药物杂质检查介绍.pptx

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1、第三章第三章 药物的杂质检查药物的杂质检查v掌握药物中杂质的来源和分类、杂掌握药物中杂质的来源和分类、杂质限量的定义和计算质限量的定义和计算v掌握一般杂质检查的原理和方法掌握一般杂质检查的原理和方法v熟悉特殊杂质检查原理熟悉特殊杂质检查原理v了解特殊杂质检查方法了解特殊杂质检查方法。学习目标第1页/共109页一、一、杂质种类及来源杂质种类及来源 杂质是指药物中存在的无治疗作用或影响药物的稳定性和疗效，甚至对人体健康有害的物质。药物中存在的杂质不仅可以影响药物的质量，而且还可以反映出生产贮藏等过程中存在的问题。因杂质的多少反映药物的纯度高低，所以药物的杂质检查又称为纯度检查。第一节 药物的杂质及

2、其来源 第2页/共109页（一）杂质的种类（一）杂质的种类 药物中的杂质按药物中的杂质按来源来源分为分为 1.一般杂质：在自然界分布广，容易在自然界分布广，容易引入药物中的物质引入药物中的物质。如氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐、酸、碱、水分、易炭化物、炽灼残渣等。其检查方法收载在药典的附录附录中 第3页/共109页 2.特殊杂质特殊杂质：指在有关药物生产或贮藏过程中，因其生产工艺或药物本身的性质可能引入的杂质。随药物的品种而异，如：Aspirin中的游离水杨酸、甾体激素中的其他甾体检查方法收载在药典正文各药品的质量标准中第4页/共109页按性质分为信号杂质和有害杂质信号杂质本身一般无害，但

3、其含量的多少可反映出药物的纯度水平，如含量过高，表明药物的纯度差。如氯化物、硫酸盐等属于信号杂质。有害杂质如砷盐、重金属、氰化物对人体有害，在质量标准中要严格控制。第5页/共109页（二）药物中杂质的来源（二）药物中杂质的来源1.生产过程中引入生产过程中引入（1）原料、反应中间体及副产物（2）试剂、溶剂、催化剂类 （3）生产中所用金属器皿、装置以及其他不耐酸、碱的金属工具所带来的杂质(AsPbFe)第6页/共109页2 2 贮藏过程中引入贮藏过程中引入 (1)保管不善或贮存时间过长保管不善或贮存时间过长(2)包装不当包装不当第7页/共109页二、杂质限量检查及其计算（一）杂质的限量检查 在不影

4、响药物疗效、稳定性及不发生毒性的前提下,药物中所含杂质的最大允许量.通常用百分之几或百万分之几（ppm）来表示第8页/共109页杂质量 杂质限量 杂质量药品合格药品不合格第9页/共109页限量检查方法有以下三种：对照法 灵敏度法 比较法 第10页/共109页（二）（二）杂质限量的有关计算杂质限量的有关计算第11页/共109页S式中式中L杂质限量，杂质限量，%（或（或mg/kg）；）；T标准溶液浓度，标准溶液浓度，mg/ml（或（或g/ml）；）；V标准溶液的体积，标准溶液的体积，mL；S供试品取样量，供试品取样量，g。第12页/共109页第三节 一般杂质检查第二节 一般杂质检查 第13页/共1

5、09页一、氯化物检查法一、氯化物检查法1.原理 对照法 第14页/共109页2.操作方法取各药品项下规定量的供试品，加水溶解使成25mL（溶液如显碱性，可滴加硝酸使成中性），再加稀硝酸10mL；溶液如不澄清，应滤过；置50mL纳氏比色管中，加水使成约40mL，摇匀，即得供试液。另取各药品项下规定量的标准氯化钠溶液，置50mL纳氏比色管中，加稀硝酸10mL，加水使成40mL，摇匀，即得对照溶液。于供试溶液与对照溶液中，分别加入硝酸银试液1.0mL，用水稀释至50mL，摇匀，在暗处放置5min，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，比较，即得。第15页/共109页3.注意事项标准氯化钠溶液配制：称

6、取氯化钠0.165g，置1000mL量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液10mL，置100mL量瓶中，加水稀释到刻度，摇匀，即得（第1mL相当于10ug的Cl)。第16页/共109页3.注意事项使用的标准氯化钠溶液每1mL相当于10g的Cl-。测定条件下，氯化物浓度以50mL中含5080g的Cl-为宜，相当于标准氯化钠溶液58mL。此范围内氯化物所显浑浊度明显，便于比较。应以此计算供试品取样量范围。第17页/共109页3.注意事项加硝酸可避免弱酸银盐如碳酸银、磷酸银及氧化银沉淀的干扰，且可加速氯化银沉淀的生成并产生较好的乳浊。酸度以50mL供试溶液中含稀

