分子遗传学--11.DNA复制--B(PPT文档).ppt

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1、 1968年Gilbert提出 滚环复制模型:（1）共价延伸；（2）模板链和新合成的链 分开;（3）不需RNA引物，在正 链3OH上延（4）只有一个复制叉;（5）形成多联体（concatemer）;滚环复制的电镜照片 哪些DNA进行滚环复制?真核rDNA的扩增,F因子DNA的转移,裂解途经的复制,X174,M13.G4等单链环状DNA噬 菌体 第二阶段复制都是进 行滚环复制的.二.DNA末端起始复制n线性双链DNA的复制有的是从一端开始的:腺病毒（Adenovirus）29 DNAs 脊髓灰质病毒（poliovirus)n腺病毒DNA全长35937 bp,线性双链，n两端各有反向重复顺序103

2、162 bp，两末端各有50 bp为复制起点。n其复制是以单链置换（strand displacement）形成一个大的茎环或叫平锅形结构来进行的。三.复制的终止n1.E.coli的复制终止n现已发现有两个终止区域（terE,D,A和ter C,B），位于相遇点的另一侧100Kb处。每一终止顺序对某一方向移动的复制叉来说是特异的。nter顺序有一个23bp的区域，在体外可导致复制的终止，但其功能显示了一定的方向性。n终止需要tus(terminus utilization substance)基因的产物Tus(36kD)，Tus能识别ter保守顺序，并阻止复制叉继续前进。nter-Tus复合物

3、可能通过抑制螺旋酶来实行终止第六节 复制的过程n一.半不连续复制nE.colidUTPase，它能使dUTP变成dUMP，dUMP是不能作为DNA合成的底物，这样它就不再能加入DNA中。n尿嘧啶N-糖苷酶（uracil N-glycosylase），它可以切断混合尿苷的糖苷键，形成无Pu和Py位点（apurinic or apyrimidinic，AP），再由AP内切酶在AP位点切出一个缺口，进一步进行切除修复。以下实验证实了这个解释：n(1)在dut-突变体（dUTPase缺失）中冈崎片段比在dut+中为短。这是因为U掺入机会增加；n(2)在ung-（尿嘧啶N-糖苷酶缺失）突变体中，新合成的

4、DNA约有一半由片段组成。n(3)因为尿嘧啶N-糖苷酶缺失，不会切除U的糖苷链，也就不会出现AP位点，所以碱沉淀时不易断裂，从而保持了半不连续的原貌。n在dut-,ung-双突变体中，结果和实验（2）相同，更进一步证实了此推测。酵母的自主复制区nARS(autonomously replicationg sequence)n发挥复制起点的功能，但是过量的。n酵母染色体的着丝粒附近为ARS1序列nARS1分为A,B,C三个功能区,A,B起主要作用,C起次要作用。nA区为15bp,其中11个保守，称ACS(ARS consensus sequence)。有复制起始子的功能nB区约为80bp,含B1

5、,B2,B3三个功能区。nB3是ABF1（ARS-binding factor 1）结合区，酵母的复制nORC：由6个亚基组成相当于Dna A和 的O蛋白，与 A/B1结合，结合于游离的DNA nCdc6:相当于DnaC,及的P蛋白，使Mcm蛋白结合到复合体上。此对在Origin上起始复制是必须的。nMcm:DnaB 螺旋酶。即 licensing factornABF1（转录因子）结合于B3 原核和真核生物复制体系的比较nE.coli SV40/人 酵母 功能n DnaA O T抗原 ORC 起始蛋白n DnaB DnaB T抗原 MCM 解旋酶n DnaC P?Cdc6 装配因子n Dna

6、G DnaG Pol-引发酶 Pol-引发酶 引发酶 n Pol的 亚基 Pol Pol,Pol 聚合酶n Pol的亚基 Pol Pol,Pol 校正n Pol的亚基 PCNA PCNA 滑动钳n 复合体 RF-C RF-C 滑动钳装配器n SSB RF-A RF-A 单链结合蛋白 Pvu Bg1 Bam H1 Bam pBR322 TEL TEL 四膜虫rDNA ARS Pvu Bg1 Bam H 连接 Pvu 转化酵母 Pvu 传几代酵母DNA Pvu Pvu 连接 转化酵母 传几代 图 11-56 四膜虫与酵母TEL的拼接以及酵母细胞将其特有的TEL加到四膜虫 的TEL上(参考Shampg,J and Blackburn et al:Nature1984,310:154-157)n