高中生物实验大全.pdf
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1、实验一:使用高倍显微镜观察几种细胞一、实验目的:l、学会如何使用显微锐观察细胞;2、了解细胞的结构;3、学会制作临时装片。二、实验材料:(实验材料可换)松针、动物血液、动物神经细胞永久装片三、实验用具:载玻片、盖玻片、蒸熘水、滴管、摄子、土豆、刀片、显微镜(物镜5X、lOX、40X)四、方法步骤:l、制作松针的临时切片:(1)取干净的载玻片一个平置千试验台上,用滴管在载玻片中央滴一滴蒸饿水。(2)将土豆切成条状(截而约:0.5XO.5cm)取两条,将一根松针夹在两个土豆条之间,用刀片削成尽撇薄的薄片,削时,手腕不动,靠大臂带动小臂移动刀片。切片数次。从中选取较薄的切片,置于载玻片的水滴上。(3
2、)从一侧轻轻盖上盖玻片,不要产生气泡。用吸水纸轻轻吸去盖玻片周围的水滴,即完成临时切片的制作。2、观察切片:(1)取出显微镜,置于试验台上靠左的位置,打开光源。(2)将上步制作好的切片置千显微镜的载物台上,调整载物台位置,使盖玻片对准光源。(3)使用5X物镜观察切片,使松针切片在视野中心,换成lOX物镜,观察松针叶面横切结构。(4)换成40X物镜观察,注意细胞及细胞内物质结构,画图。3、动物血液临时装片的制作及观察(除了不用切片,其他类似)4、动物神经细胞永久装片的观察。五、考点提示:l、松针的叶面结构是什么样的?2、动物细胞的结构是什么样的?与植物细胞又什么不同?3、显微镜的物镜倍数愈大,视
3、野的亮度如何?物体的大小如何?4、如何调节焦距?5、如何才能使切片尽量的薄?切片的厚薄对显微镜下观察的效果有什么影响。实验二:检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质一、实验目的:尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质,阐明实验原理一颜色反应,识记和区分用千可溶性还原糖、脂肪、蛋白质鉴定的试剂及产生的特定颜色,初步掌握鉴定上述化合物的基本方法,学会描述实验现象,掌握NaOH溶液和CuS04溶液的使用方法。二、实验原理:某些化学试剂能使生物组织中的有关有机化合物,产生特定的颜色反应。l、生物组织中普遍存在的可溶性糖类较多,有葡萄糖、果糖、麦芽糖和庶糖。前三种糖的分子内都含有游涵的具还原性的半缩
4、醒经基,因此叫做还原糖;庶糖分子内没有,为非还原糖。实验中所用的斐林试剂,只能鉴定生物组织中可溶性还原糖,而不能鉴定可溶性非还原糖。可溶性还原糖(如葡萄糖、果糖、麦芽糖)与斐林试剂发生作用,可生成砖红色的Cu20沉淀。如:葡萄糖2Cu2+40li 加热葡萄糖酸Cu2 0 J(砖红色)阳0_ 即Cu”被还原成Cu心,葡萄糖被氧化成葡萄糖酸。用斐林试剂鉴定还原糖时,溶液变化过程为:浅蓝色一棕色一砖红色沉淀淀粉遇磺变蓝色(直链)或紫(红)色(支链)。2、脂肪和类脂(磷脂、糖脂、固醇脂等)统称为脂类。它是构成人体组织的正常成分,不溶于水而易溶千酒精、乙晓、氯仿等脂溶剂中。在化学组成上,脂类属于脂肪酸的
5、酷或与这些酷有关的物质。脂类的主要功能是氧化供能。脂肪主要存积于脂肪组织中,并以油滴状的微粒存在脂肪细胞浆内。在病理检验中,脂类染色法最常用以证明脂肪变性,脂肪栓子以及肿瘤的鉴别。脂类染色使用最广泛的染料是苏丹染料,最常用的有苏丹III,苏丹IV,苏丹黑及油红0等。脂肪被染色,实际上是苏丹染料被脂肪溶解吸附而呈现染料的颜色。经研究认为组织中脂质在液态或半液态时,对苏丹染料着色效果最好。根据这一原理,适当提高温度(37C-60C)对组织切片染色效果是有好处的。脂类染色,用冰冻或石蜡切片,以水溶性封固剂封固,如甘油、明胶和阿拉伯糖胶等。脂肪可以被苏丹III染液染成橘黄色或橙红色(或被苏丹IV染液染
