中国农业科学院研究生院应届毕业生出国(境)协议书.docx

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1、中国农业科学院研究生院应届毕业生出国(境)协议书 第一篇：中国农业科学院探讨生院应届毕业生出国(境)协议书 中国农业科学院探讨生院应届毕业生出国境协议书 甲方： 乙方：中国农业科学院探讨生院 依据中国农业科学院探讨生院学生管理规定和国家公派出国留学探讨生管理规定试行中的有关规定，现甲、乙双方在自主自愿的条件下，达成以下协议： 1、甲方确因A.学术沟通、科研合作B.攻读学位 C.其它：需要出国境，所赴国家或地区为_。 2、甲方出国境期限为_，最迟应在_年_月_日前回国。 3、甲方需认真遵守国家公派出国留学探讨生管理规定试行中的各项规定。 4、乙方关心甲方办理有关护照和签证手续。乙方负责保存甲方在

2、留学期限内的户籍和档案，超过规定留学期限未归，乙方将甲方档案和户籍迁转回生源所在地。 5、甲方不享受在校生待遇，留学期间要严格遵守我国和当地法律规定、风俗人情，如有违纪违规现象，造成的意外及其它刑事、民事责任与乙方无关。 6、甲方回国应在一个月内向乙方报到，办理有关手续。 7、本协议自签订之日起生效。 8、本协议书一式三份，甲方持一份、乙方持两份。 甲方盖章代表签字日期 乙方盖章代表签字日期 甲方国内联系人与本人关系联系方式 其次篇：中国农业科学院探讨生院招生简章 中国农业科学院探讨生院 2022年全日制专业学位硕士探讨生统一入学考试大纲 科目代码：341 考试科目：农业学问综合三 一、考查目

3、标 农业学问综合三侧重于农业工程综合学问的考查。考试内容涵盖食品加工与平安领域的主干课程，包括食品卫生学、食品平安管理与法规、食品分析与检验技术等学科。要求考生比较系统地理解和驾驭本领域基本概念、基础理论和基本方法，能够运用基本原理和方法分析、推断和解决有关实际问题。 二、适用范围 适用于报考食品加工与平安领域的考生。 三、考试形式和试卷结构 1、试卷总分及考试时间 本试卷总分为150分，考试时间为180分钟。 2、答题方式 闭卷、笔试。 3、试卷内容结构 食品卫生学、食品平安管理与法规、食品分析与检验技术等科目内容各占50分。 四、考试大纲 一食品卫生学 1. 食品的生物污染 1.1 食品的

4、细菌污染 食品细菌污染的途径 食品细菌污染的种类 食品细菌污染的危害 食品细菌污染的检验和标准 食品细菌污染的预防 1.2 食品的真菌污染 食品真菌及其毒素污染的特点 食品的黄曲霉毒素污染：黄曲霉毒素污染的状况和危害、黄曲霉毒素的性质及限制措施 食品的其他真菌毒素污染：赭曲霉素、杂色曲霉毒素、伏马菌素、T2毒素、单端孢霉烯族类化合物、展青霉素、桔青霉素易污染的食品和限制措施 1.3 食品的腐败变质 食品腐败变质的概念、发生的条件、影响因素、卫生学意义及限制措施 1.4 食品的病毒污染 食品中甲肝病毒、脊髓灰质炎病毒、口蹄疫病毒、疯牛病病毒污染的途径与限制措施 1.5 食品的寄生虫污染 寄生虫的

5、概念、危害方式以及绦虫含幼虫、蛔虫的感染途径、危害、预防措施 2. 食品的化学污染 2.1 食品农药残留 食品中农药残留的来源、影响因素和预防限制措施 2.2 食品的重金属污染 生物放大的概念和意义、食品中铅、砷、汞、镉污染的途径、危害及预防限制措施 2.3 食品的多环芳烃污染 多环芳烃的污染来源、危害及预防措施 2.4 食品中N-亚硝基化合物的污染 食品中N-亚硝基化合物的来源、危害及预防限制措施 2.5 食品中二噁英的污染 食品中二噁英的来源、危害及预防措施 2.6 食品添加剂 食品添加剂的运用原则、存在的问题及限制 2.7 食品包装材料的污染 食品包装材料的污染、影响因素、预防限制措施

