实验八维生素片含量测定的方法验证精品文稿.ppt

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1、实验八维生素片含量测定的方法验证实验八维生素片含量测定的方法验证第1页，本讲稿共19页实验原理实验原理维生素维生素B B1 1又称盐酸硫胺又称盐酸硫胺 （thiamine hydrochloridethiamine hydrochloride），化），化学名称为氯化学名称为氯化4-4-甲基甲基-3(2-3(2-甲基甲基-4-4-氨基氨基-5-5-嘧啶基嘧啶基)-)-甲甲基基-5-(2-5-(2-羟基乙基噻唑鎓盐酸盐羟基乙基噻唑鎓盐酸盐第2页，本讲稿共19页性性 质质溶解性：水中易溶，乙醇中微溶，乙醚中不溶溶解性：水中易溶，乙醇中微溶，乙醚中不溶硫色素反应：硫色素反应：紫外吸收特性：紫外吸收特性

2、：A Amaxmax=246nm=246nm与生物碱沉淀试剂反应与生物碱沉淀试剂反应氯化物特性：氯化物特性：特征性鉴别特征性鉴别特征性鉴别特征性鉴别含量测定含量测定含量测定含量测定氯化物检查氯化物检查氯化物检查氯化物检查第3页，本讲稿共19页原理原理特征性鉴别特征性鉴别硫色素反应硫色素反应维生素B1在碱液中可被铁氰化钾氧化生成硫色素，色素转溶于正丁醇(或异丁醇、异戊醇)中，显现于酸中消失的蓝色荧光。（见刘文英主编药物分析第六版，P258）含量测定含量测定维生素B1有紫外吸收，Amax=246nm，第4页，本讲稿共19页实验方法实验方法1.1.鉴别反反应取本品约5mg，加氢氧化钠试液2.5ml使

3、其溶解，加铁氰化钾试液0.5ml与正丁醇5ml，强力振摇2min，放置使成两液层，上层醇液即显强烈的蓝色荧光，加酸使成酸性荧光即消失，再加碱使成碱性，则荧光复现。第5页，本讲稿共19页2.2.含量测定含量测定精密称取片粉适量，相当于相当于维生素维生素B B1 125mg25mg，置100ml量瓶中 加盐酸溶液（91000）约70ml，摇匀15分钟使维生素B1溶解，并定容至刻度，摇匀 干燥滤纸过滤精密量取续滤液精密量取续滤液5.0ml5.0ml，置，置100ml100ml量瓶中，共量瓶中，共2 2份，份，盐酸溶液（91000）定容至刻度，摇匀 测 A A246246，用吸光系数计算浓度。如何如何

4、计算出所需要的量？算出所需要的量？稀稀释倍倍数数？第6页，本讲稿共19页实验内容与要求实验内容与要求鉴别试验鉴别试验吸收波长选择吸收波长选择精密度试验：用同一份样品溶液测定精密度试验：用同一份样品溶液测定6 6次，计算次，计算RSD%RSD%重复性试验：引用其他组同学数据（称样量，吸光度）重复性试验：引用其他组同学数据（称样量，吸光度）计算标示量计算标示量%，计算，计算RSD%RSD%稳定性试验：考察样品溶液稳定性试验：考察样品溶液30min30min内的稳定性，计算内的稳定性，计算RSD%RSD%加样回收率试验：根据重复性试验的结果，设计加样加样回收率试验：根据重复性试验的结果，设计加样回收

5、率试验回收率试验含量测定：根据测定结果计算含量，标示量含量测定：根据测定结果计算含量，标示量%。如何引用？如何引用？如何引用？如何引用？第7页，本讲稿共19页 线性关系和范围分析方法的分析方法的验证1 精密度试验2 重现性试验3 加样回收试验4 稳定性试验5第8页，本讲稿共19页线性与范围线性与范围目的目的范围：达到一定精密度、准确度和线性、测定方法适用的高低限浓度或量的区间线性：测试结果与试样中被测物的浓度或量直接呈正比关系的程度要求要求至少5份系列浓度的对照品溶液，高、低浓度之间要有明显差距，最好能有一定的比例关系。线性相关系数符合规定，如UV-Vis法，r 0.99；HPLC法，r 0.

6、999列出回归方程、相关系数和线性图第9页，本讲稿共19页线性性关关系考察系考察(示例）示例）序号序号1 12 23 34 45 5浓度浓度（mg/mlmg/ml）0.012500.012500.025000.025000.037500.037500.050000.050000.062500.06250测定值测定值0.2360.2360.3360.3360.4360.4360.5360.5360.6360.636第10页，本讲稿共19页精密度试验精密度试验目的目的检测仪器、试剂、操作人员、实验条件等的可信程度要求要求用对照品按样品溶液的制备方法制备对照品溶液，同浓度至少平行操作6份，浓度与信号

7、值要在线性范围内RSD 2.0%仪器分析第11页，本讲稿共19页精密度精密度试验（示例（示例）实验序号信号值平均值RSD10.5120.5100.2%(2.0%)20.50830.51140.50950.51060.509第12页，本讲稿共19页重现性试验重现性试验目的目的考察样品溶液制备方法的可靠程度要求要求同批样品按相同方法制备样品溶液，至少6份,浓度与信号值均要在线性范围内RSD 2.0%仪器分析第13页，本讲稿共19页重重现性性试验(示例示例)试验序号称样量（g）测定值（mg）含量（mg/g）平均含量（mg/g）RSD（%）10.166622.04132.29134.530.3%2.0

8、%20.166724.82148.8930.166921.90131.2240.174223.54135.1350.166720.86125.136第14页，本讲稿共19页稳定性试验稳定性试验目的：目的：考察样品溶液样品溶液制备后多少时间内稳定要求要求要有一定的时间间隔，如：在0、15、30、45、60min时间点分别测定样品的A246；在0、1、2、4、8、12h分别测定样品的峰面积。RSD 2.0%RSD 2.0%RSD 2.0%，则需要重新选取时间点进行计算，直到RSD 2.0%，否则要尽快测定第15页，本讲稿共19页 同批、同法序号时间(min)信号值平均信号值RSD（%）RSD（%）

9、100.5050.507(2.0%)2150.5073300.5094450.5135600.5256900.54871200.567稳定性定性试验(示例示例)第16页，本讲稿共19页加样回收率试验加样回收率试验目的目的考察准确度，即用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度要求要求设计高、中、低三个浓度，每个浓度各分别制备三份供试品溶液进行测试，计算回收率RSD 2.0%第17页，本讲稿共19页加加样回收回收试验序号称样量（g）待测组分含量（mg）对照品加入量（mg）测得量（mg）回收率（%）平均加样回收率（%）RSD（%）10.1665.2820.250015.027.2100.130.

10、251240.250953.0450.250015.029.898.660.250070.250442.8480.250015.033.1100.090.2510取含量测定时一半的称样量，取含量测定时一半的称样量，0.5g/20.5g/298102%第18页，本讲稿共19页撰写方法学验证论文撰写方法学验证论文线性与范围线性与范围:设计对照品溶液的浓度设计对照品溶液的浓度精密度试验精密度试验稳定性试验稳定性试验 根据实验测定数值进行计算根据实验测定数值进行计算重复性试验重复性试验加样回收试验加样回收试验:设计称样量、对照品加入量设计称样量、对照品加入量含量测定：根据实验测定数值进行计算含量测定：根据实验测定数值进行计算第19页，本讲稿共19页