教学课件:第五章-灭菌与空气的净化.ppt
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1、第五章第五章 灭菌与空气的净化灭菌与空气的净化l灭菌的基本原理灭菌的基本原理l培养基和发酵设备的灭菌培养基和发酵设备的灭菌l空气的除菌空气的除菌本章主要内容本章主要内容第一节第一节 灭菌的基本原理灭菌的基本原理一.灭菌的原理和方法灭菌灭菌(disinfectiondisinfection):用物理或化学的方法杀灭或除去物:用物理或化学的方法杀灭或除去物料及设备中一切生命物质的过程。料及设备中一切生命物质的过程。消毒消毒(sterilization)(sterilization):用物理或化学的方法杀灭物料、容:用物理或化学的方法杀灭物料、容器、器具内外的病原微生物,一般只能杀死营养细胞器、器具
2、内外的病原微生物,一般只能杀死营养细胞而不能杀死孢子。而不能杀死孢子。无菌无菌(asepsis)(asepsis):不存在活菌,多是灭菌的结果。不存在活菌,多是灭菌的结果。工程上灭菌:是指使用物理或化学方法将培养基工程上灭菌:是指使用物理或化学方法将培养基及发酵设备中的杂菌的细胞和孢子杀灭至不影响及发酵设备中的杂菌的细胞和孢子杀灭至不影响发酵为限。发酵为限。灭菌是为了保证进行纯培养(纯种)发酵。灭菌是为了保证进行纯培养(纯种)发酵。消毒灭菌的方法消毒灭菌的方法 (一)物理消毒灭菌法(一)物理消毒灭菌法(二)化学消毒法(二)化学消毒法(二)化学消毒法(二)化学消毒法用化学药品进行消毒的方法,由于
3、化学用化学药品进行消毒的方法,由于化学药品对细菌及人体都有毒性,故只能用于体药品对细菌及人体都有毒性,故只能用于体表、医疗器械及周围环境等的消毒。表、医疗器械及周围环境等的消毒。杀菌机制:杀菌机制:(1 1)使菌体蛋白质变性或凝固;)使菌体蛋白质变性或凝固;(2 2)干扰细菌的酶系统和代谢;)干扰细菌的酶系统和代谢;(3 3)影响细菌胞浆膜的通透性。)影响细菌胞浆膜的通透性。消毒剂类别消毒剂类别名称名称浓度浓度(%)用途用途重金属盐重金属盐红汞红汞2皮肤、粘膜、小创面消毒皮肤、粘膜、小创面消毒硫柳汞硫柳汞0.01生物制品防腐生物制品防腐氧化剂氧化剂高锰酸钾高锰酸钾0.1皮肤、尿道、水果、蔬菜消
4、毒皮肤、尿道、水果、蔬菜消毒过氧化氢过氧化氢3皮肤、粘膜、创伤消毒皮肤、粘膜、创伤消毒过氧乙酸过氧乙酸0.20.5塑料、玻璃、人造纤维消毒塑料、玻璃、人造纤维消毒卤素类卤素类碘液碘液2.5皮肤消毒皮肤消毒醇类醇类乙醇乙醇7075皮肤、体温计消毒皮肤、体温计消毒酚类酚类石炭酸石炭酸35地面、器皿表面和排泄物消毒地面、器皿表面和排泄物消毒来苏来苏35同上、也常用于手及皮肤消毒同上、也常用于手及皮肤消毒表面活性剂表面活性剂新洁尔灭新洁尔灭0.1手术器械消毒手术器械消毒酸碱类酸碱类生石灰生石灰1:41:8排泄物、地面消毒排泄物、地面消毒染料染料龙胆紫龙胆紫24表浅创伤消毒表浅创伤消毒二.湿热灭菌的原理
5、及影响因素1.1.湿热灭菌的原理湿热灭菌的原理湿热灭菌:就是直接用高温蒸汽灭菌。蒸汽在冷凝时湿热灭菌:就是直接用高温蒸汽灭菌。蒸汽在冷凝时释放出大量潜能,蒸汽具有强大穿透力,蒸汽的湿热释放出大量潜能,蒸汽具有强大穿透力,蒸汽的湿热破坏菌体蛋白质和核酸的化学键,使酶失活,微生物破坏菌体蛋白质和核酸的化学键,使酶失活,微生物因代谢障而死亡。因代谢障而死亡。致死温度:致死温度:杀死微生物的极限温度。杀死微生物的极限温度。致死时间:致死时间:致死温度下,杀死全部微生物所需要的时致死温度下,杀死全部微生物所需要的时间。间。热阻:热阻:表示微生物对热的抵抗能力,指微生物在某一表示微生物对热的抵抗能力,指微
6、生物在某一条件下(主要是温度)的致死时间。条件下(主要是温度)的致死时间。芽孢的热阻特别高。芽孢的热阻特别高。概念:概念:枯草芽孢体2.2.微生物的热死规律微生物的热死规律对数残留定律对数残留定律微生物热死微生物热死:微生物受热失活直到死亡。微生物受:微生物受热失活直到死亡。微生物受热死亡主要是由于微生物细胞内酶蛋白受热凝固,热死亡主要是由于微生物细胞内酶蛋白受热凝固,丧失活力所致。丧失活力所致。对数残留定律对数残留定律:湿热灭菌时,培养基中微生物受热死亡:湿热灭菌时,培养基中微生物受热死亡(个数减少)的速度与残有的微生物数量成正比。(个数减少)的速度与残有的微生物数量成正比。-dN/dt=k