7、硝酸10mL为宜。供试品溶液如不澄明，可用含硝酸的蒸馏水洗净滤纸中氯化物后再滤过。第18页/共109页3.注意事项供试品如带颜色，常采用内消色法处理，即取供试品溶液两份，分置50mL纳氏比色管中，一份加硝酸银试液1.0mL，摇匀，放置10min，如显浑浊，可反复过滤，至滤液完全澄清，再加规定量的标准氯化钠溶液与水适量使成50mL，摇匀，在暗处放置5min，作为对照溶液；另一份加硝酸银试液1.0mL与水适量使成50mL，摇匀，在暗处放置5min，对两管进行比浊。此外，也可采用外消色法，即加入某种试剂，使供试液褪色后再检查。第19页/共109页操作时的温度一般控制在3040，以产生最大的浑浊度，结

8、果也较恒定；若在20以下，生成氯化银浑浊的速度较慢，也不恒定。检查氯化物时，应按规定操作程序进行，先制成约40mL水溶液后，再加硝酸银试液，以免在较大浓度的氯化物存在时产生沉淀，影响比浊结果。加入硝酸银试液后，宜缓慢地混匀，如过快则生成的浑浊减少。另外，标准管与供试管必须平行进行实验，如加入试剂的程序及放置时间应一致，所用纳氏比色管的规格一致，比浊时同置于黑色衬底上自上而下观察。第20页/共109页二、硫酸盐检查法二、硫酸盐检查法（一）原理 对照法第21页/共109页2操作方法取各药品项下规定量的供试品，加水溶解使成约40mL（溶液如显碱性，可滴加盐酸使成中性）；溶液如不澄清，应滤过；置50m

9、L纳氏比色管中，加稀盐酸2mL，摇匀，即得供试液。另取各药品项下规定量的标准硫酸钾溶液，置50mL纳氏比色管中，加水使成约40mL，加稀盐酸2mL，摇匀，即得对照溶液。于供试溶液与对照溶液中，分别加入25%氯化钡溶液5mL，用水稀释成50mL，充分摇匀，放置10min，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，比较，即得。第22页/共109页3注意事项标准硫酸钾溶液的制备：称取硫酸钾0.181g，置1000mL量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每1mL相当于100ug的SO42-）。第23页/共109页3注意事项每1mL标准硫酸钾溶液相当于100g的SO42-。供试品溶液加入盐酸使成

10、酸性，可防止碳酸钡或磷酸钡等沉淀生成，影响比浊。但酸度过大可使硫酸钡溶解，降低检查灵敏度，以50mL供试中含2mL稀盐酸为宜。供试溶液如需滤过，应先用盐酸使成酸性的蒸溜水洗净滤纸中硫酸盐。第24页/共109页 供试品如有色，采用内消色法处理，即取供试品溶液两份，分置50mL50mL纳氏比色管中，一份加25%25%氯化钡溶液5mL5mL，摇匀，放置10min10min，如显浑浊，可反复过滤，至滤液完全澄清，再加规定量的标准氯化钠溶液与水适量使成50mL50mL，摇匀，放置10min10min，作为对照溶液；另一份加25%25%氯化钡溶液5mL5mL与水适量使成50mL50mL，摇匀，放置10mi

11、n10min，按上述方法对照溶液比较，即得。温度对浑浊有影响，操作温度一般控制在25253030，若温度太低，产生的白色浑浊既慢又少，且不稳定。故室温低于1010时应将比色管在25253030水浴中放置10min10min，再进行比较。采用25%25%氯化钡溶液，呈现的浑浊度较稳定，使用时不必新配。第25页/共109页三、铁盐检查法三、铁盐检查法（一）硫氰酸盐法1.原理第26页/共109页2.检查方法检查方法 药典附录药典附录 除另有规定外，取各药品项下除另有规定外，取各药品项下规定量的供试品：规定量的供试品：过过硫酸铵硫酸铵50mg25ml稀稀HCl4mL 30%硫氰酸铵硫氰酸铵H2O50m

12、lH2O 供试品供试品标准溶液标准溶液3mlHNO3第27页/共109页与与 标准铁溶液一定量制成的对照溶液标准铁溶液一定量制成的对照溶液（取各药品项下规定量的标准铁溶液，置（取各药品项下规定量的标准铁溶液，置 50ml纳氏比色管纳氏比色管中，加水使成中，加水使成25ml，加稀盐酸，加稀盐酸 4ml与与（NH4）2S2O8 50mg，用水稀释使成，用水稀释使成 35ml后，加后，加30%NH4SCN溶液溶液3ml，再加，再加水适量稀释成水适量稀释成 50ml，摇匀），摇匀）比较，即得。比较，即得。第28页/共109页3、注意事项标准铁溶液的制备：称取硫酸铁铵0.863g，置1000mL量瓶中，

13、加水溶解后，加硫酸2.5mL，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液10mL，置100mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每1mL相当于10ug的Fe)。第29页/共109页3、注意事项（1）适宜的比浊浓度为10-50ugFe3+/50mL。（2）测定法中，加入氧化剂过硫酸铵将供试品中Fe2+氧化成Fe3+，同时可防止硫氰酸铁因光照还原或分解褪色。（3）有些药物如葡萄糖、糊精、硫酸氢钠和硫酸镁等在检查过程中加硝酸处理，则不再加过硫酸铵，但必须加热煮沸除去一氧化氮，因硝酸中可能含亚硝酸，能与硫氰酸根离子作用，生成红色亚硝酰氰化物，影响比色。第30页/共109页3、注意事项（

