酶促反应动力学多底物动力学.pptx

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1、会计学1酶促反应动力学多底物动力学酶促反应动力学多底物动力学(二二)反应机制的分类和命名反应机制的分类和命名 (以双底物双产物反应为例）：以双底物双产物反应为例）：以双底物双产物反应为例）：以双底物双产物反应为例）：1.1.序列序列序列序列(sequential)(sequential)反应机制反应机制反应机制反应机制:酶必需与所有底物都结合之后才有产物放出。对于双底酶必需与所有底物都结合之后才有产物放出。对于双底酶必需与所有底物都结合之后才有产物放出。对于双底酶必需与所有底物都结合之后才有产物放出。对于双底物双产物反应，必有酶物双产物反应，必有酶物双产物反应，必有酶物双产物反应，必有酶-底物

2、三元复合物形成。底物三元复合物形成。底物三元复合物形成。底物三元复合物形成。n n 根据底物及产物与酶的结合及释放是否有序分为根据底物及产物与酶的结合及释放是否有序分为根据底物及产物与酶的结合及释放是否有序分为根据底物及产物与酶的结合及释放是否有序分为:(1)(1)有序双双双底物双产物反应有序双双双底物双产物反应有序双双双底物双产物反应有序双双双底物双产物反应(ordered Bi Bi)(ordered Bi Bi)：A B P QA B P Q E EA (EAB E EA (EABEPQ)EQ EEPQ)EQ E n n EAEA、EQ:EQ:非中心复合物；非中心复合物；非中心复合物；非

3、中心复合物；(EAB(EAB EPQ):EPQ):中心复合物中心复合物中心复合物中心复合物n n A A：领先底物；：领先底物；：领先底物；：领先底物；B B：随后底物：随后底物：随后底物：随后底物第1页/共31页 例如：许多以例如：许多以例如：许多以例如：许多以NADNAD+或或或或NADPNADP+为辅酶的脱氢酶类，为辅酶的脱氢酶类，为辅酶的脱氢酶类，为辅酶的脱氢酶类，乳酸脱氢酶（乳酸脱氢酶（乳酸脱氢酶（乳酸脱氢酶（LDH)LDH)、苹果酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶(MDH)(MDH)等等等等 NADNAD+苹果酸苹果酸苹果酸苹果酸(MAMA)草酰乙酸草酰乙酸草酰乙酸

4、草酰乙酸(OAAOAA)NADH)NADH MA OAAMA OAA E E E ENADNAD+(E+(ENAD+NAD+E E NADHNADH)E)E NADHNADH E E n n NAD NAD+/NADH /NADH 形成形成形成形成外底物对外底物对外底物对外底物对n n机制：由于底物机制：由于底物机制：由于底物机制：由于底物A A与酶结合后改变了酶的构象，使与酶结合后改变了酶的构象，使与酶结合后改变了酶的构象，使与酶结合后改变了酶的构象，使 原来隐蔽的原来隐蔽的原来隐蔽的原来隐蔽的B B结合位点暴露，结合位点暴露，结合位点暴露，结合位点暴露，B B才能结合上去。才能结合上去。才

5、能结合上去。才能结合上去。暗示：暗示：暗示：暗示：A A与与与与B B可能结合在酶的不同部位。可能结合在酶的不同部位。可能结合在酶的不同部位。可能结合在酶的不同部位。第2页/共31页 (2)Theorell-Chance(T-C (2)Theorell-Chance(T-C 机制机制机制机制)：A A B P Q B P Q E EA EQ E E EA EQ E 第二个底物第二个底物第二个底物第二个底物B B结合及释放非常快，没有明显的三元复合结合及释放非常快，没有明显的三元复合结合及释放非常快，没有明显的三元复合结合及释放非常快，没有明显的三元复合物变构过程。可看作是三元复合物浓度极低的序

