医学专题—尿液蛋白质检查简介19737.ppt

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1、尿液蛋白质检查尿液蛋白质检查(jinch)第一页，共十九页。一、尿液微量白蛋白的测定一、尿液微量白蛋白的测定(cdng)n n健康人的尿液白蛋白一般健康人的尿液白蛋白一般健康人的尿液白蛋白一般健康人的尿液白蛋白一般(ybn)(ybn)小于小于小于小于2020mg/L,大于大于大于大于3030mg/L时即提示异常。时即提示异常。时即提示异常。时即提示异常。n n定义：定义：定义：定义：微量白蛋白是指尿中白蛋白含量超过微量白蛋白是指尿中白蛋白含量超过(chogu)(chogu)健康人水平，但常规尿蛋白试验为阴性的低健康人水平，但常规尿蛋白试验为阴性的低 浓度白蛋白。浓度白蛋白。n n检测方法：检测

2、方法：检测方法：检测方法：染料结合法、放射免疫分析、染料结合法、放射免疫分析、酶酶 联免疫吸附、免疫比浊分析、胶体金纸片联免疫吸附、免疫比浊分析、胶体金纸片联免疫吸附、免疫比浊分析、胶体金纸片联免疫吸附、免疫比浊分析、胶体金纸片第二页，共十九页。n n报告报告(bogo)(bogo)方式：定时留尿法方式：定时留尿法（g/ml;mg/24h)g/ml;mg/24h)晨尿法晨尿法晨尿法晨尿法(mg/L)mg/L)随机留尿法随机留尿法随机留尿法随机留尿法(mg/mmol Cr;mg/g Cr)n n国际上以尿白蛋白排泄国际上以尿白蛋白排泄(pixi)(pixi)率率20 20 mg/L 或尿总或尿总

3、蛋蛋 白白白白30mg/24hmg/24h作为尿微量白蛋白的临界值。作为尿微量白蛋白的临界值。作为尿微量白蛋白的临界值。作为尿微量白蛋白的临界值。第三页，共十九页。n n临床意义：临床意义：临床意义：临床意义：v尿微量白蛋白在糖尿病肾病尿微量白蛋白在糖尿病肾病(shn bn)中的应用中的应用v尿微量白蛋白在心血管疾病尿微量白蛋白在心血管疾病(jbng)中的应用中的应用v尿微量白蛋白在炎症尿微量白蛋白在炎症(ynzhng)方面的应用方面的应用v其他其他第四页，共十九页。二、二、Bence-Jones protein：v实质实质(shzh)是免疫球蛋白轻链或其聚合物，单聚体分子量为是免疫球蛋白轻链

4、或其聚合物，单聚体分子量为2.3万。万。v凝溶蛋白：凝溶蛋白：pH4.55.5，5656条件加热出现白色混浊条件加热出现白色混浊(hnzhu)(hnzhu)及凝固，及凝固，100 100 煮沸以后混浊消失或明显减退，再煮沸以后混浊消失或明显减退，再冷却时又可重新凝固。冷却时又可重新凝固。v蛋白电泳时可在蛋白电泳时可在2 2至至球蛋白区带间的某个部位球蛋白区带间的某个部位(bwi)(bwi)出出现现M M区带。区带。第五页，共十九页。检测方法：检测方法：q对甲苯磺酸沉淀筛选对甲苯磺酸沉淀筛选(shixun)实验：灵敏度实验：灵敏度3mg/Lq热沉淀法验证热沉淀法验证(ynzhng)q乙酸纤维素膜

5、电泳乙酸纤维素膜电泳(din yn)或者聚丙烯酰胺凝胶电泳或者聚丙烯酰胺凝胶电泳(din yn)：M带带q免疫固定电泳：区带电泳分离蛋白后，立即将浸有特免疫固定电泳：区带电泳分离蛋白后，立即将浸有特异抗异抗L链血清的薄膜条直接放到预计出现异常蛋白带的链血清的薄膜条直接放到预计出现异常蛋白带的位置上，使之产生抗原抗体的复合物反应。位置上，使之产生抗原抗体的复合物反应。q免疫扩散实验：用特异的免疫扩散实验：用特异的L链血清进行免疫扩散实验。链血清进行免疫扩散实验。临床意义：临床意义：多发性骨髓瘤、原发性巨球蛋白血症多发性骨髓瘤、原发性巨球蛋白血症第六页，共十九页。三、三、2-microglobul

6、inn n性质：一种性质：一种性质：一种性质：一种(y zhn)(y zhn)低分子量的蛋白质（低分子量的蛋白质（低分子量的蛋白质（低分子量的蛋白质（1.181.18万），是细万），是细万），是细万），是细胞膜上完整组织相溶性抗原胞膜上完整组织相溶性抗原胞膜上完整组织相溶性抗原胞膜上完整组织相溶性抗原HLAHLA的一部分。的一部分。n n检测方法：放射免疫分析（检测方法：放射免疫分析（检测方法：放射免疫分析（检测方法：放射免疫分析（RIARIA）、）、）、）、酶免疫分析酶免疫分析（EIA）n n参考值参考值:血血2 2-M 3.0mg/L-M 3.0mg/L 尿尿尿尿2 2-M0.2 mg/L