6、成红色),胆脂素呈淡红色,脂肪酸不着色,细胞核呈蓝色。3、蛋白质与双缩脤试剂发生作用,产生紫色反应。(蛋白质分子中含有很多肤键,在碱性NaOH溶液中能与双缩腮试剂中的Cu2作用,产生紫色反应。)NH2 C|=O NH 如2180C|C=O 加热|NH H-N+NH31 C|=2 O|C=O|NH 如2 双缩脉l O=C凡0c=O、,HN I R孚、,一只勺H-RO=C Cu_C=O-Z 沁一-!.NH/I R-CH:订H-RH20 I 紫色络合物三、实验材料:l、做可溶性还原性糖鉴定实验,应选含糖高,颜色为白色的植物组织,如苹果、梨。(因为组织的颜色较浅,易千观察。)经试验比较,颜色反应的明显
7、程度依次为苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜。2、做脂肪的鉴定实验。应选宣含脂肪的种子,以花生种子为最好,实验前一般要浸泡34小时(也可用鹿麻种子)。3、做蛋白质的鉴定实验,可用富含蛋白质的黄豆或鸡蛋清。4、淀粉的鉴定:马铃薯匀浆。四、实验用具:双面刀片、试管(最好用刻度试管)、试管夹、试管架、大小烧杯、小量筒、滴管、酒精灯、三脚架、石棉网、火柴、载玻片、盖玻片、毛笔、吸水纸、显微镜五、实验试剂:1.斐林试剂(包括甲液:质量浓度为0.lg/mL NaOH溶液和乙液:质量浓度为0.05g/m L CuS04 溶液)2.苏丹田或苏丹1V染液3.双缩脤试剂(包括A液:质雇浓度为0.lg/mL NaOH溶液
8、和B液:质噩浓度为0.Olg/m L CuS04溶液)4.体积分数为50的酒精溶液5.磺液6.蒸馆水六、方法步骤:一、可溶性糖的鉴定操作方法l.制备组织样液。(去皮、切块、研磨、过滤)2.取1支试管,向试管内注入2mL组织样液。3.向试管内注入lmL新制的斐林试剂,振荡。注意问题解释苹果或梨组织液必须临时制备。因苹果多酚氧化酶含量高,组织液很易被氧化成褐色,将产生的颜色掩盖。应将组成斐林试剂的甲液、乙液斐林试剂很不稳定,甲、乙分别配制、储存,使用前才将甲、液混合保存时,生成的Cu乙液等量混匀成斐林试剂;(OH)2在7090C下分解成黑色CuO和水;切勿将甲液、乙液分别加入苹果甲、乙液分别加入时
9、可能会组织样液中进行检测。与组织样液发生反应,无Cu OH生成。4.试管放在盛有50-65C温最好用试管夹夹住试管上部,使防止试管内的溶液冲出试水的大烧杯中,加热约2分试管底部不触及烧杯底部,试管管,造成烫伤;钟,观察到溶液颜色:浅蓝口不朝向实验者。色-棕色-砖红色(沉也可用酒精灯对试管直接加热。淀)缩短实验时间。二、脂肪的鉴定操作方法注意问题解释花生种子浸泡、去皮、切下一些子干种子要浸泡34小因为浸泡时间短,不易切片;叶沛片,将溥片放在载玻片的水滴时,新花生的浸泡时浸泡时间过长,组织较软,切中,用吸水纸吸去装片中的水。间可缩短。片不易成形。切片要尽可能薄些,便千观察。在子叶薄片上滴23滴苏丹
10、田或苏染色时间不宜过长。丹W染液,染色l分钟。用吸水纸吸去薄片周围染液,用酒精用千洗去浮色,不洗去浮50酒精洗去浮色,吸去酒精。色,会影响对橘黄色脂肪滴的观察。同时,酒精是脂溶性溶剂,可将花生细胞中的脂肪颗粒溶解成油滴。用吸水纸吸去薄片周围酒精,滴上滴上清水可防止盖盖玻片时产12滴蒸饿水,盖上盖玻片。生气泡。低倍镜下找到花生子叶薄片的最装片不宜久放。时间一长,油滴会溶解在乙醇沥处,可看到细胞中有染成橘黄色中。或红色圆形小颗粒。三、蛋白质的鉴定操作方法注意问题解释制备组织样液。黄豆浸泡1至2天,容易研(浸泡、去皮研磨、过滤。)磨成浆,也可购新鲜豆浆以节约实验时间。鉴定。加样液约2ml于试管A液和
