核酸类药物的生产.pptx

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1、第五节 核酸类药物的生产内容提要五、核酸类结构改造药物的制备五、核酸类结构改造药物的制备二、核酸类药物的生产方法二、核酸类药物的生产方法一、核酸类药物的分类一、核酸类药物的分类三、三、DNA和和RNA的制备的制备四、肌苷的制备四、肌苷的制备2碱基：碱基：腺嘌呤腺嘌呤 A核苷：核苷：腺苷腺苷核苷酸：核苷酸：腺苷酸腺苷酸 AMP(腺苷一磷酸腺苷一磷酸)ADP(腺苷二磷酸腺苷二磷酸)ATP(腺苷三磷酸腺苷三磷酸)DNARNA3(一一)什么是核酸类药物？什么是核酸类药物？n具有药用价值的核酸、核苷酸、核苷、碱基及其衍生物。4（二）核酸类药物的分类具有具有天然结构天然结构的核酸类物质的核酸类物质 核酸类

2、药物核酸类药物的分类的分类自然结构核酸自然结构核酸类物质的类似类物质的类似物和聚合物物和聚合物51、具有天然结构的核酸类物质n ATP、GTP、CTP、UTP、肌苷。ATP：用于心肌炎、心肌梗死、心力衰竭及动脉或冠状动脉硬化的治疗或辅助治疗。肌苷：用于急慢性肝炎、肝硬化、白细胞减少、血小板减少等。62、自然结构核酸类物质的类似物和聚合物叠氮胸苷、阿糖腺苷、阿糖胞苷等。治疗病毒、肿瘤、艾滋病的重要药物。7二、核酸类药物的生产方法直接提取法1水解法（酶水解、碱水解、酸水解）2化学合成法3酶合成法4微生物发酵法58酶水解酶水解9碱水解碱水解n用碱水解用碱水解RNA 可产生可产生2、3-混合核苷酸混合

3、核苷酸 2、3-混合核苷酸在医药上有它的特殊用途，对血小板减少，白血球减混合核苷酸在医药上有它的特殊用途，对血小板减少，白血球减少症和癌症化疗后升白血球均有较好疗效。少症和癌症化疗后升白血球均有较好疗效。10DNADNA的作用的作用的作用的作用维护正常免维护正常免疫功能疫功能延缓机体延缓机体衰老衰老调节新陈调节新陈代谢代谢（一）DNA的制备促进细胞的活促进细胞的活化化11利用补救合成途径为人体提供脱氧核苷酸，参与人体核酸代谢，从而具有促进细胞生长、修复受损细胞及改变机体代谢的作用。用于急慢性肝炎白细胞减少症，血小板减少症及再生障碍性贫血等的辅助治疗。12DNA的粗提取1、准备材料n将新鲜菜花和

4、体积分数为95%的酒精溶液放入冰箱冷冻室,至少24 h。2、取材n称取30 g菜花，去梗取花,切碎。3、研磨n将碎菜花放入研钵中，倒入10 mL研磨液，充分研磨10 min。4、过滤n在漏斗中垫上尼龙纱布，将菜花研磨液倒入塑料离心管中进行离心,用1 000r/min的旋转频率，离心25 min，取上清液放入烧杯中，取上清液。5、加冷酒精n将一倍体积的上清液倒入两倍体积的体积分数为95%的冷酒精溶液中，并用玻璃棒缓缓地轻轻搅拌溶液，可见白色的DNA絮状物出现。14DNA的鉴定1、配制二苯胺试剂n取0.1 mL B液，滴入到10 mL A液中，混匀。2、鉴定n取4 mL DNA提取液放入试管中，参

5、加4 mL 二苯胺试剂，混匀后观察溶液颜色(不变蓝)。用沸水浴(100)加热10 min。在加热过程中，随时注意试管中溶液颜色的变化(逐渐出现浅蓝色)。15农业生产农业生产化装品抗癌、抗病毒抗癌、抗病毒关节炎关节炎肝炎、心脏病肝炎、心脏病RNA的作用的作用（二）RNA的制备16BP素素(注射用核糖核酸注射用核糖核酸)【性状】本品为白色或类白色冻干块状物或粉末，易溶于水。【药理毒理】本品具有提高机体细胞免疫功能和抑瘤作用。【适应症】适用于胰腺癌、肝癌、胃癌的辅助治疗，对乙型肝炎的辅助治疗有较好的效果。本品亦可用于其他免疫机能低下引起的各种疾病。BP素素(注射用核糖核酸注射用核糖核酸)BP素素(注