14、4）铁盐与硫氰酸根离子的反应为可逆反应，加入过量的硫氰酸铵可增加产物配离子稳定性，提高反应灵敏度，还能消除氯化物等干扰。（5）消色方法：用正丁醇或异戊醇外消色法。第31页/共109页四、重金属检查法四、重金属检查法以铅为代表，共有3种检查方法 系指在实验条件下，能与CH3CSNH2或Na2S作用显色的金属杂质。如银、铅、汞、铜、镉、铋、锡、砷、锑、镍、钴、锌等第32页/共109页第一法 硫代乙酰胺法 适用于溶于适用于溶于水水、稀酸稀酸和和乙醇乙醇的药物的药物 1.原理悬浊液第33页/共109页2.操作方法除另有规定外，取25ml 纳氏比色管三支，甲管中加标准铅溶液一定量与醋酸盐缓冲液（pH3.

15、5）2ml 后，加水或各品种项下规定的溶剂稀释成25ml，乙管中加入按各品种项下规定的方法制成的供试液25ml，丙管中加入与甲管相同量的标准铅溶液后，再加入与乙管相同量的按各品种项下规定的方法制成的供试液，加水或各品种项下规定的溶剂使成25ml；若供试液带颜色，可在甲管与丙管中滴加少量的稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液，使之均与乙管一致；再在甲乙丙三管中分别加硫代乙酰胺试液各2ml，摇匀，放置2 分钟，同置白纸上，自上向下透视，当丙管中显出的颜色不浅于甲管时，乙管中显出的颜色与甲管比较，不得更深。如丙管中显出的颜色浅于甲管，应取样按第二法重新检查。第34页/共109页第二法 适用于含芳环、杂环

16、芳环、杂环以及不溶于水、稀酸、乙醇及碱的有机药物。1.原理：500600炽灼，使有机结合使有机结合的重金属游离的重金属游离，经处理后，依第一法一法检查。第35页/共109页2.操作方法操作方法H2SO4进一步消化溶解第36页/共109页（三）第三法（三）第三法 硫化钠法硫化钠法 适用于溶于碱溶于碱而不溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的药物。如磺胺类、巴比妥类磺胺类、巴比妥类。1.原理 对照法悬浊液悬浊液第37页/共109页2.方法取供试品适量，加氢氧化钠试液5mL与水20mL溶解后，置纳氏比色管中，加硫化钠试液5滴，摇匀，与一定量的标准铅溶液同样处理后的颜色比较，不得更深。第38页/共109页3.注

17、意事项硝酸铅标准溶液的制备：称取硝酸铅0.1599g，置1000mL量瓶中，加硝酸5mL与水50mL溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。精密量取贮备液10mL，置100mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每1mL相当于10ug的Pb)，本液仅供当日使用。第39页/共109页3.注意事项（1）适宜的比浊质量浓度为10-30ug/27mL。（2）反应的PH值是3.5，故配制醋酸盐缓冲液时要用PH计测定，调至PH=3.5，此酸度下PbS沉淀较完全。（3）必须蒸干除去氧化氮，否则亚硝酸可氧化硫化氢析出硫，影响比色检查。第40页/共109页3.注意事项（4）温度愈高，重金属损失愈多，炽灼温度为

18、500-600最合适。（5）某些供试品炽灼时能腐蚀瓷坩埚而带入较多的重金属，应改用石英坩埚或铂坩埚操作。第41页/共109页五、砷盐检查法（一）古蔡法 As有毒须严格控制，常有2种方法第42页/共109页1.原理 遇遇HgBr2试试纸纸生生成成黄黄色色棕棕色色的的砷砷斑斑，与与2ml 标标准准砷砷溶溶液液在在相相同条件下生成的砷斑比较同条件下生成的砷斑比较古蔡法第43页/共109页2.操作方法（1）标准砷斑用2ml 标准砷溶液制备（2）供试品需经有机破坏，则标准砷）供试品需经有机破坏，则标准砷溶液应平行操作溶液应平行操作古蔡法第44页/共109页第45页/共109页黄色黄色棕色棕色 古蔡法检砷

19、装置古蔡法检砷装置A-A-砷化氢发生瓶；砷化氢发生瓶；B-B-中空磨口塞；中空磨口塞；C-C-导气管；导气管；D-D-具孔的有机玻璃旋塞；具孔的有机玻璃旋塞；E-E-具孔的有机玻璃旋塞盖具孔的有机玻璃旋塞盖第46页/共109页3.注意事项若供试品为硫化物、亚硫酸盐、硫代硫酸盐等，在酸性溶液中生成硫化氢或二氧化硫气体，与溴化汞作用生成黑色硫化汞或金属汞，干扰比色。应先加硝酸处理，使氧化成无干扰的硫酸盐，过量的硝酸及产生的氮的氧化物应蒸干除尽。供试品若为铁盐，不仅消耗还原剂，影响测定条件，且能氧化砷化氢。应先加酸性氯化亚锡试液，将Fe3+还原为Fe2+，再依法检查。供试品若为强氧化剂或在酸性溶液中

