【课件】动物细胞工程++课件+高二下学期生物人教版选择性必修3.pptx

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1、动物细胞工程1.阐明动物细胞培养的条件和过程。2.阐述干细胞在生物医学工程中有广泛的应用价值。3.阐明利用动物细胞融合技术制备单克隆抗体的过程，认同单克隆抗体在临床上有重要的应用价值4.阐明利用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程和该技术的应用前景。学习目标动物细胞培养 动物细胞培养就是指从动物体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后在适宜的培养条件下,让这些细胞生长和增殖的技术。2.原理：1.概念：细胞增殖动物动物细胞培养细胞培养3.动物细胞培养的条件（2）无菌、无毒的环境：适宜的温度：人和哺乳动物最适温度为36.50.5。适宜的酸碱度：pH：7.2-7.4（葡萄糖、氨基酸）、促生长因子、

2、（水、无机盐、葡萄糖、氨基酸）、促生长因子、（水、无机盐、微量元素）微量元素）等；通常还需加入等；通常还需加入血清等血清等天然成分。天然成分。（4）气体环境：（1）营养：将细胞所需的营养物质按种类和所需量严格配制而成的培养基称为合成培养基，通常需要加入血清等一些天热成分。培养动物细胞一般使用液体培养基，也称为培养液。包含：（3）温度、pH和渗透压：“95空气+5CO2”的混合气体培养箱。氧气是细胞代谢必须的；CO2维持培养液的pH。首先对培养液和所有培养用具无菌处理；定期更换培养液以清除代谢产物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害。拓展：为什么对动物细胞进行培养时通常添加血清？血清中含有蛋白

3、质、氨基酸、葡萄糖、激素等，其中蛋白质主要为白蛋白和球蛋白。氨基酸有多种，是细胞合成蛋白质的基本成分，其中有些氨基酸动物细胞本身不能合成（称为必需氨基酸），必须由培养液提供。血清激素有胰岛素、生长激素等及多种生长因子（如表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、类胰岛素生长因子等）；血清还含有多种未知的促细胞生长因子、促贴附因子及其他活性物质，能促进细胞的生长、增殖和贴附。因此，细胞培养时，要保证细胞能够顺利生长和增殖，一般需添加10%20%的血清。动物细胞培养液的主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。植物组织培养呢？无机盐、蔗糖、维生素、生长调节物质、植物激素动物培养基特有的特点是：

4、（1）液体培养基（2）含有动物血清动物体细胞大都生活在液体的环境4.动物细胞培养的过程 动物细胞培养的过程：首先要对新鲜取材的动物组织进行处理，用机械的方法，或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理一段时间，将组织分散成单个细胞。然后，用培养液将细胞制成细胞悬液放入培养皿或培养瓶内，置于适宜环境中培养。（1）体外培养的动物细胞的类型细胞能够悬浮在培养液中生长增殖悬浮培养的细胞会因细胞密度过大、有害代谢物积累和培养液中营养物质缺乏等因素而分裂受阻。需要贴附于某些基质表面才能生长增殖大多数细胞属于这种类型。这类细胞往往贴附在培养瓶的瓶壁上，这种现象称为细胞贴壁。贴壁细胞在生长增殖时，除受上述因素的影响外，还

5、会发生接触抑制现象，即当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞通常会停止分裂增殖。定义：人们通常将分瓶之前的培养，即动物组织经处理后的初次培养称为原代培养。用机械方法，或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理取动物组织（胚胎或幼龄动物器官组织）剪碎分散成单个细胞制成细胞悬液转入培养液中培养（贴壁生长长成单层细胞。有接触抑制现象）。原代培养（2）过程原代培养增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，容易培养去掉组织间蛋白加培养液传代培养细胞贴壁接触抑制传代10代以内，遗传物质不改变，保持正常二倍体核型。传代10-50代左右，增殖缓慢以至于完全停止，部分细胞核型可能发生变化 （遗传物质可能改变）定义：定义：贴满瓶壁

