仿制药杂质检查方法建立和方法学研究与评价34850.pptx

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1、仿制药杂质检查方法建立和仿制药杂质检查方法建立和方法学研究与评价方法学研究与评价主讲人：许真玉主讲人：许真玉讲习组成员：霍秀敏、高杨讲习组成员：霍秀敏、高杨药品审评中心药品审评中心2008年年7月月一、概述一、概述二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立三、杂质检查方法学验证的要求三、杂质检查方法学验证的要求四、杂质检查方法和方法验证常见问题分析四、杂质检查方法和方法验证常见问题分析五、几个小问题的计论五、几个小问题的计论六、小结六、小结主要内容主要内容2l杂质杂质：任何影响药物纯度的物质统称为杂质。：任何影响药物纯度的物质统称为杂质。药品中的杂质按其理化性质一般分为三类：有药品中的杂质按

2、其理化性质一般分为三类：有机杂质、无机杂质及残留溶剂。机杂质、无机杂质及残留溶剂。有关物质有关物质：有机杂质包括工艺中引入的杂质和：有机杂质包括工艺中引入的杂质和降解产物等，可能是已知的或未知的、挥发性降解产物等，可能是已知的或未知的、挥发性的或不挥发性的。由于这类杂质的化学结构一的或不挥发性的。由于这类杂质的化学结构一般与活性成分类似或具渊源关系，故通常又可般与活性成分类似或具渊源关系，故通常又可称之为有关物质。称之为有关物质。有关物质包括已知杂质和未知杂质。有关物质包括已知杂质和未知杂质。主要内容主要内容31、杂质检查方法和方法学验证对仿制药的重要、杂质检查方法和方法学验证对仿制药的重要意

3、义意义（1）安全性的重要保证）安全性的重要保证-关注毒性杂质关注毒性杂质（2）评价仿制药质量是否一致的关健指标之一）评价仿制药质量是否一致的关健指标之一-仿制药与被仿制药的质量一致仿制药与被仿制药的质量一致-杂质的种类和数量不高于被仿制药杂质的种类和数量不高于被仿制药（3）杂质研究的基础）杂质研究的基础-杂质检查方法不合适或方法学验证不完善，杂质检查方法不合适或方法学验证不完善，杂质检查不可靠，无法准确评价药品质量杂质检查不可靠，无法准确评价药品质量一、概述一、概述4仿制药与被仿制药一致性要求仿制药与被仿制药一致性要求药学方面一致（含量、结构、杂质、其它检查项等）药学方面一致（含量、结构、杂质

4、、其它检查项等）杂质的数量和种类低于被仿制药，否则需要分析杂质杂质的数量和种类低于被仿制药，否则需要分析杂质的安全性并提供有关数据，必要时应进行相关的安全的安全性并提供有关数据，必要时应进行相关的安全性试验性试验建立杂质适宜的杂质检查方法用于判断一致性建立杂质适宜的杂质检查方法用于判断一致性用于工艺优化、去除杂质、考察稳定性、控制药物质量用于工艺优化、去除杂质、考察稳定性、控制药物质量一、概述一、概述52、目前国内仿制药研究中杂质检查面临的困难、目前国内仿制药研究中杂质检查面临的困难-杂质来源不清杂质来源不清被仿制药和仿制药杂质的种类和数量不清，包括杂被仿制药和仿制药杂质的种类和数量不清，包括

5、杂质产生或引入过程、降解途径质产生或引入过程、降解途径-杂质检查方法缺乏针对性杂质检查方法缺乏针对性不知控制何种杂质以及为何控制，缺乏安全性数据不知控制何种杂质以及为何控制，缺乏安全性数据的支持的支持-杂质对照品制备困难（受限于工艺困难），方法杂质对照品制备困难（受限于工艺困难），方法验证不充分验证不充分-杂质检查结果难于评价杂质检查结果难于评价研究基础薄弱，需要提高杂质研究水平，包括杂质研究基础薄弱，需要提高杂质研究水平，包括杂质检查方法和验证水平，以提高仿制药研制水平检查方法和验证水平，以提高仿制药研制水平一、概述一、概述6例盐酸曲美他嗪片例盐酸曲美他嗪片进口标准釆用梯度洗脱，对进口标准釆

6、用梯度洗脱，对3种已知杂质、单种已知杂质、单个未知杂质及总杂质分别进行控制个未知杂质及总杂质分别进行控制国内仿制釆用等度洗脱，仅对未知杂质（单个国内仿制釆用等度洗脱，仅对未知杂质（单个杂质和杂质和/或总杂质）进行控制或总杂质）进行控制国内同品种标准对有关物质的规定：总杂质不国内同品种标准对有关物质的规定：总杂质不得过得过1.0%。一、概述一、概述7例例BP收载的核黄素磷酸钠杂质检验收载的核黄素磷酸钠杂质检验-HPLC法法-已知杂质核黄素：对照品法已知杂质核黄素：对照品法-其它杂质：相对保留时间加上自身对照的方法其它杂质：相对保留时间加上自身对照的方法5-单磷酸核黄素的保留时间为单磷酸核黄素的保

