（浙江选考）高考生物总复习 专题10 生物技术实践 第31讲 微生物的利用课件-人教版高三全册生物课件.ppt

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1、第第3131讲微生物的利用讲微生物的利用加试题组加试题组考点考点1大肠杆菌的培养和分离大肠杆菌的培养和分离1.下下表表是是某某公公司司研研发发的的一一种种培培养养大大肠肠杆杆菌菌菌菌群群的的培培养养基基配配方方，请根据表格和所学知识回答下列相关问题。请根据表格和所学知识回答下列相关问题。成分成分蛋白胨蛋白胨乳糖乳糖蔗糖蔗糖K2HPO4指示剂指示剂 琼脂琼脂含量含量（g）10.05.05.02.00.212.0将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL（1）从生态系统的成分上看，大肠杆菌属于）从生态系统的成分上看，大肠杆菌属于。（2）若若根根据据用用途途划划分分

2、，该该培培养养基基属属于于（填填“选选择择”或或“鉴鉴别别”）培培养养基基。若若要要用用上上述述培培养养基基来来筛筛选选出出土土壤壤中中的的尿尿素分解菌，培养基的营养成分必需怎样更改？素分解菌，培养基的营养成分必需怎样更改？，并用，并用作为指示剂。作为指示剂。（3）在在微微生生物物培培养养的的过过程程中中，为为防防止止杂杂菌菌污污染染，需需要要对对培培养养基基和和培培养养皿皿进进行行；操操作作者者的的双双手手需需要要进进行行清清洗洗和和。（4）图图1和和图图2是是培培养养某某细细菌菌的的结结果果图图，其其对对应应的的接接种种方方法法分分别别是是：和和，这这两两种种方方法法接接种种后后培培养养基

3、基上上都都可可以以得得到到由由单单个个细细胞胞繁繁殖殖所所形形成成的的。图图1所所用用的的接接种种方方法法可可用用来来对对活活菌菌进进行行计计数数。此此外外，测测定定微微生生物数目的另一种方法是物数目的另一种方法是_。（5）用用以以下下微微生生物物发发酵酵生生产产特特定定产产物物时时，所所利利用用的的主主要要微微生生物的细胞结构与大肠杆菌较相似的有物的细胞结构与大肠杆菌较相似的有。A.制作果酒制作果酒 B.B.由果酒制作果醋由果酒制作果醋C.制作泡菜制作泡菜 D.D.制作腐乳制作腐乳解解析析（1）大大肠肠杆杆菌菌为为厌厌氧氧性性细细菌菌，在在生生态态系系统统中中属属于于分分解解者者。（2）该该

4、培培养养基基属属于于鉴鉴别别培培养养基基，如如果果需需要要筛筛选选出出土土壤壤中中的的尿尿素素分分解解菌菌，则则应应将将蛋蛋白白胨胨改改成成尿尿素素，然然后后用用酚酚红红作作为为指指示示剂剂。（3）为为防防止止杂杂菌菌污污染染，需需要要对对培培养养基基和和培培养养皿皿进进行行灭灭菌菌处处理理，且且双双手手需需要要清清洗洗和和消消毒毒。（4）图图1为为稀稀释释涂涂布布平平板板法法，图图2为为平平板板划划线线法法，单单个个细细胞胞繁繁殖殖所所形形成成的的为为菌菌落落，测测定定微微生生物物的的方方法法有有活活菌菌计计数数法法和和血血球球计计数数板板计计数数法法。（5）大大肠肠杆杆菌菌属属于于原原核核

5、生生物物。制制作作果果酒酒为为酵酵母母菌菌，酵酵母母菌菌属属于于真真核核生生物物，A错错误误。由由果果酒酒制制作作果果醋醋所所利利用用的的微微生生物物是是醋醋酸酸菌菌，醋醋酸酸菌菌属属于于原原核核生生物物，B正正确确。制制作作泡泡菜菜所所利利用用的的微微生生物物是是乳乳酸酸菌菌，乳乳酸酸菌菌属属于于原原核核生生物物，C正正确确。制制作作腐腐乳乳所所利利用用的的微微生生物物主主要要是是毛毛霉霉，毛霉属毛霉属于真核生物，于真核生物，D错误。错误。答案答案（1）分解者）分解者（2）鉴别鉴别将蛋白将蛋白胨胨改成尿素酚改成尿素酚红红（3）灭灭菌消毒菌消毒（4）稀稀释释涂涂布布平平板板法法平平板板划划线线

6、法法菌菌落落显显微微镜镜直直接接计计数数（或（或“血球血球计计数板数板计计数法数法”）（5）BC2.（2015浙浙江江杭杭州州一一模模，17）据据报报道道，一一些些企企业业生生产产的的速速冻冻食食品品中中检检出出金金黄黄色色葡葡萄萄球球菌菌超超标标，加加上上熟熟卤卤制制品品的的大大肠肠杆杆菌菌超超标标，“细细菌菌门门”事事件件引引起起公公众众普普遍遍关关注注。金金黄黄色色葡葡萄萄球球菌菌能能分分解解卵卵黄黄中中的的卵卵磷磷脂脂，在在含含卵卵黄黄的的固固体体培培养养基基上上形形成成的的菌菌落落周周围围会出会出现现特有的乳白色的乳特有的乳白色的乳浊环浊环。请请回答下列回答下列问题问题：（1）某某生