6、列有序机物变构过程。可看作是三元复合物浓度极低的序列有序机物变构过程。可看作是三元复合物浓度极低的序列有序机物变构过程。可看作是三元复合物浓度极低的序列有序机制。制。制。制。例如：马肝醇脱氢酶：例如：马肝醇脱氢酶：例如：马肝醇脱氢酶：例如：马肝醇脱氢酶：NADNAD+乙醇乙醇乙醇乙醇 乙醛乙醛乙醛乙醛 NADHNADH E EE ENADNAD+E E NADHNADH E E第3页/共31页(3)(3)随机双双随机双双随机双双随机双双(random Bi Bi)(random Bi Bi)：A B P QA B P Q EA EQ EA EQ E E （EABEABEPQEPQ）E E B

7、A Q P B A Q Pn n 产物从酶上的释放及底物和酶的结合无一定顺序。产物从酶上的释放及底物和酶的结合无一定顺序。产物从酶上的释放及底物和酶的结合无一定顺序。产物从酶上的释放及底物和酶的结合无一定顺序。n n少数脱氢酶和一些磷酸激酶属于该类，例如肌酸激少数脱氢酶和一些磷酸激酶属于该类，例如肌酸激少数脱氢酶和一些磷酸激酶属于该类，例如肌酸激少数脱氢酶和一些磷酸激酶属于该类，例如肌酸激酶酶酶酶:肌酸肌酸肌酸肌酸 +ATP +ATP 磷酸肌酸磷酸肌酸磷酸肌酸磷酸肌酸+ADP+ADPn n机制：酶蛋白上的机制：酶蛋白上的机制：酶蛋白上的机制：酶蛋白上的A A、B B结合位均处于暴露状态，结合位

8、均处于暴露状态，结合位均处于暴露状态，结合位均处于暴露状态，两者与底物的结合即互不干扰，也不互相依赖。两者与底物的结合即互不干扰，也不互相依赖。两者与底物的结合即互不干扰，也不互相依赖。两者与底物的结合即互不干扰，也不互相依赖。EBEP第4页/共31页2 2 乒乓机制乒乓机制乒乓机制乒乓机制(Ping-Pang Bi Bi)(Ping-Pang Bi Bi)：各种底物全部和酶结合以前各种底物全部和酶结合以前各种底物全部和酶结合以前各种底物全部和酶结合以前 ，已经有一种或多种，已经有一种或多种，已经有一种或多种，已经有一种或多种底物放出，不形成三元复合物。底物放出，不形成三元复合物。底物放出，不

9、形成三元复合物。底物放出，不形成三元复合物。A P B QA P B Q E (EA E (EAFP)F (FBFP)F (FBEQ)EEQ)En n属于该机制的酶大多数具有辅酶，如转氨酶、黄素属于该机制的酶大多数具有辅酶，如转氨酶、黄素属于该机制的酶大多数具有辅酶，如转氨酶、黄素属于该机制的酶大多数具有辅酶，如转氨酶、黄素酶等。谷草转氨酶属于典型的乒乓机制：酶等。谷草转氨酶属于典型的乒乓机制：酶等。谷草转氨酶属于典型的乒乓机制：酶等。谷草转氨酶属于典型的乒乓机制：Asp OAA AKG GluAsp OAA AKG Glu E ECHOCHO (E (ECHOCHOAsp EAsp ENHN

10、H2 2 (E(ENHNH2 2 AKG AKG E ECHOCHO E ENHNH2 2 OAA)OAA)E ECHOCHOGlu)Glu)第5页/共31页n n总结：总结：有序机制有序机制有序机制有序机制 序列反应机制序列反应机制序列反应机制序列反应机制 T-C T-C 机制机制机制机制 随机机制随机机制随机机制随机机制 乒乓反应机制乒乓反应机制乒乓反应机制乒乓反应机制第6页/共31页二二二二 King-AltmanKing-Altman法法法法速度方程图示法速度方程图示法速度方程图示法速度方程图示法(一一)Kappa表示法表示法:E +A E +A k k1 1 EA EA 1 1 k-