11、B液也要分开配制,储先加NaOH溶液,为C矿与蛋中,加入双缩脉试剂A,摇匀;存。鉴定时先加A液后加B白质反应提供一个碱性的环再加入双缩脉试剂B液34液。境。A、B液混装或同时加入,滴,摇匀,溶液变紫色。会导致c矿变成Cu(OH)2 CuS04溶液不能多加。沉淀,而失效。否则Cu观的蓝色会遮盖反应的真实颜色。可用蛋清代替豆浆。蛋清要先稀释。如果稀释不够,在实验中蛋清粘在试管壁,与双缩腮试剂反应后会粘固在试管内壁上,使反应不容易彻底,并且试管也不易洗干净。附:淀粉的检测和观察磺液不要滴太多以免影响颜色观察用试管取2ml待测组织样液,向试管内滴加2滴碳液,观察颜色变化。七、考点提示:l、常见还原性糖
12、与非还原性糖有哪些?答:葡萄糖、果糖、麦芽糖都是还原性糖;淀粉、庶糖、纤维素都是非还原性糖。2、还原性糖植物组织取材条件?答:含糖量较高、颜色为白色或近于白色,如:苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜等。3、研磨中为何要加石英砂?不加石英砂对实验有何影响?答:加石英砂是为了使研磨更充分。不加石英砂会使组织样液中还原性糖减少,使鉴定时溶液颜色变化不明显。4、斐林试剂甲、乙两液的使用方法?混合的目的?为何要现混现用?答:混合后使用;产生氢氧化铜;氢氧化铜不稳定。5、还原性糖中加入斐林试剂后,溶液颜色变化的顺序为?答:浅蓝色棕色砖红色。6、花生种子切片为何要薄?答:只有很薄的切片,才能透光,而用千显微镜的观
13、察。7、转动细准焦螺旋时,若花生切片的细胞总有一部分清晰,另一部分模糊,其原因一般是什么?答:切片的厚薄不均匀。8、脂肪鉴定中乙醇作用?答:洗去浮色。9、双缩脉试剂A、B两液是否混合后用?先加A液的目的怎样通过对比看颜色变化?答:不能混合;先加A液的目的是使溶液呈碱性;先留出一些大豆组织样液做对比。实验三:观察DNA和RNA在细胞中的分布一、实验原理:l、真核细胞的DNA主要分布在细胞核内,RNA主要分布在细胞质中。2、甲基绿和咙罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同,甲基绿对DNA亲和力强,使DNA显现出绿色,而咄罗红对RNA的亲和力强,使RNA呈现出红色。用甲基绿、P比罗红的混合染色剂
14、将细胞染色,可同时显示DNA和RNA在细胞中的分布。3、盐酸的作用CD盐酸能改变细胞膜的通透性,加速染色剂的跨膜运输;盐酸使染色体中的DNA与蛋白质分离,便千DNA与染色剂的结合二、实验材料:人的D腔上皮细胞、洋葱鳞片叶表皮细胞三、实验用具:大小烧杯、温度计、滴管、消毒牙签、载玻片、盖玻片、铁架台、石棉网、火柴、酒精灯、吸水纸、显微镜四、方法步骤:l、取材O滴:在洁净的载玻片上滴一滴质痲分数为0.9的NaCl溶液;刮:用消毒牙签在口腔内侧壁上轻轻地刮几下;涂:将牙签上的碎屑涂抹在载玻片的生理盐水中;烘:将涂有口腔上皮细胞的载玻片在酒精灯的火焰上烘干。2、水解O 解:将烘干的载玻片放入装有30m
15、l质量分数为8的盐酸的小烧杯中,进行材料的水解;保:将小烧杯放入装有30C温水的大烧杯中保温5分钟。3、冲洗涂片(D冲:用缓缓的蒸熘水冲洗载玻片10秒钟;吸:用吸水纸吸去载玻片上的水分。4、染色染:用2滴咄罗红甲基绿混合染色剂滴在载玻片上,染色5分钟;吸:吸去多余染色剂;盖:盖上盖玻片。5、观察低在低倍物锐下,寻找染色均匀,色泽浅的区域,移至视野中央,将物像调节消晰;高:转到高倍物镜,调节细准焦螺旋,观察细胞核和细胞质的染色情况。五、考点提示:l、取口腔上皮细胞之前,应先漱口,以避免装片中出现太多的杂质;2、取洋葱表皮细胞时,尽撇避免材料上带有叶肉组织细胞;3、冲洗载玻片时水的流速要尽量慢,切