6、射用核糖核酸注射用核糖核酸)BP素素(注射用核糖核酸注射用核糖核酸)171、制备、制备RNA的材料来源的材料来源主要采用酵母、面包酵母等。18（1）稀碱法用氢氧化钠溶液，使细胞壁变性，使核酸从细胞内释放出来，再用酸中和至pH 7.0，将pH调至RNA的等电点(pH 2.5)，使RNA沉淀出来。（2）浓盐法用高浓度盐溶液(68)处理，同时加热，改变细胞壁的通透性，使核酸从细胞内释放出来。2、提取法制备RNA193、RNA的提取实例n啤酒酵母是提取RNA的很好的资源。n取100g压榨啤酒酵母，参加230mL 0.33mol/L的Na0H溶液，20以下缓慢搅拌30min。n用6mol/L HCl调至

7、pH 7，搅拌15min，离心得清液255mL。冷至10以下n6mol/L HCl调pH 2.5，置冷过夜，离心得RNA 1.8g。20肌苷的背景知识n【质量标准】：收载于药典2005年版二部205页21【药理作用】本品能使处于低能缺氧状态下的细胞继续顺利进行代谢，并参与人体能量代谢与蛋白质的合成。【适应症】临床用于白细胞或血小板减少症，各种急慢性肝脏疾病、心脏疾病、洋地黄中毒症等疾病。肌苷的背景知识22洋地黄肌苷的背景知识肌苷的背景知识23n肌苷是由次黄嘌呤与核糖结合而成。n次黄嘌呤可由腺嘌呤(A)脱氨形成，是嘌呤衍生物。肌苷的背景知识241、肌苷生产的工艺流程25精制精制菌种菌种菌种扩大菌

8、种扩大培养培养发酵发酵提取提取吸附吸附洗脱洗脱肌苷肌苷操作要点操作要点2、肌苷生产的操作要点26(1)菌种 变异芽孢杆菌 2、肌苷生产的操作要点27(2)种子扩大培养流程28A、斜面培养30-32,培养48h斜面培养基：葡萄糖、蛋白胨、酵母浸膏、牛肉浸膏、琼脂B、摇瓶振荡培养(32 1),培养18h摇瓶培养基：葡萄糖、蛋白胨、酵母浸膏、玉米浆、尿素、NaClC、种子罐培养(32 1)，培养12-15h种子罐培养基：同摇瓶种子培养基29(3)发酵 50L发酵罐，(32 1),93h 500L发酵罐,(32 1),75h 20000L发酵罐，(35 1),83hn发酵培养基：淀粉水解糖、干酵母水解

9、液、豆饼水解液、尿素、硫酸铵、硫酸镁、氯化钾、磷酸氢二钠、有机硅油303溶解氧和溶解氧和CO2的影响1温度温度的影响4泡沫泡沫的影响2pH的影响发酵过程要注意31(4)提取、吸附、洗脱(5)精制32（一）三氮唑核苷的制备n 别名别名 利巴韦林，病毒唑，为广谱抗病毒药物。n 抗病毒机制抗病毒机制 抑制多种DNA和RNA病毒的复制，但对病毒无直接的灭活作用。n 抗病毒谱抗病毒谱 如甲型和乙型流感病毒、单纯疱疹病毒、麻疹病毒、乙型脑炎病毒、流行性出血热病毒、脊髓灰质炎病毒等。331、化学合成法 1972年，一家公司首次化学合成法研制成功。鸟苷 核糖-1-磷酸 核糖-1-磷酸+三叠氮羧基酰胺(TCA)

10、三氮唑核苷乙酸酐，冰醋酸双-对硝基苯酚-磷酸酯氨解342、发酵法(1)35(2)培养基n斜面活化培养基：葡萄糖、蛋白胨、牛肉膏、酵母膏.，氯化钠、琼脂，pH7.0-7.2n种子培养基：葡萄糖、味精、尿素、蛋白胨、酵母膏、玉米浆，pH7.0-7.2n发酵培养基：葡萄糖、硫酸铵、酵母粉、味精、豆饼水解液、磷酸二氢钾、七水硫酸镁、硫酸锰、碳酸钙，pH7.0-7.236TCA 添加量为10g/L(3)发酵最适条件发酵最适条件37MnSO4 的最正确添加量为10mg/L38KH2PO24的最正确添加量为6mg/L39胞二磷胆碱，为卵磷脂生物合成必需的辅酶。主要用于急性颅脑外伤和脑手术后的意识障碍1954年，Kennedy博士等人发现了胞二磷胆碱1963年，武田公司首次开辟，用于治疗意识障碍获得成功，商品名Nicholin，译名尼可林。1973年，国内试制成功。（二）胞二磷胆碱的制备401、发酵法(1)菌种 啤酒生产中废弃的酵母(2)反应体系 CMP；磷酸胆碱；葡萄糖；MgSO47H2O；磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液（pH8.0）；41磷酸胆碱浓度30微克/毫升42(3)反响条件：28水浴，培养20 h，可得胞二磷胆碱。43演讲完毕，谢谢观看！