11、1 k-1 2 2 V Vf f=k=k1 1 A E;VA E;Vr r=k=k-1-1 EAEAn n KappaKappa()=速度常数项速度常数项速度常数项速度常数项 底物底物底物底物(产物产物产物产物)浓度项浓度项浓度项浓度项 正向反应的正向反应的正向反应的正向反应的KappaKappa：12 12=k=k1 1 A A 逆向反应的逆向反应的逆向反应的逆向反应的KappaKappa：21 21=k=k-1-1 反应速度：反应速度：反应速度：反应速度：V Vf f=12 12 E;VE;Vr r=21 21 EA EA n n 具有方向性，是一个矢量。其方向与酶形式的具有方向性，是一个

12、矢量。其方向与酶形式的具有方向性，是一个矢量。其方向与酶形式的具有方向性，是一个矢量。其方向与酶形式的 流向有关流向有关流向有关流向有关第7页/共31页(二二二二)King-Altman)King-Altman 法步骤法步骤法步骤法步骤:(1)(1)首先写出反应历程，然后将反应历程安排成封首先写出反应历程，然后将反应历程安排成封首先写出反应历程，然后将反应历程安排成封首先写出反应历程，然后将反应历程安排成封闭环形式。环的角数就是酶存在形式数目，用闭环形式。环的角数就是酶存在形式数目，用闭环形式。环的角数就是酶存在形式数目，用闭环形式。环的角数就是酶存在形式数目，用n n表示。然后在各角之间连线

13、上标出各步反应的表示。然后在各角之间连线上标出各步反应的表示。然后在各角之间连线上标出各步反应的表示。然后在各角之间连线上标出各步反应的。E+A E+A k1 k1 EA EA k2 k2 EP EP k3 k3 E+PE+P k-1 k-2 k-3k-1 k-2 k-3 E E k1Ak1A EA EA k-1k-1 k-3P k3 k2 k-3P k3 k2 k-2k-2 EP EP第8页/共31页 E =k-1k3 +k-1k-2+k2k3 EA=k1k3 A +k1k-2A+k-2k-3P EP=k-1k-3P+k1k2A+k2k-3P E k1A EA k-3P k3 k-1 k2

14、k-2 EP E:EA:EP:（2）画出King-Altman 图形，即：所有流向各种酶形式的n1 线矢量图，再将各步反应的标到矢量图上,并写出流向 各种酶形式的乘积之和。k-1 k3k-2k-1k3 k2k1Ak3k1Ak-2k-3Pk-2k-3Pk-1k1Ak2k-3Pk2第9页/共31页（3）速度方程推导）速度方程推导:n n 各种酶形式的浓度与其各种酶形式的浓度与其各种酶形式的浓度与其各种酶形式的浓度与其乘积之和成正比乘积之和成正比乘积之和成正比乘积之和成正比:E E E E ;EA ;EA EAEA;EP;EP EPEP E E0 0 =E E +EAEA+EPEP E E =E E

15、 E E0 0 E=E=（E E）EE0 0 EA EA =EAEA E E0 0 EA=EA=（EAEA）EE0 0 EP EP =EPEP E E0 0 EP=EP=（EPEP）EE0 0 第10页/共31页 V=kV=k3 3 EPEP k-k-3 3 E P=E P=(k k3 3 EP EP/k-k-3 3 PP E E/)EE0 0 =(k(k1 1k k2 2k k3 3 A A k k-1-1k k-2-2 k k-3-3 P)E P)E0 0 (k (k-1-1k k3 3+k+k-1-1k k-2-2+k+k2 2k k3 3)+k)+k1 1(k(k2 2+k+k-2-2

16、+k+k3 3)A+k)A+k-3-3(k(k-1-1+k+k-2-2+k+k2 2)P)P =num1A num1A num2Pnum2P const+coefconst+coefA A A+coefA+coefP P P P num1:num1:分子中分子中分子中分子中AA项之前的系数乘以项之前的系数乘以项之前的系数乘以项之前的系数乘以EE0 0 num2:num2:分子中分子中分子中分子中PP项之前的系数乘以项之前的系数乘以项之前的系数乘以项之前的系数乘以EE0 0 const:const:分母常数项分母常数项分母常数项分母常数项 coefcoefA A:分母中分母中分母中分母中AA项之