7、N-dN/dt=kN;N N:培养基中微生物的个数,:培养基中微生物的个数,t t:时间,:时间,k k:比死亡速率。从:比死亡速率。从0 t0 t,N N0 0 N Nt t积分上式可得:积分上式可得:t=t=2.3032.303k kLg N0Lg N0NtNt随时间的延长,加热灭菌的残存菌数呈随时间的延长,加热灭菌的残存菌数呈对数减少对数减少,且且温度越高,死亡越快。温度越高,死亡越快。灭菌时间取决于灭菌时间取决于污染的程污染的程度(度(N N0 0),灭菌的程度(残留菌数),灭菌的程度(残留菌数N Nt t)和和k k值。值。K K值值:微生物耐热性的一种特征,随:微生物耐热性的一种特
8、征,随微生物种类微生物种类和和 灭菌温度灭菌温度而异。而异。温度相同,温度相同,k k值越小,微生物愈耐热。值越小,微生物愈耐热。对于同一微生物,灭菌温度越低,对于同一微生物,灭菌温度越低,k k值愈小。值愈小。提高灭菌温度,提高灭菌温度,k k值增大,灭菌时间缩短。值增大,灭菌时间缩短。通常必要的灭菌条件是通常必要的灭菌条件是110110130130,5 520min20min。芽孢对热耐受强,并不始终符合对数残留定律。芽孢对热耐受强,并不始终符合对数残留定律。培养液灭菌多采用高温短时间加热的方式。培养液灭菌多采用高温短时间加热的方式。一般以芽孢细菌和细菌芽孢的数量合作为依据一般以芽孢细菌和
9、细菌芽孢的数量合作为依据来计算灭菌时间。来计算灭菌时间。在实际操作中,要达到在实际操作中,要达到NtNt0 0,即,即t t为为,是不,是不可能的,因此,在设计时常采用可能的,因此,在设计时常采用 NtNt0.0010.001。一、培养基灭菌温度的选择培养基灭菌的过程中,除微生物被杀死,营养成培养基灭菌的过程中,除微生物被杀死,营养成分也遭到破坏;高压加热情况下,氨基酸、维生分也遭到破坏;高压加热情况下,氨基酸、维生素极易被破坏。因此素极易被破坏。因此必须选择一个能达到灭菌的必须选择一个能达到灭菌的目的又能使培养基中营养成分破坏至最小的灭菌目的又能使培养基中营养成分破坏至最小的灭菌工艺条件工艺
10、条件。第二节第二节 培养基和发酵设备的灭菌培养基和发酵设备的灭菌动力学分析动力学分析1.1.培养基的破坏反应动力学培养基的破坏反应动力学大部分的培养基的破坏为一级分解反应,动力学方程如下大部分的培养基的破坏为一级分解反应,动力学方程如下 dc/dt=-kcc c反应物的浓度,反应物的浓度,mol/L;mol/L;t t反应时间,反应时间,minmin;kk化学反应速率常数(随温度及反应类型而变),化学反应速率常数(随温度及反应类型而变),minmin-1-1 用阿伦尼乌斯方程表示用阿伦尼乌斯方程表示 kAe-E/RTA A频率因子;频率因子;EE反应所需的活化能反应所需的活化能J/molJ/m
11、ol;R R气体常数,气体常数,8.314 J/mol*K8.314 J/mol*KT T绝对温度,绝对温度,K K2.2.杂菌的死亡动力学杂菌的死亡动力学杂菌的死亡也属于为一级动力学类型,动力学方程如下杂菌的死亡也属于为一级动力学类型,动力学方程如下 dN/dt=-kN 用阿伦尼乌斯方程表示用阿伦尼乌斯方程表示 kAe-E/RTA A频率因子;频率因子;E E杀死微生物所需的活化能,杀死微生物所需的活化能,J/molJ/mol;R R气体常数,气体常数,8.314 J/mol*K8.314 J/mol*KT T绝对温度,绝对温度,K K在灭菌时,温度由在灭菌时,温度由T1T1升高到升高到T2
12、T2,灭菌速率常数,灭菌速率常数k k和培养基成分破坏速率常数和培养基成分破坏速率常数kk的值为:的值为:k1=Ae-E/RT1 ln(k2/k1)=E/R(1/T1-1/T2)(1)k2=Ae-E/RT2 k1=Ae-E/RT1 ln(k2/k1)=E/R(1/T1-1/T2)(2)k2=Ae-E/RT2 ln(k2/k1)E(1)/(2)=1 ln(k2/k1)E灭菌时活化能灭菌时活化能E大于培养基营养成分破坏的活化能大于培养基营养成分破坏的活化能E所以,随温度升高,灭菌速率常数增加的倍数大于培养基中营养所以,随温度升高,灭菌速率常数增加的倍数大于培养基中营养成分分解的速率常数的增加成分分
13、解的速率常数的增加 灭菌温度升高时,微生物杀灭速度提高超过了培养基营养成分破灭菌温度升高时,微生物杀灭速度提高超过了培养基营养成分破坏的速度坏的速度 温度升高时,微生物死亡的速度更快温度升高时,微生物死亡的速度更快因此,采用高温瞬时灭菌法较好因此,采用高温瞬时灭菌法较好ln(k2/k1)ln(k2/k1)11.分批灭菌分批灭菌指将配制好的培养基放入发酵罐中,直接用蒸汽加热,指将配制好的培养基放入发酵罐中,直接用蒸汽加热,达到灭菌要求的温度和压力后维持一定时间,再冷却至达到灭菌要求的温度和压力后维持一定时间,再冷却至发酵要求的温度,发酵要求的温度,也称实罐灭菌也称实罐灭菌。二、培养基的灭菌方法.
