（山东专用）高考生物一轮复习 第十单元 生物技术与工程 第32讲 微生物的培养与应用课件-人教版高三全册生物课件.ppt

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1、第第32讲微生物的培养与应用讲微生物的培养与应用生物技术与工程生物技术与工程（选择性必修（选择性必修3 3）第十单元第十单元等级考等级考(2017级级)课标要求课标要求内容标准内容标准活动要求活动要求1进行微生物的分离与培养。进行微生物的分离与培养。2测定某种微生物的数量。测定某种微生物的数量。3研究培养基对微生物的选择作研究培养基对微生物的选择作用。用。4探讨微生物的利用。探讨微生物的利用。1用大肠杆菌为材料进行平面培用大肠杆菌为材料进行平面培养，分离菌落。养，分离菌落。2分离土壤中分解尿素的细菌，分离土壤中分解尿素的细菌，并进行计数。并进行计数。1培养基培养基考点一微生物的实验室培养考点一

2、微生物的实验室培养 氮源氮源无机盐无机盐液体培养基液体培养基鉴别培养基鉴别培养基pH氧气氧气2无菌技术无菌技术化学药剂消毒法化学药剂消毒法外来杂菌外来杂菌高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌干热灭菌干热灭菌3大肠杆菌的纯化培养大肠杆菌的纯化培养称量称量灭菌灭菌平板划线法平板划线法甘油管藏法甘油管藏法 归纳整合归纳整合 1全面比较消毒和灭菌全面比较消毒和灭菌条件条件结结果果常用方法常用方法应应用范用范围围消毒消毒较为较为温和的温和的物理或化学物理或化学方法方法仅杀仅杀死物体表面或内部死物体表面或内部的部分微生物的部分微生物煮沸消毒法煮沸消毒法日常用品日常用品巴氏消毒法巴氏消毒法不耐高温的液体不耐高温的液体化

3、学化学药剂药剂消消毒法毒法用酒精擦拭双手，用用酒精擦拭双手，用氯氯气消毒水源气消毒水源灭灭菌菌强强烈的烈的理化因素理化因素杀杀死物体内外所有的微死物体内外所有的微生物，包括芽生物，包括芽孢孢和和孢孢子子灼灼烧灭烧灭菌法菌法接种工具接种工具2平板划线法和稀释涂布平板法的比较平板划线法和稀释涂布平板法的比较比比较项较项目目平板划平板划线线法法稀稀释释涂布平板法涂布平板法关关键键操作操作接种接种环环在固体平板培养基表面在固体平板培养基表面连连续续划划线线一系列的梯度稀一系列的梯度稀释释涂布平板法操作涂布平板法操作注意事注意事项项 每次划每次划线线前后均需灼前后均需灼烧烧接种接种环环稀稀释释度要足度要

4、足够够高，高，为为确保确保实验实验成功成功可以增加稀可以增加稀释释度的范度的范围围菌体菌体获获取取在具有在具有显显著的菌落特征的区域菌著的菌落特征的区域菌落中挑取菌体落中挑取菌体从适宜稀从适宜稀释释度的平板上的菌落中挑度的平板上的菌落中挑取菌体取菌体适用范适用范围围 适用于好氧菌适用于好氧菌适用于适用于厌厌氧菌和兼性氧菌和兼性厌厌氧菌氧菌优优点点可以根据菌落的特点可以根据菌落的特点获获得某种微得某种微生物的生物的单细单细胞菌落胞菌落既可以既可以获获得得单细单细胞菌落，又能胞菌落，又能对对微微生物生物计计数数缺点缺点不能不能对对微生物微生物计计数数操作复操作复杂杂，需要涂布多个平板，需要涂布多个

5、平板 思维探究思维探究 如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，请分析：如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，请分析：(1)获得图获得图A效果和图效果和图B效果的接种方法分别是什么？效果的接种方法分别是什么？提提示示：获获得得效效果果A的的接接种种方方法法为为稀稀释释涂涂布布平平板板法法，获获得得效效果果B的的接接种种方方法法为为平平板板划线法。划线法。(2)某某同同学学在在纯纯化化土土壤壤中中的的细细菌菌时时，发发现现培培养养基基上上的的菌菌落落连连成成了了一一片片，最最可可能能的的原因是什么？应当怎样操作才可避免此种现象？原因是什么？应当怎样操作才可避

6、免此种现象？提提示示：最最可可能能的的原原因因是是菌菌液液浓浓度度过过高高或或划划线线时时在在划划下下一一区区域域前前未未将将接接种种环环灼灼烧烧灭菌；采取的措施是增大稀释倍数或每次划新区域前先将接种环灼烧灭菌。灭菌；采取的措施是增大稀释倍数或每次划新区域前先将接种环灼烧灭菌。(3)接种操作为什么一定要在火焰附近进行？接种操作为什么一定要在火焰附近进行？提示：提示：火焰附近存在着无菌区域。火焰附近存在着无菌区域。教材深挖教材深挖 1教材选修教材选修1P17“倒平板操作讨论倒平板操作讨论”：平板冷凝后，为什么要将平板倒置？：平板冷凝后，为什么要将平板倒置？提提示示：平平板板冷冷凝凝后后，皿皿盖盖

