月季的花药培养219114.pptx

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1、种子种子有有果皮包果皮包被着，被着，（胚珠胚珠有子房有子房壁包被壁包被着着）被子植物被子植物 裸子植物裸子植物种子种子无无果皮包果皮包被着，被着，（胚珠胚珠无子房无子房壁包被壁包被着着）种子种子花的结构花的结构被子植物的被子植物的有性生殖有性生殖是在是在花花里里进行的，进行的，雌蕊雌蕊和和雄蕊雄蕊是进是进行有性生殖的主要部分行有性生殖的主要部分。雌雌蕊蕊雄雄蕊蕊雌蕊雌蕊的结构的结构花粉粒花粉粒花粉管花粉管精子精子(2(2个个)卵细胞卵细胞极核极核（一）、（一）、被子植物的花粉发育被子植物的花粉发育花丝花丝花药：花药：囊状结构，内有很多花粉粒囊状结构，内有很多花粉粒雄蕊：雄蕊：一、一、基础知识基

2、础知识药隔药隔：由薄壁细胞构成，内有维管束由薄壁细胞构成，内有维管束花药花药花粉囊花粉囊（4 4或或2 2）囊壁囊壁花粉粒花粉粒药隔药隔药隔药隔花花粉粉囊囊囊壁囊壁花粉花粉是是小孢子母细胞小孢子母细胞经过经过减数分裂减数分裂而形成而形成的，因此，花粉是的，因此，花粉是单倍体单倍体的的生殖细胞生殖细胞花粉粒的形成花粉粒的形成经历时期：经历时期：四分体时期、单核期、双核期四分体时期、单核期、双核期四分体时期四分体时期(小孢子小孢子)有丝有丝分裂分裂单核靠边期单核靠边期(小孢子小孢子)单核居中期单核居中期(小孢子小孢子)花粉母细胞花粉母细胞（小孢子母细胞）（小孢子母细胞）减数分裂减数分裂精子精子精子

3、精子有丝有丝分裂分裂花粉管细胞核花粉管细胞核生殖细胞核生殖细胞核生殖细胞生殖细胞营养细胞营养细胞双核期双核期两个精子和一个营养细胞的基因型相同两个精子和一个营养细胞的基因型相同1 1个个花粉花粉母细母细胞胞4 4个个小孢小孢子子减分减分有分有分4 4个花粉管细胞核个花粉管细胞核4 4个生殖细胞核个生殖细胞核有分有分8 8个精子个精子(二二)、产生花粉植株的两条途径、产生花粉植株的两条途径（三）、影响花药培养的因素（三）、影响花药培养的因素1 1、材料的选择、材料的选择时期初花期时期初花期选择合适的选择合适的花粉发育时期花粉发育时期是是 提高诱导成功率的重要因素提高诱导成功率的重要因素 只有某一

4、个时期对离体刺激敏感。只有某一个时期对离体刺激敏感。最适合花药培养的小孢最适合花药培养的小孢子发育时期为子发育时期为单核靠边期单核靠边期措施？措施？2 2、培养基的组成、培养基的组成 花药培养所采用的培养基因花药培养所采用的培养基因植物的不同而有所变化植物的不同而有所变化3 3、其他因素、其他因素 亲本植株的生长条件、材料的亲本植株的生长条件、材料的低温预处理以及接种的密度等对诱低温预处理以及接种的密度等对诱导成功都有一定的影响导成功都有一定的影响六、实验操作六、实验操作（一）材料的选取（一）材料的选取某些植物的花粉细胞核不易着色，某些植物的花粉细胞核不易着色，需采用需采用焙花青焙花青-铬矾法

5、，铬矾法，这种方法能这种方法能将将花粉细胞核染成蓝黑色。花粉细胞核染成蓝黑色。最常用的方法有最常用的方法有醋酸洋红法醋酸洋红法1 1、方法、方法醋酸洋红法染色机理醋酸洋红法染色机理 醋酸洋红为醋酸洋红为碱性染色剂碱性染色剂，而花粉细，而花粉细胞内有染色体，染色体主要成分是胞内有染色体，染色体主要成分是DNADNA和蛋白质和蛋白质,易被碱性染料着色易被碱性染料着色染成红色染成红色 。醋酸洋红的配置醋酸洋红的配置2 2、醋酸洋红法、醋酸洋红法将体积分数将体积分数4545的醋酸的醋酸100ml100ml煮沸，缓缓加入煮沸，缓缓加入1g1g洋洋红，在加热回流红，在加热回流8h8h，冷却至，冷却至505

