食物中毒采样检与验.ppt
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1、细菌性食物中毒样品的细菌性食物中毒样品的采集及实验室检测程序采集及实验室检测程序北京市疾病预防控制中心北京市疾病预防控制中心陈陈 倩倩20132013年年4 4月月 食物中毒样品种类和采集方法食物中毒样品种类和采集方法采样注意事项采样注意事项实验室应急检测程序实验室应急检测程序食源性疾病WHOWHO:由于食物中含有致病因子引起的以急性病理:由于食物中含有致病因子引起的以急性病理过程为主要临床特征的感染性或中毒性疾病过程为主要临床特征的感染性或中毒性疾病 美国美国CDCCDC:由于食用了受污染的食品或饮料而引起:由于食用了受污染的食品或饮料而引起的疾病的疾病包括常见的食物中毒、肠道传染病、人畜共
2、患传染包括常见的食物中毒、肠道传染病、人畜共患传染病、寄生虫病及化学性有毒有害物质所引起的疾病。病、寄生虫病及化学性有毒有害物质所引起的疾病。食源性疾患的发病率居各类疾病总发病率的前列,食源性疾患的发病率居各类疾病总发病率的前列,是当前世界上最突出的卫生问题。是当前世界上最突出的卫生问题。食源性疾病特点食源性疾病特点爆发和散发两种形式爆发和散发两种形式肠道传染病存在人与人之间传播肠道传染病存在人与人之间传播种类多、潜伏期不同种类多、潜伏期不同不一定出现明显消化道症状不一定出现明显消化道症状细菌性食源性疾病细菌性食源性疾病细菌性食源性疾病:细菌性食源性疾病:是进食被细菌或细菌毒是进食被细菌或细菌
3、毒素污染的食物而引起的感染性或中毒性疾病。素污染的食物而引起的感染性或中毒性疾病。细菌性肠道传染病细菌性肠道传染病(霍乱、痢疾、伤寒副伤(霍乱、痢疾、伤寒副伤寒、寒、O157O157短期内集中发病常被诊断为短期内集中发病常被诊断为细菌性食物中毒细菌性食物中毒散发或潜伏期较长病例常被诊断为胃肠炎或散发或潜伏期较长病例常被诊断为胃肠炎或其他疾病其他疾病食物中毒相关概念食物中毒相关概念食食物物中中毒毒:摄摄入入了了含含有有生生物物性性、化化学学性性有有毒毒有有害害物物质质的的食食品品或或者者把把有有害害物物质质当当作作食食品品摄摄入入后后出出现现的的非非传传染染性性(不不属属于于传传染染病病)的的急
4、急性性、亚急性疾病。亚急性疾病。食食物物中中毒毒诊诊断断标标准准主主要要以以流流行行病病学学调调查查资资料料及及病病人人的的潜潜伏伏期期和和中中毒毒的的特特有有表表现现为为依依据据,实验室诊断是为了确定中毒的病因而进行的实验室诊断是为了确定中毒的病因而进行的食物中毒的致病因素食物中毒的致病因素20122012年全国报告食物中毒年全国报告食物中毒917917起起 微生物引起的患者数最多,占总数的微生物引起的患者数最多,占总数的50%50%美国食源性疾病爆发细菌性的占总起数的美国食源性疾病爆发细菌性的占总起数的75%75%,占病例数,占病例数86%86%。我国细菌性食物中毒。我国细菌性食物中毒发生
5、起数同样常年居首位发生起数同样常年居首位美国食源性病原体美国食源性病原体空肠弯曲菌空肠弯曲菌产气荚膜梭状芽孢杆菌产气荚膜梭状芽孢杆菌出血性大肠杆菌出血性大肠杆菌O157O157单增李斯特菌单增李斯特菌沙门氏菌沙门氏菌金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌圆孢子虫圆孢子虫隐孢子虫隐孢子虫常见细菌性食物中毒常见细菌性食物中毒沙沙门门氏氏菌菌、志志贺贺氏氏菌菌、致致泻泻性性大大肠肠杆杆菌菌、副副溶溶血血性性弧弧菌菌、其其它它致致病病性性弧弧菌菌、金金黄黄色色葡葡萄萄球球菌菌、蜡蜡样样芽芽胞胞杆杆菌菌、肉肉毒毒梭梭菌菌、产产气气荚荚膜膜梭梭菌菌、出出血血性性大大肠肠杆杆菌菌O157O157、单单增增李李斯斯特特