7、留时间为20分钟分钟3，4-二磷酸核黄素大约二磷酸核黄素大约0.23，5-二磷酸核黄素大约二磷酸核黄素大约0.34，5-二磷酸核黄素大约二磷酸核黄素大约0.53-单磷酸核黄素大约单磷酸核黄素大约0.74-单磷酸核黄素大约单磷酸核黄素大约0.9核黄素大约核黄素大约2-4-单单磷酸核黄素峰与单单磷酸核黄素峰与5-单磷酸核黄素峰的分离度应不小于单磷酸核黄素峰的分离度应不小于1.5一、概述一、概述83、本讲所依托的主要技术指导原则和技术要求、本讲所依托的主要技术指导原则和技术要求化学药物杂质研究的技术指导原则化学药物杂质研究的技术指导原则已有国家标准化学药品研究技术指导原则已有国家标准化学药品研究技术

8、指导原则 过渡期品种集中审评（化学药品）技术要求过渡期品种集中审评（化学药品）技术要求 FDA、ICH的相关指导原则的相关指导原则-Guidance for Industry,ANDAs:Impurities in Drug Substances,Chemistry,Manufacturing,and Controls Information-ANDAs:Impurities in Drug Products-Q3A(R)-Q3B(R)一、概述一、概述94、本讲杂质的范围、本讲杂质的范围有机杂质有机杂质-包括工艺中引入的杂质和降解产物，包括工艺中引入的杂质和降解产物，化学结构与活性成分的分子式

9、类似或具渊源关化学结构与活性成分的分子式类似或具渊源关系，通常称为有关物质系，通常称为有关物质无机杂质无机杂质-产生的无机物产生的无机物残留溶剂残留溶剂-生产过程中使用的有机溶剂生产过程中使用的有机溶剂来源来源-工艺杂质、降解产物、从反应物及试剂工艺杂质、降解产物、从反应物及试剂中混入的杂质（外源性杂质）等中混入的杂质（外源性杂质）等结构杂质结构杂质-几何异构体、光学异构体、聚合物、几何异构体、光学异构体、聚合物、其它甾体、其它氨基酸其它甾体、其它氨基酸一、概述一、概述10目的目的-1、建立杂质检查方法是质控的要求、建立杂质检查方法是质控的要求包括具体的分析操作方法，以及计算方法，包括具体的分

10、析操作方法，以及计算方法，限度要求限度要求-2、用于分析杂质谱、用于分析杂质谱考察与被仿制药一致性，进而优化制备工艺考察与被仿制药一致性，进而优化制备工艺及稳定性考察及稳定性考察二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立11二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立121、杂质检查方法建立的前提、杂质检查方法建立的前提-（1）被仿制药杂质谱如何？）被仿制药杂质谱如何？参考公开信息：质量标准、说明书、有关文献参考公开信息：质量标准、说明书、有关文献和专利和专利-（2）自身杂质谱如何？）自身杂质谱如何？理论综合分析、直接测试理论综合分析、直接测试二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立13

11、英国药典头孢克洛中收载的杂质谱英国药典头孢克洛中收载的杂质谱二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立14杂质谱分析的一些方法（供参考）杂质谱分析的一些方法（供参考）-分析起始原料中可能存在的杂质分析起始原料中可能存在的杂质例：盐酸曲美他嗪的合成中哌嗪的控制例：盐酸曲美他嗪的合成中哌嗪的控制二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立15-分析中间体杂质分析中间体杂质-分析副反应及副反应产物分析副反应及副反应产物制剂工艺中可能的制剂工艺中可能的Millard反应反应杂质产生的来源？结构？工艺条件（灭菌温度、杂质产生的来源？结构？工艺条件（灭菌温度、灭菌时间）的影响？灭菌时间）的影响？例：氨甲

12、环酸与葡萄糖例：氨甲环酸与葡萄糖二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立16-推测降解产物推测降解产物举例：甘氨酰谷酰胺举例：甘氨酰谷酰胺 降解杂质：环降解杂质：环-（甘氨酰（甘氨酰-谷氨酰胺）和谷氨酰胺）和焦谷氨酸焦谷氨酸二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立17研究头孢菌素的降解途径研究，为杂质谱提供研究头孢菌素的降解途径研究，为杂质谱提供基础基础二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立18-UV法（法（HPLC-PAD）二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立19-LC-MS/GC-MS或或CE-MS法法-HPLC峰保留时间对比法峰保留时间对比法 用于未知杂质或未定性杂

