微生物实验培养检测保存.ppt

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1、 霉霉菌菌实实验验相相关关知知识识霉菌的实验材料霉菌的实验材料谭跃2012 9.20 霉霉菌菌实实验验相相关关知知识识（1）培养基制备的一般程序 e.加棉塞，包装。霉霉菌菌实实验验相相关关知知识识鉴定是否有菌可将培养基置于鉴定是否有菌可将培养基置于37 培养培养24小时，然后观察小时，然后观察注意因高压之后因高压之后pH值会下降值会下降0.1左右，所以矫正左右，所以矫正pH时应比所需的时应比所需的pH高高 霉霉菌菌实实验验相相关关知知识识实验室常用培养基肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl5g，琼脂15-20g，水1000ml，pH7.0-7.2；淀粉琼脂培养基（高氏1号培养基

2、）：可溶性淀粉20g，KNO31g，NaCl0.5g，K2HPO40.5g，FeSO40.01g，琼脂20g，水1000ml，pH7.0-7.2;PDA培养基：马铃薯（去皮）200g，蔗糖或葡萄糖15g，琼脂15-20g，水1000ml;霉霉菌菌实实验验相相关关知知识识实验原理二二 消毒、灭菌及倒平板消毒、灭菌及倒平板 霉霉菌菌实实验验相相关关知知识识 霉霉菌菌实实验验相相关关知知识识步骤步骤 霉霉菌菌实实验验相相关关知知识识 霉霉菌菌实实验验相相关关知知识识半固体培养基：穿刺接种液体培养基接种普通琼脂培养基：涂布平板，平板划线接种，斜面划线接种浅盘固体接种（2）接种）接种 霉霉菌菌实实验验相

3、相关关知知识识划线分离划线分离 霉霉菌菌实实验验相相关关知知识识 霉霉菌菌实实验验相相关关知知识识 霉霉菌菌实实验验相相关关知知识识划线接种注意要点划线时接种环与平皿约成30-40度角,轻轻接触,以腕力在琼脂表面轻快滑动,不能划破琼脂.第一次划线应占平皿面积的1/10,以后每次划线约占面积的1/41/5.划线为连续划线,不能间断.应占满平皿.划线不能交叉重复.每次划完后接种环应灭菌.霉霉菌菌实实验验相相关关知知识识稀稀释释分分离离涂涂布布平平板板 霉霉菌菌实实验验相相关关知知识识稀稀释释分分离离倾倾注注平平板板 霉霉菌菌实实验验相相关关知知识识真菌分离真菌分离、纯化、纯化利用低碳氮比的培养基可

4、使真菌生长菌落分散，利于计数，分离和鉴定。这里主要是利用营养成分的减少而使生长减慢，并由此限制真菌的迁涉生长。一般采用PDA培养基改变培养温度将有利于不同嗜温区真菌的分离。有时，真菌子实体形成必须有光线，这在分离培养时应加以考虑。将分离得到的单菌落分别接种到单个平板上 霉霉菌菌实实验验相相关关知知识识t 颜色反应：分离特定的菌株；t 牛奶平板：分离蛋白酶产生菌；待分离的微生物的生长特征明显不同 霉霉菌菌实实验验相相关关知知识识 霉霉菌菌实实验验相相关关知知识识菌落观察菌落观察霉菌霉菌放线菌放线菌要求：要求：每种微生物选择典型菌落1-2个，列表描述细菌、霉菌、酵母、放线菌的菌落形态特征 霉霉菌菌

5、实实验验相相关关知知识识不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定的特征（形状、颜色等），可以成为对该微生物进行分类、鉴定的重要依据。霉霉菌菌实实验验相相关关知知识识 霉霉菌菌实实验验相相关关知知识识（4）菌种保藏最常见的保藏方法：斜面细菌的保藏：甘油保藏真菌的保藏：石蜡油保藏、孢子保藏 霉霉菌菌实实验验相相关关知知识识几种常用菌种保藏方法的比较 霉霉菌菌实实验验相相关关知知识识1比浊计数法比浊计数法浊浊细菌悬浮液的浊度细菌悬浮液的浊度n n细细细细菌菌菌菌不不不不完完完完全全全全透透透透光光光光，一一一一定定定定范范范范围围围围内内内内菌菌菌菌溶溶溶溶液液液液的的的的混混混混

6、浊浊浊浊度与菌数量成度与菌数量成度与菌数量成度与菌数量成正比正比（一）实验原理（一）实验原理 霉霉菌菌实实验验相相关关知知识识2.2.酵母的血球计数板计数酵母的血球计数板计数0.050.052 2cmcm2 225250.1ml0.1ml菌液菌液 霉霉菌菌实实验验相相关关知知识识提提问问：数数了了125个个小小格格中中有有90个个细细菌菌，样样品品中中的的细细菌菌浓度是多少？浓度是多少？(90个个125)*400/0.1ml=2880个个/ml适适用用范范围围：酵酵母母及及较较大大细细菌菌，如如细细菌菌个个体体太太小小、过过多多，由由于于每每一一小小格格中中细细菌菌层层层层叠叠加加，相相互互遮