6、的细胞，需要重新用贴满瓶壁的细胞，需要重新用胰蛋胰蛋白酶白酶处理处理,悬浮培养密度过大的细胞用离心悬浮培养密度过大的细胞用离心法收集，法收集，然后然后分瓶继续培养分瓶继续培养,让细胞继续增让细胞继续增殖。这样的培养过程称为传代培养。殖。这样的培养过程称为传代培养。强调一：细胞贴壁过程细胞贴壁：在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。培养瓶或培养皿壁要求：表面光滑、无毒、易于贴附。当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。强调二：接触抑制 瓶壁上的细胞层数是：一层（或单层）！怎样解除这种现象？胰蛋白酶处理1.为什么用胰蛋白酶处理？动物

7、组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，胰蛋白酶处理动物组织，可分解细胞间的蛋白质，获得单个细胞。2.进行动物细胞培养时常用胰蛋白酶分散细胞而不用胃蛋白酶的原因 用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。胃蛋白酶作用的适宜pH约为2，当pH 大于6时，胃蛋白酶就会失去活性。多数动物细胞培养的适宜pH为7.27.4，胃蛋白酶在此环境中没有活性，所以不用胃蛋白酶而用胰蛋白酶。3.为什么要将动物细胞分散成单个细胞培养？在进行细胞原代培养时可以分散成单个细胞培养，也可以用细胞群（团）或组织块培养，但经传代培养后，最终都要分散成单个细胞培养。分散成单个细胞后容易培养，细胞所需的营养容易供应，

8、其代谢废物容易排出。而用大块组织培养时，内部细胞的营养供应和代谢废物的排出都比较困难，它们很难在体外长时间生存和生长。分散成单个细胞培养，还使得在细胞水平操作的技术容易实现。疑难解析 拓展延伸 细胞株细胞株：传代培养的细胞能传到：传代培养的细胞能传到10-5010-50代，代，遗传物质一般不会发遗传物质一般不会发生改变生改变强调：细胞株、细胞系细胞系细胞系：传代：传代5050代以后，有部分细胞代以后，有部分细胞遗传物质发生了改变，遗传物质发生了改变，能连续传代获能连续传代获得不死性，叫细胞系。得不死性，叫细胞系。取组织、器官配置细胞悬液10代细胞转入培养瓶40-50代细胞传代培养无限传代单个细

9、胞分瓶传代培养细胞株：一般说遗传物质未改变细胞系：遗传物质已改变原代培养总结：动物细胞培养过程动物组织块配置细胞悬液剪碎，用机械方法，或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理10代细胞转入培养瓶40-50代细胞传代培养无限传代分散成单个细胞加培养液稀释传代10代以内，遗传物质不改变，保持正常二倍体核型。传代10-50代左右，增长缓慢以至于完全停止，部分细胞核型可能发生变化（遗传物质可能改变）分瓶传代培养原代培养特点：细胞贴壁、接触抑制继续传代培养少部分细胞获得不死性，细胞突变，遗传物质已经改变，等同于癌细胞。细胞株：一般说遗传物质未改变细胞系：遗传物质已改变原代培养动物组织块用机械方法，或用胰蛋白酶、胶原

10、蛋白酶等处理剪碎分散成单个细胞加培养液制成细胞悬液传代培养细胞株（1050代）细胞系（50代）原代培养培养分瓶培养50代细胞少数不死细胞保持正常二倍体核型遗传物质改变总结：动物细胞培养过程问题细胞分裂受阻悬浮生长贴壁生长细胞密度过大、有害代谢物积累和培养液中营养物质缺乏等接触抑制解决细胞的全能性细胞群植物体或组织培养结果获得细胞或细胞分泌蛋白快速繁殖、培育无病毒植株等培养目的葡萄糖、动物血清蔗糖、植物激素培养基特有成分液体培养基固体培养基培养基性质细胞增殖原理动物细胞培养植物组织培养比较项目植物组织培养和动物细胞培养的比较胚胎干细胞（简称ES细胞）和成体干细胞1.种类：2.存在部位早期胚胎、骨

11、髓和脐带血等多种组织和器官中干细胞培养及其应用干细胞培养及其应用胚胎干细胞（embryonic stem cell，简称ES细胞）存在于早期胚胎中，具有分化为成年动物体内的任何一种类型的细胞，并进一步形成机体的所有组织和器官甚至个体的潜能。3.胚胎干细胞来自早起胚胎的干细胞（1）存在部位：成体干细胞是成体组织或器官内的干细胞。（2）种类：包括骨髓中的造血干细胞、神经系统中的神经干细胞和睾丸中的精原干细胞等。（3）特点：成体干细胞具有组织特异性，只能分化成特定的细胞或组织，不具有发育成完整个体的能力。4.成体干细胞造血干细胞注意：造血干细胞是发现最早、研究最多、应用也最为成熟的一类成体干细胞，主