13、质的用于未知杂质或未定性杂质的“标记标记”-其他方法其他方法杂质研究实例杂质研究实例.DOC二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立202、仿制药杂质检查方法建立的一般考虑点、仿制药杂质检查方法建立的一般考虑点（1）参考被仿制药的方法）参考被仿制药的方法被仿制药杂质检查方法和限度如何？标准中控制了哪被仿制药杂质检查方法和限度如何？标准中控制了哪些杂质？些杂质？重要参考，为方法建立提供重要的信息，全面考察重要参考，为方法建立提供重要的信息，全面考察不可简单套不可简单套-工艺或处方的不同，二者的杂质谱可能不同，被仿制工艺或处方的不同，二者的杂质谱可能不同，被仿制药杂质检查方法可能不适用药杂质检

14、查方法可能不适用-被仿制药标闪较低，无杂质检查项或控制较为简单被仿制药标闪较低，无杂质检查项或控制较为简单-被仿制药的杂质检查方法无法获得被仿制药的杂质检查方法无法获得二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立21（2）结合杂质理化特点）结合杂质理化特点根据杂质谱，考虑杂质结构、理化性质根据杂质谱，考虑杂质结构、理化性质例如：例如：阿司匹林阿司匹林 比色法比色法游离水杨酸（游离水杨酸（CP2005）葡萄糖葡萄糖UV法法5-羟甲基糠醛（羟甲基糠醛（CP2005）氨基酸原料药氨基酸原料药 TLC法法其他氨基酸其他氨基酸（CP2005）二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立22（3）结合杂质

15、的毒性特点）结合杂质的毒性特点安全性控制的需要安全性控制的需要被仿制药和自身杂质的毒性如何？重视药理毒理及临床安全性被仿制药和自身杂质的毒性如何？重视药理毒理及临床安全性研究的结果的作用研究的结果的作用对于有些分子通过以下化学反应可能产生潜在的遗传毒性作用对于有些分子通过以下化学反应可能产生潜在的遗传毒性作用-烷基化烷基化-交联交联-脱嘌呤脱嘌呤可参考遗传毒性结构库可参考遗传毒性结构库遗传毒性杂质或具有可能引起遗传毒性的结构（遗传毒性杂质或具有可能引起遗传毒性的结构（alerting stucture）的杂质需要建立灵敏的试验方法）的杂质需要建立灵敏的试验方法-EMEA遗传毒性杂质限度指导原则

16、：毒理学阈值遗传毒性杂质限度指导原则：毒理学阈值（TTC）1.5ug/人人/日日二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立23(4)考虑不同检查方法的特点考虑不同检查方法的特点主要是灵敏度和专属性能否符合要求主要是灵敏度和专属性能否符合要求痕量杂质和遗传毒性杂质的严格控制，对方法痕量杂质和遗传毒性杂质的严格控制，对方法的要求较高的要求较高-化学法化学法vsTLC法法vsHPLC法法-HPLC/MS，HPLC/荧光荧光CE法可用于微量样品法可用于微量样品GC适用于挥发性杂质检查适用于挥发性杂质检查二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立24（5）注意多种方法联用）注意多种方法联用由杂质多样

17、性复杂性和方法局限性所决定由杂质多样性复杂性和方法局限性所决定单一方法不能满足多个杂质的检测时，可釆用单一方法不能满足多个杂质的检测时，可釆用两种或两种以上的方法互为补充，控制杂质两种或两种以上的方法互为补充，控制杂质-化学法、色谱法、光谱法、生物检定法化学法、色谱法、光谱法、生物检定法-同一方法釆用不同的测试条件同一方法釆用不同的测试条件如正相如正相HPLC、反相、反相HPLC、不同流动相的反相、不同流动相的反相HPLC等等-分离技术与检测手段联用，较为有效，如分离技术与检测手段联用，较为有效，如HPLC、GC、LC-MS、HPLC-PDA、CE等等例：肝素钠中多硫酸软骨素的例：肝素钠中多硫

18、酸软骨素的NMR检查方法检查方法二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立25（6）综合药学其他研究结果）综合药学其他研究结果杂质检查与药物外观色泽、含量等项目间存在杂质检查与药物外观色泽、含量等项目间存在密切联系，如果这些项目发生明显变化，而杂密切联系，如果这些项目发生明显变化，而杂质基本不变时，应分析原因，关注杂质检查方质基本不变时，应分析原因，关注杂质检查方法的可行性法的可行性二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立26例：例：5-羟甲基糠醛的检查方法的综合分析羟甲基糠醛的检查方法的综合分析-溶液颜色法、紫外法、溶液颜色法、紫外法、HPLC法法葡萄糖注射液颜色深浅与葡萄糖注射液颜色

