医学专题一桑树叶斑病防治PPT.ppt

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1、云南桑树病菌云南桑树病菌(bngjn)初步鉴定及其对初步鉴定及其对咪酰胺的敏感性测定咪酰胺的敏感性测定答答 辩辩 人：陈文智人：陈文智指导指导(zhdo)(zhdo)(zhdo)(zhdo)教师：杜教师：杜 飞飞 20122012年年6 6月月1212日日园林园林(yunln)园艺园艺学院学院本科论文答辩本科论文答辩第一页，共二十四页。汇报提纲汇报提纲研研究究背背景景结结论论与与讨讨论论研研究究目目的的研研究究内内容容结结果果与与分分析析第二页，共二十四页。研究背景：研究背景：在很多蚕区，桑树容易发生桑树叶在很多蚕区，桑树容易发生桑树叶斑病，影响桑树的生长发育，桑叶老化脱落，造斑病，影响桑树的

2、生长发育，桑叶老化脱落，造成桑叶减产，叶质下降，蚕儿食下病叶后，吸收成桑叶减产，叶质下降，蚕儿食下病叶后，吸收不到有利于蚕儿生长发育所需的营养，会降低蚕不到有利于蚕儿生长发育所需的营养，会降低蚕儿抗病的能力，影响蚕茧儿抗病的能力，影响蚕茧(cnjin)的产量和质量。的产量和质量。第三页，共二十四页。研究目的：研究目的：采用采用咪酰胺不同咪酰胺不同(b tn)浓度浓度对桑对桑树病菌的树病菌的抑制率和抑制率和EC50研究，为提高桑树研究，为提高桑树的产量和质量提供理论依据。的产量和质量提供理论依据。第四页，共二十四页。研究内容：研究内容：以云南保山、曲靖两地区带有以云南保山、曲靖两地区带有叶斑病的

3、桑叶为材料，采用叶斑病的桑叶为材料，采用菌落直径菌落直径(zhjng)法法，对杀菌剂咪酰胺的对杀菌剂咪酰胺的EC50进行测定。算出咪进行测定。算出咪酰胺对病原菌的酰胺对病原菌的敏感性敏感性。带病桑叶带病桑叶(sn y)第五页，共二十四页。试试验验(shyn)技技术术路路线线图图植植物物保保护护学学院院何何永永红红老老师师提提供供编编号号为为SHBSHB的的病原菌病原菌病原菌分离病原菌分离病原菌活化病原菌活化 病原菌纯化病原菌纯化 单孢分离单孢分离 鉴定鉴定形态鉴定形态鉴定分子鉴定分子鉴定 农药测定农药测定曲曲靖靖、保保山山、采采集集新新鲜带病桑叶鲜带病桑叶5%NaClo5%NaClo处理处理常

4、温培养常温培养3 35 5天天显微镜下显微镜下常温培养常温培养35天天第六页，共二十四页。菌株编菌株编号号名称名称采集地采集地点点分离部分离部位位病斑形病斑形状状病斑颜病斑颜色色1 1保保2-22-2保山保山叶片叶片斑点状斑点状黑褐色黑褐色2 2曲曲4-1-14-1-1曲靖曲靖枝条枝条斑点状斑点状黑褐色黑褐色3 3曲曲6-2-16-2-1曲靖曲靖叶片叶片条状条状黑褐色黑褐色4 4曲曲5-1-15-1-1曲靖曲靖叶片叶片斑点状斑点状黑褐色黑褐色5 5曲曲5-1-25-1-2曲靖曲靖叶片叶片斑点状斑点状黑褐色黑褐色6 6曲曲2-2-22-2-2曲靖曲靖叶片叶片斑点状斑点状黑褐色黑褐色7 7曲曲2-

5、1-22-1-2曲靖曲靖枝条枝条斑点状斑点状黑褐色黑褐色8 8曲曲5-2-15-2-1曲靖曲靖叶片叶片条状条状黑褐色黑褐色9 9曲曲3-1-13-1-1曲靖曲靖叶片叶片斑点状斑点状黑褐色黑褐色 供试菌株分别(fnbi)从保山、曲靖采样得到。从桑树的叶片和枝条部位分离可得病原菌，病斑部有条状和斑点状，病斑颜色都为黑褐色。表表1 桑树病菌采集地点桑树病菌采集地点(ddin)、分离部位和病症、分离部位和病症第七页，共二十四页。编号名称正面形态背面形态孢子堆1保2-2粉红色 丝状粉红色黑色 较少 2曲4-1-1白色 丝状白色黑色 丰富 3曲6-2-1米白色 有轮纹 絮状桔黄色 有轮纹黑色 丰富4曲5-