6、菌菌、耶耶尔尔森森氏氏菌菌、空空肠肠弯弯曲曲菌菌、变变形形杆杆菌菌、耶耶毒毒假单胞菌酵米面亚种、气单胞菌、肠球菌等假单胞菌酵米面亚种、气单胞菌、肠球菌等细菌性食物中毒的特点细菌性食物中毒的特点与饮食有密切关系,去除原因食品后,不再与饮食有密切关系,去除原因食品后,不再有新的患者。有新的患者。临床症状以急性胃肠炎为主,基本相同。临床症状以急性胃肠炎为主,基本相同。短时期内多人发病,无人传染人的现象。短时期内多人发病,无人传染人的现象。中毒发生与不同区域人群饮食习惯有密切关中毒发生与不同区域人群饮食习惯有密切关系。系。与季节相关。细菌繁殖条件及人体防御机能。与季节相关。细菌繁殖条件及人体防御机能。
7、发病率高,病死率较低、恢复快、多数预后发病率高,病死率较低、恢复快、多数预后良好良好 细菌性食源性疾病的流行病学细菌性食源性疾病的流行病学传染源:被病原菌感染的动物或人传染源:被病原菌感染的动物或人传播途径:通过进食被细菌或其毒素污染传播途径:通过进食被细菌或其毒素污染的食物的食物人群易感性:普遍,无病后免疫力,可重人群易感性:普遍,无病后免疫力,可重复感染复感染流行特征:夏秋季高发;病例可散发或爆流行特征:夏秋季高发;病例可散发或爆发流行;发病急,时间集中,潜伏期短;发流行;发病急,时间集中,潜伏期短;有共同进餐史;症状轻重与进食量有关。有共同进餐史;症状轻重与进食量有关。细菌性食源性疾病的
8、发病机制细菌性食源性疾病的发病机制 感染型感染型细菌污染食物在条件适宜时大量繁殖,人食细菌污染食物在条件适宜时大量繁殖,人食入大量活菌的食物,引起消化道感染而造成入大量活菌的食物,引起消化道感染而造成的中毒。的中毒。细菌毒力、细菌污染程度、进食量多少、人细菌毒力、细菌污染程度、进食量多少、人体抵抗力等因素与症状轻重直接相关。体抵抗力等因素与症状轻重直接相关。较少引起败血症或严重毒血症,病程较短较少引起败血症或严重毒血症,病程较短 (沙门氏菌、副溶血性弧菌)(沙门氏菌、副溶血性弧菌)感染型感染型 活菌污染食品活菌污染食品|适宜条件适宜条件 食品中大量繁殖食品中大量繁殖(菌量一般(菌量一般1010
9、6 6)|人摄入人摄入 侵犯消化道粘膜侵犯消化道粘膜 消化道消化道 体死亡放出内毒素体死亡放出内毒素 引起充血、水肿、渗出等炎症引起充血、水肿、渗出等炎症 作用于体温调节中枢作用于体温调节中枢 发烧发烧 消化道症状消化道症状 细菌性食源性疾病的发病机制细菌性食源性疾病的发病机制毒素型毒素型细菌污染食物在其中繁殖并产生大量毒细菌污染食物在其中繁殖并产生大量毒素,人食入大量毒素的食物而造成的中素,人食入大量毒素的食物而造成的中毒。毒。临床症状与食入毒素量正相关临床症状与食入毒素量正相关起病急,不发热,病程短,可引起败血起病急,不发热,病程短,可引起败血症或严重毒血症(葡萄球菌肠毒素、肉症或严重毒血
10、症(葡萄球菌肠毒素、肉毒毒素)毒毒素)毒素型毒素型活菌污染食品活菌污染食品|适宜条件适宜条件 食品中大量繁殖产生外毒素食品中大量繁殖产生外毒素(如肠毒素、神经毒素等)(如肠毒素、神经毒素等)|摄入含外毒素的食品而中毒摄入含外毒素的食品而中毒|出现相应外毒素的特殊临床表现出现相应外毒素的特殊临床表现食物中毒诊断标准和处理原则食物中毒诊断标准和处理原则GB14938GB14938产气荚膜梭菌食物中毒诊断及技术处理原则产气荚膜梭菌食物中毒诊断及技术处理原则病原性大肠艾希氏菌食物中毒诊断及技术处理原则病原性大肠艾希氏菌食物中毒诊断及技术处理原则变形杆菌食物中毒诊断及技术处理原则变形杆菌食物中毒诊断及技