12、要存在于成体的骨髓、外周血和脐带血中。有着自我更新能力及分化潜能的干细胞，与组织、器官的发育、再生和修复等密切相关，因而在医学上有着广泛的应用。例如，将正常的造血干细胞移植到病人体内，恢复病人的造血和免疫功能，已成为治疗白血病及一些恶性肿瘤放疗或化疗后引起的造血系统、免疫系统功能障碍等疾病的一种重要手段；神经干细胞在治疗神经组织损伤和神经系统退行性疾病（如帕金森病、阿尔茨海默病等）方面有重要的应用价值。5.干细胞的应用（1）含义：科学家通过体外诱导小鼠成纤维细胞，获得了类似胚胎干细胞的一种细胞，将它称为诱导多能干细胞（简称iPS 细胞），并用iPS 细胞治疗了小鼠的镰状细胞贫血。6.iPS细胞

13、及应用从胚胎中获取胚胎干细胞，是否涉及伦理问题？（2）应用：用iPS 细胞治疗阿尔茨海默病、心血管疾病等领域的研究也取得了新进展。因为诱导过程无须破坏胚胎，而且iPS 细胞可以来源于病人自身的体细胞，将它移植回病人体内后，理论上可以避免免疫排斥反应，所以科学家普遍认为iPS 细胞的应用前景优于胚胎干细胞。例1 干细胞是一种尚未充分分化的未成熟的细胞，医学家们正在尝试利用干细胞治疗一些顽疾，下列说法不正确的是（）A.各种组织干细胞分化形成不同组织细胞是基因选择性表达的结果B.利用干细胞治疗某些顽疾，是因为干细胞具有再生各种组织、器官的潜能C.同一生物个体中，神经细胞与干细胞所含有的遗传物质不同D

14、.干细胞包括成体干细胞和胚胎干细胞【答案】C【解析】细胞分化是基因选择性表达的结果，A 项正确；干细胞具有发育的全能性，可以分化成成年动物的各种组织、器官，故可利用干细胞治疗某些顽疾，B 项正确；同一个体的神经细胞和干细胞均是由受精卵通过细胞分裂和细胞分化形成的，遗传物质相同，C 项错误；干细胞包括成体干细胞和胚胎干细胞，D 项正确。例题精讲例2 有研究表明“渐冻症”是由突变的基因导致运动神经元合成了某种毒蛋白，从而阻碍了轴突内营养物质的流动。也有最新研究结果表明，利用诱导多功能干细胞（iPS 细胞）制作前驱细胞，然后移植给渐冻症实验鼠，能延长其寿命。下列相关描述错误的是（）A.iPS 细胞分

15、化成的多种细胞中所有核酸相同，蛋白质却不完全相同B.iPS 细胞分化的实质是基因的选择性表达，细胞种类增多C.若控制运动神经元合成毒蛋白的基因替换，则可以起到良好的治疗作用D.植入神经干细胞，恢复受损的运动功能，也许会在一定程度上使“渐冻症”病情改善【答案】A【解析】细胞分化的实质是基因的选择性表达，因此iPS细胞分化成的多种细胞中DNA 相同，RNA 和蛋白质不完全相同，A 项错误；细胞分化的结果是形成形态、结构和生理功能不同的细胞，使细胞的种类增多，B 项正确；若控制运动神经元合成毒蛋白的基因替换，则无法合成该毒蛋白，所以可以起到治疗该病的作用，C 项正确；植入神经干细胞，诱导分化成前驱细

16、胞，恢复受损的运动功能，也许会在一定程度上使“渐冻症”病情改善，D 项正确。动物细胞融合技术与单克隆抗体19701970年，有两位年，有两位科学家做科学家做了一个著了一个著名的实验名的实验：人：人鼠细胞融合的实验鼠细胞融合的实验，以以证明细胞膜上的证明细胞膜上的蛋白质蛋白质分子是运分子是运动的。动的。人鼠细胞是怎样实现融合的？动物细胞融合有什么实践意义呢？1.细胞融合：是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。融合后形成的杂交细胞具有原来两个或多个细胞的遗传信息。自然发生：受精卵人工诱导：诱导因素：聚乙二醇（PEG）融合法、电融合法或灭活病毒诱导法等。细胞融合技术仙台病毒仙台病毒紫外线紫外