7、生物物兴兴趣趣小小组组欲欲检检测测某某果果汁汁类类食食品品中中是是否否含含有有金金黄黄色葡萄球菌以及该菌的含量。色葡萄球菌以及该菌的含量。配配制制培培养养基基：称称取取适适量量的的牛牛肉肉膏膏、蛋蛋白白胨胨、NaCl、琼琼脂脂等等，加加入入蒸蒸馏馏水水，搅搅拌拌加加热热至至完完全全溶溶解解后后，分分装装到到锥锥形形瓶瓶后后利利用用进进行行灭灭菌菌，在在无无菌菌状状态态下下加加入入卵卵黄黄液液（100mL10%灭灭菌菌NaCl溶溶液液中中加加一一个个鸡鸡蛋蛋黄黄，振振荡荡均均匀匀）摇匀后立即倒平板。摇匀后立即倒平板。接接种种：该该小小组组采采用用涂涂布布分分离离法法检检测测果果汁汁样样品品的的细

8、细菌菌含含量量。在在涂涂布布接接种种前前，随随机机取取若若干干灭灭菌菌后后的的空空白白平平板板先先行行培培养养了了一一段段时时间间，这样做的目的是这样做的目的是_；然然后后，将将1mL果果汁汁样样品品稀稀释释10倍倍，在在3个个平平板板上上用用涂涂布布法法分分别别接入接入0.1mL稀释液。稀释液。培培养养及及结结果果：将将培培养养皿皿放放入入恒恒温温培培养养箱箱中中经经适适当当培培养养，3个个平平板板上上的的菌菌落落数数分分别别为为19、18和和17。据据此此可可得得出出每每升升果果汁汁样品中的活菌数为样品中的活菌数为。（2）示示意意图图A和和B中中表表示示的的是是用用涂涂布布分分离离法法接接

9、种种培培养养后得到的结果。后得到的结果。（3）下列有关常用涂布分离法的操作正确的是）下列有关常用涂布分离法的操作正确的是。A.在超净工作台中进行接种时应关闭紫外灯在超净工作台中进行接种时应关闭紫外灯B.接种前需先稀释，然后过滤除去杂菌接种前需先稀释，然后过滤除去杂菌C.在每个固体培养基表面都可形成单菌落在每个固体培养基表面都可形成单菌落D.玻璃刮刀浸泡在玻璃刮刀浸泡在70%的酒精中灭菌，不用灼烧的酒精中灭菌，不用灼烧（4）菌菌种种保保存存：在在无无菌菌条条件件下下将将单单菌菌落落用用接接种种环环取取出出，再再用用划划线线法法接接种种在在上上，在在37下下培培养养24h后后，置置于于4冰冰箱中保

10、存。箱中保存。解解析析（1）培培养养基基配配制制好好后后应应调调节节酸酸碱碱度度（pH），分分装装到到锥锥形形瓶瓶后后利利用用高高压压蒸蒸汽汽灭灭菌菌锅锅进进行行灭灭菌菌。涂涂布布接接种种前前，将将制制好好的的空空白白平平板板先先培培养养一一段段时时间间，目目的的是是检检测测培培养养基基是是否否被被杂杂菌菌污污染染；接接种种后后，培培养养皿皿需需要要倒倒置置培培养养，防防止止皿皿盖盖上上凝凝集集的的水水滴滴滴滴落落造造成成污污染染；0.1mL稀稀释释液液（稀稀释释10倍倍）含含细细菌菌数数约约为为18个个，得得出出每每升升果果汁汁含含有有活活菌菌数数1.8106个个。（2）图图中中A为为划划线

11、线分分离离得得到到的的结结果果，B为为涂涂布布分分离离得得到到的的结结果果。（3）在在超超净净工工作作台台进进行行接接种种操操作作时时应应关关闭闭紫紫外外灯灯，A正正确确；涂涂布布分分离离前前需需稀稀释释，但但不不能能过过滤滤除除菌菌，B错错误误；稀稀释释度度较较大大的的溶溶液液涂涂布布分分离离不不一一定定出出现现菌菌落落，C错错误误；玻玻璃璃刮刮刀刀浸浸泡泡后后需需要要灼灼烧烧，D错错误误。（4）纯纯化化的的菌菌种种保存在保存在斜斜面上。面上。答答案案（1）调调节节pH高高压压蒸蒸汽汽灭灭菌菌锅锅检检测测培培养养基基平平板板灭灭菌菌是否合格倒置是否合格倒置1.8106（2）B（3）A（4）斜

12、面）斜面1.实验室常用的消毒和灭菌的方法实验室常用的消毒和灭菌的方法项目项目概念概念常用方法常用方法应用范围应用范围消毒消毒使用较为温使用较为温和的物理或和的物理或化学方法化学方法仅仅杀死物体表杀死物体表面或内部一面或内部一部分微生物部分微生物（不包括不包括芽芽孢孢和和孢孢子子）煮沸煮沸消消毒毒法：在法：在100下下煮沸煮沸56min一一般般物物品品巴氏巴氏消消毒毒法：在法：在7075下下煮煮30min或在或在80下下煮煮15min一些不一些不耐耐高温的液高温的液体，如体，如牛奶牛奶化学药剂消化学药剂消毒毒法法如用酒精如用酒精擦拭双手擦拭双手、用用氯氯气气消消毒毒水源等水源等紫紫外外线线消消毒