6、3. 食品平安性评价 3.1 基本概念 毒性、剂量、剂量-反应关系、半数致死量、阈剂量、最大无作用剂量、ADI等食品平安性评价的基本概念 3.2 食品平安性毒理学评价程序及推断标准 4. 食物中毒 4.1 食物中毒的概念、流行病学特点、类型 4.2 细菌性食物中毒 沙门氏菌、副溶血弧菌、变形杆菌、蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、肉毒梭状芽孢杆菌食物中毒的缘由食品、发生季节、预防措施 4.3 真菌性食物中毒 真菌性食物中毒的特点，毒蕈、霉变甘蔗、霉变甘薯、赤霉病麦等真菌毒素中毒发生的季节、缘由和预防措施 4.4 自然植物食物中毒 四季豆、发芽马铃薯、毒蕈、鲜黄花菜、豆浆中毒的中毒物质、危害及其预防

7、措施 4.5 自然动物食物中毒 河豚鱼、有毒贝类、热带鱼、鱼胆、动物甲状腺中毒的中毒物质、危害及其预防措施 二食品平安管理与法规 1. 绪论 1.1 食品质量和食品平安概念 1.2 食源性疾病、污染物和食品平安危害分类 食源性疾病；食品污染物；食品平安危害：生物危害、化学危害和物理危害。 1.3 食品平安质量限制体系的探讨对象、内容和手段 1.4 食品供应链概念 2. 建立实施HACCP体系的意义 2.1 HACCP体系概念及其来历 2.2 建立实施HACCP体系的缘由 2.3 建立实施HACCP体系的组织 2.4 ISO22000:2005食品平安管理体系 3. HACCP体系原理 3.1

8、HACCP体系的七项基本原理 3.2 HACCP体系所涉及的术语和定义 HACCP探讨；HACCP支配；HACCP体系；HACCP工作小组；直线型、模块型和通用型HACCP方案；HACCP加工流程图；显著危害和非显著危害；CCP推断树；关键限制点的关键限值与操作限值；纠偏。 3.3 建立HACCP体系的步骤 4. 建立HACCP体系的条件与前提方案 4.1 一般管理规范 4.2 ISO 9000质量管理体系 质量管理体系中质量限制点和食品平安关键限制点的区分 4.3 HACCP体系的前提方案GMP GMP的主要内容和强调的环节 4.4 HACCP体系的前提方案SSOP 4.5 HACCP体系与

9、GMP和SSOP的关系 4.6 食品配方与食品平安 酸度、防腐剂、水分活度、配料等与食品平安 4.7 食品加工技术环节与食品平安 热加工、发酵、辐照等加工技术环节与食品平安 4.8 对食品平安危害的限制措施 5. HACCP原理应用实例 5.1 畜禽屠宰行业可能发生的食品平安危害与限制 5.2 净菜加工可能发生的食品平安危害与限制 5.3 肉类罐头加工可能发生的食品平安危害与限制 5.4 果蔬汁可能发生的食品平安危害与限制 5.5 糕点加工可能发生的食品平安危害与限制管理 三食品分析与检验技术 1. 食品分析的概念、性质、任务和作用 1.1 食品分析的概念及性质 食品分析是探讨和评定食品品质及

10、其转变、开发食品分析方法的一门专业性很强的技术学科。 1.2 食品分析的任务与作用 是对食品工业生产中的原料、辅料、成品、半成品、副产品等进行检测，以到达限制和管理生产、保障食品质量平安和开发新资源与新产品的目的。 1.3 食品分析的内容 主要包括1食品养分成分分析；2食品添加剂分析；3食品中有害物质分析4食品的感官检验等。 2. 样品采集及预处理方法 2.1 样品的采集 样品采集是指从大量的分析对象中抽取有代表性的一部分样品作为分析材料的过程。 2.2 样品的制备 是对上述采集的样品进一步粉碎、混匀、缩分，目的是保证样品完全均匀，取任何部分都具有代表性。 2.3 样品的保存 样品如不能马上分

