实验十的限制性内切酶酶切精品文稿.ppt

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1、实验十的限制性内切酶酶切第1页，本讲稿共11页一、实验目的一、实验目的v了解核酸限制性内切酶的特点及其对了解核酸限制性内切酶的特点及其对DNA的的酶切过程酶切过程v学会设计构建体外重组学会设计构建体外重组DNA分子的方法，并分子的方法，并根据目的基因合理选择载体与限制性内切酶根据目的基因合理选择载体与限制性内切酶以及以及DNA的酶切技术的酶切技术第2页，本讲稿共11页二、实验原理二、实验原理EcoRI限制性内切酶的识别与切割顺序为：限制性内切酶的识别与切割顺序为：5GAATTC3 3CTTAAG5Xhol I限制性内切酶的识别与切割顺序为：限制性内切酶的识别与切割顺序为：5CTCGAG3 3T

2、AGCTC5第3页，本讲稿共11页三、实验材料三、实验材料 v仪器：水浴锅、制冰机、离心机、电泳设备、仪器：水浴锅、制冰机、离心机、电泳设备、各式移液枪、核酸紫外检测仪等。各式移液枪、核酸紫外检测仪等。v1.5ml离心管、移液枪枪头等。离心管、移液枪枪头等。vDNA样品：上一个实验获得的质粒样品：上一个实验获得的质粒DNAv限制性内切酶限制性内切酶Xhol I和和EcoR I（Takara）第4页，本讲稿共11页四、实验步骤四、实验步骤第5页，本讲稿共11页第6页，本讲稿共11页酶切体系酶切体系：v质质粒粒DNA 5ulvEcoR 1ulvXhol 1ulv2Buffer H 2ulvSw 1

3、1ul vTotal 20ul第7页，本讲稿共11页v用微量移液枪（用微量移液枪（20微升）依次吸取微升）依次吸取vSWv10倍酶切缓冲液倍酶切缓冲液vDNAvEcoR IvXhol I第8页，本讲稿共11页v盖紧上述两个盖紧上述两个1.5ml离心管的盖子，在振荡器离心管的盖子，在振荡器上充分混匀上充分混匀2秒钟，立即于离心机内离心一下，秒钟，立即于离心机内离心一下，以将管壁上的液体集中于管底。以将管壁上的液体集中于管底。v将离心管放置将离心管放置37水浴锅中反应水浴锅中反应3小时。在酶小时。在酶切反应的同时，制备切反应的同时，制备1.0%的琼脂糖凝胶，并的琼脂糖凝胶，并准备好电泳装置。准备好

4、电泳装置。第9页，本讲稿共11页五、实验结果五、实验结果v根据电泳结果，描述酶切的结果与效果。根据电泳结果，描述酶切的结果与效果。第10页，本讲稿共11页 M 1 24900bp1518bpv Analysis of recombinant expression vector with restriction enzymevM.DNA Marker(Lambda DNA/Hind III+EcoR I Markers)v1.pGEX 6p-1-hly/BamH I/Xho Iv2.pGEX 6p-1/EcoR I重组质粒重组质粒pGEX 6p-1-hlypGEX 6p-1-hly酶切结果酶切结果bp193296223148942542590774318823472第11页，本讲稿共11页