13、毒法法：紫紫外外灯灯照照射射30min接种接种室室、操作台、操作台灭菌灭菌使用使用强强烈烈的理化因的理化因素杀死物素杀死物体内外所体内外所有的微生有的微生物物（包括包括芽芽孢孢和和孢孢子子）灼灼烧灭烧灭菌菌：酒精：酒精灯火灯火焰焰接种接种工工具的具的灭灭菌菌和试和试管口的管口的灭灭菌菌干干热灭热灭菌菌：在：在160170下下灭灭菌菌12h玻玻璃璃器器皿皿、金、金属工属工具具的的灭灭菌菌高压高压蒸汽蒸汽灭灭菌菌：在压：在压力为力为100kPa，温度为，温度为121的条件下，的条件下，灭灭菌菌1530min培养基及容器的培养基及容器的灭灭菌菌2.微生物培养后判断是否有杂菌污染的方法微生物培养后判断

14、是否有杂菌污染的方法（1）从从菌菌落落的的形形态态看看，是是否否湿湿润润、透透明明、黏黏稠稠、呈呈何何种种颜颜色等等，是区别细色等等，是区别细菌菌、酵酵母母菌菌、放线、放线菌菌和和霉菌霉菌的关键指的关键指标标。（2）用用显显微微镜镜镜镜检检观观察察菌菌的的形形态态、大大小小，看看是是否否有有菌菌丝丝、孢孢子子、芽芽孢孢等等，这这也也是是区区别别细细菌菌、酵酵母母菌菌、放放线线菌菌和和霉霉菌菌的的关键指关键指标标。（3）上述方法较上述方法较难难区分同类的不同物种，需要区分同类的不同物种，需要借助借助化学方化学方法和进一步的形态观察，如用法和进一步的形态观察，如用革革兰兰氏氏染色法，观察有无染色法

15、，观察有无鞭毛鞭毛、孢孢子形态、子形态、孢孢子着生方式、子着生方式、菌菌丝生长方式、丝生长方式、芽芽孢孢等。等。备考备查备考备查1.培养基培养基液体液体含义含义微生物生存的环境和营养物质微生物生存的环境和营养物质成分成分水、无机盐、碳源和氮源，还需满足不同微生物生水、无机盐、碳源和氮源，还需满足不同微生物生长对长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求、特殊营养物质以及氧气的要求种类种类按物理状态分，包括固体培养基、半固体培养基按物理状态分，包括固体培养基、半固体培养基、_培养基培养基按作用分，选择培养基、鉴别培养基按作用分，选择培养基、鉴别培养基2.无菌技术无菌技术（1）灭灭菌菌原原因因：为为了了

16、获获得得纯纯净净的的培培养养物物，关关键键是是防防止止外外来来杂菌的污染。杂菌的污染。（2）无菌操作的条件）无菌操作的条件各种器皿必须是无菌的；各种器皿必须是无菌的；各种培养基必须是无菌的；各种培养基必须是无菌的；细菌转移操作的过程必须是无菌的。细菌转移操作的过程必须是无菌的。（3）三种常用灭菌方法的比较）三种常用灭菌方法的比较灭菌方法灭菌方法适用材料或用具适用材料或用具灭菌条件灭菌条件灭菌时间灭菌时间灼烧灭菌灼烧灭菌接种环、接种针接种环、接种针或其他金属用具或其他金属用具在酒精灯火焰的在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧充分燃烧层灼烧直至烧红直至烧红干热灭菌干热灭菌玻璃器皿（吸管、玻璃器皿（吸管、培

17、养皿）和金属培养皿）和金属用具等用具等干热灭菌箱内，干热灭菌箱内，160170加热加热12h高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌培养基等培养基等100kPa，1211530min（4）避免被杂菌污染的方法）避免被杂菌污染的方法注注意意灭灭菌菌操操作作原原则则，灭灭菌菌彻彻底底，降降低低环环境境污污染染几几率率、手手和和实实验服要清洁，减少操作时间，对污染源的改善考虑周到。验服要清洁，减少操作时间，对污染源的改善考虑周到。注注意意微微生生物物生生长长条条件件，如如pH、渗渗透透压压、温温度度等等。细细菌菌喜喜中中性性偏偏碱碱的的环环境境，喜喜蛋蛋白白质质丰丰富富的的营营养养物物质质，喜喜37的的温温度度；而

18、而霉霉菌菌喜喜中中性性偏偏酸酸的的环环境境，喜喜糖糖类类丰丰富富的的营营养养物物质质，喜喜2530的的温度。因此，可以根据不同微生物的温度。因此，可以根据不同微生物的“喜好喜好”来减少污染。来减少污染。3.微生物的纯化培养技术微生物的纯化培养技术（1）原理）原理在培养基上将细菌稀释或分散成在培养基上将细菌稀释或分散成个个细细胞胞，使使其其长长成成单单个个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。（2）两种纯化细菌的方法）两种纯化细菌的方法划线分离法：是通过接种环在琼脂固体培养基表面划线分离法：是通过接种环在琼脂固体培养基表面_的的操操作作，将将聚聚集集的的