7、上上会会凝凝结结水水珠珠，凝凝固固后后的的培培养养基基表表面面的的湿湿度度也也比比较较高高，将将平平板板倒倒置置，既既可可以以使使培培养养基基表表面面的的水水分分更更好好地地挥挥发发，又又可可以以防防止止皿皿盖盖上上的的水水珠珠落落入培养基，造成污染。入培养基，造成污染。2教教材材选选修修1P18“旁旁栏栏小小资资料料”：微微生生物物的的接接种种方方法法只只有有平平板板划划线线法法和和稀稀释释涂涂布平板法吗？微生物接种的核心是什么？布平板法吗？微生物接种的核心是什么？提提示示：不不是是。微微生生物物的的接接种种方方法法还还包包括括斜斜面面接接种种、穿穿刺刺接接种种等等，其其核核心心是是防防止止

8、杂菌污染，保证培养物的纯度。杂菌污染，保证培养物的纯度。命题点一微生物的培养基及无菌技术命题点一微生物的培养基及无菌技术1(2019河河南南郑郑州州一一中中期期中中改改编编)如如表表所所示示为为某某培培养养基基的的配配方方，下下列列叙叙述述错错误误的是的是()成分成分NaNO3K2HPO4MgSO47H2O(CH2O)蒸蒸馏馏水水青霉素青霉素含量含量3 g1 g0.5 g30 g定容至定容至1 000 mL0.1万万单单位位A根据物理性质划分，该培养基属于液体培养基根据物理性质划分，该培养基属于液体培养基B根据用途划分，该培养基属于选择培养基根据用途划分，该培养基属于选择培养基C根据培养基的配

9、方可知，该培养基培养的微生物的同化作用类型是异养型根据培养基的配方可知，该培养基培养的微生物的同化作用类型是异养型D固体培养基中加入少量水即可形成液体培养基固体培养基中加入少量水即可形成液体培养基答案答案D解解析析固固体体培培养养基基和和液液体体培培养养基基的的区区别别在在于于是是否否加加入入凝凝固固剂剂(如如琼琼脂脂)，如如表表所所示示的的培培养养基基配配方方中中没没有有琼琼脂脂，因因此此属属于于液液体体培培养养基基，A A正正确确、D D错错误误；加加入入青青霉霉素素可可分分离离得得到到酵酵母母菌菌和和霉霉菌菌，因因此此该该培培养养基基属属于于选选择择培培养养基基，B B正正确确；该该培培

10、养养基基中中的的(CHO)(CHO)可作为有机碳源，因此其培养的微生物的同化作用类型是异养型，可作为有机碳源，因此其培养的微生物的同化作用类型是异养型，C C正确。正确。2(2018全全国国卷卷，T37)在在生生产产、生生活活和和科科研研实实践践中中，经经常常通通过过消消毒毒和和灭灭菌菌来来避免杂菌的污染。避免杂菌的污染。回答下列问题：回答下列问题：(1)在在实实验验室室中中，玻玻璃璃和和金金属属材材质质的的实实验验器器具具_(填填“可可以以”或或“不不可可以以”)放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。(2)牛牛奶奶的的消消毒毒常常采采用用巴巴氏氏消消毒毒法法或或高高温温

11、瞬瞬时时消消毒毒法法，与与煮煮沸沸消消毒毒法法相相比比，这这两两种方法的优点是种方法的优点是_。可以可以在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少(3)密密闭闭空空间间内内的的空空气气可可采采用用紫紫外外线线照照射射消消毒毒，其其原原因因是是紫紫外外线线能能_ _。在照射前，适量喷洒。在照射前，适量喷洒_，可强化消毒效果。，可强化消毒效果。(4)水水厂厂供供应应的的自自来来水水通通常常是是经经过过_(填填“氯氯气气”“乙乙醇醇”或或“高高锰锰酸酸钾钾”)消毒的。消毒的。(5)某某同同学学在在使使用用高高压压蒸蒸汽汽灭灭菌菌锅锅时时，若若压压力力达达到到设设定定

12、要要求求，而而锅锅内内并并没没有有达达到到相应温度，最可能的原因是相应温度，最可能的原因是_。破坏破坏DNA结构结构消毒液消毒液氯气氯气未将锅内冷空气排尽未将锅内冷空气排尽 解解析析(1)干干热热灭灭菌菌是是指指将将物物品品放放入入干干热热灭灭菌菌箱箱内内，在在160170 条条件件下下加加热热12 h。耐耐高高温温、需需要要保保持持干干燥燥的的物物品品，如如玻玻璃璃器器皿皿(吸吸管管、培培养养皿皿)和和金金属属用用具具等等，可采用干热灭菌的方法。可采用干热灭菌的方法。(2)巴巴氏氏消消毒毒法法是是在在7075 条条件件下下煮煮30 min或或在在80 条条件件下下煮煮15 min，可可以以杀

