天然药物化学实验须知实验要求二实验室规则三.ppt

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1、天然药物化学实验须知实验要求二实验室规则三 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望实验一 药用植物化学成分的提取一 实验目的 1 了解天然药物成分的分析方法2 掌握预实验的实验技术二 实验原理：1 单项预试法：寻找特定成分。2 系统预试法：在未知情况下对可能含有的各类成分进行全面检查。三 实验步骤：1 制备样品试液（1）石油醚提取液 挥发油、油脂、甾醇三萜（2）乙醇提取液 黄酮内酯、生物碱、酚类香 醇、萜类内酯、强心苷、鞣质、有机酸（3）水提取液 氨基酸、

2、多肽、蛋白质、糖类、皂苷有机酸2 选择合适的展开系统3 薄层层析 取长春花粉末20g,加70%乙醇150ml加热回流0.5h,抽滤，滤液减压浓缩至浸膏。展开系统：氯仿：甲醇=10：1实验 二 薄层层析及中药成分预实验一 实验目的：1 了解薄层层析的原理及应用。2 掌握薄层层析的实验技术。二 实验原理薄层色谱即TLC，属固液吸附色谱，利用吸附剂（硅胶）对不同组分吸附能力的差异，从而达到分离目的的方法。三 TLC的应用1 可用于判断两个化合物是否相同。2 可用于确定混合物中含有的组分数。3 可用于为柱色谱选择合适的展开剂。4 可跟踪有机反应。四实验步骤1 点样：画出起点线，即距离薄层板一端约1cm

3、处。2 展开：浸入深度0.5cm,待展开剂前沿离顶端1cm处，取出用铅笔画出展开剂前沿。展开剂：氯仿：石油醚=5：1 显色：（1）紫外灯；（2）碘缸；（3）5%硫酸乙醇溶液4 计算比移值 Rf=原点距斑点中心距离/原点距展开剂前沿距离思考题：1、在混合物的薄层色谱中，如何判定各组分在薄层上的位置？2、展开剂的的高度若超过了点样线对实验结果有何影响？3、对一个未知混合物如何选择展开剂？实验三 硅胶柱层析一 实验目的 1、了解硅胶柱层析的原理。2、掌握硅胶柱层析的技术。二 实验原理 硅胶柱层析属吸附色谱，是利用吸附剂硅胶对被分离物质的吸附能力不同，用溶剂洗脱，以使组分分离。三 实验步骤1 装柱 湿

4、法：量取一定量体积的洗脱剂（V0），倒入色谱柱中，然后，将硅胶放置于烧杯中，加入一定量的洗脱剂搅拌至无气泡，加入柱内，并将活塞打开，一边沉降一边加，直到加完硅胶，仍使洗脱剂流滴一段时间，使色谱柱中高于硅胶的溶剂几乎全部留入接收瓶中，正确计量接收器中的溶剂量（V1），计算色谱柱的保留体积（V0-V1）2 上样 干法：称取一定量硅胶（色谱柱中硅胶量的10%），置于蒸发皿中，用滴管慢慢加入样品溶液，用滴管慢慢加入样品溶液，边加边搅拌，待硅胶已完全被样品溶液湿润时，在水浴锅上蒸除溶剂，蒸除溶剂后的吸附有样品的硅胶在1000C加热除去水分，3 洗脱 样品加完后打开活塞放出液体至柱面相同时，加入洗脱剂至液

5、面高出柱面约10cm,在柱面上加入一个小滤纸片，再加2cm厚的硅胶，再加一团脱脂棉。洗脱剂：石油醚：乙酸乙脂：=3：1 洗脱收集：每份洗脱液按30ml收集 显色合并：槐花米中芦丁的提取槐花米中芦丁的提取分离分离 实验目的实验目的n n通过芦丁的提取与精制，掌握碱溶酸沉法提通过芦丁的提取与精制，掌握碱溶酸沉法提取黄酮类化合物的原理与操作。取黄酮类化合物的原理与操作。n n了解苷类结构研究的一般程序和方法了解苷类结构研究的一般程序和方法n n了解了解UV在黄酮类化合物结构鉴定中的应用在黄酮类化合物结构鉴定中的应用实验原理实验原理n n芦丁溶于热水，难溶于冷水，且分子具较芦丁溶于热水，难溶于冷水，且