19、菌菌种种逐逐步步稀稀释释分分散散到到培培养养基基的的表表面面。（如如下下图所示）图所示）单单连续划线连续划线涂布分离法：是将菌液进行一系列的涂布分离法：是将菌液进行一系列的，取取0.1mL稀稀释释度度不不同同的的菌菌液液，加加在在培培养养皿皿的的固固体体培培养养基基上上，用用玻玻璃璃刮刮刀刀涂涂布布在在培培养养基基平平面面上上，进进行行培培养养。在在适适当当的的稀稀释释度度下下，即即可可获获得相互分开的得相互分开的。系列稀释操作（如下图所示）系列稀释操作（如下图所示）（3）比比较较：划划线线分分离离法法，方方法法简简单单；涂涂布布分分离离法法，单单菌菌落落更更易分开，但操作复杂。易分开，但操作

20、复杂。梯度稀释梯度稀释单菌落单菌落温馨提示温馨提示平板划线操作的注意事项平板划线操作的注意事项（1）操操作作第第一一步步即即取取菌菌液液之之前前及及每每次次划划线线之之前前都都需需要要进进行行灼灼烧烧灭灭菌菌，划划线线操操作作结结束束后后，仍仍需需灼灼烧烧接接种种环环，每每次次灼灼烧烧目目的的如如下表。下表。第一步操作第一步操作 每次划线之前（除第一次）每次划线之前（除第一次）划线结束划线结束目目的的杀死接种环杀死接种环上原有的微上原有的微生物生物杀死上次划线结束后接种杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种。使每次环上残留的菌种。使每次划线的菌种来源于上次划划线的菌种来源于上次划线的末端线的末端

21、杀死接种环上残留的杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染菌种，避免细菌污染环境和感染操作者环境和感染操作者（2）灼灼烧烧接接种种环环之之后后，待待其其冷冷却却后后才才能能伸伸入入菌菌液液，以以免免温温度度太太高杀死高杀死菌菌种。种。（3）第第二二次次及及其其以以后后的的划划线线操操作作总总是是从从上上一一次次划划线线末末端端开开始始，目目的的是是使使细细菌菌的的数数目目随随着着划划线线次次数数的的增增加加而而逐逐渐渐减减少少，最最终终得得到由单个细到由单个细菌繁菌繁殖而来的殖而来的菌落菌落。（4）划）划线时最后一区不要与第一区相连。线时最后一区不要与第一区相连。（5）划）划线用力大小要适线用力大

22、小要适当当，防止用力过大将培养基，防止用力过大将培养基划划破。破。4.大肠杆菌的培养和分离大肠杆菌的培养和分离（1）大肠杆菌）大肠杆菌特性：革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌。特性：革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌。用途：基因工程技术中被广泛采用的工具。用途：基因工程技术中被广泛采用的工具。（2）培养：用）培养：用LB液体培养基扩大培养大肠杆菌。液体培养基扩大培养大肠杆菌。（3）分离：）分离：培养培养基灭菌基灭菌50mLLB液体培养基和液体培养基和50mLLB固体培养基及培固体培养基及培养皿高压蒸汽灭菌（养皿高压蒸汽灭菌（1kg压力灭菌压力灭菌15min）倒平倒平板板灭菌后，将固体培养基分别倒至灭菌

23、后，将固体培养基分别倒至4个灭菌后的培养个灭菌后的培养皿中，每倒入一个培养皿后立即将培养皿置于水平皿中，每倒入一个培养皿后立即将培养皿置于水平位置上，并轻轻晃动，使培养基铺满底部，待凝固位置上，并轻轻晃动，使培养基铺满底部，待凝固后形成平面后形成平面接种接种将菌体放入三角瓶的液体培养基中，三角瓶在将菌体放入三角瓶的液体培养基中，三角瓶在37，每分钟每分钟200转的摇床上振荡培养转的摇床上振荡培养12h划线划线分离分离用接种环在培养了用接种环在培养了12h的菌液中蘸一次，在固体培养的菌液中蘸一次，在固体培养基的平板上连续划线，划线后盖好培养皿基的平板上连续划线，划线后盖好培养皿培养培养观察观察将

24、培养皿倒置（盖在下面），放在将培养皿倒置（盖在下面），放在37恒温培养箱中恒温培养箱中培养培养1224h后，可看到在划线的末端出现不连续的后，可看到在划线的末端出现不连续的单个菌落，表明菌已被分离单个菌落，表明菌已被分离（4）保保存存菌菌种种：在在无无菌菌操操作作下下，用用接接种种环环取取出出单单菌菌落落，用用划划线线法法接接种种在在斜斜面面培培养养基基上上，37培培养养24h后后，置置于于4冰冰箱箱中中保存。保存。加试题组加试题组考点考点2分离以尿素为氮源的微生物分离以尿素为氮源的微生物1.（2016年年10月浙江选考卷）月浙江选考卷）回答下列回答下列问题问题：请请回回答答从从土土壤壤中中分