20、能产生强氧化性物质者，如亚硝酸钠在酸性溶液中能产生亚硝酸和硝酸，不仅消耗锌粒且产生氮的氧化物氧化新生态的氢，影响砷化氢的生成。因此，需加入硫酸先行分解后依法测定。第47页/共109页具环状结构的有机药物，因砷可能以共价键与其结合，需进行有机破坏后再检查，常用的有机破坏法有碱破坏法和酸破坏法。若供式品需经有机破坏后再行检砷，则制备标准砷斑时，应取标准砷溶液2.0mL代替供试品，照各品种项下规定的方法同法处理后，依法制备标准砷斑。砷斑遇光、热及湿气则褪色。如需保存，可将砷斑在石蜡饱和的石油醚溶液中浸过晾干或避光置于干燥器内，也可将砷斑用滤纸包好夹在记录本中保存。第48页/共109页（二）二乙基二硫

21、代氨基甲酸银法二乙基二硫代氨基甲酸银法 （Ag-DDC法）法）原理：对照法原理：对照法第49页/共109页 砷化氢与Ag-DDC溶液作用，还原AgDDC为红色胶态银，直接比色或于510nm波长处测定吸收度，进行比较。a 灵敏度高 0.5 g As/30ml b 可仪器测定,还可定量 c Sb干扰小第50页/共109页 Ag-DDCAg-DDC法检砷装置法检砷装置A-砷化氢发生瓶；砷化氢发生瓶；B-中空磨口塞；中空磨口塞；C-导气管；导气管；D-平底玻璃管平底玻璃管第51页/共109页 用用有有机机碱碱吸吸收收反反应应产产生生的的HDDC有有利于反应的进行。利于反应的进行。本法适用于含本法适用于

22、含Sb量小于量小于500 g的供试品。的供试品。第52页/共109页六、硫化物检查法 硫化物为有毒物质。硫化物为有毒物质。原理：原理：硫化物与盐酸作用产生硫化氢气硫化物与盐酸作用产生硫化氢气体，遇醋酸铅试纸产生棕色的硫化铅体，遇醋酸铅试纸产生棕色的硫化铅“硫斑硫斑”，与一定量标准硫化钠溶液在相，与一定量标准硫化钠溶液在相同条件下生成的硫斑比较，判断供试品同条件下生成的硫斑比较，判断供试品中硫化物是否符合限量规定。中硫化物是否符合限量规定。仪器装置仪器装置同古蔡法检砷装置，但导气管同古蔡法检砷装置，但导气管中不装醋酸铅棉花，溴化汞试纸改用醋中不装醋酸铅棉花，溴化汞试纸改用醋酸铅试纸。反应温度为酸

23、铅试纸。反应温度为80809090水浴中水浴中加热加热10min10min。第53页/共109页七、硒盐检查法药物中混入的微量硒主要来自生产中使用的试剂。元素状态的硒无毒，但硒化物（二氧化物）有剧毒，因此对有可能引入硒的药物要对残留硒进行限量检查。检查时先将有机药物用氧瓶燃烧法进行有机破坏，使硒成为高价氧化物(SeO3)，被硝酸溶液吸收，再用盐酸羟胺将Se6+还原为Se4+，在pH2.02的条件下，加二氨基萘试液反应100min，生成4,5-苯并苯硒二唑，用环己烷提取后在378nm波长处测定吸收度，结果应不大于对照液的吸收度。第54页/共109页 检检查查不不含含金金属属的的有有机机药药物物或

24、或挥挥发发性性无无机机药药物物中中混混入入的的无无机机杂杂质质(金金属属氧氧化化物物或或无无机盐类机盐类)。1.原理原理 样样品品炭炭化化后后+H2SO4湿湿润润700800炽灼至恒重炽灼至恒重炽灼残渣（硫酸灰分）炽灼残渣（硫酸灰分）八、炽灼残渣检查法八、炽灼残渣检查法第55页/共109页2.操作方法第56页/共109页九、干燥失重测定法九、干燥失重测定法 干燥失重是指药物在规定条件下经干燥后所减失的重量，主要是水分，也包括其它挥发性物质。第57页/共109页（一）常压恒温干燥法（一）常压恒温干燥法 适用于受热较稳定的药物。适用于受热较稳定的药物。干燥温度：干燥温度：105105。取供试品，混