7、遮挡挡，难难以以准准确确计数。计数。数酵母数酵母数目，（数目，（一般数一般数125个小格个小格），），折算折算样样品酵母菌浓度；品酵母菌浓度；霉霉菌菌实实验验相相关关知知识识酵母菌悬液酵母菌悬液显微镜、血球计数板、分光光度计等。显微镜、血球计数板、分光光度计等。（三）实验器材（三）实验器材 霉霉菌菌实实验验相相关关知知识识 1 1了解血球计数板构造了解血球计数板构造v显微镜下找到血球计数板的各种格子显微镜下找到血球计数板的各种格子（四）实验步骤（四）实验步骤 霉霉菌菌实实验验相相关关知知识识2、目测酵母菌大致浓度。、目测酵母菌大致浓度。3、稀释酵母菌悬液，直至其个数在计数范围内：每、稀释酵母菌

8、悬液，直至其个数在计数范围内：每小格小格2-5个。个。4、计算出酵母浓度，同时采用分光光度计测定其、计算出酵母浓度，同时采用分光光度计测定其OD。5、将原酵母菌液稀释至、将原酵母菌液稀释至5-7个梯度，分别测定其浓度。个梯度，分别测定其浓度。霉霉菌菌实实验验相相关关知知识识以以OD值为横坐标，浓度为纵坐标，做值为横坐标，浓度为纵坐标，做标准曲线。标准曲线。（五）数据处理（五）数据处理 霉霉菌菌实实验验相相关关知知识识霉菌形态及培养方法1培养基的选择 o目前国标方法中使用的培养基有:马铃薯葡萄糖琼脂(PDA),孟加拉培养基(RBC)、高盐察氏培养基(CAO),其中PDA和RBC适合于一般的霉菌和

9、酵母菌生长,而CAO则适合于高渗性霉菌生长,酵母菌几乎不长。霉菌菌落o有菌丝,可在显微镜下观察到o孢子 菌丝均可繁殖o水浸片制作 视频讨论o 1培养基选择o有的菌株即使污染数量不多,但其产生的霉菌毒素却危害较大,因此仅作霉菌计数并不能全面反映其危害程度,重要的是要知道污染菌的菌相,才能更好地判断被污染食品的安全程度。为此,国外有些研究者设计出各类选择性培养基,可以识别产毒的霉菌。如AFPA培养基(配方:酵母提取汁20g,蛋白胨10g,柠檬酸铁铵0.5g,0.2%二氯硝基苯胺1.0mL,琼脂15g,蒸馏水1000mL,PH5.6)用于分离黄曲霉毒素产生菌高污染率的食品。2接种方式 o2.1主要有

10、倾注法和涂布法两种。目前国际方法中采用倾注法,但近来国际上有不少学者认为霉菌计数采用涂o2.2对霉菌计数来说,涂抹法有以下几方面优越于倾注法:培养出的霉菌菌落数较多;培养所需的时间较短;霉菌孢子、菌落形态特征发育完全,便于鉴定。这是因为绝大多数霉菌是好氧的,在培养基表面生长快,发育好,而混在培养基中发育就受影响,而且在培养基倾注时霉菌孢子易受热损伤。布法更合适。3培养温度 o3.1大部分菌种的最适温度为2530。o3.2若有特殊培养目的,则应适当调节培养温度 4培养时间 o如果只要作霉菌计数,培养34天已基本达到目的,但如果还要进一步分类鉴定,则需要培养更长的时间(714天)。5最适计数范围

11、o5.1应尽量选择1050个/平皿的稀释度进行霉菌计数。o5.2为控制霉菌的生长速度和菌落的生长范围,可在培养基中添加少量抗生素,如氯霉素(50100mg/L),金霉素(20100mg/L),庆大霉素(50mg/L),土霉素(100mg/L)等。6霉菌检测过程中应特别注意的事项 o6.1由于霉菌检测所需的时间较长,中间又需要多次观察,因此实验前一定要作好实验计划,明确观察记录的时间。6.2霉菌孢子通过空气传播,所以实验时应保持实验室平静,减少空气流通;操作时手脚要快,动作要轻,特别是培养过程中,如果观察时动作过大,早期生长出的霉菌孢子就会在培养基内扩散,形成新的菌落,导致结果不准确。6.3实验前应认真做好全面的消毒工作,包括操作人员手指、实验室空间、实验台等,实验后应第一时间将有霉菌的培养物高压灭菌,防止进一步扩散。o6.4对使用的菌株的生理、生态、形态、毒理、致病性必需有充分的了解,并作好相应的防扩措施,防止污染其它物品。7霉菌控制o7.1利用排气换气，减少湿度 o7.2每半月用甲醛熏蒸一次 o7.3保证无菌室的墙壁、地面、天花板为光滑的材料制成 o7.4二氧化氯3000ppm熏蒸 o7.5食品中霉菌杀灭时间80C 10分钟 霉菌检测操作视频