11、析应妥当保存，其目的是防止样品发生受潮、挥发、风干、变质等现象。 2.4 样品的预处理方法 样品预处理就是在样品正式分析测定前将被测组份提取出来或将干扰成分去除的过程。一般分为1溶剂提取法；2有机物破坏法；3蒸馏法；4皂化法；5层析法等。 3 食品分析检验的一般方法 食品分析所接受的分析方法主要有 3.1 感官检验法 通过人的感觉器官眼、鼻、口、皮肤所具有的视觉、嗅觉、味觉和触觉，对食品的色、香、味、形等质量特征和卫生状况作出判定和客观评价的方法。 3.2 物理检验法 通过对被测食品的某些物理性质如温度、密度、折射率、旋光度、非典等的测定，可间接求出食品中某种成分的含量，进而推断被检食品的纯度

12、和品质。 3.3 化学分析法 是以物质的化学反应为基础的分析方法，主要包括重量分析和容量分析法两大类。 3.3.1 重量分析 是将被测成分与样品中的其他成分分别，然后称定该成分的质量，计算出被测物质的含量。 3.3.2 容量分析 也称滴定分析，它是将已知浓度的标准溶液由滴定管加到被检溶液中，直到所用试剂与被测物质的物质量相等为止。可借助指示剂的变色来视察终点。根据标准溶液的浓度和消耗体积，计算出被测物质的含量。 3.3.3 化学分析中标准溶液的配制及溶液浓度的表示方法 标准溶液是化学分析中用来干脆定量测定待测组分含量的溶液，正确配制标准溶液对提高容量分析的精确度有重大意义。标准溶液的配制方法一

13、般有干脆法和间接法两种。 溶液的浓度通常是指在确定量的溶液中所含溶质的量。常用的方法有：物质的量浓度摩尔浓度、溶质的质量分数百分浓度、溶质的体积分数、比例浓度等。 3.4 仪器分析法 借助特殊的仪器，通过测量试样溶液的光学性质或电化学性质，从而求出被测组分的含量。常用的方法有紫外-可见分光光度法、原子汲取光谱法、荧光分析法、气相色谱法、高效液相色谱法等。 3.5 酶分析法 是利用酶的反应进行物质定性、定量的方法。要求驾驭酶法分析的特点。 4. 食品中一般成分的检验 不同食品其成分与含量也各不相同。要求了解以下各种成分测定的主要方法，驾驭操作原理与简洁过程。 4.1 水分的测定 水分测定常分为干

14、脆法和间接法两大类。干脆法是利用水分本身的物理、化学性质来测定水分的方法，如枯燥法、蒸馏法和卡尔.费舍尔法；间接法是利用食品的相对密度、折射率、电导、介电常数等物理性质测定水分的方法。本大纲仅要求驾驭枯燥法原理。 4.2 灰分的测定 食品经灼烧后的残留物就叫灰分。灰分是食品中无机成分总量的标记。灰分测定包括总灰分、水溶性灰分、水不溶性灰分、酸不溶性灰分等。要求驾驭总灰分的测定原理和方法。 4.3 总酸度的测定 通过中和滴定，用标准碱液测定浅色食品中总酸度的含量。 4.4 粗脂肪的测定 常用的方法为索氏提取法，适用于脂类含量较高、含结合态脂肪较少、能烘干磨细、不易吸潮结块的样品测定。 4.5 碳

15、水化合物的测定 4.5.1 还原糖的测定 糖类的测定是以还原糖的测定为基础的。驾驭干脆滴定法测定还原糖的原理和方法。 4.5.2 淀粉的测定 常用的淀粉测定方法有酸水解法和酶水解法。本大纲要求驾驭酶水解法测定淀粉的原理和方法。 4.6 蛋白质的测定 蛋白质的测定主要有紫外法、比色法、凯氏定氮法、仪器法等多种方法，凯氏定氮法是测定食品中粗蛋白的常用方法。 4.7 维生素的测定 食品中维生素种类繁多，测定方法也各不相同。 4.7.1 脂溶性维生素的测定 主要通过皂化和有机溶剂提取后，用比色法、紫外分光光度法或液相色谱法测定。要求驾驭比色法测定维生素A的原理。 4.7.2 水溶性维生素的测定 用荧光

