微生物检验培养基质量控制技术精品文稿.ppt

《微生物检验培养基质量控制技术精品文稿.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《微生物检验培养基质量控制技术精品文稿.ppt（43页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、微生物检验培养基质量控制技术第1页，本讲稿共43页培养基质量的重要性培养基质量的重要性 培养基是微生物试验的基础，直接影响培养基是微生物试验的基础，直接影响微生物试验结果。适宜的培养基制备方微生物试验结果。适宜的培养基制备方法、贮藏条件和质量控制试验是提供优法、贮藏条件和质量控制试验是提供优质培养基的保证。质培养基的保证。第2页，本讲稿共43页主主 要要 内内 容容l培养基制备、使用、贮存中的注意事项培养基制备、使用、贮存中的注意事项l培养基质量控制培养基质量控制2010版药典附录版药典附录实例（培养基质量对实验结果的影响）实例（培养基质量对实验结果的影响）CHP与与USP的异同点的异同点同行

2、的方法介绍同行的方法介绍新技术新技术l部分菌种在培养基上的典型特征部分菌种在培养基上的典型特征 第3页，本讲稿共43页培养基制备过程中的注意事项培养基制备过程中的注意事项 培养基的水化培养基的水化 培养基水化时不得用铜锅或铁锅培养基水化时不得用铜锅或铁锅,以防有离以防有离 子混入培养基中子混入培养基中,影响微生物的生长；影响微生物的生长；配制培养基最常用的溶剂是纯化水配制培养基最常用的溶剂是纯化水,不能含不能含 有任何可能抑制或影响微生物生长的物质；有任何可能抑制或影响微生物生长的物质；第4页，本讲稿共43页培养基制备过程中的注意事项培养基制备过程中的注意事项 培养基的溶解培养基的溶解 在培养

3、基分装灭菌前在培养基分装灭菌前,各成分应溶解均各成分应溶解均匀匀,使用电炉等设备煮沸培养基时使用电炉等设备煮沸培养基时,应应用小火加热用小火加热,并边加热边搅拌并边加热边搅拌,避免培避免培养基焦化或爆沸溢出。养基焦化或爆沸溢出。第5页，本讲稿共43页培养基制备过程中的注意事项培养基制备过程中的注意事项 培养基的灭菌培养基的灭菌 已配制好的培养基必须立即灭菌已配制好的培养基必须立即灭菌 湿热灭菌必须严格控制灭菌温度和时间湿热灭菌必须严格控制灭菌温度和时间第6页，本讲稿共43页培养基制备过程中的注意事项培养基制备过程中的注意事项 培养基的培养基的pH微生物必须在适宜的微生物必须在适宜的pH范围内才

4、能正常生长繁殖范围内才能正常生长繁殖或体现其生物特性。或体现其生物特性。调整培养基的调整培养基的pH,应用应用1 mol/LNaOH或或1 mol/L HCl调整调整pH，一般灭菌前比最终，一般灭菌前比最终pH高高0.20.3。第7页，本讲稿共43页培养基制备过程中的注意事项培养基制备过程中的注意事项 培养基的保温培养基的保温 灭菌以后培养基应该迅速冷却至所需灭菌以后培养基应该迅速冷却至所需温度温度,避免长时间保存在灭菌锅内避免长时间保存在灭菌锅内,造造成过度灭菌成过度灭菌,影响培养基的营养成分影响培养基的营养成分或选择性效果。或选择性效果。第8页，本讲稿共43页培养基使用过程中的注意事项培养

5、基使用过程中的注意事项 培养基的接种培养基的接种 平板在接种使用时平板在接种使用时,表面必须无明表面必须无明 显潮湿水珠；显潮湿水珠；对于保存的培养基对于保存的培养基,需待温度回复需待温度回复 至室温后才可使用至室温后才可使用,并且使用前应并且使用前应 检查；检查；第9页，本讲稿共43页培养基贮存过程中的注意事项培养基贮存过程中的注意事项 干燥培养基干燥培养基 应遵循先入先出的原则；应遵循先入先出的原则；贮存于阴凉干燥处贮存于阴凉干燥处,避免强光直射；避免强光直射；第10页，本讲稿共43页培养基贮存过程中的注意事项培养基贮存过程中的注意事项 已配制的培养基已配制的培养基 建议平板倾注后立即使用

6、；建议平板倾注后立即使用；在平板上标上制备日期和在平板上标上制备日期和/或有效期或有效期 和名称；和名称；固体培养基灭菌后的再融化只允许固体培养基灭菌后的再融化只允许 一次一次；第11页，本讲稿共43页实实 例例三糖铁培养基（三糖铁培养基（TSI）未校正未校正pH时，不同厂家的时，不同厂家的TSI培养基产培养基产硫化氢强度不一；硫化氢强度不一；校正校正pH7.5后，各培养基硫化氢反应均后，各培养基硫化氢反应均有改善有改善,不同厂家的不同厂家的TSI培养基产硫化氢培养基产硫化氢强度仍不相同；强度仍不相同；第12页，本讲稿共43页实实 例例三糖铁培养基（三糖铁培养基（TSI）由于培养基由于培养基p

