分子生物学实验课PPT--曾令江-XXXX11165172.pptx

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1、LOGO分子生物学实验课分子生物学实验课生物工程与生物技术教研室生物工程与生物技术教研室20102010年年1111月月主讲人：曾令江主讲人：曾令江 13640581292 13640581292内内 容容 提提 要要分子生物学实验分子生物学实验-课程介绍课程介绍1分子生物学实验分子生物学实验-课程内容课程内容2分子生物学实验分子生物学实验-课程要求课程要求3分子生物学实验分子生物学实验-课程考核课程考核4分子生物学实验分子生物学实验-课程准备课程准备5一、分子生物学实验一、分子生物学实验课程介绍课程介绍 分子生物学是生物学科中的前言学科，发展速度快，分子生物学是生物学科中的前言学科，发展速度

2、快，内容更新快，是高等院校生命科学学科的内容更新快，是高等院校生命科学学科的主干基础课主干基础课，是生命科学中公认的是生命科学中公认的核心学科核心学科。分子生物学实验课，原来附属于理论课程，因其分子生物学实验课，原来附属于理论课程，因其重要性，现已独立成一门重要性，现已独立成一门单独学科单独学科，主要围绕能更，主要围绕能更好培养学生的动手能力和创新能力。好培养学生的动手能力和创新能力。我院从我院从19971997年开始开设本科生的分子生物学课程及年开始开设本科生的分子生物学课程及其实验课，其实验课，20062006年该课程已列为学校重点课程建设。年该课程已列为学校重点课程建设。大三上期开设，学

3、分大三上期开设，学分1.51.5，2727学时。学时。二、分子生物学实验二、分子生物学实验课程内容课程内容实验一、实验一、DNADNA的提取及检测的提取及检测 实验二、实验二、PCRPCR扩增目的基因及检测扩增目的基因及检测实验三、目的基因片段的回收、连接实验三、目的基因片段的回收、连接实验四、大肠杆菌实验四、大肠杆菌DH5DH5 感受态细胞的制备感受态细胞的制备实验五、连接产物的转化、筛选及实验五、连接产物的转化、筛选及PCRPCR检测检测实验六、质粒实验六、质粒DNADNA的抽提、酶切（生工专业选作）的抽提、酶切（生工专业选作）实验七、实验七、RNARNA的抽提与检测（生科专业选作）的抽提

4、与检测（生科专业选作）技术路线技术路线甘薯材料（甘薯材料（幼苗幼苗）提取甘薯总提取甘薯总RNARNA反转录成反转录成cDNAcDNA第一链第一链提取甘薯提取甘薯DNADNAPCRPCR扩增扩增adkadk基因核心片段基因核心片段胶回收胶回收adkadk片段片段PCRPCR检测筛选阳性转化子检测筛选阳性转化子送测序及生物信息学分析送测序及生物信息学分析连接连接T T载体载体转化大肠杆菌转化大肠杆菌DH5a引物设计三、分子生物学实验课三、分子生物学实验课课程要求课程要求2、由专人负责收集本实验课的所有中间实验结果，、由专人负责收集本实验课的所有中间实验结果，包括电泳图片、照片、电子资料等。包括电泳

5、图片、照片、电子资料等。3、安全：人生安全、仪器设备、试剂药品安全。、安全：人生安全、仪器设备、试剂药品安全。如如:离心机、移液器离心机、移液器(枪枪)的使用。的使用。1、根据集中实验课的实际进程安排上课时间，、根据集中实验课的实际进程安排上课时间，要求准时到实验课堂。要求准时到实验课堂。4、清洁：每次实验课结束，各组要收拾整理实验、清洁：每次实验课结束，各组要收拾整理实验台面、仪器设备、试剂药品等，再由当天值班清洁台面、仪器设备、试剂药品等，再由当天值班清洁小组最后收拾整理。小组最后收拾整理。四、分子生物学实验课四、分子生物学实验课课程考核课程考核 1 1、本课程为考查科目。总成绩为、本课程