16、忌直接用水龙头冲洗;4、用酒精灯烘烤载玻片时,不要只集中千材料处,而应将载玻片在火焰上来回移动,使载玻片均匀受热,以免破裂;5、烘烤后的载玻片不要马上放入盛有稀盐酸的烧杯中,最好先自然冷却1分钟。实验四:体验制备细胞膜的方法一、实验原理:细胞膜的流动性和半透性二、实验材料:猪(或牛、羊、人)的新鲜的红细胞稀释液(血液加适量的生理盐水)三、实验用具:蒸熘水、试管、吸水纸、载玻片、盖玻片、显微镜四、方法步骤:l、用试管吸取少量红细胞稀释液,滴一小滴在载玻片上,盖上盖玻片,制成临时装片2、在高倍镜下观察,待观察清晰时,在盖玻片的一侧滴一滴蒸馆水,同时在另一侧用吸水纸小心吸引,注意不要把细胞吸跑。上述
17、操作均在载物台上进行,并持续观察细胞的变化。可以看到近水的部分红细胞发生变化;凹陷消失,细胞体积增大,很快细胞破裂,内容物流出。五、考点提示:l、选择动物细胞进行实验的原因:动物细胞无细胞壁。2、选择哺乳动物成熟红细胞进行实验的原因:人和其他哺乳动物成熟红细胞无细胞核和众多的细胞器(膜),可以得到较纯净的细胞膜。3、细胞破裂后,用什么方法获得较纯的细胞膜:将涨破的细胞溶液,经过离心分离得到细胞膜。4、如何获得植物细胞膜:先用纤维素酶和果胶酶将植物细胞壁水解得到原生质体;再将原生质体放入清水中,水自由扩散进入,原生质体涨破;最后经过离心分离得到植物细胞膜。5、稀释及稀释的时候用生理盐水的原因:稀
18、释后,可以减少血液中的血浆蛋白等杂物。用生理盐水是为了保持渗透压,防止在稀释的时候就发生细胞破裂。实验五:用高倍显微镜观察叶绿体和线粒体一、实验原理:l、叶肉细胞中的叶绿体,呈绿色、扁平的椭球形或球形,散布千细胞质中,可以在高倍显微锐下观察它的形态。2、线粒体普遍存在千动物细胞和植物细胞中,健那绿染液能使活细胞中的线粒体呈现蓝绿色。通过染色,可以在高倍显微镜下观察到处千生活状态的线粒体的形态有短棒状、圆球状、线形、哑铃形等。二、实验材料:新鲜的薛类的叶、人的口腔上皮细胞、新配制的质谥分数为1的健那绿染液(将0.5g健那绿溶解千50ml生理盐水中,加温到30-40摄氏度,使其充分溶解)三、实验用
19、具:显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、摄子、消毒牙签四、方法步骤:1、观察叶绿体低倍镜下找到叶片细胞一低倍镜下找到叶片细胞一高倍镜下观察。2、观察线粒体染色一制片一低倍镜下找到D腔上皮细胞一高倍镜下观察。五、考点提示:l、观察叶绿体时选择薛类叶的原因:薛类属于低等植物,叶片是绿色的单层细胞,不需加工即可进行观察。2、临时装片中的材料要随时保待有水状态的原因:保证细胞器的正常形态并能悬浮在细胞质基质中,否则,细胞失水收缩,将影响细胞器形态的观察。实验六:植物细胞的吸水和失水一、实验目的:l、学会使用显微镜观察植物细胞质壁分离和复原。(与前面的知识:显微镜的使用联系)2、观察不同浓度的溶液对细胞吸水失
20、水的影响,掌握此种方法的具体应用。3、通过观察植物细胞的吸水和失水,明确渗透系统的组成以及具体应用。二、实验原理:l、成熟的植物细胞放到一定浓度的溶液中构成一个渗透系统。当细胞大量失水时原生质层与细胞壁的伸缩程度不同,导致原生质层和细胞壁分离。2、当外界溶液浓度大千细胞液浓度时,根据扩散作用原理,水分会由细胞液中渗出到外界溶液中,通过渗透作用失水;由千细胞壁和原生质层的伸缩性不同,细胞壁伸缩性较小,而原生质层性较大,从而使二者分开;反之,外界溶液浓度大千细胞液浓度,则细胞通过渗透作用吸水,分离后的质和壁又复原。三、实验材料:紫色特别深的洋葱外表皮、质量浓度为0.3g/ml的庶糖溶液、清水四、实
