细菌形态学检查.pptx

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1、会计学1细菌形态学检查细菌形态学检查形态学检查的目的：从形态上识别细菌，为细菌分类与鉴别的基础；了解被检标本中有无细菌；直接从标本中观察到某些细菌，可对少数疾病初步诊断（如结核，脑膜炎等）。第1页/共36页 1.普通光学显微镜 原理 自然光的波长为0.4m；显微镜的最大分辨率为0.2m（前者的一半）；肉眼的分辨率为0.2mm，故放大1000倍，使0.2m放大到0.2mm。第一节 显微镜（microscope）第2页/共36页 2.暗视野显微镜 常用于活的微生物的动力检测 3.相差显微镜 利用相差板的光栅作用，使光波穿过标本中密度不同的部位时，引起位相差，显出光的强度的明暗对比。应用于活菌的形态

2、及某些内部结构的观察。4.荧光显微镜 以紫外光或蓝紫光作光源，因其波长比自然光短，故分辨率比普通显微镜要高。第3页/共36页 5.电子显微镜：以强大的电子流代替光源，因电子流的波长仅为0.005nm，（仅为可见光源的几万分之一），故其放大倍数可达10万-100万倍，可看清1nm的物体。电镜种类 透射电镜：因电子的透射作用，可观察细菌，virus内部结构，通过荧屏显示。扫描电镜：因电子流对物体的表面进行扫描，可清楚的显露出物体的三维空间的立体结构，可用于对细菌，virus的结构观察。第4页/共36页 仅用于细菌动力的观察。1.压滴法 明视野法、暗视野法。2.悬滴法 3.毛细管法：孔径0.5-1.

3、0mm，长约60-70mm毛细管，以此管轻取细菌培养物，待液体进入后，两端火焰封融。用于厌氧菌的动力观察。注意：区别细菌的运动与布朗运动。第二节 不染色细菌标本检查法第5页/共36页一：染料：大多是人工合成的含苯环或苯的有机物。色 基：即连接在苯环上带双键的有色化学基团，它使染料带颜色，其色基越多，颜色越深 如-NO2(硝基）-N=N-（偶氮基）助色基：不显色，它决定了染料与被染物之间的亲和 性，且有酸、碱之分，决定了染料的酸碱性:-NH2（碱性）-OH（酸性）第三节 细菌染色标本的检查第6页/共36页 常用染料种类：碱性染料：美兰，结晶紫，碱性复红等，色基带正电，易与带负电的被染物结合着色

4、酸性染料：伊红，酸性复红，刚果红，色基带负电 复合染料：可与cell浆结合 单纯染料：多为偶氮化合物，亲和力低，不溶于水，而溶于脂溶剂。第7页/共36页 二 染色程序：基本步骤：涂片（干燥）固定 染色（初染、煤染、脱色、复染）1.涂片制备：液体标本（细菌培养液）直接涂于玻片上；固体培养基上的培养物，取生理盐水涂片，涂成蚕豆大小的菌膜。第8页/共36页2.固定：目的：杀死细菌，使蛋白质凝固，易于着色 改变其通透性，利于染料进入 使菌体附着在玻片上 保持细菌原有的形态、结构 方法：常用的火焰加热固定法。第9页/共36页3.染色：目的：加固初染 媒染剂：石炭酸，碘液，明矾，酚等，也可加热。目的：使不

5、该染上颜色的部分脱下颜色 脱色剂：酸（为碱的脱色剂）碱（为酸的脱色剂），还有甲醇，乙醇等脱色机制：影响蛋白质的电离程度，改变其电荷的 性质或数量，从而影响细菌与染料结合的程度初染 媒染脱色第10页/共36页（对比染色）常用染料：稀释复红、沙黄（与紫色对比）、美兰、苦味液（与红色对比）复 染第11页/共36页三：常用的染色法三：常用的染色法（一）单染法：用一种染料染，细菌及周围部分都染成同一种颜色主要用于观察细菌的形态、大小、排列及简单的结构，如美兰染色，复红染色。（二）复染法：用两种以上的染料，将不同的细菌或同一细菌的不同结构染成不同的颜色。第12页/共36页 由丹麦细菌学家Christain

6、 Gram首创，已有100多年的历史。染料：结晶紫、卢戈氏碘液、95%酒精、稀释石炭酸复红 1.革兰染色法（Gram stain):第13页/共36页原理：（1）等电点学说：革兰阳性菌ph2-3,低于革兰阴性菌ph4-5。（2）化学学说：革兰阳性菌含大量核糖核酸镁盐。（3）通透性学说：革兰阳性菌cell wall因肽聚糖厚，脂类少，通透性低，酒精不易进入脱色，相反革兰阴性菌肽聚糖少，含脂多，易被酒精溶解，使cell wall通透性升高。第14页/共36页 结晶紫（初染）卢戈氏碘液（媒染）95%酒精（脱色）稀释石炭酸复红（复染）1min 水洗1min 水洗1min 水洗结果：意义：方法：第15页

7、/共36页2.抗酸染色（acid-fast stain）原 理：分枝杆菌一般不易着色，若用5%石炭酸复红加温并延长染色时间，可染上红色，又因其菌体中含有分枝菌酸，可抵抗3%盐酸酒精的脱色，仍保持红色，故称为抗酸菌。第16页/共36页 方 法：石炭酸复红（初染）盐酸酒精脱色碱性美兰（复染）1min加热至冒蒸汽 5min涂片、干燥、固定第17页/共36页结 果：意 义：第18页/共36页 细胞壁染色：染液：10鞣酸溶液、0.5结晶紫溶液 方法：涂片自然干燥鞣酸染15min，水洗 结晶紫染35min，水洗待干，镜检。结果：细胞壁（细菌的周边）染成紫色，内部无色；无细胞壁的细菌（L型菌）整个菌体染成紫

8、色。3.特殊染色法鞭毛染色法 芽孢染色法荚膜染色法 异染颗粒染色法第19页/共36页第20页/共36页第21页/共36页第22页/共36页第23页/共36页第24页/共36页第25页/共36页第26页/共36页透射电镜第27页/共36页扫 描 电 镜第28页/共36页第29页/共36页革兰阴性菌（红色）革兰阳性菌（紫色）第30页/共36页123第31页/共36页图一图二第32页/共36页鞭毛染色法第33页/共36页荚膜染色法第34页/共36页第一章 细菌的形态与结构一、细菌的大小和形态 细菌的基本形态：球形、杆状、螺形菌二、细菌的结构 基本结构：细胞壁、细胞膜、细胞质、核质 特殊结构：鞭毛、菌毛、荚膜、芽胞三、细菌L型 复 习第35页/共36页