13、死牛奶中的微生物，并且使牛奶的营养物质损失较少。杀死牛奶中的微生物，并且使牛奶的营养物质损失较少。(3)接接种种室室、接接种种箱箱或或超超净净工工作作台台在在使使用用前前，可可以以用用紫紫外外线线照照射射30 min，紫紫外外线线能能破破坏坏微微生生物物的的DNA结结构构，以以杀杀死死物物体体表表面面或或空空气气中中的的微微生生物物。在在照照射射前前，适适量量喷喷洒石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液，可以强化消毒效果。洒石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液，可以强化消毒效果。(4)自来水通常是用氯气进行消毒的。自来水通常是用氯气进行消毒的。(5)在在使使用用高高压压蒸蒸汽汽灭灭菌菌锅锅时时，若若压压力力达达到到

14、设设定定要要求求，而而锅锅内内并并没没有有达达到到相相应应温温度，最可能的原因是锅内原有的冷空气没有排尽。度，最可能的原因是锅内原有的冷空气没有排尽。3(2019安安徽徽宣宣城城调调研研)高高温温淀淀粉粉酶酶在在大大规规模模工工业业生生产产中中有有很很大大的的实实用用性性。研研究究者者从从热热泉泉中中筛筛选选出出了了能能高高效效生生产产高高温温淀淀粉粉酶酶的的嗜嗜热热菌菌，其其筛筛选选过过程程如如下下图图所所示示。请据图回答下列问题：请据图回答下列问题：(1)号号培培养养基基从从物物理理状状态态来来看看，属属于于固固体体培培养养基基，配配制制时时要要加加入入_作作为凝固剂，从用途来看属于选择培

15、养基，应以为凝固剂，从用途来看属于选择培养基，应以_作为唯一碳源。作为唯一碳源。(2)配制固体培养基的基本步骤是配制固体培养基的基本步骤是()A计算、称量、倒平板、溶化、灭菌计算、称量、倒平板、溶化、灭菌B计算、称量、溶化、倒平板、灭菌计算、称量、溶化、倒平板、灭菌C计算、称量、溶化、灭菌、倒平板计算、称量、溶化、灭菌、倒平板D计算、称量、灭菌、溶化、倒平板计算、称量、灭菌、溶化、倒平板琼脂琼脂淀粉淀粉C(3)溶溶化化时时，烧烧杯杯中中加加入入琼琼脂脂后后要要不不停停地地_，防防止止琼琼脂脂糊糊底底引引起起烧烧杯破裂。对培养基灭菌的方法一般为杯破裂。对培养基灭菌的方法一般为_。(4)过程是过程

16、是_，过程所使用的接种方法是过程所使用的接种方法是_法。法。(5)部部分分嗜嗜热热菌菌在在号号培培养养基基上上生生长长时时可可释释放放_分分解解培培养养基基中中的的淀淀粉粉，在在菌菌落落周周围围形形成成透透明明圈圈，挑挑选选相相应应的的菌菌落落，接接种种到到 号号培培养养基基进进一一步步分分离离纯纯化化后后，再对菌种进行再对菌种进行_培养。培养。搅拌搅拌高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌稀释稀释涂布平板涂布平板淀粉酶淀粉酶扩大扩大 解解析析(1)固固体体培培养养基基通通常常加加入入琼琼脂脂作作为为凝凝固固剂剂。本本实实验验的的目目的的是是获获得得产产生生高高温温淀淀粉粉酶酶的的嗜嗜热热菌菌，故故其其选选

17、择择培培养养基基中中应应以以淀淀粉粉作作为为唯唯一一碳碳源源。(2)配配制制固固体体培培养养基基的的基基本本步步骤骤是是计计算算、称称量量、溶溶化化、灭灭菌菌、倒倒平平板板。(3)配配制制培培养养基基加加热热溶溶化化时时，要要注注意意加加入入琼琼脂脂后后要要不不断断搅搅拌拌，防防止止琼琼脂脂糊糊底底。对对培培养养基基的的灭灭菌菌一一般般采采用用高高压压蒸蒸汽汽灭灭菌菌法法。(4)仔仔细细观观察察题题图图可可知知过过程程是是菌菌液液稀稀释释过过程程，过过程程是是采采用用涂涂布布平平板板法法接接种种。(5)能能产产生生淀淀粉粉酶酶的的部部分分细细菌菌能能分分解解利利用用淀淀粉粉，其其菌菌落落周周围

18、围会会出出现现透透明明圈圈，取取这这样样的的菌菌落落再分离纯化可获得相应菌种，以后可以对菌种进行扩大培养用于生产。再分离纯化可获得相应菌种，以后可以对菌种进行扩大培养用于生产。命题点二微生物的培养与纯化命题点二微生物的培养与纯化4(2019四四川川资资阳阳期期中中)平平板板划划线线法法和和稀稀释释涂涂布布平平板板法法是是常常用用的的两两种种接接种种方方法法。下列相关叙述下列相关叙述错误错误的是的是()A平平板板划划线线法法要要求求在在培培养养基基表表面面连连续续划划线线，且且除除第第一一次次划划线线外外，每每一一次次划划线线的起点都是上一次划的起点都是上一次划线线的的终终点点B除除第第一一次次