11、术处理原则变质甘蔗食物中毒诊断及技术处理原则变质甘蔗食物中毒诊断及技术处理原则霉变谷物中呕吐毒素食物中毒诊断及技术处理原则霉变谷物中呕吐毒素食物中毒诊断及技术处理原则耶毒假单胞菌酵米面亚种食物中毒诊断及技术处理原则耶毒假单胞菌酵米面亚种食物中毒诊断及技术处理原则沙门氏菌食物中毒诊断及技术处理原则沙门氏菌食物中毒诊断及技术处理原则葡萄球菌食物中毒诊断及技术处理原则葡萄球菌食物中毒诊断及技术处理原则副溶血性弧菌食物中毒诊断及技术处理原则副溶血性弧菌食物中毒诊断及技术处理原则蜡样芽胞杆菌食物中毒诊断及技术处理原则蜡样芽胞杆菌食物中毒诊断及技术处理原则肉毒梭菌食物中毒诊断及技术处理原则肉毒梭菌食物中毒
12、诊断及技术处理原则现场调查流程现场调查流程p建立病例定义,制定采样计划(提出假设)建立病例定义,制定采样计划(提出假设)p验证假设验证假设p可疑样本采集和送检可疑样本采集和送检p实验室检验实验室检验p采取控制措施采取控制措施p调查结论和书面报告调查结论和书面报告建立病例定义72h72h内食用了共同餐次食品内食用了共同餐次食品是否到医院就诊、是否服药是否到医院就诊、是否服药24h24h腹泻腹泻3 3次以上次以上症状体征明显症状体征明显建立病例定义核实病例数核实病例数确定事件的存在确定事件的存在描述疾病的三间分布描述疾病的三间分布时间分布时间分布地区分布地区分布人群分布人群分布现场调查主要物品清单
13、现场调查主要物品清单采集工具采集工具 长柄勺、剪刀、铲子、小刀、镊子、夹子、吸管、启长柄勺、剪刀、铲子、小刀、镊子、夹子、吸管、启瓶器、采便管、注射器、消毒棉签、采样棉球、消瓶器、采便管、注射器、消毒棉签、采样棉球、消毒纱布、酒精灯、压舌板、皮筋、记号笔、标签纸毒纱布、酒精灯、压舌板、皮筋、记号笔、标签纸等等样品容器样品容器 无菌塑料袋、广口瓶(无菌塑料袋、广口瓶(200-500mL)200-500mL)、运送培养基、运送培养基试管、生理盐水、灭菌平皿、一次性小试管、便盒、试管、生理盐水、灭菌平皿、一次性小试管、便盒、样品冷藏设施等样品冷藏设施等现场调查主要物品清单现场调查主要物品清单防护用品
14、防护用品 白色工作服或隔离衣、医用手套、口罩等白色工作服或隔离衣、医用手套、口罩等调查用表调查用表 食物中毒个案调查表、卫生监督文书、采样食物中毒个案调查表、卫生监督文书、采样单等单等 取证工具取证工具 照相机、摄像机、录音机照相机、摄像机、录音机 其他相关专业参考资料其他相关专业参考资料食物中毒采样目的食物中毒采样目的 查明病因和来源查明病因和来源确定检验项目确定检验项目,验证假设验证假设为以后的分析结论提供证据为以后的分析结论提供证据食物中毒采样意义食物中毒采样意义 实验室检测结果是查明爆发原因的证据实验室检测结果是查明爆发原因的证据科学准确合理地采集、运送、保存标本科学准确合理地采集、运
15、送、保存标本直接影响实验结果的可靠性直接影响实验结果的可靠性食物中毒采样原则食物中毒采样原则目的明确目的明确代表性代表性 典型性典型性 重点突出重点突出 有的放矢有的放矢适时性适时性 把握时机把握时机程序性程序性食物中毒样品种类食物中毒样品种类剩余食品剩余食品病人排泄物病人排泄物血液标本血液标本尸体解剖标本尸体解剖标本炊具类标本炊具类标本现场环境标本现场环境标本原料、半成品和成品原料、半成品和成品从业人员标本从业人员标本无菌操作采样无菌操作采样无菌操作:防止外界微生物的污染和病原菌无菌操作:防止外界微生物的污染和病原菌扩散所采用的操作技术扩散所采用的操作技术 食物中毒采样目的是检测标本的实际污