17、前的系数项之前的系数项之前的系数项之前的系数 coefcoefP P:分母中分母中分母中分母中PP项之前的系数项之前的系数项之前的系数项之前的系数 E k1A EA k-3P k3 k-1 k2 k-2 EP 第11页/共31页(三三)注意注意:矢量图数目的计算矢量图数目的计算矢量图数目的计算矢量图数目的计算 :n-1 n-1线矢量图数目线矢量图数目线矢量图数目线矢量图数目=m!m!(n-1)!(m-n+1)!(n-1)!(m-n+1)!n=n=角数角数角数角数;m=;m=封闭环的线数封闭环的线数封闭环的线数封闭环的线数 n=3;m=3;n-1线矢量图数目=3!=3 (3-1)!(3-3+1)

18、!第12页/共31页 King-Altman King-Altman 图形不包含封闭环形式：图形不包含封闭环形式：图形不包含封闭环形式：图形不包含封闭环形式：E1E1 E2 E3 E2 E3 E4 E4 n n n=4 n=4，m=5 m=5 n-1 n-1线（线（线（线（3 3线）图数目线）图数目线）图数目线）图数目=5！=10=10个，个，个，个，(4-1)！(5-4+1)！n n 2 2个封闭环形式无效，应去除。共有个封闭环形式无效，应去除。共有个封闭环形式无效，应去除。共有个封闭环形式无效，应去除。共有8 8个有效的个有效的个有效的个有效的 King-Altman King-Altma

19、n 图形图形图形图形第13页/共31页 反应历程中有时可能没有逆反应，此时有些反应历程中有时可能没有逆反应，此时有些反应历程中有时可能没有逆反应，此时有些反应历程中有时可能没有逆反应，此时有些 King-King-AltmanAltman 图形不存在。图形不存在。图形不存在。图形不存在。E+A E+A k1 k1 EA EA k2 k2 EP EP k3 k3 E+PE+P k-1 k-2k-1 k-2 此反应若没有此反应若没有此反应若没有此反应若没有k-k-3 3 线，则某些线，则某些线，则某些线，则某些King-AltmanKing-Altman 图形不图形不图形不图形不存在，反应速度中凡

20、是含存在，反应速度中凡是含存在，反应速度中凡是含存在，反应速度中凡是含k-k-3 3 项项项项 者不存在。者不存在。者不存在。者不存在。K-3第14页/共31页 E:E:k-1 k-1 k-1 k-1 k3k3 k3 k-2 k2 k3 k-2 k2 EA:EA:k1A k1A k1A k1A k3k3 k-2k-2 k-3P k-3P k-2k-2 EP:EP:k-1 k1A k-1 k1A k-3P k-3P k2k2 k-3P k-3P k2k2 E =k-1k3 +k-1k-2+k2k3 EA=k1k3 A +k1k-2A+k-2k-3P EP=k-1k-3P+k1k2A+k2k-3P

21、 E k1A EA k-3P k3 k-1 k2 k-2 EP 第15页/共31页 V=kV=k3 3 EPEP k-k-3 3 E PE P =(k(k1 1k k2 2k k3 3 A A k k-1-1k k-2-2 k k-3-3 P)E P)E0 0 (k (k-1-1k k3 3+k+k-1-1k k-2-2+k+k2 2k k3 3)+k)+k1 1(k(k2 2+k+k-2-2+k+k3 3)A+k)A+k-3-3(k(k-1-1+k+k-2-2+k+k2 2)P)P =num1A num1A num2Pnum2P const+coefconst+coefA A A+coefA

22、+coefP P P P 第16页/共31页三三 双底物反应动力学双底物反应动力学(一一)有序双双机制：有序双双机制：1 1 方程的推导：方程的推导：方程的推导：方程的推导：E+A E+A k1k1 EA+B EA+B k2 k2 (EAB(EABEPQ)EPQ)k3k3 EQ+PEQ+P k-1k-1 k-2 k-2 k-3k-3 k-4 k4k-4 k4 E+QE+Q E E k1Ak1A EA EA k-1k-1 k4 k-4Q k-2 k2Bk4 k-4Q k-2 k2B k-3P k-3P EQ (EAB EQ (EABEPQ)EPQ)k3k3第17页/共31页n n n=4,m=4