19、划划线线前前需需要要将将接接种种环环灼灼烧烧灭灭菌菌外外，以以后后的的划划线线可可以以不不用用灭灭菌菌即即可可划划线线C如果菌液本来如果菌液本来浓浓度不高，度不高，则则可以适当降低稀可以适当降低稀释释倍数倍数D“充分稀充分稀释释”和和“连续连续划划线线”的目的都是的目的都是获获得由得由单单一一细细胞繁殖而成的菌落胞繁殖而成的菌落B解解析析在在平平板板划划线线法法中中，连连续续划划线线的的目目的的是是使使菌菌种种的的浓浓度度降降低低，所所以以除除第第一一次次划划线线外外，以以后后的的每每一一次次划划线线的的起起点点都都是是上上一一次次划划线线的的终终点点，A A正正确确。将将接接种种环环灼灼烧烧

20、灭灭菌菌并并冷冷却却后后沾沾取取菌菌液液进进行行第第一一次次划划线线，以以后后的的每每一一次次划划线线前前都都要要将将接接种种环环进进行行灼灼烧烧灭灭菌菌，B B错错误误。稀稀释释倍倍数数要要随随菌菌液液的的浓浓度度而而定定，如如果果菌菌液液的的浓浓度度过过高高，则则需需要要更更高高的的稀稀释释倍倍数数，否否则则就就可可以以适适当当降降低低稀稀释释的的倍倍数数，C C正正确确。稀稀释释涂涂布布平平板板法法中中的的“充充分分稀稀释释”及及平平板板划划线线法法中中的的“连连续续划划线线”，目目的的都都是是获获得得由由单单个个细细胞胞繁繁殖殖而而成成的的菌落，菌落，D D正确。正确。5为为了了调调查

21、查某某河河流流的的水水质质状状况况，某某研研究究小小组组测测定定了了该该河河流流水水样样中中的的细细菌菌含含量量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题：并进行了细菌分离等工作。回答下列问题：(1)该该小小组组采采用用稀稀释释涂涂布布平平板板法法检检测测水水样样中中细细菌菌含含量量。在在涂涂布布接接种种前前，随随机机取取若若干干灭灭菌菌后后的的空空白白平平板板先先行行培培养养了了一一段段时时间间，这这样样做做的的目目的的是是_ _；然然后后，将将1mL水水样样稀稀释释100倍倍，在在3个个平平板板上上用用涂涂布布法法分分别别接接入入0.1mL稀稀释释液液；经经适适当当培培养养后后，3个个平平板板

22、上上的的菌菌落落数数分分别别为为39、38和和37，据据此此可可得得出出每升水样中的活菌数为每升水样中的活菌数为_。(2)该该小小组组采采用用平平板板划划线线法法分分离离水水样样中中的的细细菌菌，操操作作时时，接接种种环环通通过过_灭灭菌菌，在在第第二二次次及及以以后后的的划划线线时时，总总是是从从上上一一次次划划线线的的末末端端开开始始划划线线，这这样样做做的的目目的的是是_。检测培养基平板检测培养基平板无菌是否合格无菌是否合格3.8107灼烧灼烧将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落(3)该该小小组组将将得得到到的的菌菌株株接接种种到到液液体体培培养养基基

23、中中并并混混匀匀，一一部部分分进进行行静静置置培培养养，另另一一部部分分进进行行振振荡荡培培养养，结结果果发发现现：振振荡荡培培养养的的细细菌菌比比静静置置培培养养的的细细菌菌生生长长速速度度快快。分分析析其其原原因因是是：振振荡荡培培养养能能提提高高培培养养液液中中_的的含含量量，同同时时可可使使菌菌体体与与培培养养液充分接触，提高液充分接触，提高_的利用率。的利用率。溶解氧溶解氧营养物质营养物质解解析析(1)为为了了确确定定培培养养基基的的灭灭菌菌是是否否合合格格，通通过过随随机机取取若若干干灭灭菌菌后后的的空空平平板板培培养养一一段段时时间间，观观察察培培养养基基上上是是否否有有菌菌落落

24、生生成成，用用来来进进行行对对照照。三三个个培培养养基基上上平平均均数数为为38，所所以以每每升升水水样样中中活活菌菌数数为为381010010003.8107。(2)接接种种环环用用灼灼烧烧进进行行灭灭菌菌。在在第第二二次次及及以以后后划划线线时时，总总是是从从上上一一次次的的末末端端开开始始划划线线，这这样样做做的的目目的的是是：通通过过划划线线次次数数的的增增加加，使使每每次次划划线线时时菌菌体体的的数数目目逐逐渐渐减减少少，以以便便得得到到菌菌落落。(3)震震荡荡培培养养可可以以增增加加液液体体培培养养基基的的氧氧气气含含量量，促促进进好好氧氧型型微微生生物物的的生生长长；同同时时还还

25、能能使使菌菌体体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率。与培养液充分接触，提高营养物质的利用率。6(2019湖湖南南永永州州模模拟拟)某某研研究究小小组组为为了了调调查查湘湘江江永永州州段段河河流流的的水水质质状状况况，测测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题：定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题：(1)在样品稀释和涂布平板步骤中，下列选项不需要的是在样品稀释和涂布平板步骤中，下列选项不需要的是_(填序号填序号)。酒精灯酒精灯培养皿培养皿显微镜显微镜无菌水无菌水(2)在在涂涂布布平平板板时时，滴滴加加到到培培养养基基表表面面的的菌菌悬悬液