7、n n临床意义：肾小管疾病、血清临床意义：肾小管疾病、血清临床意义：肾小管疾病、血清临床意义：肾小管疾病、血清 2 2-M异常增高异常增高异常增高异常增高第七页，共十九页。四、尿液血红蛋白、肌红蛋白及其代谢四、尿液血红蛋白、肌红蛋白及其代谢(dixi)产物检查产物检查 1.hemoglobinn n正常人血浆中游离正常人血浆中游离正常人血浆中游离正常人血浆中游离(yul)(yul)血红蛋白与珠蛋白结合，以复合物的形血红蛋白与珠蛋白结合，以复合物的形血红蛋白与珠蛋白结合，以复合物的形血红蛋白与珠蛋白结合，以复合物的形式运转至单核式运转至单核式运转至单核式运转至单核-巨噬细胞系统被代谢，不能从尿液

8、中排出。巨噬细胞系统被代谢，不能从尿液中排出。巨噬细胞系统被代谢，不能从尿液中排出。巨噬细胞系统被代谢，不能从尿液中排出。n n 疾病时尿液中血红蛋白有两个来源：疾病时尿液中血红蛋白有两个来源：疾病时尿液中血红蛋白有两个来源：疾病时尿液中血红蛋白有两个来源：1.1.发生发生发生发生血管内溶血血管内溶血血管内溶血血管内溶血，超过珠蛋白的结合能力，游离血红蛋白从尿液中排出。超过珠蛋白的结合能力，游离血红蛋白从尿液中排出。超过珠蛋白的结合能力，游离血红蛋白从尿液中排出。超过珠蛋白的结合能力，游离血红蛋白从尿液中排出。2.2.尿路尿路尿路尿路（尤其是上尿路）出血（尤其是上尿路）出血（尤其是上尿路）出血

9、（尤其是上尿路）出血，红细胞在，红细胞在，红细胞在，红细胞在低渗或者高渗低渗或者高渗低渗或者高渗低渗或者高渗的环境下破坏的环境下破坏的环境下破坏的环境下破坏逸出的血红蛋白。逸出的血红蛋白。逸出的血红蛋白。逸出的血红蛋白。第八页，共十九页。检测方法：检测方法：n n试纸法：试纸法：试纸法：试纸法：利用血红蛋白中利用血红蛋白中利用血红蛋白中利用血红蛋白中亚铁血红素亚铁血红素亚铁血红素亚铁血红素具有具有具有具有类过氧化物酶类过氧化物酶类过氧化物酶类过氧化物酶作作作作用用用用(zuyng)(zuyng)，在邻联甲苯胺等供氢体存在下，使过氧化物还原，在邻联甲苯胺等供氢体存在下，使过氧化物还原，在邻联甲苯

10、胺等供氢体存在下，使过氧化物还原，在邻联甲苯胺等供氢体存在下，使过氧化物还原为水，而邻联甲苯胺被氧化成有色物质。为水，而邻联甲苯胺被氧化成有色物质。为水，而邻联甲苯胺被氧化成有色物质。为水，而邻联甲苯胺被氧化成有色物质。n n 免疫测定方法：免疫测定方法：免疫测定方法：免疫测定方法：利用利用利用利用抗人血红蛋白单克隆抗体抗人血红蛋白单克隆抗体抗人血红蛋白单克隆抗体抗人血红蛋白单克隆抗体临床意义：临床意义：临床意义：临床意义：血管内溶血血管内溶血血管内溶血血管内溶血(rn xu)(rn xu)泌尿道出血泌尿道出血泌尿道出血泌尿道出血第九页，共十九页。2.myoglobin 肌红蛋白是横纹肌、心肌

11、细胞内的一种含亚铁血红素肌红蛋白是横纹肌、心肌细胞内的一种含亚铁血红素肌红蛋白是横纹肌、心肌细胞内的一种含亚铁血红素肌红蛋白是横纹肌、心肌细胞内的一种含亚铁血红素的蛋白质，分子量小，易通过肾小球。的蛋白质，分子量小，易通过肾小球。的蛋白质，分子量小，易通过肾小球。的蛋白质，分子量小，易通过肾小球。测定方法：测定方法：n 纸片法：原理与血红蛋白测定类似。纸片法：原理与血红蛋白测定类似。肌红蛋白能溶于肌红蛋白能溶于肌红蛋白能溶于肌红蛋白能溶于0.80.8饱和度的硫酸铵溶液中饱和度的硫酸铵溶液中饱和度的硫酸铵溶液中饱和度的硫酸铵溶液中n n 免疫免疫免疫免疫(miny)(miny)法：利用单克隆抗体