23、,n=4,m=4,则则则则n-1n-1线线线线(3(3线线线线)矢量图数目为矢量图数目为矢量图数目为矢量图数目为4 4 E:E:EA:EA:EAB:EAB:EQ:EQ:k4 k1Ak-3Pk-1k1Ak-4Qk-4Qk-3Pk-3Pk2Bk2Bk2Bk-3Pk-1k-1k-1 k4 k4 k4 k3k3k2Bk-2k-2k-1k-1k1Ak-4Qk-4Qk-4Qk3k3k3k2Bk2Bk-2k1Ak1Ak1A k4 k4 k-4Qk-3Pk-3Pk3k-2k-2k-2第18页/共31页V=kV=k4 4EQ k-EQ k-4 4EQEQ =(k =(k4 4 EQEQ k-k-4 4QQ E

24、E)E)E0 0 =num1AB-num2PQnum1AB-num2PQ const+coefconst+coefA A A+coefA+coefB BB+coefB+coefP PP+coefP+coefQQQQ +coef +coefABABAB+coefAB+coefAPAPAP+coefAP+coefBQBQBQ+coefBQ+coefPQPQPQPQ +coef +coefABPABPABP+coefABP+coefBPQBPQBPQBPQn n若不考虑产物的影响，即若不考虑产物的影响，即若不考虑产物的影响，即若不考虑产物的影响，即 P=0,Q=0P=0,Q=0 初速度初速度初速度初

25、速度V=V=num1AB num1AB const+coef const+coefA AA+coefA+coefB BB+coefB+coefABABABAB第19页/共31页2 2 动力学常数的定义：动力学常数的定义：动力学常数的定义：动力学常数的定义：n n 最大反应速度：最大反应速度：最大反应速度：最大反应速度：正向：正向：正向：正向：VmVmf f=num1 num1 逆向：逆向：逆向：逆向：VmVmr r=num2 num2 coefcoefABAB coefcoefABABn n 米氏常数：米氏常数：米氏常数：米氏常数：K KmAmA=coefcoefB B K KmBmB=coe

26、fcoefA A coefcoefAB AB coefcoefABAB K KmPmP=coefcoefQQ K KmQmQ=coefcoefP P coefcoefPQ PQ coefcoefPQPQn n 解离常数：解离常数：解离常数：解离常数：K KiA iA=constconst K KiB iB=constconst coefcoefA A coefcoefB B K KiP iP=constconst K KiQ iQ=constconst coefcoefP P coefcoefQQ第20页/共31页V=V=num1ABnum1AB const+coef const+coefA

27、AA+coefA+coefB BB+coefB+coefABABABAB =num1ABnum1ABcoefcoefABAB const coef const coefA A +coef coefA A A A +coef coefB B B B +coef coefABAB AB AB coef coefA A coef coefABAB coef coefABAB coef coefABAB coef coefABAB V V =V Vmmf fAB AB K KiA iA K KmBmB+K+KmBmBA+A+K KmAmAB+ABB+AB nn 双底物反应中米氏常数的意义：双底物反应中

28、米氏常数的意义：双底物反应中米氏常数的意义：双底物反应中米氏常数的意义：K KmAmA：是是是是BB饱和时酶对底物饱和时酶对底物饱和时酶对底物饱和时酶对底物A A的米氏常数的米氏常数的米氏常数的米氏常数 K KmBmB：是是是是AA饱和时酶对底物饱和时酶对底物饱和时酶对底物饱和时酶对底物B B的米氏常数的米氏常数的米氏常数的米氏常数第21页/共31页3 3 有序机制动力学常数的求取有序机制动力学常数的求取有序机制动力学常数的求取有序机制动力学常数的求取(二次作图法二次作图法二次作图法二次作图法)：n n第一次为双倒数作图，一般固定其中一个底物的浓度，变第一次为双倒数作图，一般固定其中一个底物的