19、深浅与5-HMF产生的量有关，产生的量有关，非葡萄糖注射液变色唯一因素，专属性、准确非葡萄糖注射液变色唯一因素，专属性、准确性差性差5-HMF的最大吸收波长为的最大吸收波长为284nm，干扰较少，干扰较少如果制剂中的主药或辅料在如果制剂中的主药或辅料在284nm有明显的明有明显的明收，会干扰收，会干扰5-HMF的检查，可釆用的检查，可釆用HPLC法代法代替替二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立273、杂质检查常见方法介绍、杂质检查常见方法介绍HPLC法法-考虑被仿制药的色谱条件考虑被仿制药的色谱条件-参考同类物质质量标准中的杂质检查方法参考同类物质质量标准中的杂质检查方法-一般选择多种

20、色谱条件一般选择多种色谱条件 反相和正相反相和正相-方法包括方法包括固定相、流动相、洗脱方式、波长、测试样品固定相、流动相、洗脱方式、波长、测试样品的处理、具体操作、计算方法的处理、具体操作、计算方法二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立28（1）固定相的选择）固定相的选择-根据待研究的药物的特性选择合适填料的柱子，常根据待研究的药物的特性选择合适填料的柱子，常用用RP-HPLC，色谱柱多选用，色谱柱多选用C18柱，柱，C8柱、苯基柱、柱、苯基柱、氨基柱也有使用氨基柱也有使用-C18柱时，流动相有机溶剂柱时，流动相有机溶剂%通常通常5%-流动相流动相PH值值2-8PH8，溶解硅胶载体，宜

21、选用耐碱填充剂：包覆聚，溶解硅胶载体，宜选用耐碱填充剂：包覆聚合物、高纯硅胶为载体并具有高表面覆盖度的键合硅合物、高纯硅胶为载体并具有高表面覆盖度的键合硅胶、非硅胶或有机胶、非硅胶或有机-无机杂化填充剂无机杂化填充剂-PH2，键合相水解脱落，宜选用耐酸填充剂：有，键合相水解脱落，宜选用耐酸填充剂：有机机-无机杂质填充剂、具有大体积侧链的二异丙基或无机杂质填充剂、具有大体积侧链的二异丙基或二异丁基取代基取代二异丁基取代基取代C18键合硅胶等键合硅胶等二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立29l注意不同品牌柱子在耐用性方面的研究：注意不同品牌柱子在耐用性方面的研究：-当杂质峰与主峰的分离情况

22、不十分完美当杂质峰与主峰的分离情况不十分完美-确定辅料峰的相对保留时间（用于定位扣除确定辅料峰的相对保留时间（用于定位扣除辅料峰的干扰）辅料峰的干扰）-确定特定杂质的相对保留时间确定特定杂质的相对保留时间-确定有关物质出峰完毕的保留时间确定有关物质出峰完毕的保留时间 当不同品牌而引起以上各因素不固定时，应当不同品牌而引起以上各因素不固定时，应在标准中注明品牌。在标准中注明品牌。二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立30（2）流动相的选择）流动相的选择l尝试多种流动相尝试多种流动相l结合杂质的性质结合杂质的性质 -手性杂质手性杂质 -无紫外吸收杂质无紫外吸收杂质 -一般杂质一般杂质（3）洗

23、脱方式的选择）洗脱方式的选择 等度洗脱等度洗脱 梯度洗脱：极性大的化合物可能被掩盖，极性小梯度洗脱：极性大的化合物可能被掩盖，极性小的化合物难以被洗脱，甚至保留在柱上，可适用梯度的化合物难以被洗脱，甚至保留在柱上，可适用梯度洗脱。洗脱。二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立31梯度洗脱与等度洗脱条件下有关物质的分离情况梯度洗脱与等度洗脱条件下有关物质的分离情况二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立32（4）波长的选择）波长的选择-选择的原则是大部分主要杂质与主成分均在此选择的原则是大部分主要杂质与主成分均在此波长下有吸收波长下有吸收l二极管阵列方法二极管阵列方法-无紫外吸收或检测波

24、长处吸收相差较大的多种无紫外吸收或检测波长处吸收相差较大的多种化合物，有时在单一检测波长处不能检出化合物，有时在单一检测波长处不能检出-兼顾各杂质吸收情况；特定波长检测特定杂质兼顾各杂质吸收情况；特定波长检测特定杂质-必要时，改用其他类型检测器必要时，改用其他类型检测器二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立33三、杂质检查方法验证的要求三、杂质检查方法验证的要求34（5）样品的处理和配制）样品的处理和配制-预处理样品的考虑预处理样品的考虑l乳膏乳膏l提取可能导致的杂质漏检和失真提取可能导致的杂质漏检和失真l衍生化处理导致的杂质丢失衍生化处理导致的杂质丢失-样品浓度的影响样品浓度的影响l浓

