酶活性的影响因素.pptx

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1、会计学1酶活性的影响因素酶活性的影响因素知识背景知识背景 n n pH pH、温度、紫外线、重金属盐、抑制剂、激活剂等通过影响酶的、温度、紫外线、重金属盐、抑制剂、激活剂等通过影响酶的活性来影响酶促反应的速率；酶的浓度、底物的浓度等不会影响活性来影响酶促反应的速率；酶的浓度、底物的浓度等不会影响酶活性，但可以影响酶促反应的速率。酶活性，但可以影响酶促反应的速率。n n纳氏试剂（纳氏试剂（NesslerNessler）是指一种利用红外可见分光光度法原理用于）是指一种利用红外可见分光光度法原理用于测定空气中、水体中氨氮含量的试剂。测定空气中、水体中氨氮含量的试剂。n n碘离子和汞离子在强碱性条件下

2、，会与氨反应生成红棕色胶态化碘离子和汞离子在强碱性条件下，会与氨反应生成红棕色胶态化合物，此颜色在波长合物，此颜色在波长420nm420nm左右会有强烈的吸收。而生成的这类红左右会有强烈的吸收。而生成的这类红棕色胶态化合物的量会与其溶液的吸收值成正比，可用测试反应棕色胶态化合物的量会与其溶液的吸收值成正比，可用测试反应液的吸收值而测定氨氮的含量。液的吸收值而测定氨氮的含量。第1页/共15页实验原理：实验原理：n n尿素在酸、碱、酶作用下（酸、碱需加热）能水解成氨尿素在酸、碱、酶作用下（酸、碱需加热）能水解成氨和二氧化碳和二氧化碳n n新鲜大豆中含有较高活性的尿素酶，可以水解尿素生成新鲜大豆中含

3、有较高活性的尿素酶，可以水解尿素生成NH3NH3n nCO(NH2)2+H2O-CO(NH2)2+H2O-2NH3+CO22NH3+CO2n n尿素养在尿素酶作用下，在中性或酸性环境下生成碳酸尿素养在尿素酶作用下，在中性或酸性环境下生成碳酸胺，在胺，在NaOHNaOH环境下生成环境下生成Na2CO3Na2CO3和和NH3NH3、NH3NH3与纳氏试与纳氏试剂作用，生成棕黄色碘化双汞胺剂作用，生成棕黄色碘化双汞胺 尿素酶尿素酶 NaOH NaOH n nCO(NH2)2+H2O -CO(NH2)2+H2O -(NH4)2CO3-(NH4)2CO3-NH3NH3n nNH3+NH3+纳氏试剂纳氏试

4、剂(HgI2.2KI)-(HgI2.2KI)-NH2.Hg2I3(NH2.Hg2I3(棕黄棕黄色色)第2页/共15页实验材料：实验材料：器材：控温水浴锅（每个实验室3个），制冰机，电磁灶，不锈钢锅，白瓷板，试管、滴管、移液管（1-2ml）试剂：蒸馏水，1%淀粉液，1%蔗糖液，0.1%尿素液，大豆尿素酶溶液，0.1%CuSO4，0.1%HgCl2，0.1%NaCl，1M NaOH，0.5M H2SO4，纳氏试剂，班氏试剂，各种pH缓冲液：5.0；6.8；8.0第3页/共15页酶活性的影响因素假设酶活性的影响因素假设n n1、酶的活性受、酶的活性受pH的影响的影响n n2、酶的活性受底物特异性的影

5、响、酶的活性受底物特异性的影响n n3、酶的活性受温度的影响、酶的活性受温度的影响n n4、酶的活性受重金属离子的影响、酶的活性受重金属离子的影响第4页/共15页第5页/共15页1、酶的活性受、酶的活性受pH的影响的影响n n步骤步骤n n1 1、向四支、向四支10ml10ml试管，分别标号试管，分别标号1 1，2 2，3 3，4 4n n2 2、将、将1%1%尿素液尿素液3ml3ml分别倒入四支试管中分别倒入四支试管中n n3 3、向前三支支试管中分别倒入、向前三支支试管中分别倒入1ml1ml的的pHpH为为5.05.0，6.86.8，8.08.0的缓冲液，的缓冲液，四号试管加入四号试管加入