21、验用具:显微镜、锐子、刀片、载玻片、盖玻片、滴管、吸水纸五、方法步骤:l、用刀片在洋葱鳞片叶的外表面划一个小方块,用摄子撕取这一小块洋葱表皮,在洋葱的外表皮上,用刀片划一些方块,用摄子轻轻撕取一小块(撕取的仅仅是外表皮,不要撕得太厚,仍然作为一个问题留给学生)。在取标本时,可以将洋葱的内表皮朝外,外表皮朝里进行对折,不要太用力,然后取其外表皮作为材料,将它平展地放在载玻片中央的清水滴中,并盖上盖玻片。2、用低倍镜观察洋葱表皮细胞中紫色的中央液泡大小,以及原生质层的位置。3、从盖玻片的一侧滴入0.3g/ml的庶糖溶液,在盖玻片的另一侧用吸水纸吸引。这样重复几次,洋葱表皮细胞就侵润在庶糖溶液中。注
22、意重复3-4次。4、再用低倍镜观察洋葱表皮细胞中紫色的中央液泡大小,以及原生质层的位置。5、从盖玻片的一侧滴入清水,在盖玻片的另一侧用吸水纸吸引,这样重复几次,洋葱表皮细胞就侵润在清水中。6、还用低倍镜观察洋葱表皮细胞中紫色的中央液泡大小,以及原生质层的位置。六、实验结论:当外界溶液浓度大干细胞液浓度时,水分会由细胞液中渗出到外界溶液中,通过渗透作用失水:由于细胞壁和原生质层的伸缩性不同,细胞壁伸缩性较小,而原生质层性较大,从而使二者分开;反之,当外界溶液浓度低千细胞液浓度时,则细胞通过渗透作用吸水,分离后的质和细胞壁又复原。实验七:比较过氧化氢在不同条件下的分解一、实验目的:通过比较过氧化氢
23、在不同条件下分解的快慢,了解过氧化氢酶的作用和意义二、实验原理:新鲜的肝脏中含有过氧化氢酶,根据酶的专一性,可知其可以催化过氧化氢分解成水和氧。三、实验材料:质址分数为20的猪肝研磨液,新配制的体积分数为3的过氧化氢溶液,质呈分数为3.5%的FeC13溶液四、实验用具:量筒,试管,滴管,试管夹,试管架,卫生香,火柴,酒精灯,大烧杯,石棉网,温度计五、方法步骤:l、取4支洁净试管,分别编号1,2,3,4,向试管内分别加入2ml过氧化氢溶液。2、将2号试管放在90C左右的水浴中加热,观察气泡情况,并与1号试管作比较。3、向3号试管内滴入2滴FeC13溶液,向4号试管内滴入2滴肝脏研磨液,观察哪支试
24、管产生的气泡多。4、2至3min后,将点燃的卫生香分别放在3、4号试管内液面的上方,观察哪支试管中的卫生香燃烧更猛烈。六、实验结论:l、加热能促进H心的分解,提高反应速率;2、酶有催化作用,与无机催化剂相比,酶具有高效性。实验八:影响酶活性的条件一、实验目的:l、初步学会探索影响酶活性条件的方法。2、探索过氧化氢酶在不同温度和PH下催化过氧化氢水解的情况。二、实验原理:淀粉遇殡后,形成紫蓝色的复合物。麦芽糖和葡萄糖遇磺后,不形成紫蓝色的复合物,但能与斐林试剂发生氧化还原反应,生成砖红色的氧化亚铜沉淀。三、实验材料:质量分数为2的新配置的淀粉酶溶液,新鲜的质量分数为20的猪肝研磨液,质量分数为3
25、的可溶性淀粉溶液,新配制的体积分数为3的过氧化氢溶液,质量分数为5的盐酸,质量分数为5的氢氧化钠溶液,蒸熘水,冰水,热水,磺液,斐林试剂四、实验用具:冕筒,试管,滴管,试管夹,三脚架,火柴,酒精灯,小烧杯,大烧杯,石棉网,温度计,五、方法步骤:一、温度对酶活性的影响l、取三支洁净的试管,编上号l,2,3,并分别注入2ml可溶性淀粉液。2、分别向L2,3号三支试管中各注入1ml新鲜的淀粉酶溶液,摇匀,依次放入沸水,37C左右的热水,冰水中,维持各自的温度5分钟。3、分别向L2,3号三支试管中各滴入一滴磺液,然后摇匀。观察并记录这三只试管中,溶液颜色的变化情况。二、pH对酶活性的影响l、取三支洁净
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