17、线灭活灭活丧失感染活性（不感染细胞）丧失感染活性（不感染细胞）保留融合活性（诱导细胞融合）保留融合活性（诱导细胞融合）什么是什么是病毒的灭活病毒的灭活？灭活是指用物理或化学手段使病毒失去感染能力，但是并不破灭活是指用物理或化学手段使病毒失去感染能力，但是并不破坏病毒的抗原坏病毒的抗原结构。结构。灭活病毒诱导细胞融合的原理是：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。正在融合的正在融合的淋巴细胞与骨髓瘤细胞淋巴细胞与骨髓瘤细胞 正在融合的鸡血细胞正在融合的鸡血细胞动物细胞融合的原理：细胞膜的流动性

18、细胞膜的流动性 把两个不同的动物细胞放把两个不同的动物细胞放在一起，用灭活的病毒处理细在一起，用灭活的病毒处理细胞，它们先发生质融合，再出胞，它们先发生质融合，再出现核融合，进而形成杂交细胞。现核融合，进而形成杂交细胞。融合后的杂交细胞经过有丝融合后的杂交细胞经过有丝分裂后仍能形成两个完整的杂分裂后仍能形成两个完整的杂交细胞交细胞动物细胞融合与植物体细胞杂交的不同之处（1）融合前的处理不同：植物体细胞用纤维素酶和果胶酶去掉细胞壁，制备成原生质体才能融合，而动物细胞可以直接融合。（2）诱导方式不同：相比植物体细胞杂交，动物细胞融合特有的诱导方式是用灭活的病毒处理。（3）目的不同：植物体细胞杂交的

19、目的是培育杂种植株；动物细胞融合只是为了获得杂交细胞。2.动物细胞融合技术的应用：突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能；杂交瘤技术为制造单克隆抗体开辟了新途径。使用相应的抗体检测乙肝病毒抗原医院医院一般怎样检测人体内是否存在乙肝病毒？一般怎样检测人体内是否存在乙肝病毒？乙肝病毒模式图乙肝病毒模式图 凡能够引起机体产生特异性免疫应答的物质叫做抗原。什么是抗原？例如花粉、病菌、病毒等。有时自身的组织或细胞也会成为抗原，如癌细胞等。单克隆抗体及其应用单克隆抗体及其应用抗原决定簇：抗原表面具有的某些特定的化学基团，能决定抗原特异性，是免疫细胞识别抗原的重要依据。各种抗原的决定簇数目不同，同一抗原的

20、决定簇可能有多种。什么是抗体？由何种细胞产生？主要分布在哪里?起何作用？当机体受到抗原刺激后由效应B细胞（浆细胞）产生的，并且能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白抗体。抗体主要分布于血清中，也分布于组织液及外分泌液中。由血清中提取的抗体是由不同浆细胞产生的多种抗体的混合物，可达百万种以上，称为多克隆抗体。特点：产量低、纯度低、特异性差、反应不够灵敏。抗原不纯抗体不纯 抗原 动物体内注射效应B细胞 抗体血清抗体（也称多克隆抗体）每一个效应B淋巴细胞只分泌一种化学性质单一，特异性强的抗体。如果利用单个效应B淋巴细胞进行无性繁殖（克隆），形成细胞群，这样的细胞群就有可能产生出化学性质单一、

21、特异性强的抗体单克隆抗体。问题：怎样获得化学性质单一、特异性强的抗体呢？在体外培养的条件下，一个效应B淋巴细胞能无限增殖形成细胞群吗？什么样的细胞能够在体外无限增殖呢？肿瘤细胞！不能科勒米尔斯坦荣获1984年诺贝尔生理学或医学奖 如果把一种B淋巴细胞与能在体外大量增殖的骨髓瘤细胞进行融合，所得到的融合细胞既能大量增殖，又能产生足够数量的特定抗体。如何诱导融合？PEG融合法、灭活病毒诱导法、电融合法等如何得到B淋巴细胞？用特定的抗原对小鼠进行免疫，并从该小鼠的脾中得到能产生特定抗体的B淋巴细胞。制备单克隆抗体的过程细胞两两融合后，有哪些类型？B-BB-B B-B-瘤瘤(杂交瘤细胞杂交瘤细胞)瘤瘤

