第五章 基因表达调控.ppt
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1、第五章 基因表达调控本章主要内容 基因表达调控总论 原核基因表达调控总论 乳糖操纵子与负控诱导系统 色氨酸操纵子与负控阻遏系统 操纵子的其他调控形式 转录水平上的其他调控方式 转录后调控第一节 基因表达调控总论典型的基因表达是储存遗传信息的基因,在一定调节机制控制下,经过转录、翻译,产生有生物活性的蛋白质或成熟的rRNA和tRNA的过程。一、基因表达 典型的哺乳类细胞中开放转录的基因约在1万个上下,即使蛋白质合成量比较多、基因开放比例较高的肝细胞,一般也只有不超过20%的基因处于表达状态。生物基因组的遗传信息并不是同时全部都表达出来的 大肠杆菌基因组(约4000个基因),一般情况下只有510%
2、在高水平转录状态,其它基因有的处于较低水平的表达,或者暂时不表达。人的基因组约含有10万个基因,但在一个组织细胞中通常只有一部分基因表达,多数基因处在沉静状态.二、基因表达的规律-时间性及空间性(1)时间特异性按功能需要,某一特定基因的表达严格按特定的时间顺序发生,称之为基因表达的时间特异性。多细胞生物基因表达的时间特异性又称阶段特异性。(2)空间特异性基因表达伴随时间顺序所表现出的这种分布差异,实际上是由细胞在器官的分布决定的,所以空间特异性又称细胞或组织特异性。在个体生长全过程,某种基因产物在个体按不同组织空间顺序出现,称之为基因表达的空间特异性。三、基因表达的方式1.基因组中表达的基因分
3、为两类:管家(持家)基因(house keeping gene):维持细胞基本生命活动所必须的基因。某些基因在一个个体的几乎所有细胞中持续表达,通常被称为管家基因。奢侈基因:在特别细胞类型中大量(通常)表达并编码特殊功能产物的基因。奢侈基因(luxury gene):是指导合成组织特异性蛋白的基因,对分化有重要影响,称组织特异性(tissue-specific gene)表达的基因,如表皮的角蛋白基因。(1)组成性表达无论表达水平高低,管家基因较少受环境因素影响,而是在个体各个生长阶段的大多数或几乎全部组织中持续表达,或变化很小。区别于其他基因,这类基因表达被视为组成性基因表达。2.按对刺激的
4、反应性,基因表达的方式分为:(2)诱导和阻遏表达适应性表达指环境的变化容易使其表达水平变动的一类基因表达。在特定环境信号刺激下,相应的基因被激活,基因表达产物增加,这种基因称为可诱导基因。如果基因对环境信号应答是被抑制,这种基因是可阻遏基因。是指在特定环境因素刺激下,可诱导基因被激活,从而使基因的表达产物增加。诱导表达 如:DNA发生损伤时,修复酶的基因被诱导激活。可阻遏基因表达产物水平降低的过程称为阻遏。阻遏如:周围有充足的葡萄糖,细菌就可以利用葡萄糖作能源和碳源,不必更多去合成利用其它糖类的酶类,如乳糖操纵子被阻遏、关闭。四、基因表达调控的基本原理(一)基因表达调控的方式:多级调控转录水平
5、(基因激活及转录起始)转录后水平(加工及转运)翻译水平翻译后水平原核生物主要受营养状况和环境因素的影响真核生物主要受发育阶段和激素水平的影响指挥系统多样性1顺式作用元件:顺式作用元件(cis-acting element)又称分子内作用元件,指存在于DNA分子上的一些与基因转录调控有关的特殊顺序。在原核生物中,大多数基因表达通过操纵子模型进行调控,顺式作用元件主要由启动子、操作子、激活子位点、终止位点组成。在真核生物中,与基因表达调控有关的顺式作用元件主要有启 动 子(promoter)、增 强 子(enhancer)和 沉 默 子(silencer)。(二)基因转录激活调节基本要素:基因的组
