青海高原羊肚菌菌种制作技术操作规程(T-QHJLXH 001—2021).pdf

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1、青海青海高原羊肚菌高原羊肚菌菌种制作菌种制作技术技术操作操作规程规程 青海卓辰农业科技发展有限公司 主编：张国平 编委：管俊林 刘云云 李海萍 苏亮 蒋雪林 魏东升 马玉娟 2021 年 1 月 前 言 本规范的编写符合GB/T1.1-2009给出的规则。本规范由青海卓辰农业科技发展有限公司提出并归口。本规范起草单位：青海卓辰农业科技发展有限公司。本规范主要起草人：管俊林 刘云云 李海萍 苏亮 蒋雪林 魏东升 马玉娟等 青海高原羊肚菌菌种制作技术操作规程操作规程 1 范围 本规程规定了高原羊肚菌菌种制作的术语与定义，主要包括高原羊肚菌母种（一级种）、原种（二级种）、栽培种（三级种）的制作方法；

2、菌种培养基原材料选择、原材料配方比例、羊肚菌菌种接种（转接）、羊肚菌菌种菌丝培养等。本规程适用于青海高原地区羊肚菌菌种制作方法。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T528 食用菌菌种生产技术规范 NY/T749 绿色食品 食用菌 NY 5095-2006 无公害食品 食用菌 NY 5099-2002 无公害食品 食用菌栽培基质安全技术要求 NY/T 5333-2006 无公害食品 食用菌生产技术规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。菌

3、种:是指人工培养，并可供进一步繁殖或栽培使用的食用菌纯双核菌丝体。培养基：根据各种食用菌生产对营养物质的要求，用人工方法配制而成的营养基质，供菌丝生长发育。菌丝：构成真菌菌丝体的丝状单元，由孢子或组织萌发后形成。母种：是从孢子分离培养或组织分离培养获得的菌丝体。原种：是由母种繁殖的，进一步增加菌丝数量。栽培种：由原种繁殖而来，用于出菇生产的菌丝体。细菌：以裂殖方式繁殖的单细胞原核生物。霉菌：腐生在各种机务上的除细菌以外的丝状体的微小真菌。孢子：真菌经无性或有性过程所产生的的繁殖体。4 菌种选择 选择符合当地气候条件、菌丝生命力强，菇形整齐，出菇早、生长快、抗性强的优质高产的菌种作为高原羊肚菌栽

4、培种。高原羊肚菌菌种为公司每年采摘后自制。5 菌种制作方法 5.1 母种培养基制作 5.1.1 母种培养基配方 培养基按1000毫升为例，配方为：土豆200克、琼脂20克、葡萄糖20克、磷酸二氢钾1克、硫酸镁0.5克、水1200毫升、PH自然。5.1.2 母种培养基制作方法 将土豆洗净去皮称取，切成小块放入锅中加水，煮至土豆软烂，用3层纱布过滤取滤液，若滤液减少,可用蒸馏水将滤液定容至1000ml，再次倒入洗净的锅中，依次加入琼脂、葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁等元素，搅拌至完全融化，趁热将培养液分装在试管中，每只试管装约10ml，用棉塞或是与试管匹配的硅胶塞封口，用报纸包住封口，每8-10支扎成

5、一捆。5.1.3 母种培养基灭菌 将扎好的试管竖直放入高压灭菌锅中，当灭菌锅压力上升至0.05MPa时，打开锅体排气阀排气，压力降至“0”时，关闭排气阀，当压力再次上升至0.1MPa时计时30 min。灭菌完成后自然泄压，双手洗净消毒，将灭菌后的试管拿出，摆在消毒后的洁净接种箱或是超净工作台上摆成斜面进行冷却，斜面占试管的1/2，打开紫外线消毒灯消毒。5.1.4 分离接种 接种前做好接种人员、接种箱、接种工具的消毒工作，整个操作在离酒精灯火焰10厘米处进行。采取组织分离法取成熟度为6-8羊肚菌的子实体，在无菌的条件下切开菇体，取充实、肉质较好的米粒大小的组织，放入斜面中间，用酒精灯烤试管口及棉