26、液量量不不宜宜过过多多的的原原因因是是_ _。(3)向向试试管管内内分分装装含含琼琼脂脂的的培培养养基基时时，若若试试管管口口粘粘附附有有培培养养基基，需需要要用用酒酒精精棉棉球球擦净的原因是擦净的原因是_。培培养养基基表表面的菌面的菌悬悬液会出液会出现积现积液，液，导导致菌体堆致菌体堆积积，影响分离效果，影响分离效果 避免培养基污染棉塞避免培养基污染棉塞(4)该该小小组组采采用用稀稀释释涂涂布布平平板板法法检检测测水水样样中中细细菌菌含含量量。在在涂涂布布接接种种前前，随随机机取取若若干干灭灭菌菌后后的的空空白白平平板板先先行行培培养养了了一一段段时时间间，这这样样做做的的目目的的是是_ _

27、。(5)该该小小组组采采用用平平板板划划线线法法分分离离水水样样中中的的细细菌菌。操操作作时时，接接种种环环通通过过_灭灭菌菌，在在微微生生物物的的培培养养中中，一一般般要要对对配配制制的的培培养养基基采采用用高高压压蒸蒸汽汽灭灭菌菌，其其 中中“高高 压压”是是 为为 了了 _ _。(6)该该小小组组将将得得到到的的菌菌株株接接种种到到液液体体培培养养基基中中并并混混匀匀，一一部部分分进进行行静静置置培培养养，另另一一部部分分进进行行振振荡荡培培养养。结结果果发发现现：振振荡荡培培养养的的细细菌菌比比静静置置培培养养的的细细菌菌生生长长速速度度快快，原原因因是是_ _。检测培养基平板灭菌检测

28、培养基平板灭菌 是否合格是否合格 灼烧灼烧 杀杀死死培培养养基基中中的的细细菌菌芽芽孢孢(微微生生物物的的芽芽孢孢耐耐受受性性强强，高高压压可以可以杀杀死培养基中的死培养基中的细细菌芽菌芽孢孢)振振荡荡培培养养能能提提高高培培养养液液中中溶溶解解氧氧的的含含量量，同同时时可可使使菌菌体体与与培培养养液液充充分分接接触触，提高提高营营养物养物质质的利用率的利用率 解解析析(1)在在样样品品稀稀释释和和涂涂布布平平板板步步骤骤中中，需需要要使使用用酒酒精精灯灯、培培养养皿皿、移移液液管管、无无菌菌水水等等，但但不不需需要要显显微微镜镜。(2)在在涂涂布布平平板板时时，若若滴滴加加到到培培养养基基表

29、表面面的的菌菌液液量量过过多多，则则会会导导致致菌菌体体堆堆积积，影影响响分分离离效效果果，因因此此在在涂涂布布平平板板时时，滴滴加加到到培培养养基基表表面面的的菌菌悬悬液液量量不不宜宜过过多多。(3)试试管管内内分分装装含含琼琼脂脂的的培培养养基基时时，若若试试管管口口粘粘附附有有培培养养基基，为为了了防防止止培培养养基基污污染染棉棉塞塞，应应该该用用酒酒精精棉棉球球将将其其擦擦净净。(4)微微生生物物培培养养过过程程应应该该进进行行无无菌菌操操作作，配配制制的的培培养养基基需需要要进进行行高高压压蒸蒸汽汽灭灭菌菌，可可以以将将灭灭菌菌后后的的空空白白平平板板进进行行培培养养以以检检测测培培

30、养养基基灭灭菌菌是是否否彻彻底底。(5)利利用用平平板板划划线线法法分分离离细细菌菌时时，接接种种环环应应该该灼灼烧烧灭灭菌菌，培培养养基基应应该该利利用用高高压压蒸蒸汽汽灭灭菌菌法法灭灭菌菌，其其中中高高压压是是为为了了杀杀死死培培养养基基中中的的细细菌菌芽芽孢孢。(6)振振荡荡培培养养能能提提高高培培养养液液中中溶溶解解氧氧的的含含量量，同同时时可可使使菌菌体体与与培培养养液液充充分分接接触，提高营养物质的利用率，所以振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。触，提高营养物质的利用率，所以振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。1筛选菌株筛选菌株考点二微生物的筛选和计数考点二微生物的筛选

31、和计数(1)自然界中目的菌株的自然界中目的菌株的筛选筛选依据：根据目的菌株依据：根据目的菌株对对_的要求，到相的要求，到相应环应环境中去境中去寻寻找。找。实实例例：PCR技技术术中中用用到到的的耐耐高高温温的的，Taq DNA聚聚合合酶酶就就是是从从热热泉泉中中筛筛选选出出来来的的Taq细细菌中分离出来的。菌中分离出来的。生存环境生存环境(2)实验室中目的菌株的筛选实验室中目的菌株的筛选原原理理：人人为为提提供供有有利利于于_生生长长的的条条件件(包包括括营营养养、温温度度、pH等等)，同同时时_其他微生物的生长。其他微生物的生长。方法：利用方法：利用_培养基分离。培养基分离。a选选择择培培养