29、浓度，变第一次为双倒数作图，一般固定其中一个底物的浓度，变第一次为双倒数作图，一般固定其中一个底物的浓度，变化另一个（例如：固定化另一个（例如：固定化另一个（例如：固定化另一个（例如：固定BB，变化，变化，变化，变化AA）。将有序机制的动）。将有序机制的动）。将有序机制的动）。将有序机制的动力学方程进行双倒数处理：力学方程进行双倒数处理：力学方程进行双倒数处理：力学方程进行双倒数处理：1 =KmAmA(1+(1+KmBmBKiAiA)1 +1 (1+(1+KmBmB)V Vmm KmAmAB A Vmm Bn n若将若将若将若将BB固定于不同的浓度，则以固定于不同的浓度，则以固定于不同的浓度，

30、则以固定于不同的浓度，则以 1/V 1/A 1/V 1/A 作图可得一组相交于第二作图可得一组相交于第二作图可得一组相交于第二作图可得一组相交于第二 或第三象限的直线，其交点座标为：或第三象限的直线，其交点座标为：或第三象限的直线，其交点座标为：或第三象限的直线，其交点座标为：-1 1 (1-KmA)KiA,Vm KiA1/V1/AB1B2B3 纵截距为：1 (1+KmB)Vm B第22页/共31页n n第二次作图：纵截距第二次作图：纵截距第二次作图：纵截距第二次作图：纵截距1/B1/B作图作图作图作图n n由第二次的作图可知由第二次的作图可知由第二次的作图可知由第二次的作图可知 K KmBm

31、B和和和和Vm,Vm,代入交点坐标中可知代入交点坐标中可知代入交点坐标中可知代入交点坐标中可知K KmAmAn n若若若若A(AA(A饱和时饱和时饱和时饱和时)：1 =1 (1+(1+KmB )V Vm B 转化为米氏方程转化为米氏方程转化为米氏方程转化为米氏方程n n若若若若B(BB(B饱和时饱和时饱和时饱和时):):1 =1 (1+(1+KmA )V Vm An n这就是水解反应可看作是单底物反应的原因，因为另一底这就是水解反应可看作是单底物反应的原因，因为另一底这就是水解反应可看作是单底物反应的原因，因为另一底这就是水解反应可看作是单底物反应的原因，因为另一底物是水，其浓度可看作是饱和。

32、物是水，其浓度可看作是饱和。物是水，其浓度可看作是饱和。物是水，其浓度可看作是饱和。纵截距：1 (1+KmB)Vm B1/B1/Vm-1 KmB第23页/共31页(二二)随机双双：随机双双：1 1 动力学方程推导：动力学方程推导：动力学方程推导：动力学方程推导：m=8,n=6,m=8,n=6,n-1=5 n-1=5线图：线图：线图：线图：5656个个个个 封闭环：封闭环：封闭环：封闭环：2424个个个个 有效图形：有效图形：有效图形：有效图形：3232个个个个 EAEBEPEQE(EABEPQ)第24页/共31页n n假设反应过程第一个底物与酶结合或第一个产物从酶假设反应过程第一个底物与酶结合

33、或第一个产物从酶假设反应过程第一个底物与酶结合或第一个产物从酶假设反应过程第一个底物与酶结合或第一个产物从酶释放是迅速平衡过程释放是迅速平衡过程释放是迅速平衡过程释放是迅速平衡过程迅速平衡随机双双迅速平衡随机双双迅速平衡随机双双迅速平衡随机双双:V=V=num1AB-num2PQnum1AB-num2PQ const+coefconst+coefA A A+coefA+coefB BB+coefB+coefP PP+coefP+coefQQQQ +coef +coefABABAB+coefAB+coefPQPQPQPQnn 若若若若P=0 Q=0 P=0 Q=0 则则则则 :V=V=num1A

34、B num1AB const+coefconst+coefA A A+coefA+coefB BB+coefB+coefABABABAB V V =VmVmf fABAB K KiA iA K KmBmB+K+KmBmBA+KA+KmAmAB+ABB+ABn n 此方程与有序机制相同，称为序列机制的总方程。此方程与有序机制相同，称为序列机制的总方程。此方程与有序机制相同，称为序列机制的总方程。此方程与有序机制相同，称为序列机制的总方程。第25页/共31页(三三三三)乒乓双双机制：乒乓双双机制：乒乓双双机制：乒乓双双机制：1 1 速度方程速度方程速度方程速度方程:乒乓机制的乒乓机制的乒乓机制的乒