25、合均匀（如为较大的结晶，应先迅速捣碎使成2mm 以下的小粒），取约1g 或各品种项下规定的重量，置与供试品相同条件下干燥至恒重的扁形称量瓶中，精密称定，除另有规定外，在105干燥至恒重（两次干燥后的重量差在0.3mg以下）。由减失的重量和取样量计算供试品的干燥失重。第58页/共109页（二）干燥剂干燥法 适用于受热易分解、易挥发的供试品。将供试品置干燥器中，利用干燥器内的干燥剂吸收水分至恒重。干燥剂应保持在有效状态。常用的干燥剂有硅胶、无水氯化钙、硫酸和五氧化二磷。第59页/共109页（三）减压干燥法适用于熔点低、受热不稳定及水分难去除的药物。使用减压干燥器或恒温减压干燥箱，控制压力在2.67

26、kPa(20mmHg)以下，使药物中水分在减压下以较低的干燥温度和较短的干燥时间内得以排除。第60页/共109页十、水分测定法药品中的水包括结晶水和吸附水。过多的水分不仅使药物的有效成分含量降低，还易使药物水解、霉变，影响其理化性状和生理作用。中国药典（2010）采用卡尔-费休(Karl Fischer、简称费休)法和甲苯法测定。第61页/共109页原理：采用由碘、二氧化硫、吡啶和甲醇采用由碘、二氧化硫、吡啶和甲醇按一定比例组成的费休氏试液作标准滴定按一定比例组成的费休氏试液作标准滴定液。利用碘氧化二氧化硫时，需一定量水液。利用碘氧化二氧化硫时，需一定量水分参加反应。分参加反应。I2SO2H2

27、O 2HISO3因上述反应可逆，加无水吡啶和无水因上述反应可逆，加无水吡啶和无水甲醇使反应顺利进行。总反应为甲醇使反应顺利进行。总反应为 I2SO23C5H5N+CH3OH+H2O 2 C5H5N HIC5H5N HSO4 CH3第62页/共109页 判断滴定终点的方法：自身作指示剂，即利用碘的颜色指示终点，终点前溶液呈浅黄色，终点时为红棕色（微过量的费休试剂中碘的颜色）。永停滴定法：按永停滴定法操作，终点时电流计指针突然偏转，并持续数分钟不退回。第63页/共109页十一、溶液颜色检查法十一、溶液颜色检查法 不溶性杂质的生产和贮存过程都会生成有色杂质目视法、吸光度法和目视法、吸光度法和色差计法

28、 ChP(2010)采用三种方法检查。第64页/共109页标标准准比比色色液液（一）目视比色法 与标准比色液比较黄色黄色(0.800mg/mL)K2Cr2O7;红色红色(59.5mg/mL CoCl2.6H2O);蓝色蓝色(62.4 mg/mL CuSO4.5H2O)标标准准比比色色液液第65页/共109页(二)分光光度法 单一波长定量用分光光度法检查有色杂质，通过测定溶液的吸收度，反映溶液的颜色变化。测定时，取一定量供试品，加水溶解，必要时滤过，滤液照分光光度法于规定波长处测定吸收度，不得超过规定值。第66页/共109页 如维生素如维生素C C易受外界条件影响易受外界条件影响而变色，规定取本

29、品而变色，规定取本品3.0g3.0g，加水，加水15mL15mL，振摇使溶解，溶液经，振摇使溶解，溶液经4 4号垂号垂熔玻璃漏斗滤过，滤液于熔玻璃漏斗滤过，滤液于420nm420nm波波长处测定吸收度，不得过长处测定吸收度，不得过0.030.03。第67页/共109页(三)色差计法 全波长范围定量 通过色差计直接测定溶液的通过色差计直接测定溶液的透视三透视三刺激值刺激值，对其颜色进行定量表述和分，对其颜色进行定量表述和分析的方法。析的方法。第68页/共109页 测定时除另有规定外，用水对仪器测定时除另有规定外，用水对仪器进行校准。取按各品种项下规定的方法制进行校准。取按各品种项下规定的方法制得

30、的供试品溶液和标准比色液，置仪器上得的供试品溶液和标准比色液，置仪器上进行测定，供试品溶液与水的色差值应进行测定，供试品溶液与水的色差值应 不超过相应色调的标准比色液与水的色差不超过相应色调的标准比色液与水的色差值值 。也可以将预先测定好的各色调色号的也可以将预先测定好的各色调色号的标准比色液对水的标准色差值标准比色液对水的标准色差值 输入输入到仪器，然后直接测量供试品溶液对水的到仪器，然后直接测量供试品溶液对水的色差值色差值 ；若；若 ，供，供试品溶液颜色合格，反之为不合格。试品溶液颜色合格，反之为不合格。第69页/共109页十二、易炭化物检查法 检查药物中遇H2SO4易炭化或易被氧化呈色的

31、有机杂质。此类杂质多数结构未知，用硫酸呈色的方法可以简便地控制此类杂质的总量。检查时取内径一致的比色管两支；甲管中加放各品种项下规定的对照液5mL；乙管中加94.5%95.5%（g/g）硫酸5mL后，分次缓缓加入规定量的供试品,振摇使溶解。除另有规定外，静置15min后，将两管同置白色背景前,平视观察，乙管中所显颜色不得较甲管更深。第70页/共109页对照液对照液：（1）“溶溶液液颜颜色色检检查查”项项下下的的标标准准比比色色液；液；（2）由由比比色色用用氯氯化化钴钴液液，比比色色用用重重铬铬酸酸钾钾液液，比比色色用用硫酸铜液按规定方法配成的对照液；硫酸铜液按规定方法配成的对照液；（3）高锰酸