16、染状食物中毒采样目的是检测标本的实际污染状况,故应严格避免由于采样对检品造成的新况,故应严格避免由于采样对检品造成的新的污染。的污染。要求采样容器、用具、培养基需严格灭菌同要求采样容器、用具、培养基需严格灭菌同时以无菌操作取样。时以无菌操作取样。无菌操作采样无菌操作采样采样前用采样前用75%75%酒精棉球进行手消毒或戴手套酒精棉球进行手消毒或戴手套采样用棉拭子、盐水等要求经高压灭菌消毒采样用棉拭子、盐水等要求经高压灭菌消毒采样容器要求密闭、内壁光滑、清洁干燥经采样容器要求密闭、内壁光滑、清洁干燥经高压消毒高压消毒镊子、剪刀等用具,使用前在酒精灯灼烧灭镊子、剪刀等用具,使用前在酒精灯灼烧灭菌后使
17、用菌后使用妥善保管消毒用品。生理盐水和运送培养基妥善保管消毒用品。生理盐水和运送培养基要定期更换。(常温一个月)要定期更换。(常温一个月)食物中毒采样方法食物中毒采样方法-剩余食品剩余食品餐桌上病人吃过的最好。无菌操作用灭菌镊子夹取餐桌上病人吃过的最好。无菌操作用灭菌镊子夹取置于灭菌容器。置于灭菌容器。用灭菌盐水冲洗盛装过可疑中毒食物的容器,收集用灭菌盐水冲洗盛装过可疑中毒食物的容器,收集洗涤水置于灭菌容器或使用沾有灭菌盐水的棉拭子洗涤水置于灭菌容器或使用沾有灭菌盐水的棉拭子涂抹盛装过可疑中毒食物的容器,置于盐水管内。涂抹盛装过可疑中毒食物的容器,置于盐水管内。体积较大的肉食、鱼类体积较大的肉
18、食、鱼类 表面消毒后取内部采样表面消毒后取内部采样半成品和原料半成品和原料罐头:直接采样或取空盒送检罐头:直接采样或取空盒送检无剩余食品时,采集餐厅无剩余食品时,采集餐厅4848小时留样食品小时留样食品食物中毒采样方法食物中毒采样方法-生物标本生物标本呕吐物、洗胃液呕吐物、洗胃液 取新鲜即时的,避免混入其他杂质和细菌,容取新鲜即时的,避免混入其他杂质和细菌,容器应保证无菌器应保证无菌粪便:黏液或脓血部分,液状粪便采取絮状粪便:黏液或脓血部分,液状粪便采取絮状物物1-2mL,1-2mL,成型便取蚕豆大小粪块成型便取蚕豆大小粪块 (约(约5g5g)盛于灭菌容器,勿混入尿液或水。注意密封盛于灭菌容器
19、,勿混入尿液或水。注意密封和标签和标签肛拭子(直肠拭子法):肛拭子(直肠拭子法):告知病人采样目的使其配合告知病人采样目的使其配合 食物中毒采样方法食物中毒采样方法-生物标本生物标本确定体位,询问有无肛肠疾病,确定是否确定体位,询问有无肛肠疾病,确定是否适合肛拭子采样适合肛拭子采样取出灭菌采便管观察有无破损取出灭菌采便管观察有无破损站在病人侧位,瞩病人深呼吸放松站在病人侧位,瞩病人深呼吸放松以采便管用生理盐水浸湿后,插入肛门内以采便管用生理盐水浸湿后,插入肛门内35cm,35cm,转动转动360360度后取出,插入运送培度后取出,插入运送培养基。养基。观察病人情况有无出血等观察病人情况有无出血
20、等食物中毒采样方法食物中毒采样方法-生物标本生物标本咽喉涂抹咽喉涂抹 令患者仰头张口、用压舌板压令患者仰头张口、用压舌板压舌、将无菌棉拭子伸入口腔涂抹咽部数舌、将无菌棉拭子伸入口腔涂抹咽部数次,放入盐水管次,放入盐水管血液:无菌穿刺取静脉血血液:无菌穿刺取静脉血23mL 23mL 移入移入无菌试管中送检。无菌试管中送检。生物标本的采样时机生物标本的采样时机呕吐物、洗胃液呕吐物、洗胃液 取新鲜即时的取新鲜即时的粪便(肛拭子)粪便(肛拭子)急性腹泻期及药前急性腹泻期及药前根据患者人数,决定采集数量根据患者人数,决定采集数量咽喉涂抹:发病第一日,最迟不超过咽喉涂抹:发病第一日,最迟不超过3 3日日,