35、乓机制的King-AltmanKing-Altman环形表达式为：环形表达式为：环形表达式为：环形表达式为：E E k1k1AA (EA (EAFPFP)k-1k-1 k4 k-4k4 k-4Q Q k2 k-2k2 k-2PP (EQ (EQFB)FB)k-3 k-3 F F k3 k3B B n nm=4 n=4m=4 n=4，每种酶都有，每种酶都有，每种酶都有，每种酶都有4 4种种种种3 3线图。线图。线图。线图。第26页/共31页 V=V=num1AB-num2PQnum1AB-num2PQ coefcoefA A A+coefA+coefB BB+coefB+coefP PP+coe

36、fP+coefQQQ+Q+coef coefABABAB+AB+coefcoefAPAPAP+coefAP+coefBQBQBQ+BQ+coefcoefPQPQPQPQ n n若不计产物影响，若不计产物影响，若不计产物影响，若不计产物影响，P=0 Q=0P=0 Q=0，则：，则：，则：，则：V=V=num1ABnum1AB coefcoefA A A+coefA+coefB BB+coefB+coefABABABAB V=V=VmVmf fABAB K KmAmAB+KB+KmBmBA+ABA+AB第27页/共31页2.2.乒乓机制动力学常数的求取：乒乓机制动力学常数的求取：乒乓机制动力学常数

37、的求取：乒乓机制动力学常数的求取：(1)(1)双倒数图：若固定双倒数图：若固定双倒数图：若固定双倒数图：若固定BB变化变化变化变化AA 1 1 =1 1 (1+(1+KmB KmB+KmA KmA )V Vm B A V Vm B A 横截距：横截距：横截距：横截距：纵截距：纵截距：纵截距：纵截距：(2)(2)纵截距纵截距纵截距纵截距 1/1/BB作图：作图：作图：作图：从二次作图的横纵截距中求取从二次作图的横纵截距中求取从二次作图的横纵截距中求取从二次作图的横纵截距中求取 VmVm和和和和K KmBmB，带入双倒数图的，带入双倒数图的，带入双倒数图的，带入双倒数图的 横截距表达式求取横截距表

38、达式求取横截距表达式求取横截距表达式求取K KmAmA 。1/V1/A1 (1+KmB)Vm B-1 (1+KmB)KmA BB1B2B31 (1+KmB)Vm B-1 (1+KmB)KmA B1/B1/Vm-1 KmB纵截距第28页/共31页n n 若固定若固定若固定若固定A A 变化变化变化变化BB，也可得到一组平行线，以二，也可得到一组平行线，以二，也可得到一组平行线，以二，也可得到一组平行线，以二次作图法同样求取各动力学常数。次作图法同样求取各动力学常数。次作图法同样求取各动力学常数。次作图法同样求取各动力学常数。n n 若若若若A A，1 =1 (1+(1+KmB )V Vm B 若

39、若若若B B 1 =1 (1+(1+KmA )V Vm An n即：当其中一种底物饱和时，另一种底物与酶的即：当其中一种底物饱和时，另一种底物与酶的即：当其中一种底物饱和时，另一种底物与酶的即：当其中一种底物饱和时，另一种底物与酶的反应符合米氏方程，可看作单底物动力学反应符合米氏方程，可看作单底物动力学反应符合米氏方程，可看作单底物动力学反应符合米氏方程，可看作单底物动力学 第29页/共31页小结小结机制机制动力学方程动力学方程(不考虑产物不考虑产物)动力动力学学常数常数双倒数双倒数图特征图特征序列机制序列机制(有序双双、有序双双、迅速平衡迅速平衡 随机双双）随机双双）V=VmfAB KmBKiA+KmAB+KmBA+AB4个个相交于相交于一点一点乒乓机制乒乓机制 V=VmfAB KmAB+KmBA+AB3个个 一组一组平行线平行线第30页/共31页