6、分子具较多酚羟基，显弱酸性，在碱液中易溶，在多酚羟基，显弱酸性，在碱液中易溶，在酸中易析出沉淀，故可采用碱提酸沉法提酸中易析出沉淀，故可采用碱提酸沉法提取芦丁。取芦丁。实验方法实验方法1 1、芦丁的提取、精制、芦丁的提取、精制、芦丁的提取、精制、芦丁的提取、精制 槐米粗粉槐米粗粉（40g）置置1000ml烧杯中，加水烧杯中，加水600ml，搅拌，搅拌下加入石灰乳，调下加入石灰乳，调pH89，加热至微，加热至微沸，保持沸，保持30分钟，趁热抽滤。分钟，趁热抽滤。残渣残渣滤液滤液在在6070下用浓盐酸调下用浓盐酸调pH45，静置，静置1小时，抽滤小时，抽滤沉淀（粗品芦丁）沉淀（粗品芦丁）滤液滤液粗

7、品芦丁粗品芦丁将沉淀悬浮于蒸馏水中，加将沉淀悬浮于蒸馏水中，加热煮沸热煮沸15min，趁热，趁热 抽滤抽滤残渣残渣滤液滤液在在6070下用浓盐酸调下用浓盐酸调pH45，静置，静置1小时，抽滤小时，抽滤芦丁精品芦丁精品注：注：注：注：加石灰乳时加石灰乳时加石灰乳时加石灰乳时pHpH不能过高，否则钙能与芦丁形成螯合物而不溶于水而析出；不能过高，否则钙能与芦丁形成螯合物而不溶于水而析出；不能过高，否则钙能与芦丁形成螯合物而不溶于水而析出；不能过高，否则钙能与芦丁形成螯合物而不溶于水而析出；加热过程中须不断补充蒸发掉的水分，以保持加热过程中须不断补充蒸发掉的水分，以保持加热过程中须不断补充蒸发掉的水分

8、，以保持加热过程中须不断补充蒸发掉的水分，以保持pH89pH89；pHpH过低会使芦丁形成过低会使芦丁形成过低会使芦丁形成过低会使芦丁形成盐而降低产率；盐而降低产率；盐而降低产率；盐而降低产率；可利用芦丁在冷热水中溶解度差别来达到结晶目的。得到的沉淀要粗称一下，可利用芦丁在冷热水中溶解度差别来达到结晶目的。得到的沉淀要粗称一下，可利用芦丁在冷热水中溶解度差别来达到结晶目的。得到的沉淀要粗称一下，可利用芦丁在冷热水中溶解度差别来达到结晶目的。得到的沉淀要粗称一下，按芦丁在热水中按芦丁在热水中按芦丁在热水中按芦丁在热水中1 1：200200溶解度加蒸馏水进行重结晶。溶解度加蒸馏水进行重结晶。溶解度

9、加蒸馏水进行重结晶。溶解度加蒸馏水进行重结晶。2、芦丁的鉴定、芦丁的鉴定（1 1）芦丁的定性反应：）芦丁的定性反应：）芦丁的定性反应：）芦丁的定性反应：取芦丁取芦丁取芦丁取芦丁34mg34mg，加乙醇，加乙醇，加乙醇，加乙醇56ml56ml使溶解，分成三份做下述试验。使溶解，分成三份做下述试验。使溶解，分成三份做下述试验。使溶解，分成三份做下述试验。取上述溶液取上述溶液取上述溶液取上述溶液12ml12ml，加，加，加，加2 2滴浓盐酸，再酌加少许镁粉注意观察滴浓盐酸，再酌加少许镁粉注意观察滴浓盐酸，再酌加少许镁粉注意观察滴浓盐酸，再酌加少许镁粉注意观察 颜色变化情况。颜色变化情况。颜色变化情况