6、为考查科目。总成绩为100100分，由考勤、分，由考勤、实验过程表现（个人）、小组平时成绩（各实验环节实验过程表现（个人）、小组平时成绩（各实验环节结果）、实验报告四部分组成，分别占总成绩的结果）、实验报告四部分组成，分别占总成绩的2020、2020、2020、4040。2、实验报告的写作按照毕业论文的格式，包括：标实验报告的写作按照毕业论文的格式，包括：标题、中文摘要、英文摘要、文献综述、材料与方法、结题、中文摘要、英文摘要、文献综述、材料与方法、结果与分析、实验总结（体会）等，每个实验小组提交一果与分析、实验总结（体会）等，每个实验小组提交一份实验报告。份实验报告。五、分子生物学实验课五、

7、分子生物学实验课课程准备课程准备1、清洗培养皿、三角瓶等，包装灭菌。清洗研钵并烘干备用、清洗培养皿、三角瓶等，包装灭菌。清洗研钵并烘干备用。（。（5班）班）2、分装、分装10ul（白色）、（白色）、200ul（黄色）、（黄色）、1000ul（蓝色）枪（蓝色）枪头并高压灭菌头并高压灭菌（2班）班）3、分装、分装200ul、10mlEP管并高压灭菌管并高压灭菌。（。（2班）班）4、配置、配置100mlCTAB抽提液：配方见黑板抽提液：配方见黑板。（。（5班）班）5、配制、配制LB液体培养基液体培养基400，LB固体培养基固体培养基+AMP抗生素抗生素6006、研钵、液氮，抗生素配制等。、研钵、液氮

8、，抗生素配制等。实验一：甘薯实验一：甘薯DNA的提取的提取采用采用CTAB（十六烷基三乙基溴化铵）法提取甘薯（十六烷基三乙基溴化铵）法提取甘薯DNA，并用琼脂糖凝胶电泳检测所抽提，并用琼脂糖凝胶电泳检测所抽提DNA。收集电泳图片收集电泳图片实验二：实验二：PCR扩增扩增adk基因及检测基因及检测第一链第一链cDANcDAN的合成的合成用试剂盒用试剂盒反应体系：反应体系：1:DEPC-treated water 9 ul1:DEPC-treated water 9 ul2:oligo(dT)18 primer 1 ul2:oligo(dT)18 primer 1 ul3:3:Template R

9、NA 2 ulTemplate RNA 2 ul4:5Raction buffer 4 ul4:5Raction buffer 4 ul5:RNase inhibitor 1 ul5:RNase inhibitor 1 ul6:10mM Dntp Mix 2 ul6:10mM Dntp Mix 2 ul7:MVReverse Transcriptase 1 ul7:MVReverse Transcriptase 1 ul total volume 20ul total volume 20ul反应条件：反应条件：1:42-60min;2:70 -5min 每个小组做每个小组做2个个50ul体系体

10、系反应体系：反应体系：1：MiniQ H2O 36.5ul 2：10PCR buffer 5ul 3：25mM MgCl2 3ul 4：10mM dNTP mix 1ul 5：引物1(10M)F-ADK 1ul 6：引物2(10M)R-ADK 1ul 7：Taq(2 to 5 units/ul)0.5ul 8：模板（cDNA）2ul 终体积为 50 ul 反应条件：反应条件：I）94 5min II）94 45S 56 45S 72 1min（33个循环）III）72 8min实验二：实验二：PCR扩增扩增adk基因及检测基因及检测胶回收胶回收TIANGEN公司：普通琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒

11、-离心柱型操作步骤按照试剂盒说明做。回收回收DNA片段与片段与T载体连接载体连接1、连接体系：、连接体系：T-载体 0.5ul回收片段 2ul灭菌蒸馏水 2.5ulSolution 5ul总体积：10ul2、连接条件：、连接条件：16连接过夜LOGO生物工程与生物技术教研室 LOGO谢谢观看/欢迎下载BY FAITH I MEAN A VISION OF GOOD ONE CHERISHES AND THE ENTHUSIASM THAT PUSHES ONE TO SEEK ITS FULFILLMENT REGARDLESS OF OBSTACLES.BY FAITH I BY FAITH