6、1-1米白色 有轮纹 丝状白色黑色 丰富5曲5-1-2白色 丝状桔黄色 有轮纹黑色 较少6曲2-2-2白色 有轮纹 丝状黑黄相间 有轮纹黑色 丰富7曲2-1-2黑白相间 有轮纹 絮状黑黄相间 有轮纹黑色 丰富8曲5-2-1黑白相间 有轮纹 丝状黑黄相间黑色 丰富9曲3-1-1黑白相间 有轮纹 丝状黑黄相间 有轮纹黑色 丰富表表2 9种菌株在种菌株在PDA平板上的形态平板上的形态(xngti)特征特征第八页，共二十四页。A A、菌株在、菌株在PDAPDA平板平板(pngbn)(pngbn)上的正面形态上的正面形态 B B、菌株在、菌株在PDAPDA平板平板(pngbn)(pngbn)上的背上的背

7、面形态面形态图图1 菌株在菌株在PDA平板平板(pngbn)上的形态上的形态第九页，共二十四页。序号采样地点孢子形状孢子颜色孢子长（um）孢子宽（um）1保山孢子很小椭圆形近无色，成堆时绿色1.642.300.841.382曲靖纺锤形、长椭圆形或卵形无色长：9142.543、8、9曲靖棒状中间4色胞同色，有尾和须。黑褐色本长：11.8315.11须长：5.439.84尾长：2.024.932.303.634曲靖长卵形或倒棍棒形榄褐色孢子痕长：1448孢子长：33147孢子痕宽：613；孢子宽：9335曲靖镰刀形或梭性无色9.5515.191.892.696曲靖长卵形、椭圆形或纺锤形深蓝色或深紫

8、色16254.567曲靖小型孢子椭圆形或卵形，大孢子椭圆形至长卵形无色小孢型子5.310.5大型孢子7.517小型孢子2.85大型孢子2.55.5表表3 桑树病害孢子桑树病害孢子(boz)形态形态第十页，共二十四页。观察观察(gunch)(gunch)结果表明（表结果表明（表3 3和图和图2 2）1 1号菌株初步鉴定为号菌株初步鉴定为亚木霉（亚木霉（Trichoderma Trichoderma koningiikoningii），2 2号菌株初步鉴定为号菌株初步鉴定为桑幹枯病（桑幹枯病（Phomopsis spPhomopsis sp）,3 ,3、8 8、9 9号菌株初号菌株初步鉴定为步鉴定

9、为拟盘多毛孢（拟盘多毛孢（PestalotiopsisPestalotiopsis），5 5号菌株初步鉴定为号菌株初步鉴定为禾赤霉菌禾赤霉菌（Gibberella zeaeGibberella zeae），4 4号菌株初步鉴定为号菌株初步鉴定为甘蓝长尾交链孢霉（甘蓝长尾交链孢霉（Alternaria Alternaria brassicaebrassicae），5 5号菌株初步鉴定为号菌株初步鉴定为禾赤霉菌（禾赤霉菌（Gibberella zeaeGibberella zeae），6 6号菌株初步鉴定为号菌株初步鉴定为桑牙枯病（桑牙枯病（Fusarium cerealisFusarium ce

10、realis），7 7号菌株初步鉴定为号菌株初步鉴定为蔓枯病菌（蔓枯病菌（Didymella Didymella bryoniaebryoniae）。A、3号菌株孢子(boz)形态 B、1号菌株孢子(boz)形态 C、5号菌株孢子(boz)形态形态学鉴定形态学鉴定(jindng)结果结果图图2 桑树病害孢子形态桑树病害孢子形态第十一页，共二十四页。分子鉴定结果：分子鉴定结果：本试验中分离的本试验中分离的9 9个菌株与从个菌株与从GeneBankGeneBank比对结果比对结果表明，表明，保保2-22-2、曲、曲4-1-14-1-1、曲、曲6-2-16-2-1、曲、曲5-1-15-1-1、曲、曲

11、5-1-25-1-2、曲、曲2-2-22-2-2、曲、曲2-1-22-1-2、曲、曲5-2-15-2-1、曲、曲3-1-13-1-1号号菌株是菌株是亚木霉亚木霉 、桑干枯菌、桑干枯菌 、细极链格孢、细极链格孢 、甘蓝、甘蓝(gnln)(gnln)长尾交链孢霉长尾交链孢霉 、禾赤霉菌、禾赤霉菌 、桑牙枯菌、桑牙枯菌 、蔓、蔓枯病菌枯病菌 、细极链格孢、细极链格孢 、天竺葵链格孢、天竺葵链格孢 。第十二页，共二十四页。菌种菌种AccessionAccessionMaxMaxidentidentDescriptionDescriptionGenebankGenebank比比对结对结果果保保2-22-