6、1ml1ml的蒸馏水的蒸馏水n n4 4、向四支试管中加入等量的大豆尿素酶溶液五滴，轻摇后静置、向四支试管中加入等量的大豆尿素酶溶液五滴，轻摇后静置3 3分钟分钟n n5 5、向四支试管中加入等量的纳氏试剂、向四支试管中加入等量的纳氏试剂 2ml2ml，摇匀。，摇匀。n n6 6、观察并记录实验现象、观察并记录实验现象第6页/共15页实验记录实验记录项目底物（/ml）加入的pH和蒸馏水（/ml）纳氏试剂（/ml）实验现象试管1试管2试管3试管4第7页/共15页2、酶的活性受底物的特异性的影响、酶的活性受底物的特异性的影响n n步骤n n1、向四支10ml试管，分别标号1，2，3，4n n2、向

7、四支试管中分别加入3ml的蒸馏水，1%淀粉液，1%蔗糖液，0.1%尿素液n n3、向四支试管中加入等量的大豆尿素酶溶液五滴，轻摇后静置3分钟n n4、向四支试管中加入等量的纳氏试剂2ml，摇匀。n n5、观察并记录实验现象第8页/共15页实验记录实验记录项目底物（/ml）大豆尿素酶溶液（/ml）纳氏试剂（/ml）实验现象试管1试管2试管3试管4第9页/共15页3、酶的活性受温度的影响、酶的活性受温度的影响n n步骤步骤n n1 1、向四支、向四支10ml10ml试管，分别标号试管，分别标号1 1，2 2，3 3，4 4n n2 2、向四支试管中分别加入、向四支试管中分别加入3ml0.1%3ml

8、0.1%尿素液尿素液n n3 3、将四支试管分别置于、将四支试管分别置于0C0C，30C30C，100C100C，室温的水浴中预温，室温的水浴中预温1010分钟分钟n n3 3、向四支试管中加入等量的大豆尿素酶溶液五滴，轻摇后静置、向四支试管中加入等量的大豆尿素酶溶液五滴，轻摇后静置3 3分钟分钟n n4 4、向四支试管中加入等量的纳氏试剂、向四支试管中加入等量的纳氏试剂2ml2ml，摇匀。，摇匀。n n5 5、观察并记录实验现象、观察并记录实验现象第10页/共15页实验记录实验记录项目底物（/ml）温度（/C）大豆尿素酶溶液（/ml）纳氏试剂（/ml）实验现象试管1试管2试管3试管4第11页

9、/共15页4、酶的活性受重金属离子的影响、酶的活性受重金属离子的影响n n步骤步骤n n1 1、向六支、向六支10ml10ml试管，分别标号试管，分别标号1 1，2 2，3 3，4 4，5 5，6 6n n2 2、向六支试管中分别加入、向六支试管中分别加入3ml0.1%3ml0.1%尿素液尿素液n n3 3、将六支试管分别加入、将六支试管分别加入0.1%CuSO4 0.1%HgCl2 0.1%CuSO4 0.1%HgCl2 0.1%NaCl 1M NaOH 0.5M H2SO40.1%NaCl 1M NaOH 0.5M H2SO4，蒸馏水各，蒸馏水各2ml2mln n3 3、向六支试管中加入等量的大豆尿素酶溶液五滴，、向六支试管中加入等量的大豆尿素酶溶液五滴，轻摇后静置轻摇后静置3 3分钟分钟n n4 4、向六支试管中加入等量的纳氏试剂、向六支试管中加入等量的纳氏试剂2ml2ml，摇匀。，摇匀。n n5 5、观察并记录实验现象、观察并记录实验现象第12页/共15页实验记录实验记录项目底物（/ml）加入的重金属离子和蒸馏水（/ml）大豆尿素酶溶液（/ml）纳氏试剂（/ml）实验现象试管1试管2试管3试管4试管5试管6第13页/共15页第14页/共15页