实验五 土壤中微生物的分离计数精品文稿.ppt

《实验五 土壤中微生物的分离计数精品文稿.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《实验五 土壤中微生物的分离计数精品文稿.ppt（14页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、实验五 土壤中微生物的分离计数第1 页，本讲稿共14 页一、实验目的：一、实验目的：学习学习微生物稀释平板计数微生物稀释平板计数及划线分离技术 及划线分离技术二、实验原理二、实验原理:采用适宜（选择）培养基和培养条件，或加入某种抑制采用适宜（选择）培养基和培养条件，或加入某种抑制剂有利于目标微生物的生长，从而分离获得目标微生物的剂有利于目标微生物的生长，从而分离获得目标微生物的纯培养：常用稀释平板分离法和划线分离法纯培养：常用稀释平板分离法和划线分离法在固体培养基上形成单个菌落。在固体培养基上形成单个菌落。依据一个单细胞在固体培养基上培养后可以长成一菌落从而推 依据一个单细胞在固体培养基上培养

2、后可以长成一菌落从而推算样品中含有多少细菌的活菌数目。算样品中含有多少细菌的活菌数目。第2 页，本讲稿共14 页取取一一瓶瓶牛牛肉肉膏膏培培养养基基（250ml250ml瓶瓶）熔熔化化后后每每组组倒倒4 4个个平皿平皿。（。（每个人倒每个人倒1 1个平皿用于划线分离个平皿用于划线分离）三、实验步骤：（一）土样的采集（一）土样的采集 采 采集 集土 土样 样，扒 扒开 开表 表土 土层 层大 大约 约5cm 5cm厚 厚，取 取土 土样 样10g 10g左 左右 右，装 装于 于灭 灭菌 菌后 后的 的牛 牛皮 皮袋中，封口带回。袋中，封口带回。（二）土壤悬液制备（二）土壤悬液制备准备准备11瓶

3、土壤悬液：称 瓶土壤悬液：称1010克土壤放入带玻璃珠的克土壤放入带玻璃珠的90ml90ml瓶装无菌瓶装无菌水中，振荡（水中，振荡（10min10min），使土样分散。），使土样分散。（三）倒固体琼脂培养基平板（三）倒固体琼脂培养基平板第3 页，本讲稿共14 页（四）悬液稀释 无菌操作采用无菌操作采用4 4，5 5，6 6 稀释液涂布牛肉膏蛋白胨平稀释液涂布牛肉膏蛋白胨平板板;每个稀释度每个稀释度22个重复。每人用剩下的个重复。每人用剩下的11个平板做划线分离，个平板做划线分离，从三角瓶中取土壤悬液作划线分离。从三角瓶中取土壤悬液作划线分离。90毫升无菌水10克土样10-310-210-410

4、-510-1第4 页，本讲稿共14 页第5 页，本讲稿共14 页(五)平板涂布简单易行，但易简单易行，但易造成机械损伤造成机械损伤Liquid specimen is spread on the surface of solid agar with a sterile Liquid specimen is spread on the surface of solid agar with a sterile bent glass rod.bent glass rod.第6 页，本讲稿共14 页（六）培养：将平板用报纸包好（每个平板方向一致），写上班级和姓名，皿底朝上，置于培养箱培养(温度37)。

5、第7 页，本讲稿共14 页（七）细菌计数结果稀释度 10-5 10-6 10-7平板 1 2 1 2 1 2菌落数各浓度平均菌落数土壤中含细菌数量第8 页，本讲稿共14 页四、平皿划线分离法第9 页，本讲稿共14 页特点：快速、方便。分区划线（适用于浓度较大的样品）连续划线（适用于浓度较小的样品）第10 页，本讲稿共14 页第11 页，本讲稿共14 页五、试管斜面接种1.两支试管呈“V”字形 2.拔下试管塞3.火焰上微烧一周 4.接种环灼烧、冷却5.接种、划线 6.塞上塞子，灼烧接种环第12 页，本讲稿共14 页六、思考题(1)(1)要使平板菌落计数准确，需要掌握哪几个关键 要使平板菌落计数准确，需要掌握哪几个关键?为为什么什么?(2)(2)当你的平板上长出的菌落不是均匀分散的而是集中当你的平板上长出的菌落不是均匀分散的而是集中在一起时，你认为问题出在哪里在一起时，你认为问题出在哪里?第13 页，本讲稿共14 页第14 页，本讲稿共14 页