16、法、比色法、滴定法和高效液相色谱法测定。 4.8 矿物元素的测定 食品中的矿物元素通过干灰化或湿灰化的方法，将有机物分解成无机物后用比色法、滴定法或原子汲取法进行测定。 5. 分析结果的表示与数据处理 5.1 有效数字 就是牢靠数字与可疑数字之和。有效数字的修约按“四舍六入五留双的原则。在有效数字的计算中，应遵循四则运算的规则。 5.2 误差、精确度与精密度 分析结果的精确度是指分析结果与真值的接近程度。精确度的凹凸用误差来衡量。精密度就是几次平行测定结果互相接近的程度。精密度的凹凸用偏差来衡量。食品分析中误差常用确定误差、相对误差表示，而偏差常用确定偏差及相对偏差表示。 6. 各种食物成分结

17、果的表述 检测结果的表示应接受法定计量单位并尽量与食品卫生标准一样。固体样品与液体样品的结果均有不同的表示方法。 第三篇：基因工程原理中国农业科学院探讨生院 中国农业科学院究生院 基因工程原理复习题 一、名词说明 1. 原核基因Prokaryotic gene：由原核生物如大肠杆菌基因组编码的基因，以及高等生物细胞器线粒体基因组和叶绿体基因组等编码的基因，统称原核基因。 2. 真核基因Eukaryotic gene：真核生物基因组DNA编码的基因,以及感染 真核细胞的DNA病毒和反转录病毒基因组编码的基因，统称真核基因。 3. .前导序列Leader sequence：又叫前导序列区或5-非翻

18、译区5-UTR，系指位于mRNA5-起始密码子之前的一段长数百个核苷酸的不翻译的RNA区段。 4. 跟随序列Tai1er sequence：又称跟随序列区或3-非翻译区3-UTR，系指位于mRNA3-终止密码子之后一段100多核苷酸的不翻译的RNA区段。 5 复制子Replicon： 指有一个复制起始区oriC和起始基因的DNA复制单元。例如细菌染色体、病毒基因组、质粒基因组等，凡其DNA能够进行复制的遗传单元，均称复制子。真核细胞基因组的复制子是指含有一个复制起始位点的DNARNA的复制子特称复制单元。 6. 增加子 Enhancer：又叫增加子序列或增加子元件，是真核基因中觉察的一 种特异

19、序列，能够在距离目标基因50kb以上的位置，从上游或下游的不同位置及方向增加该基因的转录活性。 7. 缄默子Silencer在真核基因启动子中除了增加子之外，缄默子同样也是一种可远距离调控相关基因转录活性的顺式元件。与增加子一样，缄默子也能够从启动子的上游、下游甚至是基因内部三种不同的位置以及正向或反向，影响相关基因启动子的转录起始效率。同时缄默子往往是以组织特异性或时间特异的作用方式，限制基因的表达作用。但与增加子的功能效应相反，缄默子只能抑制而不能激活相关基因的转录起始活性。 8. 绝缘子Insulator亦即是增加子活性的物理边界元件physical boundary element，它

20、是一段能够抑制或隔离增加子功能效应的顺式转录调整序列。绝缘子的这种功能作用的发挥，取决于它所在的位置。假如它是位于增加子和启动子之间，便能够阻断增加子的功能效应；但当它是位于增加子-启动子区段的外侧，便不能够阻断增加子的功能作用。因此也有的作者将绝缘子称为隔离邻近增加子对启动子激活作用的中间隔栅neutral barrier。绝缘子的作用是与特异结合蛋白IBP的结合发挥作用。它的意义：能阻断增加子超远距离的激活作用影响生物的发育依次；真核绝缘子能爱惜依次表达以防无义基因的表达。 9. 调整子Regulon：指在大肠杆菌基因组中，其表达活性受同一种基因编码的蛋白质协同调整的，一组不连续相邻排列的