7、H太低太低,本身就是黄色本身就是黄色,细菌细菌生长后下层仍为黄色生长后下层仍为黄色,而斜面变为橙红而斜面变为橙红色色,易误判断为下层易误判断为下层“变为变为黄色黄色”。由。由此定为发酵菌，造成误判；此定为发酵菌，造成误判；第13页，本讲稿共43页培养基质量控制（培养基质量控制（2010版药典）版药典）培养基适用性检查培养基适用性检查计数培养基计数培养基 控制菌检查用控制菌检查用培养基培养基 第14页，本讲稿共43页 计数培养基适用性检查计数培养基适用性检查对照培养基对照培养基 系指按培养基处方特别制备、系指按培养基处方特别制备、质量优良的培养基，用于培养基适用性检质量优良的培养基，用于培养基适

8、用性检查。由中国药品生物制品检定所研制及分查。由中国药品生物制品检定所研制及分发。发。第15页，本讲稿共43页 计数培养基适用性检查计数培养基适用性检查 大肠埃希菌大肠埃希菌金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌 白色念珠菌白色念珠菌 黑曲霉黑曲霉 白色念珠菌白色念珠菌营养琼脂培养基营养琼脂培养基 玫瑰红钠琼脂培养基玫瑰红钠琼脂培养基 酵母浸出粉胨葡萄糖酵母浸出粉胨葡萄糖 琼脂培养基琼脂培养基 第16页，本讲稿共43页 计数培养基适用性检查计数培养基适用性检查 结果判定结果判定 被检培养基上的菌落平均数被检培养基上的菌落平均数 对照培养基上的菌落平均数对照培养基上的菌落平均数

9、菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致 计数培养基计数培养基 70%第17页，本讲稿共43页 控制菌检查用培养基适用性检查控制菌检查用培养基适用性检查 促生长能力促生长能力 抑制能力抑制能力 指示能力指示能力 检查项目检查项目第18页，本讲稿共43页控制菌检查用培养基适用性检查控制菌检查用培养基适用性检查增菌培养基促生长能力检查：分别接种不增菌培养基促生长能力检查：分别接种不大于大于100cfu 的试验菌于被检培养基和对的试验菌于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及养温度及最短培养时间最短培养时间下

10、培养。与对照培养下培养。与对照培养基管比较，被检培养基管基管比较，被检培养基管试验菌应生长良试验菌应生长良好。好。第19页，本讲稿共43页控制菌检查用培养基适用性检查控制菌检查用培养基适用性检查固体培养基促生长能力检查：取试验菌各固体培养基促生长能力检查：取试验菌各0.1ml（含菌数（含菌数50100cfu）分别）分别涂布涂布于被检培养基和对照培养基平板上，于被检培养基和对照培养基平板上，在相应控制菌检查规定的培养温度及最在相应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养。被检培养基与对照短培养时间下培养。被检培养基与对照培养基生长的培养基生长的菌落大小形态特征应一致。菌落大小形态特征应一致。

11、第20页，本讲稿共43页控制菌检查用培养基适用性检查控制菌检查用培养基适用性检查培养基抑制能力检查：接种不少于培养基抑制能力检查：接种不少于100cfu 的试验菌于被检培养基中，在相应控制菌检的试验菌于被检培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及查规定的培养温度及最长时间最长时间下培养，下培养，试验菌试验菌应不得生长。应不得生长。第21页，本讲稿共43页控制菌检查用培养基适用性检查控制菌检查用培养基适用性检查固体培养基指示能力检查：取试验菌各固体培养基指示能力检查：取试验菌各0.1ml（含菌数不大于（含菌数不大于100cfu）分别涂）分别涂布于被检培养基和对照培养基平板上，布于被检培养基和对

12、照培养基平板上，在相应控制菌检查规定的培养温度及时在相应控制菌检查规定的培养温度及时间下培养。间下培养。被检培养基中试验菌生长的被检培养基中试验菌生长的菌落形态、大小、指示剂反应情况等应菌落形态、大小、指示剂反应情况等应与对照培养基一致。与对照培养基一致。第22页，本讲稿共43页控制菌检查用培养基适用性检查控制菌检查用培养基适用性检查液体培养基指示能力检查：分别接种不大液体培养基指示能力检查：分别接种不大于于100cfu 的试验菌于被检培养基和对照培的试验菌于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养。度及最短培养时间下培养