6、织结构及顺式作用元件 反式作用因子(trans-acting factor)又称为分子间作用因子,指一些与基因表达调控有关的蛋白质因子。原核生物中的反式作用因子主要分为特异因子()、激活蛋白和阻遏蛋白;真核生物中的反式作用因子通常称为转录因子。2反式作用因子:大多数调节蛋白在与DNA结合之前,需先通过蛋白质-蛋白质相互作用,形成二聚体或多聚体,然后再通过识别特定的顺式作用元件,而与DNA分子结合。这种结合通常是非共价键结合。3顺式作用元件与反式作用因子之间的相互作用第二节 原核基因表达调控总论一、原核生物基因表达的调控方式1.DNA水平的调控2.转录水平的调控3.翻译水平的调控调节的主要环节在
7、转录起始二、原核生物基因转录调节特点(1)因子决定RNA聚合酶识别特异性 只有一种RNA-pol,但是有很多种 因子(2)操纵子模型的普遍性 功能相关基因成簇串联通过单个启动子协调表达(3)阻遏蛋白与阻遏机制的普遍性 原核生物主要以这种负调节方式为主1.分类 负控制(negative control)系统 正控制(positive control)系统 正、负调控的共同点在于调控蛋白作为反式作用因子,能识别那些位于基因上游的顺式作用元件,根据调控蛋白的自身性质,可以激活或抑制基因表达。2.特点:通过特殊代谢物调节基因活性 可诱导调节:基因由原来的关闭状态转变为工作状态 可阻遏调节:基因由原来的
8、开启状态转变为关闭状态三、调控机制的类型与特点 1.负控制系统定义:调节基因的产物是阻遏蛋白,起着阻止结构基因转录的作用。2.阻遏蛋白(repressor)3.分类 负控诱导:调节物为诱导物 负控阻遏:调节物为阻遏物(一)负控制系统1.正控制系统:调节基因的产物是激活物,起着激活结构基因转录的作用2.激活蛋白(activator)3.分类正控诱导:调节物为诱导物正控阻遏:调节物为阻遏物(二)正控制系统1.可诱导操纵元(inducible operon)(1)可诱导操纵元:加入对基因表达有调节作用的小分子后,基因的转录活性开启的操纵元,称可诱导调节。(2)诱导(induction):小分子使基因
9、的转录活性开启的作用和过程(3)诱导物(inducer):产生诱导作用的小分子;可能的作用方式:使无活性的激活蛋白激活或使有活性的阻遏蛋白失活四、正、负控制系统对操纵元的控制(一)可诱导操纵元(1)可阻遏操纵元:加入对基因表达有调节作用的小分子后,基因的转录活性关闭的操纵元,可阻遏调节(2)阻遏(repression):小分子使基因的转录活性关闭的作用和过程(3)辅阻遏物(corepressor):产生阻遏作用的小分子;可能的作用方式:使有活性的激活蛋白失活或使无活性的阻遏蛋白激活(二)可阻遏操纵元第三节 乳糖操纵子调节机制1.发现:1940年Monod:细菌在含葡萄糖和乳糖的培养基上生长时,
10、细菌优先使用葡萄糖,当葡萄糖耗尽,细菌才利用乳糖繁殖增长;71961年,法国人法国人Jacob&Monod提出乳糖操纵子乳糖操纵子学说学说。7获1965年诺贝尔生理学和医学奖。Francis Jacob Jacques Monod 一、原核生物 操纵子(operon)操纵子:是原核生物基因表达的协调单位,它包括启动子、操纵序列以及在功能上彼此相关的几个结构基因。操纵子一般含有26个基因,它们一起被转录,构成一个转录单位。2.乳糖操纵子(lac operon)的结构 结构基因Z:-半乳糖苷酶Y:半乳糖苷透过酶A:乙酰基转移酶 调控区CAP结合位点启动序列操纵序列Z Y A O PDNACatab