25、分离离产产脲脲酶酶细细菌菌和和脲脲酶酶固固定定化化实实验验的的有有关关问问题：题：（1）LB固固体体培培养养基基：取取适适量量的的蛋蛋白白胨胨、酵酵母母提提取取物物、NaCl，加入一定量的蒸馏水溶解，再加，加入一定量的蒸馏水溶解，再加，灭菌备用。，灭菌备用。（2）尿尿素素固固体体培培养养基基：先先将将适适宜宜浓浓度度的的尿尿素素溶溶液液用用灭灭 菌菌 过过 的的 G6玻玻 璃璃 砂砂 漏漏 斗斗 过过 滤滤，因因 为为 G6玻玻 璃璃 砂砂 漏漏 斗斗，故故用用于于过过滤滤除除菌菌。然然后后将将尿尿素素溶溶液液加加入入到到已已经经灭灭菌菌的的含含有有酚红的培养基中，备用。酚红的培养基中，备用。

26、（3）取取适适量量含含产产脲脲酶酶细细菌菌的的104、105两两种种土土壤壤稀稀释释液液，分分别别涂涂布布接接种种到到LB固固体体培培养养基基和和尿尿素素固固体体培培养养基基上上，培培养养48h，推测固体培养基上生长的菌落数最少的是推测固体培养基上生长的菌落数最少的是。A.105稀释液尿素固体培养基稀释液尿素固体培养基B.105稀释液稀释液LB固体培养基固体培养基C.101稀释液尿素固体培养基稀释液尿素固体培养基D.104稀释液稀释液LB固体培养基固体培养基在在尿尿素素固固体体培培养养基基上上产产脲脲酶酶细细菌菌菌菌落落周周围围出出现现其其原原因因是细菌产生的脲酶催化尿素分解产生是细菌产生的脲

27、酶催化尿素分解产生所致。所致。（4）制制 备备 固固 定定 化化 脲脲 酶酶 时时，用用 石石 英英 砂砂 吸吸 附附 脲脲 酶酶。装装 柱柱。再再 用用 蒸蒸 馏馏 水水 洗洗 涤涤 固固 定定 化化 酶酶 柱柱，其其 作作 用用 是是_。解解析析此此题题主主要要考考察察培培养养基基、固固定定化化酶酶、植植物物组组织织培培养养等等知知识识。（1）固固体体培培养养基基常常用用琼琼脂脂作作为为凝凝固固剂剂，LB固固体体培培养养基基加加入入一一定定的的蒸蒸馏馏水水后后再再加加琼琼脂脂。（2）对对溶溶液液、培培养养基基等等灭灭菌菌，常常用用的的方方法法是是高高压压蒸蒸汽汽灭灭菌菌；用用G6玻玻璃璃砂

28、砂漏漏斗斗，因因为为G6玻玻璃璃砂砂漏漏斗斗孔孔径径比比细细菌菌小小，达达到到除除菌菌的的目目的的。（3）产产生生脲脲酶酶细细菌菌菌菌落落数数目目多多，需需稀稀释释倍倍数数较较小小，且且使使用用含含有有尿尿素素溶溶液液的的培培养养基基，故故选选A；由由于于脲脲酶酶能能催催化化尿尿素素产产生生NH3，NH3易易溶溶于于水水形形成成具具有有碱碱性性的的氨氨水水，培培养养基基中中含含有有酚酚红红，使使培培养养基基变变成成红红色色环环。（4）在在固固定定化化酶酶过过程程中中，有有部部分分酶酶没没有有被被固固定定在在固固相相载载体体上上，所以所以冲冲洗的目的是除去没有被固定的洗的目的是除去没有被固定的游

29、游离离酶酶。答答案案（1）琼琼脂脂（2）高高压压蒸蒸汽汽孔孔径径小小，细细菌菌不不能能滤滤过过（3）A红色环氨（或红色环氨（或NH3）（）（4）除去游离的脲酶）除去游离的脲酶2.（2017台台州州选选考考模模拟拟）下下图图是是“分分离离以以尿尿素素为为氮氮源源的的微微生生物物”实验实验的基本流程，的基本流程，请请回答下列回答下列问题问题：（1）该实验培养基不能含有）该实验培养基不能含有。A.尿素尿素 B.B.氯化钠氯化钠C.葡萄糖葡萄糖 D.D.琼脂琼脂（2）尿尿素素溶溶液液可可用用使使之之无无菌菌。若若 要要 检检 查查 B过过 程程 灭灭 菌菌 是是 否否 彻彻 底底，可可 以以 采采 用

30、用 的的 方方 法法 是是_。（3）图图中中步步骤骤C为为。相相对对于于划划线线分分离离法法，过过程程D涂布分离法的涂布分离法的优优点是点是。（4）如如果果菌菌落落周周围围出出现现色色环环带带，说说明明该该菌菌落落能能分泌分泌脲脲酶酶。解解析析（1）分分离离以以尿尿素素为为氮氮源源的的微微生生物物，应应该该以以尿尿素素为为唯唯一一氮氮源源，所所以以不不应应有有琼琼脂脂。（2）尿尿素素用用G6玻玻璃璃漏漏斗斗过过滤滤除除去去细细菌菌等等微微生生物物。（4）若若菌菌落落能能分分泌泌脲脲酶酶，则则菌菌落落周周围围会会出出现现红红色环色环带带。答案答案（1）D（2）G6玻玻璃璃漏漏斗斗过过滤滤将将空空