32、养基基：允允许许_种种类类的的微微生生物物生生长长，同同时时_其其他他种种类类微微生物生长的培养基。生物生长的培养基。b实实例例：选选择择分分解解尿尿素素的的细细菌菌的的培培养养基基，以以_作作为为唯唯一一氮氮源源，只只有有能能合合成成_的微生物才能分解尿素。的微生物才能分解尿素。目的菌株目的菌株 抑制或阻止抑制或阻止 选择选择 特定特定 阻止或抑制阻止或抑制 尿素尿素 脲酶脲酶 2统计菌落数目统计菌落数目稀释涂布平板稀释涂布平板 稀释度稀释度 活菌活菌 菌落数菌落数 计算公式：每克样品中的菌株数计算公式：每克样品中的菌株数_。C代表某一稀释度下平板上生长的代表某一稀释度下平板上生长的_。V代

33、表涂布平板时所用的稀释液的代表涂布平板时所用的稀释液的_。M代表代表_。计数原则：一般选择菌落数在计数原则：一般选择菌落数在_的平板进行计数。的平板进行计数。结结果果分分析析：统统计计的的菌菌落落数数往往往往比比活活菌菌的的实实际际数数目目_。原原因因是是当当两两个个或或多多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是个细胞连在一起时，平板上观察到的只是_。(2)其他方法：利用其他方法：利用_直接计数。直接计数。(CV)M平均菌落数平均菌落数 体积体积 稀释倍数稀释倍数 30300 低低 一个菌落一个菌落 显微镜显微镜 3土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(1)实验设计实

34、验设计土壤取样土壤取样富含有机质的土壤富含有机质的土壤_上上样品的稀释样品的稀释接种接种用用_法接种法接种表层表层 30300 通常通常选选用一定稀用一定稀释释范范围围的的样样品液品液进进行培养，以保行培养，以保证获证获得菌落数在得菌落数在_之之间间、适于、适于计计数的平板数的平板稀释涂布平板稀释涂布平板 观察观察根据菌落的特征区分微生物根据菌落的特征区分微生物计计数数：当当菌菌落落数数目目_时时，取取同同一一_下下的的3个个平平板板进进行行计计数数，求求出出_，并根据所对应的，并根据所对应的_计算出样品中细菌的数目。计算出样品中细菌的数目。3037 57 2528 34 稳定稳定 稀释度稀释

35、度 平均值平均值 稀释度稀释度(2)菌种鉴定菌种鉴定原理原理分解尿素的分解尿素的细细菌菌CO(NH2)2H2O CO2_脲酶脲酶 2NH3酚酚红红指示指示剂剂变变_色色 红红方法方法在在以以_为为唯唯一一氮氮源源的的培培养养基基中中加加入入_指指示示剂剂培培养养分分解解尿尿素素的的细细菌菌。若指示若指示剂变剂变_，可确定，可确定该该种种细细菌能菌能够够分解尿素。分解尿素。尿素尿素 酚红酚红 红红 归纳整合归纳整合 1微生物的筛选方法：微生物的筛选方法：单单菌落挑取菌落挑取法法利用平板划利用平板划线线法或稀法或稀释释涂布平板法接种到固体平板培养基涂布平板法接种到固体平板培养基表面，直接根据微生物

36、菌落的特征利用表面，直接根据微生物菌落的特征利用单单菌落挑取的方法菌落挑取的方法获获得目的微生物得目的微生物选择选择培养法培养法利用利用选择选择培养基培养基对对微生物微生物进进行行选择选择培养，直接培养，直接获获得目的微得目的微生物生物鉴鉴定培养法定培养法利用利用鉴别鉴别培养基使目的微生物菌落呈培养基使目的微生物菌落呈现现特有的特征，然后特有的特征，然后筛选筛选目的微生物目的微生物2.两种计数方法的比较两种计数方法的比较比比较项较项目目间间接接计计数法数法(稀稀释释涂布平板法涂布平板法)直接直接计计数法数法(显显微微计计数法数法)原理原理当当样样品的稀品的稀释释度足度足够够高高时时，培养基表面

37、生，培养基表面生长长的一个菌落来源于的一个菌落来源于样样品稀品稀释释液中的一个活菌，液中的一个活菌，通通过统计过统计平板上的菌落数，就能推平板上的菌落数，就能推测测出出样样品品中大中大约约含有多少活菌含有多少活菌利用特定利用特定细细菌菌计计数板或血数板或血细细胞胞计计数数板，在板，在显显微微镜镜下下计计算一定体算一定体积积的的样样品中微生物的数量品中微生物的数量公式公式每克每克样样品中的菌落数：品中的菌落数：(CV)MC：某稀：某稀释释度下平板上生度下平板上生长长的平均菌落数；的平均菌落数；V：涂布平板：涂布平板时时所用的稀所用的稀释释液的体液的体积积(mL)；M：稀：稀释释倍数倍数每毫升原液