32、钾液）高锰酸钾液比色比色：同置白色背景前，平视观察比较：同置白色背景前，平视观察比较第71页/共109页十三、溶液澄清度检查法十三、溶液澄清度检查法 检查药品溶液中的微量不溶性杂质，在一定程度上可反映药品的质量和生产工艺水平，对于注射用原料药，检查其溶液的澄清度尤为重要。标准比浊液：硫酸肼标准比浊液：硫酸肼+乌洛托品乌洛托品白色浑浊的甲醛腙第72页/共109页1.00硫硫酸酸肼肼溶溶液液与与10乌乌洛洛托托品品溶溶液等量混合配制浊度标准贮备液液等量混合配制浊度标准贮备液 浊度标准原液浊度标准原液 浊度标准液（浊度标准液（5个级号）个级号）澄清度标准溶液配制第73页/共109页十四、酸碱度检查法

33、十四、酸碱度检查法 酸度、碱度、酸碱度、水溶性酸、水溶性碱、游离碱和pH值都是衡量药物中的酸碱性杂质的。酸碱滴定法酸碱滴定法 指示剂法指示剂法pH值测定法值测定法 具具体体方方法法第74页/共109页1.1.酸碱滴定法酸碱滴定法 在规定的指示液条件下，用规定浓度的酸或碱滴定液滴定供试品溶液中碱性或酸性杂质，以消耗酸或碱滴定液的毫升数作为限度指标。第75页/共109页 如检查氯化钠的酸碱度：取本品如检查氯化钠的酸碱度：取本品5.0g5.0g，加水，加水50mL50mL溶解后，加溴麝香草酚蓝指溶解后，加溴麝香草酚蓝指示液示液2 2滴，如显黄色（示为酸性），滴，如显黄色（示为酸性），加氢氧化钠滴定液

34、加氢氧化钠滴定液(0.02mol/L)0.10mL(0.02mol/L)0.10mL，变为蓝色；如显蓝色或绿色（示为碱，变为蓝色；如显蓝色或绿色（示为碱性），加盐酸滴定液性），加盐酸滴定液0.02mol/L)0.20mL0.02mol/L)0.20mL，应变为黄色。表，应变为黄色。表明本品明本品100g100g中所含酸性杂质的限量为中所含酸性杂质的限量为0.04mmol0.04mmol；或所含碱性杂质的限量为；或所含碱性杂质的限量为0.08mmol0.08mmol。第76页/共109页2.指示液法 将一定量指示液的变色将一定量指示液的变色pHpH范围作为供范围作为供试液中酸碱性杂质的限度指标。

35、试液中酸碱性杂质的限度指标。如纯化水的酸碱度检查：取本品如纯化水的酸碱度检查：取本品10mL10mL加甲基红指示剂（加甲基红指示剂（pH=4.2pH=4.26.36.3，红黄），红黄）2 2滴，不得显红色（以控制其酸度）；另滴，不得显红色（以控制其酸度）；另取取10mL10mL，加溴麝香草酚蓝指示液（，加溴麝香草酚蓝指示液（pH=6.0pH=6.07.67.6，黄蓝），黄蓝）5 5滴，不得显蓝色（以控滴，不得显蓝色（以控制其碱度），故纯化水的酸碱度控制在制其碱度），故纯化水的酸碱度控制在pH=4.2pH=4.27.67.6。第77页/共109页3.pH测定法 用酸度计测定供试品溶液的用酸度计测

36、定供试品溶液的pHpH，衡量其酸碱性杂质是否符合限量规，衡量其酸碱性杂质是否符合限量规定。该法准确度高，对酸碱度要求较定。该法准确度高，对酸碱度要求较严的注射剂、供配制注射剂用的原料严的注射剂、供配制注射剂用的原料药以及酸碱度大小会明显影响其稳定药以及酸碱度大小会明显影响其稳定性的药物，采用该法检查酸碱度。如性的药物，采用该法检查酸碱度。如注射用水的注射用水的pHpH按该法检查应为按该法检查应为5.05.07.07.0。第78页/共109页特殊杂质的检查法特殊杂质的检查法一、利用药物与杂质在物理或物理化学性一、利用药物与杂质在物理或物理化学性质上的差异进行检查质上的差异进行检查 第三节 特殊杂