25、度高利于杂质的检出，但防超载浓度高利于杂质的检出，但防超载l低浓度样品杂质的检查难题？低浓度样品杂质的检查难题？二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立35（6）杂质的定量计算方法）杂质的定量计算方法 -杂质对照品法杂质对照品法l定量准确，已知杂质，需用杂质对照品定量准确，已知杂质，需用杂质对照品 -校正因子的主成分自身对照法校正因子的主成分自身对照法l定量准确，已知杂质，无需长期提供对照品定量准确，已知杂质，无需长期提供对照品 -不加校正因子的主成分自身对照法不加校正因子的主成分自身对照法l前提是假定杂质与主成分的响应因子基本相同前提是假定杂质与主成分的响应因子基本相同l有一定误差，可用

26、于未知杂质有一定误差，可用于未知杂质l已知杂质对主成分的响应因子在已知杂质对主成分的响应因子在0.91.1之间之间 -峰面积归一法峰面积归一法l简便简便l因杂质与主成分响应因子不同、线性范围不同、仪器对它们的因杂质与主成分响应因子不同、线性范围不同、仪器对它们的积分精度及准确度不同等因素，有一定的局限性积分精度及准确度不同等因素，有一定的局限性二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立36目前定量方法中存在的主要问题目前定量方法中存在的主要问题-杂质对照品法较少使用杂质对照品法较少使用-主成分自身对照法较少采用校正因子计算主成分自身对照法较少采用校正因子计算l杂质无法进行归属或杂质对照品无法

27、得到杂质无法进行归属或杂质对照品无法得到l校正因子无法计算校正因子无法计算-常见的是对未知杂质，不加校正因子的主成分常见的是对未知杂质，不加校正因子的主成分自身对照或面积归一化法自身对照或面积归一化法l无法准确定量无法准确定量l无法有效检测杂质无法有效检测杂质二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立37TLC法法-设备和操作简便，一些特定杂质的检查设备和操作简便，一些特定杂质的检查-灵敏度较差、定量不够精确，分离度欠佳，有灵敏度较差、定量不够精确，分离度欠佳，有时无法满足需要时无法满足需要-仅限于限度检查（半定量），结合不同原理的仅限于限度检查（半定量），结合不同原理的检视技术能使各杂质斑

28、点均可显示，弥补检视技术能使各杂质斑点均可显示，弥补HPLC的不足的不足-需做好系统适用性试验需做好系统适用性试验二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立38-定量方法定量方法l限度检查（半定量）限度检查（半定量）l对照品比较法对照品比较法已知杂质，对照品已知杂质，对照品l自身对照法自身对照法已知杂质、未知杂质，色调一已知杂质、未知杂质，色调一致致l检视技术检视技术显色、荧光、自身颜色等显色、荧光、自身颜色等二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立39lLC-MS/GC-MS/GC-IR/CE-MS法法-分离技术和鉴别技术联用，为解析化合物的分离技术和鉴别技术联用，为解析化合物的结构提

29、供直接证据结构提供直接证据-有助于杂质谱的分析和定性有助于杂质谱的分析和定性二、杂质检查方法的建立二、杂质检查方法的建立40l方法验证的目的方法验证的目的-考察分析方法是否适用于杂质的检测和定量考察分析方法是否适用于杂质的检测和定量l方法验证中面临的困难方法验证中面临的困难-杂质谱不清杂质谱不清-杂质对照品无法获得杂质对照品无法获得l验证的具体要求验证的具体要求三、杂质检查方法验证的要求三、杂质检查方法验证的要求411、专属性、专属性l指在可能的共存组分存在时，对被分析物准确测定的指在可能的共存组分存在时，对被分析物准确测定的能力。能力。l分离度分离度-专属性指标专属性指标-杂质谱的明确是基础

30、杂质谱的明确是基础l杂质可得杂质可得最难分离物质对的分离试验、粗品中间体最难分离物质对的分离试验、粗品中间体分离试验、辅料与杂质及主成他的分离试验分离试验、辅料与杂质及主成他的分离试验l杂质不可得杂质不可得强制降解试验、与另一成熟方法比对强制降解试验、与另一成熟方法比对l峰纯度峰纯度-二极管阵列、质谱；改变流动相比例二极管阵列、质谱；改变流动相比例l方法不够专属时，应多个方法予以补充方法不够专属时，应多个方法予以补充三、杂质检查方法验证的要求三、杂质检查方法验证的要求42降解试验的注意点降解试验的注意点-降解程度降解程度-当降解产物、中间体、副产物吸收波长不同当降解产物、中间体、副产物吸收波长