38、所含每毫升原液所含细细菌数：每小格平菌数：每小格平均均细细菌数菌数40010 000稀稀释释倍数倍数缺点缺点当两个或多个菌体当两个或多个菌体连连在一起在一起时时，平板上，平板上观观察察到的只是一个菌落到的只是一个菌落不能区分不能区分细细胞死活胞死活结结果果比比实际值实际值偏小偏小比比实际值实际值偏大偏大 思维探究思维探究(1)利利用用活活菌菌计计数数法法进进行行实实验验操操作作时时，常常常常将将同同一一浓浓度度稀稀释释液液接接种种三三个个平平板板，分分析这样做的目的。析这样做的目的。提提示示：该该做做法法是是设设置置重重复复实实验验，目目的的是是增增强强实实验验的的说说服服力力和和准准确确性性

39、。将将同同一一稀稀释释度度的的稀稀释释液液接接种种三三个个平平板板，经经涂涂布布、培培养养，计计算算出出菌菌落落平平均均数数，可可使使结结果果更更接接近近真实值。真实值。(2)根据微生物的计数原则，判断样品稀释是否成功的依据是什么？根据微生物的计数原则，判断样品稀释是否成功的依据是什么？提提示示：若若实实验验得得到到了了2个个或或2个个以以上上菌菌落落数数目目在在30300之之间间的的平平板板，则则说说明明稀稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数。释操作比较成功，并能够进行菌落的计数。教材深挖教材深挖 1教材教材P22“选择菌落数在选择菌落数在30300的平板的平板”的两个思考：的两个思考：(

40、1)只得到只得到1个菌落数在个菌落数在30300的平板是错误的，原因是什么？的平板是错误的，原因是什么？提示：提示：不符合实验的重复原则，易受到偶然因素的影响。不符合实验的重复原则，易受到偶然因素的影响。(2)得到得到3个或个或3个以上菌落数在个以上菌落数在30300的平板，一定正确吗？为什么？的平板，一定正确吗？为什么？提提示示：不不一一定定正正确确，原原因因是是如如果果不不同同平平板板间间差差异异较较大大，如如得得到到3个个平平板板，菌菌落落数数分分别别为为230、34、240，虽虽然然菌菌落落数数均均在在30300，但但由由于于34与与另另外外两两个个平平板板菌菌落落数差异较大，应找出原

41、因并重新实验。数差异较大，应找出原因并重新实验。2教教材材P23右右上上角角相相关关信信息息：如如何何设设置置对对照照实实验验证证明明培培养养基基未未被被污污染染？如如何何设设置对照实验证明选择培养基具有选择作用？置对照实验证明选择培养基具有选择作用？提提示示：证证明明培培养养基基未未被被污污染染，需需要要用用空空白白培培养养基基作作对对照照。以以全全营营养养培培养养基基为为对对照，进行与选择培养基同样的接种、培养过程，来证明选择培养基的选择作用。照，进行与选择培养基同样的接种、培养过程，来证明选择培养基的选择作用。1(2019山西大同月考山西大同月考)分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求

42、是分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是()注：注：“”表示加入，表示加入，“”表示不加。表示不加。命题点一尿素分解菌的筛选命题点一尿素分解菌的筛选 选项选项尿素尿素琼琼脂脂葡萄糖葡萄糖硝酸硝酸盐盐ABCDC解解析析分分离离土土壤壤中中分分解解尿尿素素的的细细菌菌，培培养养基基中中要要有有碳碳源源，且且尿尿素素作作为为唯唯一一的的氮氮源，故不能添加硝酸盐。源，故不能添加硝酸盐。2(2017全全国国卷卷，T37)某某些些土土壤壤细细菌菌可可将将尿尿素素分分解解成成CO2和和NH3，供供植植物物吸吸收和利用。回答下列问题：收和利用。回答下列问题：(1)有有些些细细菌菌能能分分解解尿尿素素，有有

43、些些细细菌菌则则不不能能，原原因因是是前前者者能能产产生生_。能能分分解解尿尿素素的的细细菌菌不不能能以以尿尿素素的的分分解解产产物物CO2作作为为碳碳源源，原原因因是是_ _。但但可可用用葡葡萄萄糖糖作作为为碳碳源源，进进入入细细菌菌体体内内的的葡葡萄萄糖糖的的主主要要作作用用是是_ _(答出两点即可答出两点即可)。脲酶脲酶分分解解尿尿素素的的细细菌菌是异养生物，不能利用是异养生物，不能利用CO2来合成有机物来合成有机物为为细细胞胞生生命命活活动动提供能量，提供能量，为为其他有机物的合成提供原料其他有机物的合成提供原料(2)为为了了筛筛选选可可分分解解尿尿素素的的细细菌菌，在在配配制制培培养