37、质检查第79页/共109页 1.气味及挥发性差异 药物（特别是挥发性药物）药物（特别是挥发性药物）中存在的具有特殊气味的杂质，中存在的具有特殊气味的杂质，可从其特殊的气味判断该杂质的可从其特殊的气味判断该杂质的存在。存在。第80页/共109页 某些药物无色，但其分解产物有某些药物无色，但其分解产物有色，或在生产中引入了有色的杂质，色，或在生产中引入了有色的杂质，通过检查药物溶液的颜色可控制有色通过检查药物溶液的颜色可控制有色杂质的量。杂质的量。2.颜色差异第81页/共109页 有的药物可溶于水、有机溶剂或酸、有的药物可溶于水、有机溶剂或酸、碱溶液中，而其杂质不溶；反之，杂质可碱溶液中，而其杂质

38、不溶；反之，杂质可溶而药物不溶，利用这种溶解行为的差异溶而药物不溶，利用这种溶解行为的差异可检查药物中的杂质。可检查药物中的杂质。例：葡萄糖中糊精的检查例：葡萄糖中糊精的检查 3.溶解行为的差异第82页/共109页 1.药物有旋光度而杂质没有药物有旋光度而杂质没有例例:黄体酮在乙醇中黄体酮在乙醇中+186 +198 4.旋光性质的差异2.杂质有旋光度而药物没有杂质有旋光度而药物没有例例:硫酸阿托品中莨菪碱的检查硫酸阿托品中莨菪碱的检查,供试供试品水溶液品水溶液50mg/mL不得过不得过-0.4 第83页/共109页5对光选择性的吸收差异利用药物在某一波长处无吸收，而杂质有吸收的性质差异进行检查

39、。例：肾上腺素中的肾上腺酮检查（310nm)。第84页/共109页6吸附或分配性质的差异利用药物与杂质被一定的吸附剂和被一定的洗脱剂可解吸附的性质之差异，或在不相混溶（或部分混溶）的溶剂中分配比的不同加以分离和检查。第85页/共109页 1 1 酸碱性的差异酸碱性的差异例：苯巴比妥中苯基丙二酰脲检查例：苯巴比妥中苯基丙二酰脲检查甲基橙不得显红色甲基橙不得显红色2 2 氧化还原性的差异氧化还原性的差异 利用药物与杂质在氧化还原性质上的利用药物与杂质在氧化还原性质上的差异进行检查。差异进行检查。二、利用药物与杂质在化学性质上的二、利用药物与杂质在化学性质上的差异进行检查差异进行检查第86页/共10

40、9页 3 3 杂质与一定试剂反应产生沉淀杂质与一定试剂反应产生沉淀 利用药物中存在的杂质与一定的试剂利用药物中存在的杂质与一定的试剂产生沉淀来检查药物中存在的杂质。产生沉淀来检查药物中存在的杂质。如如咖啡因咖啡因中生物碱检查，咖啡因对碘化汞中生物碱检查，咖啡因对碘化汞钾试液不产生沉淀反应，其他生物碱产生钾试液不产生沉淀反应，其他生物碱产生沉淀反应的性质差异进行检查。沉淀反应的性质差异进行检查。第87页/共109页4.杂质与一定的试剂产生颜色利用药物中存在的杂质与一定的试剂产生颜色来检查药物中存在的杂质，根据限量要求，可规定一定条件下不得产生某种颜色，或对呈现的颜色用目视比色或用分光光度法测定其

41、吸收度。例如阿司匹林中检查游离水杨酸，即利用水杨酸与硫酸铁铵反应产生紫堇色配合物进行限量检查。第88页/共109页5杂质与一定的试剂产生气体某些药物中的氨化合物或铵盐在碱性条件下加热，如有铵盐存在，则可分解放出氨，它遇碱性碘化汞钾试液显色，而药物本身不显色；又如药物中若有微量硫化物存在，利用其在酸性条件下生成硫化氢气体放出，遇湿的醋酸铅试纸形成棕黑色的硫斑来检查杂质。第89页/共109页三、三、色谱法色谱法 (一一)薄层色谱法薄层色谱法(TLC)(二二)高效液相色谱法高效液相色谱法(HPLC)(三三)气相色谱法气相色谱法(GC)第90页/共109页 根据药物与杂质对吸附剂的根据药物与杂质对吸附

42、剂的吸附或对展开剂的解析能力不同吸附或对展开剂的解析能力不同(Rf 值的差异值的差异),加以分离和检查加以分离和检查.(一一)薄层色谱法薄层色谱法(TLC)第91页/共109页1)1)杂质对照品法杂质对照品法根据杂质限量，取一定浓度已知杂质的对根据杂质限量，取一定浓度已知杂质的对照品溶液和供试品溶液，分别点在同一硅照品溶液和供试品溶液，分别点在同一硅胶（或其它吸附剂）薄层板上，展开和定胶（或其它吸附剂）薄层板上，展开和定位后，检查供试品中所含该杂质的斑点颜位后，检查供试品中所含该杂质的斑点颜色，不得超过相应的杂质对照品斑点。色，不得超过相应的杂质对照品斑点。常用方法第92页/共109页 当杂质