11、olite gene activator protein操纵序列和启动子的相对位置关系(1)细菌半乳糖苷酶合成的诱导有乳糖供应,无葡萄糖 3.酶的诱导lac体系受调控的证据(2)安慰诱导物:具有诱导效应,而本身又不被分解的诱导物。常用:IPTG(异丙基巯基半乳糖苷)、TMG(巯甲基半乳糖苷)半乳糖(二)lac操纵子的影响因子1、Lac操纵子的本底水平表达2、大肠杆菌对乳糖的反应3、阻遏物lacI基因产物及功能4、cAMP与代谢物激活蛋白5、葡萄糖对lac操纵子的影响6、协调调节 1、乳糖操纵子本底水平的表达外周胞质乳糖细胞内面乳糖透(性)酶 透(性)酶半乳糖苷酶葡萄糖半乳糖内膜Z:-半乳糖苷酶
12、Y:半乳糖苷透过酶A:乙酰基转移酶lac操纵子理论不能解释的2个矛盾 诱导物需要穿过细胞膜才能与阻遏物结合,而转运诱导物需要透过酶,而后者的合成也需要诱导。解释:一些透过酶可能在没有诱导物的情况下合成 真正的诱导物是异构乳糖而非乳糖,前者是半乳糖苷酶的催化下由乳糖形成的,因此,需要有半乳糖苷酶的预先存在。解释:在本底水平上,有半乳糖苷酶的组成型合成,即在非诱导状态下,乳糖操纵子有本底水平上的表达。u 半乳糖苷酶的作用 催化乳糖转变为异构乳糖。异构乳糖是一种强诱导物u 原因一:一些诱导物可以以另一种摄取系统进入细胞u 原因二:阻遏蛋白与lacO的结合是动态平衡 本底水平的永久型合成:在非诱导状态
13、下有少量的 lac mRNA合成。2、大肠杆菌对乳糖的反应没有乳糖存在时有乳糖存在时 Lac操纵子阻遏物mRNA是在弱启动子控制下永久型合成的。当I基因由弱启动子突变为强启动子,细胞内就不可能产生足够的诱导物来克服阻遏状态,整个lac操纵子在这些突变体中就不可诱导。3、阻遏物lacI基因产物及功能(1)阻抑蛋白的结构和功能(2)阻抑蛋白与特异DNA(操纵基因)的结合位点(3)阻抑蛋白对DNA的特异结合作用(4)阻抑蛋白对RNA聚合酶的影响阻抑蛋白的作用机制v N端159aa,头 部片 段HTH,与 操 纵基 因DNA的 大 沟 结合;v 2个 核 心 区:每 个有6个 折 叠,诱 导物 结 合
14、 在 两 个 核 心区之间的裂缝中;v C端为一组a-螺旋(1)阻遏蛋白的结构和功能的关系核心结构域1核心结构域2HTH铰链区头部尾部聚合4个亚基的核心片段接触形成四聚体该阻遏蛋白有4个相同的亚基,每个亚基均含有347个氨基酸残基,并能与1分子IPTG结合。(2)阻抑蛋白与特异DNA(操纵基因)的结合位点操纵基因的对称序列 操纵基因的对称序列对称轴:+11(3)阻抑蛋白对DNA 的特异结合作用:非诱导条件下,阻抑蛋白都结合在DNA 上,特异位点的亲和力高,非特异位点的亲和力低。诱导物的加入改变了阻抑蛋白的分布。(4)阻抑蛋白对RNA 聚合酶的影响阻抑蛋白结合区阻抑蛋白和RNA pol可同时与D
15、NA结合;阻抑蛋白存在增强了RNA pol的结合:RNA pol 与启动子结合的平衡常数 1.9 X 107;有阻抑蛋白时,2.5 X 109。虽然阻抑蛋白存在使得RNA pol不能转录。但加入诱导物后,释放出阻抑蛋白,闭合复合体变成为开放复合体,立即起始转录。4、cAMP与代谢物激活蛋白CAP降解物基因活化蛋白 CAP-cAMP复合物CAP+转录无葡萄糖,cAMP浓度高时有葡萄糖,cAMP浓度低时(1)CAP 的正性调节Z Y A O PDNACAPCAPCAP CAPCAPCAP(2)CAP 的作用机制a.可能CAP直接作用于RNA pol a亚基,b.作用于DNA,改变其结构,从而帮助R