10、。颜色变化情况。取上述溶液取上述溶液取上述溶液取上述溶液12ml12ml，然后加，然后加，然后加，然后加2%ZrOCl2%ZrOCl2 2的甲醇溶液，并详细记录的甲醇溶液，并详细记录的甲醇溶液，并详细记录的甲醇溶液，并详细记录 颜色变化情况。颜色变化情况。颜色变化情况。颜色变化情况。取上述溶液取上述溶液取上述溶液取上述溶液12ml12ml，加等体积的加等体积的加等体积的加等体积的10%10%萘酚乙醇溶液，摇匀，萘酚乙醇溶液，摇匀，萘酚乙醇溶液，摇匀，萘酚乙醇溶液，摇匀，沿着管壁滴加浓硫酸，注意观察两液界面的颜色变化沿着管壁滴加浓硫酸，注意观察两液界面的颜色变化沿着管壁滴加浓硫酸，注意观察两液界

11、面的颜色变化沿着管壁滴加浓硫酸，注意观察两液界面的颜色变化思考题思考题n n苷类结构的鉴定大体程序如何？苷类结构的鉴定大体程序如何？n n怎样确定芦丁结构中糖基是否联结在槲皮怎样确定芦丁结构中糖基是否联结在槲皮素素3-O-上？上？n n怎样证明芦丁分子中只含有一个葡萄糖及怎样证明芦丁分子中只含有一个葡萄糖及一个鼠李糖？一个鼠李糖？大黄中蒽醌类成分的大黄中蒽醌类成分的提取分离提取分离实验目的实验目的1掌握掌握PH梯度萃取的原理及操作技术；梯度萃取的原理及操作技术；2掌握蒽醌类化合物鉴定方法；掌握蒽醌类化合物鉴定方法；3.了解液液萃取法分离混合物的实验方法；了解液液萃取法分离混合物的实验方法；实验

12、原理实验原理YY利用乙醇为提取溶剂，可把不同类型性质互异的蒽醌类成分利用乙醇为提取溶剂，可把不同类型性质互异的蒽醌类成分利用乙醇为提取溶剂，可把不同类型性质互异的蒽醌类成分利用乙醇为提取溶剂，可把不同类型性质互异的蒽醌类成分提取出来；提取出来；提取出来；提取出来；YY总蒽醌苷元在乙醚中有一定的溶解度，故回收乙醇后得总提总蒽醌苷元在乙醚中有一定的溶解度，故回收乙醇后得总提总蒽醌苷元在乙醚中有一定的溶解度，故回收乙醇后得总提总蒽醌苷元在乙醚中有一定的溶解度，故回收乙醇后得总提取物可用乙醚提取总苷元；取物可用乙醚提取总苷元；取物可用乙醚提取总苷元；取物可用乙醚提取总苷元；YY根据蒽醌衍生物的酸性强弱

13、，用不同的碱液进行萃取，最后根据蒽醌衍生物的酸性强弱，用不同的碱液进行萃取，最后根据蒽醌衍生物的酸性强弱，用不同的碱液进行萃取，最后根据蒽醌衍生物的酸性强弱，用不同的碱液进行萃取，最后得到不同的蒽醌苷元。得到不同的蒽醌苷元。得到不同的蒽醌苷元。得到不同的蒽醌苷元。实验方法实验方法1、大黄中总蒽醌成分的提取分离、大黄中总蒽醌成分的提取分离大黄粗粉大黄粗粉100g置置1000ml 圆底烧瓶中，加入圆底烧瓶中，加入95%乙醇乙醇250ml，回流提取，回流提取2hr，趁热抽滤，趁热抽滤醇液醇液药渣药渣加入加入95%乙醇乙醇200ml，回流提取，回流提取1.5hr，趁热抽滤，趁热抽滤醇液醇液药渣药渣乙醇