43、的结构不能确定或无杂质的对照品时，当杂质的结构不能确定或无杂质的对照品时，可采用此法。将供试品溶液按限量要求稀释至一可采用此法。将供试品溶液按限量要求稀释至一定浓度作为对照溶液，与供试品溶液分别点加在定浓度作为对照溶液，与供试品溶液分别点加在同一薄层板上，展开和定位后，检查供试品中所同一薄层板上，展开和定位后，检查供试品中所含该杂质的斑点颜色，不得深于对照溶液所显主含该杂质的斑点颜色，不得深于对照溶液所显主斑点颜色。斑点颜色。2)2)主成分自身对照法主成分自身对照法第93页/共109页 (二二)高效液相色谱法高效液相色谱法(HPLC)特点特点 分离效能高、应用范围广，分离效能高、应用范围广，能

44、准确、快速、分离分析同时进行能准确、快速、分离分析同时进行第94页/共109页面积归一化法供试品溶液经高效液相色谱分离后，测定各杂质及药物的峰面积，计算各杂质峰面积及其总和占总峰面积的百分率，不得超过规定的限量。如盐酸克林霉素中有关物质的检查。第95页/共109页主成分自身对照法当杂质峰面积与主成分峰面积相差悬殊时，采用该法。检查时，将供试品溶液稀释成一定浓度的溶液，作为对照溶液。分别取供试品溶液和对照溶液进样，将供试品溶液中各杂质峰面积及其总和，与对照溶液主成分峰面积比较，以控制供试品中杂质的量。第96页/共109页内标法测定供试品中杂质的总量限度采用不加校正因子的峰面积法。选用的内标物质是

45、一种与被测定组分结构不同但很相似的纯物质。第97页/共109页内标法加校正因子测定供试品中某个杂质或主成分含量按各品种项下规定，精密称（量）取杂质对照品和内标物质，分别配成溶液，精密量取各溶液，配成校正因子测定用的对照溶液。取一定量注入仪器，记录色谱图，测量对照品和内标物质的峰面积或峰高，计算出校正因子。再将含有内标物质的供试品溶液，注入仪器，记录色谱图，测量供试品中杂质（或主成分）和内标物质的峰面积或峰高，采用校正因子的内标法计算公式计算杂质（或主成分）含量。第98页/共109页外标法测定供试品中某个杂质或主成分含量按各品种项下的规定，精密称（量）取杂质对照品和供试品，分别配制成溶液，精密量

46、取一定量，注入仪器，记录色谱图，测量对照品和供试品待测成分的峰面积或峰高，采用比较法计算该杂质（或主成分）的含量。第99页/共109页(三三)气相色谱法气相色谱法气相色谱法主要用于药物中挥发性气相色谱法主要用于药物中挥发性杂质及有机溶剂残留量的检查。检杂质及有机溶剂残留量的检查。检查的方法与高效液相色谱法相同。查的方法与高效液相色谱法相同。第100页/共109页 1.紫外分光光度法紫外分光光度法 2.可见分光光度法可见分光光度法四、分光光度法四、分光光度法第101页/共109页1.紫外分光光度法利用药物和待检杂质对光选择吸收性质的差异进行 例例:肾上腺素中肾上腺酮的检查肾上腺素中肾上腺酮的检查

47、第102页/共109页规定：A310nm0.05方方 法法限量计算杂质限量杂质限量%=10012/1000100=0.0554530.05 例例:肾上腺素中肾上腺酮的检查肾上腺素中肾上腺酮的检查肾上腺酮的C(g/100mL)=A/E1%1cm第103页/共109页2比色法药物中所含杂质与试剂反应呈现的颜色与限量杂质对照品经同法处理后所呈的颜色，用目视法直接比较或用分光光度计测定吸收度后进行比较。如维生素K1中检查甲萘醌，就是利用其杂质能与氰基醋酸乙酯显蓝色，与含一定量对照品的对照液同法处理后进行目视比色，以确定维生素K1中所含杂质甲萘醌是否超过限量。第104页/共109页3原子吸收分光光度法原

48、子吸收分光光度法用于杂质限量检查时，按下法进行：取供试品按规定配制成供试溶液；另取等量的供试品，加入限量的待测元素溶液，制备成对照溶液。先将对照溶液喷入火焰，调节仪器使具有合适的读数a；在相同条件下测定供试液B，记录其读数b。则 b相当于供试品溶液中待检元素的含量，（ab）相当于对照溶液中按限量加入的待检元素的量。当b（ab）时，表示供试品中所含杂质元素符合规定，反之，为不合格。第105页/共109页4红外分光光度法某些多晶型药物由于晶型结构不同，某些化学键的键长、键角发生不同程度的变化，可导致红外吸收光谱中的某些特征带的频率、峰形和强度出现显著差异。因此可用红外吸收分光光度法检查药品中低效或无效晶型。第106页/共109页人有了知识，就会具备各种分析能力，明辨是非的能力。所以我们要勤恳读书，广泛阅读，古人说“书中自有黄金屋。”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识，培养逻辑思维能力；通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平，培养文学情趣；通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。有许多书籍还能培养我们的道德情操，给我们巨大的精神力量，鼓舞我们前进。第107页/共109页第108页/共109页感谢您的观看！第109页/共109页