21、最最好在体温好在体温3838度以上时采集度以上时采集血液:无菌穿刺静脉血。发病初期血液可做血液:无菌穿刺静脉血。发病初期血液可做细菌培养。急性期(细菌培养。急性期(3 3天内)和恢复期(天内)和恢复期(2 2周周左右)各采血一次,制备血清,有助于感染左右)各采血一次,制备血清,有助于感染型食物中毒诊断。型食物中毒诊断。食物中毒采样方法食物中毒采样方法工用具标本工用具标本锅、盆、桶、刀、菜板锅、盆、桶、刀、菜板 灭菌棉拭子沾盐水灭菌棉拭子沾盐水后反复涂擦,置于灭菌容器。棉拭子接触手后反复涂擦,置于灭菌容器。棉拭子接触手的部分及时用无菌镊子折断后置于盐水管中。的部分及时用无菌镊子折断后置于盐水管中
22、。如菜板已洗过,可刮下表面木屑置于灭菌容如菜板已洗过,可刮下表面木屑置于灭菌容器。器。抹布可剪下一块置于灭菌容器。抹布可剪下一块置于灭菌容器。食堂环境涂抹:冰箱、水池等食堂环境涂抹:冰箱、水池等食物中毒采样方法食物中毒采样方法-从业人员从业人员对直接接触食品的厨师和餐厅工作人员,对直接接触食品的厨师和餐厅工作人员,可根据不同目的做带菌检查。可根据不同目的做带菌检查。采集手采集手(皮肤皮肤)涂抹、肛拭子等样本涂抹、肛拭子等样本食物中毒采样数量食物中毒采样数量样品名称样品名称采样数量采样数量固体食品固体食品200-500g(200-500g(不同部位)不同部位)液体及半流体食物液体及半流体食物20
23、0-500mL(200-500mL(充分搅拌)充分搅拌)呕吐物呕吐物50100g50100g(每人)(每人)粪便粪便510g510g(每人)(每人)容器洗涤水容器洗涤水100200 mL100200 mL(每件)(每件)血液血液510 mL510 mL(每人)(每人)尸体标本尸体标本1020g1020g(每种脏器)(每种脏器)标本保存要求标本保存要求直肠拭子:直肠拭子:48h48h内检测内检测,保存于保存于4;4;48h 48h后检测,保存于后检测,保存于7070新鲜粪便:采集新鲜粪便:采集2h2h后冰箱保存后冰箱保存 脑脊液、尿液、唾液(脑脊液、尿液、唾液(24h24h内处理)可室温内处理)
24、可室温保存,长期保存条件保存,长期保存条件4-8 4-8 标本保存要求标本保存要求分离病毒标本:保温容器(分离病毒标本:保温容器(0-4 0-4)不可)不可超过超过2 2天。无条件立即运送和分离,需冻存。天。无条件立即运送和分离,需冻存。检测抗体的血清:检测抗体的血清:44可保存可保存710710天,最天,最好不要冷冻,防止反复冻融好不要冷冻,防止反复冻融使用冰袋保持样品运送温度使用冰袋保持样品运送温度48 48 保证保证-20 -20 条件应使用条件应使用2kg2kg干冰干冰病原微生物样本的包装病原微生物样本的包装WHOWHO传染性物质和诊断性标本的安全运送指传染性物质和诊断性标本的安全运送
25、指南南确保人员安全和标本完整确保人员安全和标本完整使用三个包装层对包装物进行三层包装使用三个包装层对包装物进行三层包装防漏、吸附材料防漏、吸附材料标签标识标签标识病原微生物样本的运送病原微生物样本的运送固定固定备有吸水材料、消毒剂、手套、口罩、密备有吸水材料、消毒剂、手套、口罩、密封防水废弃物容器封防水废弃物容器车载冷藏装置、冰袋、冰壶等车载冷藏装置、冰袋、冰壶等及时、专人、快速送检及时、专人、快速送检采样注意事项采样注意事项样品应做详细记录,体现样本全部信息样品应做详细记录,体现样本全部信息根据不同样本性状,检验项目要求,合理根据不同样本性状,检验项目要求,合理保存和运送样品。一般要求保存和
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