21、结构基因。调整子与操纵子不同之处在于，后者的结构基因是彼此相邻排列的，而调整子的结构基因则是分散于染色体的不同部位，甚至是位于不同染色体上 10. 基因差异表达Differential expression of gene ： 真核生物在每一特定的发育阶段，或是某一特定类型的细胞中，一般只有15%的基因进行表达。这种在生物个体发育的不同阶段，或是在不同组织和细胞中，发生不同基因按时间、空间进行有序表达的方式，叫基因的差异表达。 11. 基因内互补Intragenic complementaion： 系指编码同样的多肽序列，但又各具一个不同 突变的两个基因联合产生出一种有功能活性的蛋白质多肽的生

22、化过程。 12. 基因图Gene map：描述染色体或DNA分子上不同基因的排列依次及其间隔距离的线性图。它包括遗传图和物理图两种。 遗传图genetic map：是根据遗传重组试验绘制的，用来表示同一染色体上不同基因或特定DNA序列区之间的排列依次及其相对距离的线性图。其图距用厘摩(cM)表示。 物理图Physical map：以精确的物理长度为单位，一般以核苷酸数表示不同基因在染色体或DNA分子上的排列依次及其间隔距离的实际长度的线性图。 13. 基因簇Gene cluster与基因家族Gene family：系指原核生物基因组中，由不同或相关的一组相合基因组成的一种特殊的排列组合方式。同

23、一基因簇的各个基因在遗传上往往是紧密连锁，它们可以是属于同一操纵子的不同结构基因，也可以是不同操纵子的不同结构基因；它们可以是同一基因家族的不同成员，也可以是不同基因家族的不同成员。 基因家族Gene family：由同一生物中同一始祖基因经过重复突变进化而来，具相像的结构、相像的产物和相像的功能。它们的特征：1多重姓；2紧密连锁3表型及功能方面的相关性；4核苷酸序列的一样性。 14. 基因克隆Gene cloning：基因克隆又叫DNA克隆，它是指将外源基因插入到克隆载体上形成重组DNA分子群体，并转化到大肠杆菌寄主细胞中进行复制繁殖，以便从大分子DNA或DNA片段中分别纯化目的基因或特定的

24、DNA片段的试验操作，叫做基因克隆或DNA克隆。 15. 融合基因Fusion gene：亦称重组基因、杂种基因或嵌合基因。通常是指通过自发突变形成或利用DNA重组技术构建的。是一类具有来自两个或两个以上不同基因的核苷酸序列的新型基因。融合基因可以形成融合蛋白，但融合基因不愿定都形成融合蛋白。 16. 基因剂量 Gene dosage：指的是一个细胞所拥有的同一种基因的拷贝数。 基因剂量试验是建立在局部二倍体菌株的基础上，特地来检测基因拷数的增加，对其编码产物合成速率之影响的分子遗传学的探讨技术。 17. 裂口Gap：双链DNA分子上的某一条链丢失一个或连续数个核苷酸造成的单链断裂。 缺口Ni

25、ck：双链DNA分子的某一条链的相邻核苷酸之间丢失一个磷酸二酯键造成的单链断裂。 18. 切丁酶Dicer：亦有人译为RNAi核酸酶。是一种RNase样RNase like的核酸内切酶。能把双链RNAdsRNA分子切割成2123bp的小分子干扰RNA 。这是一种需要ATP的过程。 19. 异裂酶Neoschizomer： 指一组来源不同，但具有相同的识别序列和不同的切割位点的一组核酸内切限制酶称异裂酶 20. 同尾酶Isocaudarner：一组来源不同，识别序列各异，但能够切割形成相同黏性末端的核酸内切酶。 21. 同裂酶 (Isoschizomer) 是一类来源不同，而识别序列相同，切割能