16、NA Pol结合。CAPCAP以以两种方法来激活转录:两种方法来激活转录:CAP 结合位点 结合位点22bp I-70-50 II-50-40 CAP为二聚体,45KD,被cAMP激活 由 于pLac 是 弱 启 动 子,单 纯 因 乳 糖 的 存 在 发 生 去阻 遏 使lac 操 纵 元 转 录 开 放,还 不 能 使 细 菌 很 好 利 用乳 糖,必 需 同 时 有CAP 来 加 强 转 录 活 性,细 菌 才 能合成足够的酶来利用乳糖。CAP 存在原因:乳糖5、葡萄糖对lac操纵子的影响cAMP-CAP复合物对lac操纵子的正调控葡萄糖效应:葡萄糖的存在降低了cAMP的量,不能形成cA
17、MP-CAP复合物,lac操纵子关闭 调节基因转录翻译阻遏蛋白R,R与操纵基因结合,阻止结合在启动子上的RNA-pol前移,结构基因不被转录。1)无乳糖也无葡萄糖存在时:2)当无乳糖,有葡萄糖时:由于葡萄糖不能使阻遏蛋白失活,乳糖操纵子关闭,另外,由于有葡萄糖,cAMP含量低,CAP的正性调节不起作用。小结:所以:无乳糖时,无论有无葡萄糖,操纵子关闭OPOP 由于葡萄糖降解物能降低cAMP含量,不与CAP形成复合物,CAP不能结合到启动子附近,RNA聚合酶不能有效转录,使细菌只能利用葡萄糖。3)既有乳糖,又有葡萄糖时:乳糖与阻遏蛋白结合,使阻遏蛋白变构,失去与操纵基因结合的能力而脱落。O 细胞
18、内cAMP含量高,cAMP与CAP结合成复合物,与DNA结合,并推动RNA-pol向前移动,促进转录。4)有乳糖,无葡萄糖时:mRNARNA-polO 乳糖与阻遏蛋白结合,使阻遏蛋白变构,失去与操纵基因结合的能力而脱落,结合在启动子上的RNA-pol向前移动,结构基因被转录翻译,合成与乳糖代谢有关的酶类从而利用乳糖。所以:有乳糖时,没有葡萄糖,操纵子才开放,有葡萄糖存在,操纵子关闭6.协调调节 阻遏蛋白封闭转录时,CAP对该系统不能发挥作用;没有阻遏蛋白与操纵序列结合,如无CAP存在加强转录,操纵子仍无转录活性。单纯乳糖存在时,细菌利用乳糖作碳源。若有葡萄糖或葡萄糖/乳糖共同存在时,细菌首先利
19、用葡萄糖。葡萄糖对lac操纵子的阻遏作用称分解代谢阻遏。第三节 色氨酸操纵子与负控阻遏系统(1)阻遏蛋白调控系统对trp酶系统转录活性的影响系统对trp酶系统的转录起始频率有70倍的调控范围(2)弱化子系统对trp酶系统活性的影响弱化子系统对trp酶系统活性的有10倍的影响(3)弱化子系统存在的意义对转录体系产生更为精细的调节1.色氨酸操纵子:trp体系参与生物合成而不是降解一、色氨酸操纵子概述2.色氨酸的合成 在微生物、植物的芳香族氨基酸的生物合成系统中作为中间体位于重要分支点的化合物。在生物体内由莽草酸经5磷酸-3-烯醇丙酮酸莽草酸而合成。从分支酸经过预苯酸合成苯丙氨酸和酪氨酸,经邻氨基苯
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- 第五章 基因表达调控 第五 基因 表达 调控
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