13、。与对照培养基与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌生长情况、管比较，被检培养基管试验菌生长情况、指示剂反应等应与对照培养基一致。指示剂反应等应与对照培养基一致。第23页，本讲稿共43页培养基质量控制（培养基质量控制（2010版药典）版药典）实验室配制的培养基的常规监控项目实验室配制的培养基的常规监控项目pH 适用性检查试验适用性检查试验 定期的稳定性定期的稳定性 检查以确定有效期检查以确定有效期 第24页，本讲稿共43页培养基质量控制（培养基质量控制（CHP与与USP的异同点）的异同点）计数培养基的适用性检查：计数培养基的适用性检查：CHP USP菌种的选择菌种的选择 大肠埃希菌大肠埃希菌

14、铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌结果判定结果判定 比值大于比值大于70%1/2 2 培养基培养基 营养琼脂培养基营养琼脂培养基 大豆消化酪素培养基大豆消化酪素培养基 玫瑰红钠琼脂培养基玫瑰红钠琼脂培养基 沙氏葡萄糖培养基沙氏葡萄糖培养基 酵母浸出粉胨葡萄糖酵母浸出粉胨葡萄糖 琼脂培养基琼脂培养基(YPD)第25页，本讲稿共43页培养基质量控制（培养基质量控制（CHP与与USP的异同点）的异同点）控制菌检查用培养基的适用性检查：控制菌检查用培养基的适用性检查：CHP与与USP方法基本一致，检查用培养基不同。方法基本一致，检查用培养基不同。第26页，本讲稿共43页 同行的方法介绍同行的方法介绍培养基质量控

15、制培养基质量控制 理化试验方法理化试验方法 包括测定培养基的包括测定培养基的pH值和凝胶强度值和凝胶强度 微生物学方法微生物学方法 包括固体培养基和液体培养基包括固体培养基和液体培养基第27页，本讲稿共43页 同行的方法介绍同行的方法介绍固体培养基固体培养基 定量质控定量质控 采用倾注平板法、涂布法、采用倾注平板法、涂布法、划线法划线法(半定量法半定量法)、改良的、改良的MilesMisra 法等测定生长情况；法等测定生长情况；定性质控定性质控 评价目标微生物非目标微生评价目标微生物非目标微生 物接种以后的生长情况物接种以后的生长情况；第28页，本讲稿共43页同行的方法介绍同行的方法介绍液体培

16、养基液体培养基 采用定量稀释法采用定量稀释法,用目标菌和杂菌的混合用目标菌和杂菌的混合 菌株评价选择性增菌培养基的选择性；菌株评价选择性增菌培养基的选择性；利用利用OD 值评价液体培养基生长率；值评价液体培养基生长率；第29页，本讲稿共43页同行的方法介绍同行的方法介绍 分值计算分值计算 质量比较质量比较第30页，本讲稿共43页新技术介绍新技术介绍BioBall是一个很小的水溶性球状物，包含是一个很小的水溶性球状物，包含了数量精确的微生物个体，它可以了数量精确的微生物个体，它可以使微生物质控中的定量控制达到非使微生物质控中的定量控制达到非常高的精确度。常高的精确度。第31页，本讲稿共43页新技

17、术介绍新技术介绍 BioBall目前可以提供超过目前可以提供超过25种菌株；种菌株；可应用于培养基质控、方法验证等可应用于培养基质控、方法验证等需要定量质控的各个领域；需要定量质控的各个领域；第32页，本讲稿共43页新技术介绍新技术介绍BioBall SingleShot 提供提供1次精确接种量次精确接种量BioBall MultiShot-550 提供提供10次精确接种量次精确接种量第33页，本讲稿共43页新技术介绍新技术介绍BioBall SingleShot 每个每个BioBall SingleShot都含都含28至至33cfu；标准误差小于或等于标准误差小于或等于3cfu；第34页，本

18、讲稿共43页新技术介绍新技术介绍BioBall与常规稀释法相比的优势与常规稀释法相比的优势使用方便；使用方便；精确的精确的cfu数量；数量；不同批次间不同批次间cfu数量稳定；数量稳定；减少了由于接种量的变化，造成的质控失减少了由于接种量的变化，造成的质控失 败的风险；败的风险；第35页，本讲稿共43页第36页，本讲稿共43页典型特征典型特征大肠杆菌在伊红美蓝琼脂大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)上典型特征上典型特征第37页，本讲稿共43页典型特征黑曲霉和白色念珠菌在玫瑰红钠琼脂上典型特征黑曲霉和白色念珠菌在玫瑰红钠琼脂上典型特征第38页，本讲稿共43页典型特征典型特征金黄色葡萄球菌在甘露醇氯化钠琼脂上典型特征金黄色葡萄球菌在甘露醇氯化钠琼脂上典型特征第39页，本讲稿共43页典型特征典型特征沙门氏菌在沙门氏菌在SS琼脂上典型特征琼脂上典型特征第40页，本讲稿共43页典型特征典型特征沙门氏菌在沙门氏菌在BS琼脂上典型特征琼脂上典型特征第41页，本讲稿共43页典型特征典型特征沙门氏菌在沙门氏菌在XLD琼脂上典型特征琼脂上典型特征第42页，本讲稿共43页第43页，本讲稿共43页