6、0，过滤即可。，过滤即可。将花药放在载玻片上，加一滴将花药放在载玻片上，加一滴质量分数质量分数1 1的醋酸洋红，用镊柄的醋酸洋红，用镊柄将花药捣碎，盖上盖玻片在显微镜将花药捣碎，盖上盖玻片在显微镜下检查。下检查。染色操作染色操作3 3、焙花青、焙花青铬钒法铬钒法 将无水酒精与冰醋酸按体积将无水酒精与冰醋酸按体积比为比为3 3：1 1的比例混匀的比例混匀卡诺氏固定液的配制方法卡诺氏固定液的配制方法 将将5g5g铬明矾铬明矾KK2 2SOSO4 4CrCr2 2(SO(SO4 4)24H)24H2 2OO加入加入90ml90ml蒸馏蒸馏水中，溶解后加入水中，溶解后加入0.1g0.1g焙花青，混匀并

7、加焙花青，混匀并加热至沸腾，煮沸热至沸腾，煮沸5 5分钟后冷却至室温，过分钟后冷却至室温，过滤，加蒸馏水定容至滤，加蒸馏水定容至100ml100ml。焙花青焙花青铬钒溶液的配制方法铬钒溶液的配制方法 花药应该在花药应该在卡诺氏固定液中卡诺氏固定液中固定固定20min20min，然后取出放在载玻片上，然后取出放在载玻片上，加加焙花青焙花青铬钒溶液染色，铬钒溶液染色，盖上盖玻片盖上盖玻片后在显微镜下检查。后在显微镜下检查。染色操作染色操作（二）材料的消毒（二）材料的消毒1 1、酒精处理、酒精处理花蕾用体积分数花蕾用体积分数为为70%70%的酒精的酒精浸泡浸泡3030秒，立即取出。秒，立即取出。无菌

8、水清洗无菌水清洗无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分2 2、消毒液处理、消毒液处理 放入放入质量分数为质量分数为0.1%0.1%的氯化汞的氯化汞溶液溶液中中2424分钟（也可质量分数分钟（也可质量分数为为1%1%的次的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液）无菌水冲洗无菌水冲洗3535次次 用于培养花药，实际上多数未熟，由用于培养花药，实际上多数未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或颖片保护，于它的外面有花萼、花瓣或颖片保护，通常处于无菌状态，所以只要将整个花通常处于无菌状态，所以只要将整个花蕾或幼穗消毒即可。蕾或幼穗消毒即可。（三）接种和培养（三）接种和培养在无

9、菌条件下除去萼片和花瓣用镊子取出在无菌条件下除去萼片和花瓣用镊子取出花药花药要彻底去除花丝，要彻底去除花丝，因为与花丝相连的因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成花药不利于愈伤组织或胚状体的形成1 1、剥取花药、剥取花药勿损伤花药，以免诱导出勿损伤花药，以免诱导出非花粉愈伤组织非花粉愈伤组织注意：注意：立即将花药接种于培养基上，立即将花药接种于培养基上，通常每瓶通常每瓶接种花药接种花药7-107-10个个。2 2、接种、接种培养条件：温度控制在培养条件：温度控制在2525左右，不左右，不需要光照。需要光照。幼小植株形成后才需要光照。幼小植株形成后才需要光照。3 3、培养、培养培养：一

10、般经过培养：一般经过20-3020-30天培养后，会发天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体体 长出愈伤组织则将愈伤组织及时转移长出愈伤组织则将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株植株注意：如果花药开裂释放出胚注意：如果花药开裂释放出胚状体，则一个花药内就会产生大状体，则一个花药内就会产生大量幼小植株，量幼小植株，必须在花药开裂后必须在花药开裂后尽快将幼小植株分开，尽快将幼小植株分开，分别移植分别移植到新的培养基上，否则这些植株到新的培养基上，否则这些植株将很难分开。将很难分开。在花药培养

11、中，特别是通过愈伤组织在花药培养中，特别是通过愈伤组织形成的花粉植株，常常会出现染色体倍形成的花粉植株，常常会出现染色体倍性的变化（主要原因是性的变化（主要原因是营养核和生殖核营养核和生殖核融合融合造成的）造成的）4 4、鉴定和筛选、鉴定和筛选5 5、植物组织培养技术与花药培养技术的异同点：、植物组织培养技术与花药培养技术的异同点：项目项目相同点相同点不同点不同点植物组织植物组织培养技术培养技术离体的植物组离体的植物组织经脱分化形织经脱分化形成愈伤组织，成愈伤组织，再分化成丛芽，再分化成丛芽，诱导出根，然诱导出根，然后进行移栽。后进行移栽。外植体为体细胞，染色外植体为体细胞，染色体数无需加倍。体数无需加倍。花药培养花药培养技术技术取材为花药，培养的为取材为花药，培养的为单倍体幼苗，植株弱小，单倍体幼苗，植株弱小，高度不育，必须用秋水高度不育，必须用秋水仙素处理，使染色体加仙素处理，使染色体加倍，恢复正常植株的染倍，恢复正常植株的染色体数，而且为纯种。色体数，而且为纯种。谢谢观看/欢迎下载BY FAITH I MEAN A VISION OF GOOD ONE CHERISHES AND THE ENTHUSIASM THAT PUSHES ONE TO SEEK ITS FULFILLMENT REGARDLESS OF OBSTACLES.BY FAITH I BY FAITH