31、白白培培养养基基放放在在适适宜宜温温度度下下培培养养一一段段时间时间，观观察有无菌落出察有无菌落出现现（3）倒平板）倒平板单单菌落更易分开菌落更易分开（4）红红（1）用用琼琼脂脂糖糖代代替替琼琼脂脂配配制制固固体体培培养养基基。琼琼脂脂是是未未被被纯纯化化的的混混合合物物，内内含含一一定定量量的的含含氮氮化化合合物物，不不利利于于以以尿尿素素为为氮氮源源的的细细菌菌的的筛筛选。选。（2）培培养养基基中中的的酸酸碱碱指指示示剂剂产产生生颜颜色色变变化化（变变红红），标标志志着着存存在在脲脲酶酶水水解解尿尿素素的的作作用用，从从而而证证明明这这一一菌菌株株可可以以以以尿尿素素为为氮氮源源。红红色色

32、环环状状区区域域的的大大小小代代表表脲脲酶酶活活性性的的强强弱弱和和含含量量的的多多少少。红色区域越大，表明红色区域越大，表明菌株菌株利用利用尿尿素的能力越素的能力越强强。（3）与全营养培养基上的与全营养培养基上的菌落菌落数比较，数比较，尿尿素培养基上只有少素培养基上只有少数数菌落菌落，这一现象表明能利用，这一现象表明能利用尿尿素的细素的细菌菌在在土壤菌群土壤菌群中只占极中只占极小部分。小部分。备考备查备考备查1.菌种特点：含有脲酶，可以通过降解尿素作为其生长的氮源。菌种特点：含有脲酶，可以通过降解尿素作为其生长的氮源。2.培培养养基基：以以尿尿素素为为唯唯一一氮氮源源的的培培养养基基培培养养

33、，以以LB全全营营养养培培养养基为对照。基为对照。3.实验原理实验原理细细菌菌合合成成的的脲脲酶酶能能将将尿尿素素分分解解产产生生NH3，使使培培养养基基pH升升高高，使酚红指示剂变红。使酚红指示剂变红。4.实验步骤实验步骤5.鉴定鉴定在在配配制制尿尿素素固固体体培培养养基基时时，加加入入指指示示剂剂酚酚红红，培培养养某某种种细细菌菌，若指示剂变红，说明该种细菌能分解尿素。若指示剂变红，说明该种细菌能分解尿素。温馨提示温馨提示实验分析实验分析1.样品稀释样品稀释（1）稀稀释释原原因因：样样品品的的稀稀释释度度直直接接影影响响平平板板上上生生长长的的菌菌落落数数。在在适适当当的的稀稀释释度度下下

34、，培培养养基基表表面面生生长长的的一一个个菌菌落落，来来源源于于样样品品稀稀释释中中的的一一个个活活菌菌。因因此此，恰恰当当的的稀稀释释度度是是成成功功地地统统计计菌落菌落数的关键。数的关键。（2）稀稀释释标标准准：选选用用一一定定范范围围的的样样品品稀稀释释液液进进行行培培养养，保保证获得证获得菌落菌落数在数在30300之间，便于之间，便于计计数。数。2.与涂布平板有关的问题与涂布平板有关的问题（1）平平板板倒倒置置的的目目的的：培培养养基基凝凝固固后后培培养养皿皿盖盖上上会会凝凝结结水水珠珠，凝凝固固后后的的培培养养基基表表面面的的湿湿度度也也比比较较高高，将将平平板板倒倒置置，既既可可以

35、以使使培培养养基基表表面面的的水水分分更更好好地地挥挥发发，又又可可以以防防止止培培养养皿皿盖盖上的水上的水珠落珠落入培养基表面，入培养基表面，造造成成污污染。染。（2）玻玻璃璃刮刮刀刀的的灭灭菌菌：将将保保存存在在体体积积分分数数为为70%的的酒酒精精中中的玻的玻璃刮刀璃刮刀，放在酒精，放在酒精灯火焰灯火焰上上灼灼烧烧，冷却冷却后待用。后待用。3.设计设计对照实验：可排除实验中非对照实验：可排除实验中非测测试因素对实验结果的影响，试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可提高实验结果的可信信度。度。加试题组加试题组考点考点3植物组织培养植物组织培养1.（2016年年10月月浙浙江江选选考考卷卷

36、）某某小小组组欲欲进进行行烟烟草草原原生生质质体体分分离离与培养的研究。与培养的研究。请请回答：回答：（1）原原生生质质体体的的分分离离：在在无无菌菌条条件件下下，取取烟烟草草无无菌菌苗苗的的叶叶片片，放放入入含含有有0.5mol/L甘甘露露醇醇（维维持持较较高高渗渗透透压压）的的混混合合液液处处理理，经经过过离离心心纯纯化化后后获获得得原原生生质质体。体。（2）原原生生质质体体的的培培养养：将将原原生生质质体体进进行行培培养养，重重新新长长出出细细胞胞壁壁，形形成成胚胚性性细细胞胞。此此时时，应应该该培培养养基基中中甘甘露露醇醇的的浓浓度度，以以利利于于胚胚性性细细胞胞继继续续培培养养形形成