31、不同时的处理时的处理-制剂降解破坏制剂降解破坏-消除辅料的干扰，当无法避开辅料的干扰时消除辅料的干扰，当无法避开辅料的干扰时应对辅料进行定位予以扣除应对辅料进行定位予以扣除三、杂质检查方法验证的要求三、杂质检查方法验证的要求43l破坏性试验破坏性试验-酸降解一般釆用酸降解一般釆用0.1mol/L-1mol/L盐酸或硫酸盐酸或硫酸-碱降解釆用碱降解釆用0.1mol/L-1mol/L氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液-氧化降解釆用合适的过不去氧化氢溶液氧化降解釆用合适的过不去氧化氢溶液-必要时可以加热或提高浓度必要时可以加热或提高浓度-高温试验通常温度高于加速试验温度的高温试验通常温度高于加速试验温度的10

32、，50、60等等-对于原料药有时需考虑水溶液或混悬液的降解对于原料药有时需考虑水溶液或混悬液的降解-考虑在不同考虑在不同PH值条件下的降解值条件下的降解-光照试验条件可釆用光照试验条件可釆用4500LX三、杂质检查方法验证的要求三、杂质检查方法验证的要求44存在的主要问题：存在的主要问题：-（1）主药完全降解，无法对降解产物进行有）主药完全降解，无法对降解产物进行有效检测效检测-（2）由于选择的降解条件强度不够，使药物）由于选择的降解条件强度不够，使药物未能降解，而误认为药物稳定未能降解，而误认为药物稳定-（3）不能选择合适测定方法测定降解产物，）不能选择合适测定方法测定降解产物，使主成分降解

33、后测定的回收量偏低使主成分降解后测定的回收量偏低-（4）未考虑破坏性试验时产生的聚合物）未考虑破坏性试验时产生的聚合物三、杂质检查方法验证的要求三、杂质检查方法验证的要求45三、杂质检查方法验证的要求三、杂质检查方法验证的要求462、灵敏度、灵敏度-试样中能被检测（或定量）的最低量。试样中能被检测（或定量）的最低量。-通常用检测限及定量限表征，可根据直观评通常用检测限及定量限表征，可根据直观评价、信噪比、响应值的标准差和斜率获得。价、信噪比、响应值的标准差和斜率获得。-应满足质控需要应满足质控需要-信噪比的方法信噪比的方法三、杂质检查方法验证的要求三、杂质检查方法验证的要求47三、杂质检查方法

34、验证的要求三、杂质检查方法验证的要求483、精密度、精密度-在规定的测试条件下，同一个均匀样品经多在规定的测试条件下，同一个均匀样品经多次取样测定所得结果之间的接近程度次取样测定所得结果之间的接近程度-重复性、中间精密度、重现性重复性、中间精密度、重现性三、杂质检查方法验证的要求三、杂质检查方法验证的要求494、准确度、准确度-测定结果与真实值或参考值接近程度测定结果与真实值或参考值接近程度-已知杂质：回收率（根据精密度、专属性、已知杂质：回收率（根据精密度、专属性、线性）推断线性）推断-未知杂质：与另一成熟方法比对、根据质量未知杂质：与另一成熟方法比对、根据质量平衡原理结合含量等结果进行粗略

35、判定，必要平衡原理结合含量等结果进行粗略判定，必要时研究几种不同色谱条件甚至不同测定原理的时研究几种不同色谱条件甚至不同测定原理的方法进行比较选用方法进行比较选用三、杂质检查方法验证的要求三、杂质检查方法验证的要求505、线性、线性-在设计范围内，检测响应值与待测物质量之在设计范围内，检测响应值与待测物质量之间成正比关系的程度。间成正比关系的程度。6、-检测方法能达到一定精密度、准确度和线性检测方法能达到一定精密度、准确度和线性的高、低浓度或量的区间的高、低浓度或量的区间-范围应在规定限度的范围应在规定限度的20%间或定量限至限度间或定量限至限度的的20%间，若含量测定和杂质检查同用一套间，若

36、含量测定和杂质检查同用一套色谱系统，则线性范围应为杂质限度的色谱系统，则线性范围应为杂质限度的-20%至含量限度（上限）的至含量限度（上限）的+20%间间三、杂质检查方法验证的要求三、杂质检查方法验证的要求517、耐用性、耐用性-指测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承指测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度受程度-HPLC：流动相的组成比例及：流动相的组成比例及PH值、不同产家或批值、不同产家或批号的色谱柱、柱效、柱温、流速等及被测溶液的稳定号的色谱柱、柱效、柱温、流速等及被测溶液的稳定性、样品提取的次数和时间等性、样品提取的次数和时间等l建议固定上述测定条件的参数，如柱长、填