26、产生相同的黏性末端的核酸内切酶。 22. 拓朴异构酶T0poisomerase：在原核和真核细胞中觉察的，具有催化单链DNA或双链DNA产生瞬时断裂的功能。具有切割与连接的双重功能，导致双链构型的变更。在抗癌探讨中，进展抑制拓扑异构酶的活性的抗癌药物好的开发研制具有重要意义。 23. 质粒DNA迁移作用Plasmid mobilization：指由共存的接合型质粒引发的非接合型质粒的转移过程。由于结合型质粒的mob基因产生的迁移蛋白可作用于与其共存的非迁移型质粒的nic位点所产生的迁移作用，称质粒DNA迁移作用。 24. 柯斯载体Cosmid：是一类人工构建的，含有噬菌体DNA的cos序列和质

27、粒复制子的特殊类型的质粒载体。它既具有噬菌体的特性，也具有质粒载体的特性。并且具有高容量的克隆实力，其DNA可以体外被包装到噬菌体的外壳内。 25. 噬菌体展示载体Phage display vector：根据单链噬菌体外表表达的蛋白质或多肽的噬菌体外表展示技术，当把外源基因插入在该载体的基因或基因的编码序列中，正确表达出融合蛋白的这类特殊用处的噬菌体载体。 26. 穿梭质粒载体S huttle plasmid vector： 简称穿梭载体，或叫双功能载体。是一类人工构建具有两种不同的复制起点和选择记号，因此可在两种不同寄主细胞如大肠杆菌和酿酒酵母中进行复制与存留的质粒载体。 27. M13克

28、隆体系的优点： a. 可便利地产生外源单链DNA； b. 重组子可用组织化学方法检测； c. lacZ基因上具多克隆位点，便于外源DNA插入； d. 可定向克隆外源基因； 28. 质粒载体的结构特点： a. 具复制起点ori； b. 具抗生素抗性基因选择用； c. 具若干核酸内切酶的单切点； d. 较小的分子量和较高的拷贝数。 29 启动子封堵Promoter occlusion：由一个上游启动子驱动的转录作用，当其通读过下游启动子时，便会使该启动子的功能受到抑制的现象，叫做启动子封堵。 30.型核酸内切酶的特点：a. 不具有多亚基结构单一切割功能；b. 能识别双链DNA分子中靶子序列c.切割

29、形成不同长度的限制片段; d由于不对称切割，能形成粘性末端; e 酶切反应不需能量ATP。 31. 表观遗传信息层Epigenetic layer of information：它是贮藏在围绕DNA分子四周并与DNA分子结合的蛋白质及化学物质中。表观遗传信息犹如RNA基因一样令人困惑，甚至比RNA基因更为重要。 32. 分子伴侣Molecular chaperone： 专指一类多功能蛋白质，它能促使某些蛋白质按正确方式组装或折叠，而它本身却不是最终形胜利能蛋白质的组成部分，此类蛋白质特称为分子伴侣。 33. RNA干扰RNAi：近年来探讨觉察，当一些小分子量的外源双链RNA进入寄主细胞后，便可

30、促进与其同源的内源mRNA发生特异性的降解作用，从而高效而特异地阻断体内相应基因的活性，在细胞内发挥基因的剔除作用。这种现象叫RNA干扰。 34. 生命体遗传信息的三个层次是： 第一层次是由编码蛋白质的基因组成，如人类基因组的基因编码序列占总DNA序列的不到2%； 其次层次：仅由编码RNA而不编码蛋白质的基因组DNA组成。这一部分DNA叫做非编码的DNA，它的转录产物称为非编码的RNA不包括tRNA、rRNA和snoRNA，其相应的基因称为RNA基因。这类基因隐藏在巨大的非编码的染色体DNA序列当中。因此过去亦被称为隐藏基因cryptic gene； 第三层次：表观遗传信息层epigeneti

31、c layer of information。 它贮藏于围绕在DNA分子四周并与DNA结合的蛋白质及其他化学物质中。表观遗传信息犹如RNA基因一样令人兴奋，甚至比RNA基因更为重要。 35. 全局调整Global regulation system 原核生物如细菌细胞为了适应环境条件的大范围的重要转变，单靠一个操纵子作局部的调整明显是不够的，它还需一种能够同时调整许多相关操纵子的，特殊调整体系。这种调整体系称全局调整体系。它是由许多单一的调控途经，交织组成的一种困难的调控网络，来应付外界环境的压力的同时，能适时快速作出反应。 36 共线性 Collinearity：所谓共线性包括如下4种不同的