12、2AF218790.1AF218790.199%99%Trichoderma koningiiTrichoderma koningii亚亚木霉木霉曲曲4-1-14-1-1AB302247.1AB302247.199%99%Phomopsis spPhomopsis sp桑干枯菌桑干枯菌曲曲6-2-16-2-1HM467832.1HM467832.199%99%Alternaria Alternaria tenuissimatenuissima细极链格孢细极链格孢曲曲5-1-15-1-1JF439449.1JF439449.199%99%Alternaria brassicaeAlternari

13、a brassicae甘蓝长尾交链孢霉甘蓝长尾交链孢霉曲曲5-1-25-1-2HQ671191.1HQ671191.199%99%Gibberella zeaeGibberella zeae禾赤霉菌禾赤霉菌曲曲2-2-22-2-2GU584950.1GU584950.199%99%Fusarium cerealisFusarium cerealis桑牙枯菌桑牙枯菌曲曲2-1-22-1-2EU167573.1EU167573.199%99%Didymella bryoniaeDidymella bryoniae蔓枯病菌蔓枯病菌曲曲5-2-15-2-1JQ417902.1JQ417902.1100

14、%100%AlternariaAlternariatenuissimatenuissima细细极极链链格格孢孢曲曲3-1-13-1-1JF422727.1JF422727.199%99%Alternaria porriAlternaria porri天竺葵链格孢天竺葵链格孢表表4 分离分离(fnl)菌株在菌株在Genebank比对结果比对结果第十三页，共二十四页。菌株菌株抑制率抑制率浓浓度度10ug/ml10ug/ml浓浓度度30ug/ml30ug/ml浓浓度度50ug/ml50ug/ml浓浓度度100ug/ml100ug/ml浓浓度度150ug/ml150ug/ml保保2-22-20.507

15、10.50710.66140.66140.70390.70390.66930.66930.6220.622曲曲4-1-14-1-10.30940.30940.25880.25880.22710.22710.30350.30350.50240.5024曲曲6-2-16-2-10.55660.55660.72110.72110.70390.70390.29610.29610.80130.8013曲曲5-1-15-1-10.52030.52030.66440.66440.77560.77560.84240.84240.85250.8525曲曲5-1-25-1-20.4950.4950.63830.6

16、3830.71670.71670.79670.79670.80830.8083曲曲2-2-22-2-20.50.50.55560.55560.59520.59520.73810.73810.8810.881曲曲2-1-22-1-2-0.365-0.3650.19570.19570.47830.47830.44780.44780.66090.6609曲曲5-2-15-2-10.19650.19650.05880.05880.28590.28590.44710.44710.51410.5141曲曲3-1-13-1-10.27650.27650.25880.25880.30240.30240.305

17、90.30590.44710.4471表表5 桑树病菌桑树病菌(bngjn)对咪酰胺的抑制率对咪酰胺的抑制率 第十四页，共二十四页。实验表明咪酰胺对桑树病菌的抑制率较强，在咪酰胺浓度实验表明咪酰胺对桑树病菌的抑制率较强，在咪酰胺浓度(nngd)为为10ug/ml，30ug/ml，50ug/ml，100ug/ml，150ug/ml的的PDA平板上培平板上培养的桑树病菌抑制都较明显。养的桑树病菌抑制都较明显。图图3 咪酰胺对桑树病菌咪酰胺对桑树病菌(bngjn)的抑制效果图的抑制效果图 咪酰胺对桑树病菌的抑制效果图0.000000.200000.400000.600000.800001.00000

18、147101316192225283134374043菌株抑制率第十五页，共二十四页。农药测定结果农药测定结果 本实验本实验(shyn)为桑树病菌在加入浓度为桑树病菌在加入浓度10ug/ml和和30ug/ml的咪酰胺在的咪酰胺在PDA平板上的生长状况。实验平板上的生长状况。实验(shyn)表明桑树病菌对咪酰胺较敏感，不同表明桑树病菌对咪酰胺较敏感，不同的桑树病菌对咪酰胺的的桑树病菌对咪酰胺的敏感度不同敏感度不同。图图4 不同浓度的咪酰胺对桑树病菌不同浓度的咪酰胺对桑树病菌(bngjn)的抑制效果图的抑制效果图第十六页，共二十四页。本实验为桑树病菌本实验为桑树病菌(bngjn)在加入浓度为在加入