37、料的粒度、建议固定上述测定条件的参数，如柱长、填料的粒度、温度、流速，甚至品牌温度、流速，甚至品牌-TLC：适当改变展开剂比例及：适当改变展开剂比例及PH值，考察耐用性。值，考察耐用性。如对色谱条件要求苛刻时，规定最难分离物质对试验如对色谱条件要求苛刻时，规定最难分离物质对试验-较容易忽略较容易忽略三、杂质检查方法验证的要求三、杂质检查方法验证的要求528、溶液的稳定性考察、溶液的稳定性考察-一般在常温、常光情况下进行，对同份样品一般在常温、常光情况下进行，对同份样品溶液进行时间的测定，以杂质量的变化进行考溶液进行时间的测定，以杂质量的变化进行考查。查。-光或温度引起，应在标准中说明避光或实验

38、光或温度引起，应在标准中说明避光或实验温度温度三、杂质检查方法验证的要求三、杂质检查方法验证的要求539、系统适用性、系统适用性-理论板数理论板数-柱拖尾因子柱拖尾因子-难分离物质对的分离度难分离物质对的分离度-对照品溶液得复进样的偏差对照品溶液得复进样的偏差否则，应对色谱系统作必要的调整或更换色谱否则，应对色谱系统作必要的调整或更换色谱柱柱杂质检查方法验证实例杂质检查方法验证实例.doc三、杂质检查方法验证的要求三、杂质检查方法验证的要求541、简单套用被仿制药的检查方法，未建立针对、简单套用被仿制药的检查方法，未建立针对性的方法性的方法盐酸伪麻黄碱，分别釆用人工合成与植物提取盐酸伪麻黄碱，

39、分别釆用人工合成与植物提取工艺，有机溶剂残留量、有关物质均不同工艺，有机溶剂残留量、有关物质均不同2、方法学验证不充分、方法学验证不充分-如强制降解条件过于剧烈，无法判断主峰与如强制降解条件过于剧烈，无法判断主峰与降解产物的分离度情况降解产物的分离度情况-样品经碱解、氧化破坏后主药被完全破坏，样品经碱解、氧化破坏后主药被完全破坏，无法说明其降解物与主峰的分离情况无法说明其降解物与主峰的分离情况-调整降解条件的剧烈程度调整降解条件的剧烈程度四、杂质检查方法和方法验证常见问题分析四、杂质检查方法和方法验证常见问题分析553、检查方法对杂质的控制不全面，尤其是对毒、检查方法对杂质的控制不全面，尤其是

40、对毒性杂质性杂质某药间位和对位异构体的检查某药间位和对位异构体的检查脂质体溶血磷脂的检查脂质体溶血磷脂的检查四、杂质检查方法和方法验证常见问题分析四、杂质检查方法和方法验证常见问题分析56案例间位和对位异构体的控制案例间位和对位异构体的控制合成工艺简介合成工艺简介四、杂质检查方法和方法验证常见问题分析四、杂质检查方法和方法验证常见问题分析57合成原料中的异构体杂质合成原料中的异构体杂质产生的杂质产生的杂质四、杂质检查方法和方法验证常见问题分析四、杂质检查方法和方法验证常见问题分析58以杂质对照品验证以杂质对照品验证HPLC方法的检测能力方法的检测能力四、杂质检查方法和方法验证常见问题分析四、杂

41、质检查方法和方法验证常见问题分析59建议的质量保证策略建议的质量保证策略过程控制：控制合成原料的纯度过程控制：控制合成原料的纯度终产品控制：检查终产品残留的结构异构体终产品控制：检查终产品残留的结构异构体四、杂质检查方法和方法验证常见问题分析四、杂质检查方法和方法验证常见问题分析60脂质体溶血磷脂的检查脂质体溶血磷脂的检查四、杂质检查方法和方法验证常见问题分析四、杂质检查方法和方法验证常见问题分析614、方法灵敏度不够、方法灵敏度不够-有关物质检查法的定量限为有关物质检查法的定量限为0.75ng，标准规，标准规定杂质限度不得过定杂质限度不得过1.0%，折算为，折算为0.5ng，表明，表明此方法

42、不能有效检测产品杂质，需重新建立有此方法不能有效检测产品杂质，需重新建立有效的杂质检测方法效的杂质检测方法5、方法缺乏互补性、方法缺乏互补性-合成中重要中间体检测波长处无吸收，建立合成中重要中间体检测波长处无吸收，建立的有关物质检查方法无法检测该物质的有关物质检查方法无法检测该物质-建立该中间体适宜的要检测方法建立该中间体适宜的要检测方法四、杂质检查方法和方法验证常见问题分析四、杂质检查方法和方法验证常见问题分析626、积分时间不充分，不能有效检出杂质、积分时间不充分，不能有效检出杂质-氧化破坏试验中，主峰保留时间的氧化破坏试验中，主峰保留时间的3倍处，仍倍处，仍有降解物峰出现，色谱图记录至有