32、状况： 其一是指位于同一条染色体DNA分子或是同一条DNA分子上，不同基因的位置排列关系。这种状况有时特称为同线性Synteny。 其二是指不同物种的相关染色体DNA分子之间，基因排列依次的一样性。 其三是指位于DNA分子与其转录本RNA分子之间，核苷酸碱基排列依次的一 致性。 其四是指位于DNA分子或mRNA分子上遗传密码子的排列依次，与相应的蛋白质多肽链上氨基酸排列依次之间的一样性。 37. 基因工程诞生的理论基础和技术基础是什么？ 1 理论基础： a 上世纪40年头明确了遗传物质携带者是DNA，而不是蛋白质;明确了基因的载体。 b上世纪50年头相继揭示了DNA双螺旋结构模型和半保存复制机

33、理，从而解决了基因的复制。 c 上世纪50 世纪末和60年头初相继提出了中心法则和操纵子学说并成地破译了遗传密码子，从而解决了遗传信息的流向和基因表达问题。 2 技术基础： a DNA分子的体外切割与连接技术; b DNA测序技术; c 基因克隆的载体的进展与应用; d大肠杆菌的转化技术; e琼酯糖凝胶电泳技术; f 核酸杂交技术。 38. RNA编辑RNA editing： 在有些基因的转录后加工过程中，会有大量的尿嘧啶核苷酸Us加入到前体mRNApre-mRNA的核苷酸序列中去，或是从pre-mRNA的核苷酸序列中删除下来，甚至还会发生核苷酸碱基的取代反应。这种在RNA转录本成熟、修饰过程

34、中发生的核苷酸的加入、删除或取代的现象，叫做RNA编辑RNA editing。 如此碱基饰变的结果，使得RNA转录本的核苷酸序列与其对应的DNA链的核苷酸编码序列并不完全匹配。由此饰变的mRNA所转译的蛋白质多肽链的氨基酸序列结构，便与依据其基因的核苷酸序列推导出来的有所差异。 391微小RNA(microRNA，miRNA)： 是在真核细胞中觉察的一类调整型的、非编码蛋白质的、小分子量的单链RNA。miRNA是由内源基因组编码转录成的Pri-miRNA被果蝇酶切割生成70-80nt的pre-miRNA，经自我折叠成双链的发夹结构，进入细胞质后被切丁酶进一步切割并除去单链环，形成2125bp双

35、链体(miRNA：miRNA*)分子，双链体解离出单链的存留链miRNA同目标mRNA结合阻挡翻译，另一条消逝链miRNA*被降解。 392miRNA与siRNA的比较 相像点： 1 分子结构特别相像。长度均为2125的小分子量RNA、 5，-端都具有P基团、3，-端都具有0H-基团； 2 都通过与RISC结合的方式发挥功能作用； 3 终极作用都是抑制mRNA的翻译活性，而导致基因缄默。 不同点： 1 生物合成途径不同； siRNA主要是由外源导入的双链(dsRNA)经切割产生的、少数的是由内源dsRNA切割产生。 miRNA则不然，它是由内源基因组编码转录成Pri-miRNA，被果蝇酶切割生

36、成70-80nt的pre-miRNA，由于pre-miRNA存在回文结构自我折叠成双链的发夹结构由输出蛋白的作用进入细胞质后被切丁酶进一步切割加工成2125bp小片段并除去单链环形成双链miRNA，双链体(miRNA：miRNA*)分子，解离出单链的存留链miRNA同目标mRNA结合阻挡翻译，另一条消逝链miRNA*被降解。 2抑制翻译的方式不同； siRNA是通过与目标mRNA编码区中的靶序列的结合引导RISC复合物中的切段酶，从靶序列的中间部位切割断裂mRNA分子，从而抑制翻译。 miRNA与此不同，它是通过与目标基因mRNA的 3，-UTR序列中的结合位点的序列互补作用，促使mRNA失去