19、浓度为50ug/ml、100ug/ml 和和150ug/ml的咪酰胺在的咪酰胺在PDA平板上的生长状况。实验表明咪酰胺的平板上的生长状况。实验表明咪酰胺的浓度越高桑树病菌浓度越高桑树病菌(bngjn)越敏感，对桑树病菌越敏感，对桑树病菌(bngjn)的抑制率越强。的抑制率越强。图图5 不同不同(b tn)浓度的咪酰胺对桑树病菌的抑制效果图浓度的咪酰胺对桑树病菌的抑制效果图第十七页，共二十四页。本实验为不同的桑树病菌在本实验为不同的桑树病菌在PDAPDA平板上的正常平板上的正常(zhngchng)(zhngchng)生长状况。本生长状况。本实验表明不同地区的桑树病菌并不完全相同，病菌的菌落大小，

20、颜色，菌丝实验表明不同地区的桑树病菌并不完全相同，病菌的菌落大小，颜色，菌丝的长短，有无菌丝，生长快慢都不相同。在不同地区不同气候条件下影响桑的长短，有无菌丝，生长快慢都不相同。在不同地区不同气候条件下影响桑树减产的主要病害不同。树减产的主要病害不同。图图6 桑树病菌的正常生长桑树病菌的正常生长(shngzhng)状况图状况图第十八页，共二十四页。咪酰胺对桑树病菌的抑制效果：咪酰胺对桑树病菌的抑制效果：咪酰胺的咪酰胺的EC50EC50从从0.012774ug/ml-17.815ug/ml0.012774ug/ml-17.815ug/ml。EC50EC500.10.1的菌株有的菌株有3 3个分别

21、是细个分别是细极链格孢（极链格孢（3 3号）、甘蓝长尾交链孢霉（号）、甘蓝长尾交链孢霉（4 4号）和禾赤霉菌（号）和禾赤霉菌（5 5号）这号）这4 4个菌株对咪酰胺个菌株对咪酰胺的敏感性最强。证明的敏感性最强。证明(zhngmng)(zhngmng)咪酰胺能有效防治亚木霉、细极链格孢、甘蓝长尾交咪酰胺能有效防治亚木霉、细极链格孢、甘蓝长尾交链孢霉和禾赤霉菌所引起的桑树病害链孢霉和禾赤霉菌所引起的桑树病害。序号序号菌株菌株EC50 ug/mlEC50 ug/ml1 1保保2-22-20.0431670.0431672 2曲曲4-1-14-1-117.81517.8153 3曲曲6-2-16-2-

22、10.0127740.012774 4 4曲曲5-1-15-1-10.0808460.0808465 5曲曲5-1-25-1-20.0990040.0990046 6曲曲2-2-22-2-20.1375850.1375857 7曲曲2-1-22-1-20.9441320.9441328 8曲曲5-2-15-2-11.6770011.6770019 9曲曲3-1-13-1-117.0250417.02504表表6 咪酰胺对桑树病菌咪酰胺对桑树病菌(bngjn)的的EC50第十九页，共二十四页。8个菌株对咪酰胺的个菌株对咪酰胺的EC50分布分布(fnb)有一个单峰，其中有一个单峰，其中6号（桑牙枯

23、号（桑牙枯病菌）、病菌）、3号（细极链格孢）、号（细极链格孢）、4号霉（甘蓝长尾交链孢）和号霉（甘蓝长尾交链孢）和5号（禾赤号（禾赤霉菌）这四个菌株的霉菌）这四个菌株的EC502。即除了。即除了EC502的这两菌株外，其余的这两菌株外，其余6个菌株菌落对咪酰胺敏感。个菌株菌落对咪酰胺敏感。图图7 咪酰胺对桑树病菌咪酰胺对桑树病菌(bngjn)的的EC50分布图分布图第二十页，共二十四页。结论结论(jiln)与讨论与讨论桑树病菌的病原桑树病菌的病原：本文鉴定表明，云南省引起桑树真菌病害的病原有：本文鉴定表明，云南省引起桑树真菌病害的病原有：细极链格孢（细极链格孢（Alternaria tenui