14、升温阶段升温阶段 升温方式:在夹套和蛇管中通入蒸汽间接加热;升温方式:在夹套和蛇管中通入蒸汽间接加热;在培养基中直接通入蒸汽加热。在培养基中直接通入蒸汽加热。培养基温度不太高时,相应培养基温度不太高时,相应k k值非常小,灭菌效果值非常小,灭菌效果可以忽略不计,因此,在升温阶段可以认为只有可以忽略不计,因此,在升温阶段可以认为只有在温度高于在温度高于100 100 时才有灭菌作用。时才有灭菌作用。.保温阶段保温阶段 灭菌的主要时段,习惯上把保温时间看作灭菌时间。灭菌的主要时段,习惯上把保温时间看作灭菌时间。此时,此时,k k值不变,培养基温度恒定,则保温时间为:值不变,培养基温度恒定,则保温时
15、间为:t=2.303/k lg(Nt=2.303/k lg(N1 1/N/N2 2).冷却阶段冷却阶段培养基灭菌后用冷却水间壁将培养基冷却至培养所培养基灭菌后用冷却水间壁将培养基冷却至培养所要求温度的过程。要求温度的过程。2.2.连续灭菌连续灭菌培养基在发酵罐外经过一套灭菌设备连续的加热灭菌,培养基在发酵罐外经过一套灭菌设备连续的加热灭菌,冷却后送入已灭菌的发酵罐内的工艺过程,也称冷却后送入已灭菌的发酵罐内的工艺过程,也称“连消连消”。连续灭菌的方法连续灭菌的方法(1)喷射加热连续灭菌喷射加热连续灭菌(2)薄板换热器连续灭菌(薄板换热器连续灭菌(最先进的灭菌最先进的灭菌方式方式)(3)喷淋冷却
16、连续灭菌(喷淋冷却连续灭菌(最基础的灭菌方最基础的灭菌方式式)薄板换热器连续灭菌薄板换热器连续灭菌薄板换热器连续灭菌时的温度和时间曲线图3.3.固体培养基灭菌固体培养基灭菌利用转鼓式灭菌机,装料后旋紧进出口盖,旋转转鼓利用转鼓式灭菌机,装料后旋紧进出口盖,旋转转鼓使培养基得到翻动,蒸汽沿轴中心通过加热培养基达使培养基得到翻动,蒸汽沿轴中心通过加热培养基达到一定温度后,进行保温灭菌。灭菌完毕后用真空泵到一定温度后,进行保温灭菌。灭菌完毕后用真空泵沿空心横抽真空,转鼓内压力降低,培养基冷却。沿空心横抽真空,转鼓内压力降低,培养基冷却。4.4.补料液的灭菌补料液的灭菌 灭菌的方法则视料液的性质、体积
17、和补料速率灭菌的方法则视料液的性质、体积和补料速率而定。而定。如果补料量较大,而具有连续性时,则采用连如果补料量较大,而具有连续性时,则采用连续灭菌较为合适。续灭菌较为合适。也有利用过滤法对另补料液进行除菌。也有利用过滤法对另补料液进行除菌。补料液的分批灭菌,通常是向盛有物料的容器补料液的分批灭菌,通常是向盛有物料的容器中直接通入蒸汽。所有的附属设备和管道都要中直接通入蒸汽。所有的附属设备和管道都要经过灭菌。经过灭菌。三.影响培养基灭菌的因素 培养基成分培养基成分:油脂、糖类及蛋白质的浓度越大,:油脂、糖类及蛋白质的浓度越大,灭菌的温度越高;低浓度(灭菌的温度越高;低浓度(12)的)的Nacl
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- 教学 课件 第五 灭菌 空气 净化
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