37、翻译活性。因此在miRNA作用过程中，虽然目标蛋白质的数量削减了，但其mRNA的丰度却没有明显的转变。 3碱基互补水平不同； siRNA与靶序列之间核苷酸碱基的互补水平达百分之百的完全匹配。 但miRNA则依材料来源的差异而有两种不同的状况。植物mRNA与靶序列核苷酸碱基也是百分之百完全匹配的、而动物的miRNA与其结合位点的核苷酸碱基则不是完全互补的，两者之间存在着若干非配对的碱基。 40. 微量碱法分别纯化质粒DNA的原理有如下几点： 1根据质粒DNA与染色体线性 DNA在拓扑学上的差异。质粒DNAcccDNA是共价闭合双链超回旋构型的小分子DNA，而细胞染色体DNA在细胞裂解分别过程中断

38、裂成线性DNALDNA，虽然在化学本质上没有本质区分，但在高级结构拓扑学上存在差异。 2 差异碱变性，在pH 12.0-12.5高pH条件下，线性的DNA简洁变性解链，而质粒DNA不易变性或很少变性。 3 酸复性，在pH4.8条件下，cccDNA很快复性，而线性的染色体DNA不行逆的变性并与蛋白质、RNA形成沉淀物，通过离心可以把LDNA与cccDNA分开。cccDNA在上清液中。 4 酒精沉淀cccDNA, 以2.5倍的95% 酒精沉淀质粒DNA，(浓度为66%沉淀最好)。保存在TEpH8.o缓冲液中，放置在20Co下保存备用。 41. 图示ZAP载体的组成结构及优点： T3-MCS- T7

39、 _ cos_ pBluescriptSK噬菌粒 _ _cos I LacZ T 结构组成：1含有具内删除特性的pBluescriptSK噬菌粒； 2在pBluescriptSK噬菌粒两端具有f1的起始子I和终止子T； 3在pBluescriptSK噬菌粒内部具有两端带有T3和T7启动子的多克隆位点MCS； 4在pBluescript的内部带有缺陷的LacZ基因； 5在该载体的两端具有cos末端。 ZAP的特点： 1是一种具有内删除特性的插入型噬菌体载体， 2可克隆10kb大小的外源DNA。 3当外源DNA插入取向和读码结构正确，就能表达出融合蛋白质，并可用抗体筛选。 4当外源DNA插入在多克

40、隆位点，使半乳糖苷酶失活故可用Xgal显色的组织化学筛选重组子白色为重组子； 5克隆的外源DNA可在体内随pBluescript噬菌粒删除下来，省去了常规的亚克隆； 6利用T3或T7噬菌体的RNA聚合酶，可便利地制备外源插入的DNA的任何一条链的mRNA。 内删除源理：当含有外源DNA插入的重组ZAP载体，感染大肠杆菌F菌株，再用帮助噬菌体M13或f1 超感染。于是，在细胞内由此帮助噬菌体基因供应的反式作用蛋白质，便会识别位于ZAp载体上的f1起始子和终止子，并最终导致含有外源DNA插入的pBluescript噬菌粒在体内从ZAP载体上删除下来。最终被帮助噬菌体M13的蛋白质包装成单链DNA噬菌体颗粒，并被挤出寄主细胞。 42. M13克隆体系中-半乳糖苷酶Xgal的显色原理 M13克隆体系包括M13克隆载体和M13特殊的寄主菌株两部分组成。-半乳糖苷(LacZ)当它为四聚体时具有活性，可把无色的X-gal切割成半乳糖和深蓝色靛蓝，因此Xgal可作为-半乳糖苷酶活性的一种指示剂。由于LacZ基因分子量太大。根据基因内互补作用的原理。利用基因工程的方法，即将编码同样的蛋白质多肽链序列，但各自具突变的序列，当这种载体转入到特殊的寄主菌株中便组成具有功能活性的多肽的生化过程。根据