43、降解物峰出现，色谱图记录至2倍，不能有倍，不能有效检出有关物质效检出有关物质-改进改进7、检测波长缺乏针对性、检测波长缺乏针对性-220nm附近的吸收强度远高于附近的吸收强度远高于278nm波长处波长处-提供检测波长选择依据提供检测波长选择依据四、杂质检查方法和方法验证常见问题分析四、杂质检查方法和方法验证常见问题分析638、供试液制备处理欠妥、供试液制备处理欠妥-有关物质检查中供试液制备经过了碱化、萃有关物质检查中供试液制备经过了碱化、萃取等复杂过程，是否会引起产品中有关物质的取等复杂过程，是否会引起产品中有关物质的变化而影响了检出结果？变化而影响了检出结果？-供试液制备经过了固定萃取过程，

44、测定结果供试液制备经过了固定萃取过程，测定结果可能难以如实反映产品中杂质情况可能难以如实反映产品中杂质情况五、几个问题的讨论五、几个问题的讨论641、复方制剂的杂质研究、复方制剂的杂质研究-如何进行研究？如何进行研究？-主药的稳定性主药的稳定性l将不稳定主药的降解产物和主药带进的毒性将不稳定主药的降解产物和主药带进的毒性杂质或含量较高的杂质（尤其已知杂质）作为杂质或含量较高的杂质（尤其已知杂质）作为杂质研究检测的重要内容；无法兼顾其他杂质杂质研究检测的重要内容；无法兼顾其他杂质时，首先保证此类杂质监控时，首先保证此类杂质监控-主药之间、主药与辅料之间的相容性主药之间、主药与辅料之间的相容性l主

45、药之间的相互作用，应作为复方制剂杂质研主药之间的相互作用，应作为复方制剂杂质研究的重点究的重点五、几个问题的讨论五、几个问题的讨论65l杂质检测方法的建立：杂质检测方法的建立：-参考各原料药的杂质研究，并尽量釆用杂质对照品参考各原料药的杂质研究，并尽量釆用杂质对照品法法-参照单方制剂杂质研究。难以实现杂质的检测时，参照单方制剂杂质研究。难以实现杂质的检测时，综合质量研究的其他项目总体把握杂质的控制综合质量研究的其他项目总体把握杂质的控制l进行其中某一成分的杂质检查进行其中某一成分的杂质检查l对总杂质按两个成分的平均峰面积进行自身对照法测对总杂质按两个成分的平均峰面积进行自身对照法测定定l按出峰

46、时间段对两个成分的杂质分别进行自身对照法按出峰时间段对两个成分的杂质分别进行自身对照法测定测定l关健是对杂质的归属和确证关健是对杂质的归属和确证五、几个问题的讨论五、几个问题的讨论662、多手性中心的手性杂质检查、多手性中心的手性杂质检查-方法建立较为困难方法建立较为困难-如顺苯磺阿曲库铵如顺苯磺阿曲库铵l4个手性中心，其中个手性中心，其中2个为手性碳，个为手性碳，2个为手个为手性氮，理论上有性氮，理论上有16个手性异构体，结构对称，个手性异构体，结构对称，实际实际10个异构体个异构体l五、几个问题的讨论五、几个问题的讨论67-结合中间过程控制杂质结合中间过程控制杂质-质量源于设计质量源于设计

47、-分离度是关键分离度是关键-计算方法计算方法l用相应的异构体的对照品的外标法（或用相应用相应的异构体的对照品的外标法（或用相应的异构体的对照品定位釆用归一化法）的异构体的对照品定位釆用归一化法）l用消旋体的对照品的外标法（或用相应的消旋用消旋体的对照品的外标法（或用相应的消旋体的对照品定位釆用归一化法）体的对照品定位釆用归一化法）l釆用相对保留时间或以出峰次序定位的归一化釆用相对保留时间或以出峰次序定位的归一化法法六、小结六、小结68l药品杂质能否被全面准确地控制，直接关系到药品杂质能否被全面准确地控制，直接关系到药品的质量可控与安全有效药品的质量可控与安全有效l杂质检查依赖于对杂质质谱的基础研究杂质检查依赖于对杂质质谱的基础研究l与被仿制药的杂质比较仍是一个难题与被仿制药的杂质比较仍是一个难题六、小结六、小结69Thanks谢谢观看/欢迎下载BY FAITH I MEAN A VISION OF GOOD ONE CHERISHES AND THE ENTHUSIASM THAT PUSHES ONE TO SEEK ITS FULFILLMENT REGARDLESS OF OBSTACLES.BY FAITH I BY FAITH