酶分离纯化过程中需要注意什么问题为什么进行酶活力酶比活力的测定.pptx
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1、会计学1酶分离纯化过程中需要注意什么问题为什酶分离纯化过程中需要注意什么问题为什么进行酶活力酶比活力的测定么进行酶活力酶比活力的测定酶在分离纯化中应注意的问题酶活力酶比活力酶活回收率酶比活力提高比酶的分离与纯化 目 录第1页/共15页酶的提取、分离纯化技术路线酶的提取、分离纯化技术路线细胞破碎细胞破碎酶提取酶提取酶分离纯化酶分离纯化酶浓缩酶浓缩酶贮存酶贮存动物、植物或微生物细胞动物、植物或微生物细胞离心分离,过滤分离,沉淀分离,层析分离,电泳分离,萃取分离,结晶分离等。第2页/共15页根据酶提取时,所采用的溶剂或溶液的不同,酶抽提的方法主要有盐溶液提取,酸溶液提取,碱溶液提取,有机溶剂提取等。
2、2.2.酸溶液提取:酸溶液提取:有些酶在酸性条件下溶解度比较大,且稳定性好,宜用有些酶在酸性条件下溶解度比较大,且稳定性好,宜用酸溶液提取。提取时需注意溶液的酸溶液提取。提取时需注意溶液的pHpH不能太低,以免酶变性失活。不能太低,以免酶变性失活。如胰蛋白酶可用如胰蛋白酶可用0.12mol/l0.12mol/l硫酸溶液提取。硫酸溶液提取。1.1.盐溶液提取:盐溶液提取:大多数酶在一定浓度的盐存在条件下,酶的溶解度增加,大多数酶在一定浓度的盐存在条件下,酶的溶解度增加,即盐溶,但盐浓度不能太高,否则溶解度反而降低,即盐析。即盐溶,但盐浓度不能太高,否则溶解度反而降低,即盐析。故:一般采用稀盐溶液
3、进行酶的提取,盐浓度控制在故:一般采用稀盐溶液进行酶的提取,盐浓度控制在0.02-0.02-0.5mol/L0.5mol/L。如淀粉酶、蛋白酶等胞外酶。如淀粉酶、蛋白酶等胞外酶0.14mol/l0.14mol/l氯化钠溶液提氯化钠溶液提取。取。第3页/共15页3.碱性溶液提取:有些酶在碱性条件下溶解度较大,且稳定性较好,宜用碱溶液提取,操作时注意pH不能过高,以免影响酶活,同时加碱液时要一边搅拌一边缓慢加进,避免局部过碱而引起酶变性失活。4.有机溶剂提取:有些酶与脂类物质结合牢固或含有较多非极性基团,可采用与水可以混溶的乙醇、丙酮、丁醇等有机溶剂提取。第4页/共15页影 响 酶 分 离 纯 化
4、 的 主 要 因 素1.1.温度:温度:提取时的温度对酶的提取效果有明显影响,一般来说,提取时的温度对酶的提取效果有明显影响,一般来说,适当提高温度,可提高酶的溶解度,但温度过高则容易引起酶适当提高温度,可提高酶的溶解度,但温度过高则容易引起酶的变性失活,所以提取时温度不宜过高,特别是采用有机溶剂的变性失活,所以提取时温度不宜过高,特别是采用有机溶剂提取时,温度应控制在提取时,温度应控制在010010的低温条件下。的低温条件下。2.pH2.pH:溶液的溶液的pHpH对酶的溶解度和稳定性有显著影响,在达到酶等对酶的溶解度和稳定性有显著影响,在达到酶等电点时的电点时的pHpH值下,酶分子的溶解度最
5、小。为了提高酶的溶解度,值下,酶分子的溶解度最小。为了提高酶的溶解度,提取时提取时pHpH应避开酶的等电点以提高酶的溶解度。应避开酶的等电点以提高酶的溶解度。第5页/共15页3.3.提取液的体积:提取液的体积:增加提取液的用量,可以提高酶的提取率,但是过量增加提取液的用量,可以提高酶的提取率,但是过量的提取液会使酶的浓度降低,对进一步的分离纯化不利。所的提取液会使酶的浓度降低,对进一步的分离纯化不利。所以提取液的总量一般为原材料的以提取液的总量一般为原材料的3535倍,最好分多次提取。倍,最好分多次提取。4.4.添加保护剂:添加保护剂:加入适量的酶作用底物、辅酶或抗氧化剂可以提高酶加入适量的酶
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