37、成细细胞胞团团，然然后后经经两两条条途途径径形形成成再再生生植植株株。途途径径一一：细细胞胞团团经经球球形形胚胚、和和胚胚状状体体，最最后后发发育育成成植植株株。途途径径二二：细细胞胞团团增增殖殖为为愈愈伤伤组组织织，然然后后在在发发芽芽培培养养基基上上诱诱导导出出芽芽、切切割割芽芽经经过过生生根根后后形形成成完完整整植植株株。上上述述发发芽芽培培养养基基中中含含量量相相对对较较高高的的激激素素是是胚胚性性细细胞胞的的主主要要特点是特点是。A.液泡小、细胞核小液泡小、细胞核小 B.B.液泡大、细胞核大液泡大、细胞核大C.液泡大、细胞核小液泡大、细胞核小 D.D.液泡小、细胞核大液泡小、细胞核大

38、（3）为为了了对对烟烟草草的的某某些些性性状状进进行行改改良良，分分离离得得到到两两种种烟烟草草的的原原生生质质体体后后，通通过过方方法法将将它它们们的的遗遗传传物物质质组组合合在在一一起起，经培养获得具有新性状的再生植株。经培养获得具有新性状的再生植株。解解析析（1）去去除除植植物物细细胞胞壁壁，获获得得植植物物细细胞胞的的原原生生质质体体，常常用用的的方方法法是是利利用用纤纤维维素素酶酶和和果果胶胶酶酶处处理理植植物物细细胞胞。（2）在在获获取取原原生生质质体体时时甘甘露露醇醇是是作作为为维维持持细细胞胞膜膜内内外外渗渗透透压压平平衡衡的的稳稳定定剂剂使使用用的的。其其具具体体作作用用是是

39、提提高高渗渗透透压压，防防止止水水分分渗渗入入细细胞胞内内部部，造造成成细细胞胞破破裂裂。在在原原生生质质体体形形成成新新细细胞胞壁壁后后，有有细细胞胞壁壁支支持持与与保保护护作作用用，所所以以要要稀稀释释甘甘露露醇醇的的浓浓度度；从从胚胚性性细细胞胞细细胞胞团团球球形形胚胚心心（星星）形形胚胚胚胚状状体体，然然后后再再生生出出完完整整的的小小植植株株；为为快快速速诱诱导导芽芽的的分分化化，培培养养基基中中往往往往添添加加细细胞胞分分裂裂素素；胚胚性性细细胞胞的的特特点点是是液液泡泡小小、细细胞胞核核大大。（3）植植物物细细胞胞工工程程中中，利利用用原生质体原生质体融融合的方法获得合的方法获得

40、杂杂种细胞。种细胞。答答案案（1）纤纤维维素素酶酶和和果果胶胶酶酶（2）降降低低心心形形胚胚细细胞胞分分裂素裂素D（3）原生）原生质质体融合体融合2.（2015浙浙江江台台州州中中学学测测试试，17）下下图图表表示示菊菊花花的的嫩嫩枝枝和和月月季季的花的花药药离体培养离体培养过过程，程，请请据据图图回答下面的回答下面的问题问题。（1）对对菊菊花花来来说说，要要选选取取的的嫩嫩枝枝来来进进行行组组织织培培养养。对对月月季季来来说说，适适宜宜花花粉粉培培养养的的时时期期是是期期。为为确确定定花花粉粉是否处于该时期，最常用的方法是是否处于该时期，最常用的方法是_。（2）在在培培养养花花粉粉的的培培养

41、养基基中中要要加加入入一一定定的的植植物物激激素素，常常用用的的植物激素有植物激素有。（3）某某同同学学在在培培养养过过程程中中发发现现培培养养基基上上感感染染了了几几种种细细菌菌。若若在在以以尿尿素素为为唯唯一一氮氮源源的的培培养养基基中中加加入入指指示示剂剂培培养养几几种种菌菌后后，指指示示剂剂变变红红就就可可以以鉴鉴定定其其中中含含有有能能够够分分解解尿尿素素的的细细菌菌。为为了了避避免免其其他他微微生生物物对对培培养养造造成成的的影影响响，在在进进行行接接种种时时应应注注意意 。接种室要消毒接种室要消毒只要戴口罩，操作时便可说话只要戴口罩，操作时便可说话外外植植体体可可预预先先用用体体

42、积积分分数数为为70%的的酒酒精精浸浸泡泡，取取出出用用无无菌菌水水冲洗后，再用冲洗后，再用5%次氯酸钠溶液消毒，并用无菌水冲洗干净次氯酸钠溶液消毒，并用无菌水冲洗干净接种操作要在酒精灯火焰旁进行接种操作要在酒精灯火焰旁进行接种完毕应立即盖好瓶盖接种完毕应立即盖好瓶盖A.B.C.D.（4）月月季季的的花花药药培培养养与与菊菊花花的的嫩嫩枝枝组组织织培培养养不不同同，从从植植株株产产生生的的途途径径来来说说，花花粉粉植植株株产产生生的的途途径径除除了了图图中中所所示示外外，还还可可以以通通过过阶阶段段发发育育而而来来，这这两两种种发发育育途途径径的的差差别别主主要要取取决决于于_。（5）不不同同