24、ssima）、甘蓝长尾交链孢霉（）、甘蓝长尾交链孢霉（Alternaria brassicae）、禾赤霉菌）、禾赤霉菌（Gibberella zeae）、桑牙枯病（）、桑牙枯病（Fusarium cerealis）、蔓枯病菌（）、蔓枯病菌（Didymella bryoniae）、天竺葵链格孢（）、天竺葵链格孢（Alternaria porri）。前人研究表明云南桑树病害主。前人研究表明云南桑树病害主要是侵染性病害，而引起桑树侵染性病害的病原物主要是真菌，属于子囊菌纲要是侵染性病害，而引起桑树侵染性病害的病原物主要是真菌，属于子囊菌纲（Ascomycetes）、担子菌纲（）、担子菌纲（Basid

25、iomycetes）和半知菌类（）和半知菌类（Fungi imperfecti）。菌丝体发达，有隔膜和分枝，菌丝体可构成菌核、子座、子囊果等组织）。菌丝体发达，有隔膜和分枝，菌丝体可构成菌核、子座、子囊果等组织体。此外，本文还分离到一株亚木霉（体。此外，本文还分离到一株亚木霉（Trichoderma koningii），），亚木霉亚木霉（Trichoderma koningii）是否是否(sh fu)对桑树的其它病原有防治效果，需进一对桑树的其它病原有防治效果，需进一步研究步研究。第二十一页，共二十四页。本本文文中中，咪咪酰酰胺胺可可以以有有效效防防治治桑桑树树真真菌菌病病害害，在在供供试试的

26、的8个个菌菌株株中中有有三三个个菌菌株株：细细极极链链格格孢孢（Alternaria tenuissima）、甘甘蓝蓝长长尾尾交交链链孢孢霉霉（Alternaria brassicae）和和禾禾赤赤霉霉菌菌（Gibberella zeae）的的EC500.1，表表明明咪咪酰酰胺胺对对桑桑树树上上的的这这些些病病菌菌抑抑制制和和杀杀菌菌作作用用很很显显著著。2007年年仇仇铁铁烨烨用用咪咪酰酰胺胺防防治治水水稻稻恶恶苗苗病病的的效效果果显显著著，每每hm2用用咪咪酰酰胺胺60ml，对对秧秧苗苗期期和和分分蘖蘖末末期期恶恶苗苗病病防防治治效效果果达达到到(d do)90左左右右，齐齐穗穗期期防防效

27、效达达到到(d do)98以以上上；2010年年郭郭双双义义、郭郭漠漠镁镁、罗罗晓晓新新等等用用20咪咪酰酰胺胺防防治治水水稻稻纹纹病病在在水水稻稻破破口口前前施施用用750 kg/hm2 效效果果最最好好，防防效效达达761，水水稻稻产产量量为为655208 kg/hm 2。前前人人研研究究结结果果表表明明，咪咪鲜鲜胺胺是是一一种种咪咪唑唑类类杀杀菌菌剂剂，对对大大田田作作物物、水水果果、蔬蔬菜菜、皮皮革革及及观观赏赏植植物物上上的的多多种种病病害害具具有有治治疗疗和和铲铲除除作作用用 由由于于它它具具有有选选择择性性高高、杀杀菌菌谱谱广广、高高效效、安安全全等等特特点点，而而且且咪咪鲜鲜安

28、安属属低低毒毒杀杀菌菌剂剂，未未发发现现致致畸畸、致致突突变变和和致致癌癌作作用用。蚕蚕食食少少量量没没有有影影响响。在在本本文文中中咪咪鲜鲜胺胺也也可以有效防治桑树病害，因此，以后对桑树真菌病害的防治可以采用咪鲜胺。可以有效防治桑树病害，因此，以后对桑树真菌病害的防治可以采用咪鲜胺。咪酰胺可以咪酰胺可以(ky)有效防止桑树病害有效防止桑树病害第二十二页，共二十四页。第二十三页，共二十四页。内容(nirng)总结云南桑树病菌初步鉴定及其对咪酰胺的敏感性测定。研究内容：以云南保山、曲靖两地区带有叶斑病的桑叶为材料，采用菌落直径法，对杀菌剂咪酰胺的EC50进行(jnxng)测定。曲靖、保山、采集新鲜带病桑叶。保2-2。曲6-2-1。从桑树的叶片和枝条部位分离可得病原菌，病斑部有条状和斑点状，病斑颜色都为黑褐色。小型孢子椭圆形或卵形，大孢子椭圆形至长卵形。图4 不同浓度的咪酰胺对桑树病菌的抑制效果图。图6 桑树病菌的正常生长状况图。谢谢第二十四页，共二十四页。