凝剂橼酸钠等鳌合剂的抗凝剂第八页,共四十一页。试剂试剂(shj)(shj)与校准血清的稳定性与校准血清的稳定性 n n原包装原包装(bozhung)(bozhung)试剂储存在试剂储存在2 28 8至标签所示失效日期。至标签所示失效日期。试剂开瓶后,在仪器中至少可保存试剂开瓶后,在仪器中至少可保存3030天。天。n n试剂储存在试剂储存在18182222稳定稳定2828天,试剂应避免污染。试剂颜天,试剂应避免污染。试剂颜色为澄清透明液体,当试剂出现沉
12、淀或絮状物时,按照色为澄清透明液体,当试剂出现沉淀或絮状物时,按照试剂失效处理。试剂失效处理。n n校准血清在28储存至标签所示失效日期,复溶后-20保存,可稳定一个月,只可冻融一次,避免反复冻融。第九页,共四十一页。IMA的特性(txng)(txng)及应用 心血管疾病是威胁人类健康与生命(shngmng)(shngmng)的头号杀手,它具有高发病率、高致残率、高死亡率及较高的治疗费用等特点。最近的流行病学资料显示,我国现有高血压患者达1.6亿,高血脂人数达1.6亿,约有400万心力衰竭病人,平均每12秒就有一人死于心血管疾病,心血管疾病已逐渐成为我国城乡居民的第一位死因。第十页,共四十一页
13、。知识知识(zh shi)(zh shi)的逻辑联系的逻辑联系 心血管疾病心血管疾病是威胁人类健康与生命的头号杀手,它具有高发病率、高致残率、是威胁人类健康与生命的头号杀手,它具有高发病率、高致残率、高死亡率及较高的治疗费用等特点,心血管疾病已逐渐成为我国城乡居民的高死亡率及较高的治疗费用等特点,心血管疾病已逐渐成为我国城乡居民的第一位死因;第一位死因;ACSACS是包括不稳定心绞痛(是包括不稳定心绞痛(UAUA)、非)、非STST段升高的心肌梗死(段升高的心肌梗死(NSTEMINSTEMI)和)和STST段升高段升高的心肌梗死(的心肌梗死(STEMISTEMI)等一组)等一组连续进展连续进展
14、的病症的病症(bngzhng)(bngzhng),连续进展的特点连续进展的特点是从是从心肌缺血到心肌损伤的发展,从可逆性改变向非可逆性改变的发展;心肌缺血到心肌损伤的发展,从可逆性改变向非可逆性改变的发展;心肌缺血心肌缺血是是ACSACS最常见的发病原因;最常见的发病原因;心肌缺血的早期诊断和干预心肌缺血的早期诊断和干预能够及时阻断能够及时阻断ACSACS的发展进程,对于降低的发展进程,对于降低AMIAMI的发病的发病率、致残率、死亡率具有重要的意义;率、致残率、死亡率具有重要的意义;IMAIMA是心肌缺血的早期标志物;是心肌缺血的早期标志物;IMAIMA检测试剂检测试剂是检测血清是检测血清I
15、MAIMA含量的检测试剂。含量的检测试剂。第十一页,共四十一页。急性急性(jxng)(jxng)冠状动肪综合征(冠状动肪综合征(Acute coronary syndromes,ACS)n nACS是指动肪粥样硬化斑点脱落、血小板聚集、血栓形成,致使冠状动肪狭窄、阻塞,引起心肌缺血和梗死的病理现象。从临床角度(ji(ji od)od)来看,它涵盖了一组连续进展的病症,包括不稳定心绞痛(UA),非ST段升高的心肌梗死(NSTEMI)和ST段升高的心肌梗死(STEMI)。心肌缺血是ACS最常见的发病原因。第十二页,共四十一页。急性急性急性急性(jxng)(jxng)冠状动脉综合征冠状动脉综合征冠状
16、动脉综合征冠状动脉综合征(Acute coronary(Acute coronary syndromes,ACS)syndromes,ACS)ACSACS诊断诊断(zhndun)(zhndun)通常是很困难的。在急诊有超过通常是很困难的。在急诊有超过50%50%的的以胸痛就诊的病人未收治入院是因为未能诊断以胸痛就诊的病人未收治入院是因为未能诊断(zhndun)(zhndun)为为ACSACS,致使延误治疗发展至心肌梗死。确诊为,致使延误治疗发展至心肌梗死。确诊为ACSACS的病的病人经早期治疗可以阻止心肌损害的进程。所以尽早明确人经早期治疗可以阻止心肌损害的进程。所以尽早明确诊断诊断(zhnd
17、un)(zhndun)和开始治疗对于患有和开始治疗对于患有ACSACS的病人是至关重要的病人是至关重要的。的。第十三页,共四十一页。ACS诊断诊断(zhndun)(zhndun)n n根据病史、症状(zhngzhung)(zhngzhung)、体格检查、心电图、心肌标志物诊断患者是否ACS、有无心肌坏死或死亡的危险性,其中心电图和心肌损伤标志物已经被广泛使用。n n目前临床应用的心脏标志物大致可分为三类:一类是主要反映心脏组织损伤的标志物;第二类是了解心脏功能的标志物;第三类是作为心血管炎症疾病的标志物。第十四页,共四十一页。传统方法传统方法(fngf(fngf)检测心肌缺血的局限性检测心肌缺
18、血的局限性n n心电图常首先用来评估(pn(pn )以胸部不适就诊的病人,但心梗的病人也可多表现为心电图未见异常,其灵敏度低于50%;第十六页,共四十一页。传统传统(chunt(chunt ng)ng)方法检测心肌缺血的局限性方法检测心肌缺血的局限性n n心肌(xnj)(xnj)肌钙蛋白I(cTnI)或T(cTnT)具有高特异性,但其在心脏损伤发生612小时之后才能从血中检测出,且对心肌(xnj)(xnj)细胞损伤的特异性高,对可逆的心肌(xnj)(xnj)缺血多为阴性 第十七页,共四十一页。肌钙蛋白肌钙蛋白三种亚型:Trop I (Tn I)、Trop T(Tn T)、Trop C(Tn C
19、)Trop I 只特异心肌表达,不在骨骼肌表达发病(f bng)(f bng)后12h达高峰持续持续710710天恢复正常,此阶段不用来检测再梗塞天恢复正常,此阶段不用来检测再梗塞血浆血浆 Tn I Tn I 或或 Tn T Tn T 升高可诊断升高可诊断AMIAMI肌钙蛋白轻度增高可见:肌钙蛋白轻度增高可见:UAUA,CADCAD和肾衰和肾衰第十八页,共四十一页。传统传统(chunt(chunt ng)ng)方法检测心肌缺血的局限性方法检测心肌缺血的局限性n n当心脏受到损伤时,肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌红蛋白(Myoglobin)从心肌细胞释放入血,但这些(zhxi
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