22、-瘤瘤 制备单克隆抗体过程中的几种细胞的比较如何筛选出杂交瘤细胞？单克隆抗体制备过程中，总共有两轮筛选，第一轮筛选出杂交瘤细胞，第二轮筛选为多次筛选，筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，两轮筛选的原理和方法是不相同的。首先用选择培养基筛选出杂交瘤细胞细胞细胞特点B B淋巴细胞淋巴细胞能产生单一抗体，但不能无限增殖。骨髓瘤细胞能无限增殖，但不能产生抗体。杂交瘤细胞杂交瘤细胞既能产生单一抗体，又能在体外培养条件下无限增殖。细胞细胞合成合成DNADNA有有D D和和S S两条途径，其中两条途径，其中D D途径能被氨基嘌呤阻断。途径能被氨基嘌呤阻断。人人淋巴细胞中有这两种淋巴细胞中有这两种DNADNA

23、的合成途径，但一般不分裂增殖。的合成途径，但一般不分裂增殖。鼠鼠骨髓瘤细胞中只有骨髓瘤细胞中只有D D途径，没有途径，没有S S途径，可是能不断分裂增途径，可是能不断分裂增殖。殖。你想到筛选杂交瘤细胞的方案了么？小资料：小资料：在培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖细胞！加入氨基嘌呤后，使 D 合成途径阻断，仅有 D 合成途径的骨髓瘤细胞及其彼此融合的细胞就不能增殖，但人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂种细胞因为可以利用淋巴细胞中的 S 途径合成DNA而增殖。通常采用有限稀释克隆细胞的方法，将杂交瘤细胞多倍稀释，接种在多孔细胞培养板上培养再筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞阳性孔阳性孔方法方法抗原抗原-

24、抗体杂交法抗体杂交法 在单克隆抗体制备过程中，在单克隆抗体制备过程中，两轮筛选两轮筛选的原理和方法是不相同的。的原理和方法是不相同的。如何得到大量的单克隆抗体？如何得到大量的单克隆抗体？体内培养体内培养体外培养体外培养单克隆抗体优点单克隆抗体优点化学性质单一、特异性化学性质单一、特异性强、灵敏度强、灵敏度高高9.制备单克隆抗体过程中两次筛选的原因、方法及目的第一次筛选第二次筛选筛选原因诱导融合后得到多种杂交细胞，另外还有未融合的细胞。由于小鼠在生活中还受到其他抗原的刺激，所以需经过选择性培养。筛选方法用特定的选择培养基筛选：未融合的细胞和同种细胞融合后形成的细胞（“BB”细胞、“瘤瘤细胞）都会

25、死亡，只有融合的杂交瘤细胞（“B瘤”细胞）才能生长。用多孔培养皿培养，在每个孔只有一个杂交瘤的情况下开始克隆化培养和抗体检测，经多次筛选得到能产生特异性抗体的细胞群。筛选目的得到杂交瘤细胞。得到既能分泌所需抗体又能大量增殖的杂交单克隆抗体单克隆抗体筛筛筛筛选选选选杂交细胞杂交细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞体外或体内体外或体内体外或体内体外或体内细胞培养细胞培养细胞培养细胞培养筛选筛选筛选筛选骨髓瘤骨髓瘤细胞细胞诱导细胞融合诱导细胞融合诱导细胞融合诱导细胞融合特异性杂交瘤细胞特异性杂交瘤细胞杂交瘤细胞系杂交瘤细胞系提取提取提取提取经过免疫的经过免疫的B B B B淋巴细胞淋巴细胞动物细胞动物细胞动物细