14、提取液乙醇提取液静置冷却，抽滤静置冷却，抽滤滤液滤液 减压回收乙醇至糖浆状，将浓减压回收乙醇至糖浆状，将浓缩物转移至缩物转移至250ml三角瓶中三角瓶中 乙醇总提物乙醇总提物放冷，加入乙醚放冷，加入乙醚60ml冷浸，振摇冷浸，振摇20将将乙醚液倾入乙醚液倾入500ml三角瓶中三角瓶中 乙醚层乙醚层浸膏浸膏40ml乙醚乙醚+16ml丙酮冷浸三次（每次丙酮冷浸三次（每次15）乙醚层乙醚层浸膏浸膏乙醚总提液乙醚总提液2、游离蒽醌的分离、游离蒽醌的分离乙醚总提液乙醚总提液5%NaHCO3水溶液萃取水溶液萃取3次，每次次，每次40、30、30ml，至水层颜色变浅，至水层颜色变浅 乙醚层乙醚层碱水层碱水层

15、5%Na2CO3水溶水溶液萃取液萃取3次，每次，每次次40、35、35ml碱水层碱水层乙醚层乙醚层2%NaOH水溶液萃取水溶液萃取3次，次，每次每次30ml，乙醚层乙醚层碱水层碱水层滴加滴加HCl酸化，静置沉淀，抽酸化，静置沉淀，抽滤，水洗至中性，干燥滤，水洗至中性，干燥 沉淀沉淀I，大黄酸，大黄酸 酸化，抽滤酸化，抽滤水洗，干燥水洗，干燥 沉淀沉淀大黄素大黄素 酸化，抽滤酸化，抽滤水洗，干燥水洗，干燥 沉淀沉淀大黄素甲醚、大黄酚大黄素甲醚、大黄酚 3、蒽醌类化合物的检识、蒽醌类化合物的检识（1）薄层鉴别）薄层鉴别 吸附剂：硅胶吸附剂：硅胶 展开剂：石油醚展开剂：石油醚-正己烷正己烷-苯苯-甲

16、酸乙酯甲酸乙酯-甲醇甲醇-水水 （25：75：5：35：6：25）显显 色：紫外灯下观察，斑点为黄色色：紫外灯下观察，斑点为黄色（2）呈色反应）呈色反应 滴加滴加2%NaOH水溶液，观察颜色变化水溶液，观察颜色变化 滴加滴加0.5%醋酸镁乙醇溶液，观察颜色变化醋酸镁乙醇溶液，观察颜色变化 滴加浓硫酸数滴，观察颜色变化滴加浓硫酸数滴，观察颜色变化思考题思考题vvPHPH梯度萃取的原理是什么？梯度萃取的原理是什么？梯度萃取的原理是什么？梯度萃取的原理是什么？vv大黄中各蒽醌化合物的酸性及极性强弱顺序如何？大黄中各蒽醌化合物的酸性及极性强弱顺序如何？大黄中各蒽醌化合物的酸性及极性强弱顺序如何？大黄中各蒽醌化合物的酸性及极性强弱顺序如何？vv根据大黄中所含五种羟基蒽醌的结构，说明为什么根据大黄中所含五种羟基蒽醌的结构，说明为什么根据大黄中所含五种羟基蒽醌的结构，说明为什么根据大黄中所含五种羟基蒽醌的结构，说明为什么它们可以分别被不同强度的碱性水溶液提取出来？它们可以分别被不同强度的碱性水溶液提取出来？它们可以分别被不同强度的碱性水溶液提取出来？它们可以分别被不同强度的碱性水溶液提取出来？