43、植植物物对对各各种种条条件件的的要要求求往往住住不不同同，进进行行菊菊花花组组织织培培养养一一般般将将温温度度控控制制在在 ，并并且且对对光光照照的的控控制制为为_。解解析析（1）植植物物组组织织培培养养法法获获取取菊菊花花植植株株时时选选用用的的材材料料一一般般是是生生长长旺旺盛盛的的嫩嫩枝枝。月月季季的的花花药药培培养养中中选选择择单单核核期期的的花花药药离离体体培培养养，成成功功率率最最高高。确确定定花花粉粉发发育育期期最最常常用用的的方方法法是是醋醋酸酸洋洋红红法法。（2）在在培培养养花花粉粉的的培培养养基基中中要要加加入入细细胞胞分分裂裂素素和和生生长长素素。（3）在在以以尿尿素素为

44、为唯唯一一氮氮源源的的培培养养基基中中加加入入酚酚红红指指示示剂剂，培培养养某某几几种种细细菌菌后后，如如果果pH升升高高，指指示示剂剂变变红红，可可知知道道其其中中含含有有能能够够分分解解尿尿素素的的细细菌菌。（4）月月季季的的花花药药培培养养与与菊菊花花的的嫩嫩枝枝组组织织培培养养不不同同，从从植植株株产产生生的的途途径径来来说说，花花粉粉植植株株的的产产生生一一般般有有两两种种途途径径：一一是是花花粉粉通通过过胚胚状状体体阶阶段段发发育育为为植植株株；另另一一种种是是花花粉粉在在诱诱导导培培养养基基上上，先先形形成成愈愈伤伤组组织织，再再将将其其诱诱导导分分化化成成植植株株。这这两两种种

45、发发育育途途径径的的差差别别主主要要取取决决于于培培养养基基中中激激素素的的种种类类及及其其浓浓度度配配比。比。答答案案（1）生生长长旺旺盛盛单单核核醋醋酸酸洋洋红红法法（2）细细胞胞分分裂裂素素和和生生长长素素（3）酚酚红红C（4）胚胚状状体体培培养养基基中中激激素素的的种种类类及其及其浓浓度配比（度配比（5）1825每天光照不少于每天光照不少于14.5小小时时备考备查备考备查1.操作流程操作流程 外外植植体体消消毒毒；用用70%的的乙乙醇醇和和5%的的次次氯氯酸酸钠钠溶溶液液对对外外植植体体进进行消毒，注意时间不能太长行消毒，注意时间不能太长接接种种：接接种种过过程程中中插插入入外外植植体

46、体时时形形态态学学上上端端朝朝上上，每每个个锥锥形形瓶瓶接接种种23个个外外植植体体。外外植植体体接接种种与与细细菌菌接接种种相相似似，操操作作步步骤骤相相同，而且都要求无菌操作同，而且都要求无菌操作培培养养：接接种种后后的的锥锥形形瓶瓶应应该该放放在在无无菌菌箱箱中中进进行行培培养养，并并定定期期进进行消毒，保持适宜的温度和光照行消毒，保持适宜的温度和光照移移栽栽：将将生生根根的的苗苗从从锥锥形形瓶瓶中中移移至至草草炭炭土土或或蛭蛭石石中中继继续续生生长长，苗健壮后再移至土中苗健壮后再移至土中栽培栽培2.植物激素与组织培养植物激素与组织培养生生长长素素和和细细胞胞分分裂裂素素是是启启动动细细

47、胞胞分分裂裂、脱脱分分化化和和再再分分化化的的关关键激素，其作用及特点为：键激素，其作用及特点为：（1）在在生生长长素素存存在在的的情情况况下下，细细胞胞分分裂裂素素的的作作用用呈呈现现加加强强的趋势。的趋势。（2）使用顺序不同，结果不同，具体如下。）使用顺序不同，结果不同，具体如下。使用顺序使用顺序实验结果实验结果先使用生长素，后使用细胞分先使用生长素，后使用细胞分裂素裂素有利于细胞分裂，但细胞不有利于细胞分裂，但细胞不分化分化先使用细胞分裂素，后使用生先使用细胞分裂素，后使用生长素长素细胞既分裂又分化细胞既分裂又分化同时使用同时使用分化频率提高分化频率提高（3）用量比例不同，结果也不同：）

48、用量比例不同，结果也不同：1.影响植物组织培养的主要因素影响植物组织培养的主要因素（1）培养材料培养材料不不同同植植物物的的影影响响：不不同同的的植植物物组组织织，培培养养的的难难易易程程度度差差别别很很大，容易进行无性大，容易进行无性繁繁殖的植物也容易进行组织培养。殖的植物也容易进行组织培养。（2）同同一一植植物物发发育育状状况况、保保存存状状况况的的影影响响：同同一一种种植植物物材材料料的的年年龄龄、保保存存时时间间的的长长短短等等对对培培养养也也有有影影响响，幼幼龄龄、保保存存时间短的植物材料容易培养成功。时间短的植物材料容易培养成功。2.无无菌菌条件：培养基上有细条件：培养基上有细菌菌等微生物存在时，它们比植物细等微生物存在时，它们比植物细胞生长、胞生长、繁繁殖得殖得更更快，而且它们会产生快，而且它们会产生毒毒素，使培养的植物素，使培养的植物细胞中细胞中毒毒，因此在培养过程中要，因此在培养过程中要求求进行一系列的消进行一系列的消毒毒、灭灭菌菌，并且要并且要求求无无菌菌操作。操作。