26、胞动物细胞融合技术融合技术融合技术融合技术动物细动物细动物细动物细胞培养胞培养胞培养胞培养技术技术技术技术单单克克隆隆抗抗体体的的制制备备过过程程：特点：既能产生专一抗体又能特点：既能产生专一抗体又能特点：既能产生专一抗体又能特点：既能产生专一抗体又能大量繁殖大量繁殖大量繁殖大量繁殖特点：特异性强灵敏度高可大特点：特异性强灵敏度高可大特点：特异性强灵敏度高可大特点：特异性强灵敏度高可大量制备量制备量制备量制备注射抗原注射抗原注射抗原注射抗原免疫免疫免疫免疫2.2.单抗隆单抗隆抗体的应用抗体的应用 利用同位素或荧光标记的单克隆抗体在特定组织中成像的技术，可定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病，纯度高、

27、特异性强，具有准确、高效、简易、快速的优点。（2）用于运载药物和治疗疾病（1）用作诊断试剂 抗体药物偶联物（antibody-drug conjugates，ADC）；单克隆抗体诊断试剂盒和抗体药物偶联物（ADC）在临床应用上各具有的优势：（1）单克隆抗体诊断试剂盒中的单克隆抗体只与特定的抗原反应，因此使检测的特异性和灵敏度大大提高；生产单克隆抗体的杂交瘤细胞可以传代培养、冷冻保存和复苏利用，有利于控制产品的质量和标准化生产诊断试剂盒。（2）ADC能够协同发挥抗体特异性识别的靶向作用和细胞毒素对肿瘤细胞的杀伤作用，因此在临床上具有靶点清楚、毒副作用小等优点。（3）单克隆抗体在临床上还有哪些应用

28、？单克隆抗体在临床上的应用涉及治疗、诊断等方面。单克隆抗体药物已被广泛用于肿瘤、自身免疫病等疾病的治疗，如利妥昔单抗被用于治疗复发难治的低分化B细胞淋巴瘤；曲妥珠单抗被用于治疗乳腺癌等。在临床诊断方面，单克隆抗体被广泛用于一些感染性疾病的检测、肿瘤的诊断、激素和细胞因子的测定等。以单克隆抗体在诊断肿瘤方面的应用为例，用放射性同位素或荧光标记抗肿瘤表面抗原的单克隆抗体，可以用这些抗体来对体内的肿瘤进行定位，辅助诊断并确定肿瘤的复发与转移等。项目项目项目项目动物细胞融合动物细胞融合动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交植物体细胞杂交植物体细胞杂交原理原理原理原理细胞膜的流动性细胞膜的

29、流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性和植物细细胞膜的流动性和植物细细胞膜的流动性和植物细细胞膜的流动性和植物细胞的全能性胞的全能性胞的全能性胞的全能性融合前提融合前提融合前提融合前提分散成单个细胞分散成单个细胞分散成单个细胞分散成单个细胞去除细胞壁去除细胞壁去除细胞壁去除细胞壁诱导方法诱导方法诱导方法诱导方法聚乙二醇、离心、振动、电激、聚乙二醇、离心、振动、电激、聚乙二醇、离心、振动、电激、聚乙二醇、离心、振动、电激、灭活病毒灭活病毒灭活病毒灭活病毒聚乙二醇、离心、振动、聚乙二醇、离心、振动、聚乙二醇、离心、振动、聚乙二醇、离心、振动、电激、电激、电激、电激、结果结果结果结果获得杂

30、种细胞或细胞产物获得杂种细胞或细胞产物获得杂种细胞或细胞产物获得杂种细胞或细胞产物获得杂种植株获得杂种植株获得杂种植株获得杂种植株用途用途用途用途制备单克隆抗体制备单克隆抗体制备单克隆抗体制备单克隆抗体培育作物新品种培育作物新品种培育作物新品种培育作物新品种意义意义意义意义使远缘杂交成为可能使远缘杂交成为可能使远缘杂交成为可能使远缘杂交成为可能克服远缘杂交障碍克服远缘杂交障碍克服远缘杂交障碍克服远缘杂交障碍动物体细胞核移植技术和克隆动物卵母细胞受体供体代孕受体核移植的卵细胞可以发育成个体，但乳腺细胞不能直接发育成个体，这说明了什么？黑面母绵羊白面母绵羊乳腺细胞细胞核移植早期胚胎C母绵羊子宫胚胎