6、塞1-2秒，封口。接种过程要快、准、稳，每次操作后将接种工具放置酒精中，拿出，在火焰烤3-5秒冷却消毒。经接种后将试管放入25的恒温箱培养，大概1-2天后萌发，7天即可长满试管斜面，将试管置于0-4冷藏。5.2 原种培养基制作 5.2.1 原种培养基配方 小麦80%、木屑（或麸皮）20%、石灰1%、自来水用量为原料体积的1.2-1.3倍。5.2.2 培养基拌料 提前将小麦浸泡24h，煮至无白芯，捞出放凉，按比例拌入麸皮或木屑，目的是为了增加培养基透气性，加入水拌匀，含水量65%左右，即手抓料捏紧，指间有水渗出，但不滴落为准，pH值8-8.5。堆料2小时使培养基吸足水份即可装瓶，原种瓶选择500

7、ml的透明玻璃瓶，培养基装至瓶肩为宜，将瓶内料面压平，擦去瓶壁内外沾染的培养基，塞上棉塞。5.2.3 原种培养基灭菌 将装好的原种瓶搬入高压锅内灭菌，灭菌锅内温度升至80时打开排气阀排气，压力降为“0”时关闭排气阀，锅内压力再次升至1.5Mpa时持续2-3小时即可。灭菌完成后，自然冷却。5.2.4 原种接种 羊肚菌原种接种要求在无菌条件下进行，一般选择超净工作台或是接种箱，首先对接种室空间及地面用3%来苏水溶液或是酒精喷雾消毒，接种箱用酒精擦拭一遍，将原种培养基、接种工具放入，打开臭氧发生器或是紫外线灯30分钟进行消毒。接种时一手拿试管，一手揭开原种瓶棉塞，用接种耙勾取试管内母种放入原种培养基

8、上方，轻轻按一下，棉塞过一下酒精灯火焰，塞住瓶口。每支母种试管接5-8瓶原种，接种后将菌种放在18-22温度下避光培养。原种培养期间，每日观察，除去污染菌种，尽量避免强光刺激。20天后，当菌丝长满瓶内培养基，可用于制作栽培种。5.3 栽培种制作 5.3.1 原料选择 高原羊肚菌栽培种培养基原料要求新鲜无霉变、无潮湿、板结。小麦：选择籽粒饱满，硬质率高的当年优质小麦。木屑：选择树龄10-15之年间的阔叶树，粉碎成2-3mm的颗粒状木屑，提前发酵15-40天。含芳香之类的松，杉，樟，柏，杜仲等树不可使用。麦麸：麦麸是小麦加工面粉后得到的副产品，用于制作羊肚菌菌种的一般的含粉量要求3-5%。5.3.

9、2 栽培种配方 小麦60%、麦麸20%、木屑20%、石膏1%、石灰1%、自来水用量为原料体积的1.2-1.3倍。5.3.3 栽培种制作 提前将小麦浸泡24h，煮至无白芯，捞出放凉，按比例拌入麸皮、木屑，目的是为了增加培养基透气性，加入水拌匀，含水量65%左右，即手抓料捏紧，指间有水渗出，但不滴落为准，pH值8-8.5。堆料2小时使培养基吸足水份，装入33cm15cm的聚丙烯折角袋，每袋装料约500g，装好料后套上环盖。5.3.4 栽培种灭菌 将栽培种培养基整齐摆到高压灭菌锅内，锅内温度升至80时打开排气阀排去锅内冷气，压力降至“0”时关闭排气阀。压力再次升至0.15MPa时维持3-4h，灭菌完成后使灭菌锅自然泄压冷却。5.3.5 栽培种接种 栽培种培养基自然冷却至室温时，在无菌条件下进行接种，接种时将原种瓶放在接种架上，用75%酒精棉球擦拭瓶口和内壁，将原种上部老菌皮挖掉。瓶口用酒精灯火焰封住。用接种耙取出原种，迅速接入栽培袋，封口。5.4 养菌管理 高原羊肚菌栽培种接种后通常放到塑料筐中盛放，将菌袋移到培养室内进行避光培养菌，菌袋之间要有1厘米空隙。室温控制在20-23，每日观察，去除污染菌种，约20天左右,菌丝长满菌袋时使用。