44、养基基时时，应应选选择择_(填填“尿尿素素”“NH4NO3”或或“尿尿 素素 NH4NO3”)作作 为为 氮氮 源源，不不 选选 择择 其其 他他 两两 组组 的的 原原 因因 是是_。(3)用用来来筛筛选选分分解解尿尿素素细细菌菌的的培培养养基基含含有有KH2PO4和和Na2HPO4，其其作作用用有有_(答答出出两两点点即可即可)。尿素尿素 其其他他两两组组都都含含有有NH4NO3，能能分分解解尿尿素素的的细细菌菌和和不不能能分分解解尿尿素素的的细细菌菌都都能能利利用用NH4NO3，不能起到，不能起到筛选筛选作用作用为细菌生长提供无机营养，作为缓冲剂保持细胞生长过程中为细菌生长提供无机营养，

45、作为缓冲剂保持细胞生长过程中pH稳定稳定 解解析析(1)有有些些细细菌菌能能分分解解尿尿素素是是因因为为这这些些细细菌菌能能产产生生脲脲酶酶，将将尿尿素素分分解解成成CO2和和NH3。能能分分解解尿尿素素的的细细菌菌是是异异养养生生物物，不不能能利利用用CO2作作为为碳碳源源合合成成有有机机物物，但但这这些些细细菌菌可可用用葡葡萄萄糖糖作作为为碳碳源源，进进入入细细菌菌体体内内的的葡葡萄萄糖糖的的主主要要作作用用是是：作作为为能能源源物物质质氧化分解为细胞生命活动提供能量，为其他有机物的合成提供原料。氧化分解为细胞生命活动提供能量，为其他有机物的合成提供原料。(2)为为了了筛筛选选可可分分解解

46、尿尿素素的的细细菌菌，在在配配制制培培养养基基时时，应应选选择择尿尿素素作作为为唯唯一一氮氮源源，这这样样只只有有能能分分解解尿尿素素的的细细菌菌才才能能在在培培养养基基上上生生存存。若若选选择择“NH4NO3”或或“尿尿素素NH4NO3”作作为为氮氮源源，能能分分解解尿尿素素的的细细菌菌和和不不能能分分解解尿尿素素的的细细菌菌都都能能利利用用NH4NO3，不不能起到筛选作用。能起到筛选作用。(3)用用来来筛筛选选分分解解尿尿素素细细菌菌的的培培养养基基含含有有KH2PO4和和Na2HPO4，它它们们可可以以为为细细菌菌生生长长提提供供无无机机营营养养；同同时时，KH2PO4和和Na2HPO4

47、还还可可以以作作为为缓缓冲冲剂剂保保持持细细胞胞生生长长过过程中程中pH稳定。稳定。3(2019河河北北衡衡水水中中学学月月考考)用用稀稀释释涂涂布布平平板板法法测测定定某某一一土土壤壤样样品品中中的的细细菌菌数数，在对应稀释倍数为在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是()A涂布了涂布了1个平板，统计的菌落数是个平板，统计的菌落数是230B涂布了涂布了2个平板，统计的菌落数是个平板，统计的菌落数是215和和260，取平均值，取平均值238C涂布了涂布了3个平板，统计的菌落数分别是个平板，统计的菌落数分别是21、212和和256

48、，取平均值，取平均值163D涂布了涂布了3个平板，统计的菌落数分别是个平板，统计的菌落数分别是212、240和和250，取平均值，取平均值234D命题点二菌落数目的统计命题点二菌落数目的统计解解析析在在设设计计实实验验时时，一一定定要要涂涂布布至至少少3 3个个平平板板作作为为重重复复组组，才才能能增增强强实实验验的的说说服服力力与与准准确确性性，A A、B B错错误误。C C项项虽虽然然涂涂布布了了3 3个个平平板板，但但是是，其其中中1 1个个平平板板的的计计数数结结果果与与其其他他的的相相差差太太远远，说说明明在在操操作作过过程程中中可可能能出出现现了了错错误误，此此时时，不不能能简简单

49、单地地用用3 3个平板的计数值来求平均值。个平板的计数值来求平均值。4自自然然界界中中的的微微生生物物往往往往是是混混杂杂生生长长的的。人人们们在在研研究究微微生生物物时时一一般般要要将将它它们们分分离离提提纯纯，然然后后进进行行数数量量测测定定。下下面面是是对对某某水水样样中中大大肠肠杆杆菌菌进进行行数数量量测测定定的的实实验验，请回答有关问题。请回答有关问题。步骤：步骤：制备稀释倍数为制备稀释倍数为102、103、104、105、106的系列稀释液；的系列稀释液；用稀释涂布平板法接种样品；用稀释涂布平板法接种样品；在适宜温度下培养。在适宜温度下培养。结果分析：结果分析：(1)一一位位同同学

50、学在在稀稀释释倍倍数数为为106的的培培养养基基上上测测得得平平板板上上菌菌落落数数的的平平均均值值为为43.4，那那么每毫升样品中的菌株数是么每毫升样品中的菌株数是(涂布平板时所用稀释液的体积为涂布平板时所用稀释液的体积为0.2 mL)_。(2)用用这这种种方方法法测测定定微微生生物物数数量量时时，实实际际的的活活菌菌数数往往往往要要比比统统计计的的菌菌落落数数_，因为，因为_。2.17108 多多当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落(3)某某同同学学在在测测定定大大肠肠杆杆菌菌的的密密度度时时发发现现，在在培培养养基基