31、移植多莉羊分娩妊娠融合后的卵母细胞白面体外培养母羊克隆羊1.概念：动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核,移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使这个重新组合的细胞发育成新胚胎，继而发育成动物个体的技术。3.分类：胚胎核移植、体细胞核移植。胚胎细胞分化程度低，恢复其全能性相对容易。动物体细胞分化程度高，恢复其全能性十分困难2.原理：动物细胞核具有全能性。克隆动物供体受体动物核移植技术和克隆动物动物核移植技术和克隆动物供体体细胞 （供核）细胞培养体细胞卵巢卵母细胞（M中期：供质）通过显微在操作去核 无核 卵母细胞注入重组细胞重构胚胚胎移植代孕母体生出与供体遗传性状基本相同的动物4.过程克隆动物的性状

32、表现与三个亲本的关系大多数与母羊_相同，少数与母羊_相同，与母羊_无关。因为：克隆动物绝大部分DNA来自供体细胞核，但核外还有少部分DNA来自受体卵母细胞。ABC 克隆动物的遗传物质不是对供体动物的100的复制 动物细胞培养技术动物核移植技术胚胎移植技术.核移植之前，为何要去掉受体卵母细胞的核？为使核移植动物的核遗传物质全部来自有利用价值的动物提供的细胞。.用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，为什么？10代以内的细胞遗传物质不改变保持正常二倍体的核型3.细胞核移植生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？不是，克隆动物绝大部分DNA来自供体细胞核，但核外还

33、有少部分DNA（如线粒体DNA）来自受体卵母细胞。思考讨论（1）体细胞核移植共分成两大阶段：（2）移植过程用到的生物技术：核移植和胚胎移植动物细胞培养、核移植、早期胚胎培养、胚胎移植（3）克隆的繁殖方式：无性繁殖总结（1）畜牧业方面：（2）医药卫生方面：可以加速家畜遗传改良的进程，促进优良畜群繁育。保护濒危物种，增加其存活数量生产医用蛋白质组织器官的移植（3）其他领域：了解胚胎发育及衰老过程克隆一批遗传背景相同的动物，可以通过它们之间的对比来分析致病基因。克隆特定疾病模型的动物，还能为研究该疾病的致病机制和开发相应的药物提供帮助应用前景该技术的成功率仍然非常低，各个技术环节也有待进一步改进相对

34、于技术研究，核移植的理论研究较为滞后，需要与发育生物学、细胞生物学和分子遗传学等学科更深层次的理论研究相结合。绝大多数克隆动物存在健康问题体细胞核移植技术存在的问题疑难解析 拓展延伸克隆动物、试管动物与转基因动物遗传特性比较表克隆动物试管动物转基因动物概念用核移植的方法获得的动物用体外受精的方法获得的由被转人了目的基因的受精卵发育成的动物技术核移植体外受精DNA重组技术生殖方式无性繁殖有性生殖有性生殖或保持原生殖方式遗传特性主要与供核个体相同具备双亲的遗传性状具备原受精卵及被转入的目的基因两方的遭传特异性相同点三者均涉及早期胚胎培养、胚胎移植等技术，且移植所选胚胎一般是桑葚胚或囊胚期的胚胎。已

35、知细胞合成DNA有D和S两条途径,其中D途径能被氨基蝶呤阻断。人淋巴细胞中有这两种DNA合成途径,但不能无限增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径,但能不断分裂增殖。将这两种细胞在培养皿中混合,并添加促融剂促进细胞融合,获得杂种细胞,并生产单克隆抗体,实验流程如图所示。请回答:(1)生产单克隆抗体时,一般不直接利用B淋巴细胞,主要原因是 。(2)过程中,常用的与诱导植物细胞融合相同的诱导剂是。(3)过程为 培养,培养箱中还需通入气体物质,其中通入CO2的目的是。(4)过程表示杂交瘤细胞的扩大培养,其既可在体外培养,也可注射到小鼠内培养。与体外培养相比,体内培养的优点是。(5)为了从培养液中分离出杂交瘤细胞,需在过程向培养液中加入 ,理由是杂交瘤细胞可利用途径合成DNA,从而在该培养液中增殖。例题精讲 B淋巴细胞不能无限增殖聚乙二醇动物细胞维持培养液的pH腹腔易于控制培养条件,成本较低,操作简便氨基蝶呤B淋巴细胞中的S