12、法：利用单克隆抗体法：利用单克隆抗体法：利用单克隆抗体 ELISA、第十页，共十九页。3.hemosiderin 当发生血管内溶血时，大部分血红蛋白随尿排出，其中一部当发生血管内溶血时，大部分血红蛋白随尿排出，其中一部当发生血管内溶血时，大部分血红蛋白随尿排出，其中一部当发生血管内溶血时，大部分血红蛋白随尿排出，其中一部分血红蛋白被肾小管上皮细胞再吸收分血红蛋白被肾小管上皮细胞再吸收分血红蛋白被肾小管上皮细胞再吸收分血红蛋白被肾小管上皮细胞再吸收(xshu)(xshu)后在肾小管上皮细胞后在肾小管上皮细胞后在肾小管上皮细胞后在肾小管上皮细胞内分解形成血铁黄素，再随细胞脱落至尿中排出。内分解形成

13、血铁黄素，再随细胞脱落至尿中排出。内分解形成血铁黄素，再随细胞脱落至尿中排出。内分解形成血铁黄素，再随细胞脱落至尿中排出。检测方法：检测方法：检测方法：检测方法：PrussianPrussian反应，当尿中含有铁血黄素时，其中高铁反应，当尿中含有铁血黄素时，其中高铁反应，当尿中含有铁血黄素时，其中高铁反应，当尿中含有铁血黄素时，其中高铁离子离子离子离子(lz)(lz)与亚铁氰化钾作用，在酸性环境下，产生蓝色的亚铁与亚铁氰化钾作用，在酸性环境下，产生蓝色的亚铁与亚铁氰化钾作用，在酸性环境下，产生蓝色的亚铁与亚铁氰化钾作用，在酸性环境下，产生蓝色的亚铁氰化钾沉淀。氰化钾沉淀。氰化钾沉淀。氰化钾沉淀

14、。注意事项：注意事项：注意事项：注意事项：1.1.避免避免避免避免(bmin)(bmin)铁污染；铁污染；铁污染；铁污染；2.2.清晨第一次尿阳性率较高清晨第一次尿阳性率较高清晨第一次尿阳性率较高清晨第一次尿阳性率较高 临床意义：临床意义：临床意义：临床意义：血管内溶血、行进性血红蛋白尿。血管内溶血、行进性血红蛋白尿。血管内溶血、行进性血红蛋白尿。血管内溶血、行进性血红蛋白尿。第十一页，共十九页。4.porphyrin -氨基酮戊酸、卟胆原氨基酮戊酸、卟胆原氨基酮戊酸、卟胆原氨基酮戊酸、卟胆原 尿卟啉尿卟啉尿卟啉尿卟啉 粪卟粪卟粪卟粪卟啉啉啉啉 原卟啉原卟啉原卟啉原卟啉+Fe Fe 血红素血红

15、素血红素血红素 卟啉尿是指尿中排出过多卟啉尿是指尿中排出过多卟啉尿是指尿中排出过多卟啉尿是指尿中排出过多(u du)(u du)的卟啉或者其前体的卟啉或者其前体的卟啉或者其前体的卟啉或者其前体测定方法：测定方法：测定方法：测定方法：酸萃取后，紫外线进行检测酸萃取后，紫外线进行检测酸萃取后，紫外线进行检测酸萃取后，紫外线进行检测临床意义：临床意义：临床意义：临床意义：先天性卟啉病、肝性卟啉病先天性卟啉病、肝性卟啉病先天性卟啉病、肝性卟啉病先天性卟啉病、肝性卟啉病 第十二页，共十九页。五、五、TammHorsfall protein TH TH蛋白由蛋白由蛋白由蛋白由HenleHenle袢升支与远

16、曲小管的上皮细胞的高尔基复合袢升支与远曲小管的上皮细胞的高尔基复合袢升支与远曲小管的上皮细胞的高尔基复合袢升支与远曲小管的上皮细胞的高尔基复合体产生体产生体产生体产生(chnshng)(chnshng)，是一种肾特异性蛋白质。是构成管型的一种，是一种肾特异性蛋白质。是构成管型的一种，是一种肾特异性蛋白质。是构成管型的一种，是一种肾特异性蛋白质。是构成管型的一种重要蛋白。重要蛋白。重要蛋白。重要蛋白。检测方法检测方法检测方法检测方法：酶联免疫吸附法、放射免疫法：酶联免疫吸附法、放射免疫法：酶联免疫吸附法、放射免疫法：酶联免疫吸附法、放射免疫法 临床意义临床意义临床意义临床意义：协助诊断上尿路疾患

17、：协助诊断上尿路疾患：协助诊断上尿路疾患：协助诊断上尿路疾患 有助于泌尿系统结石形成机制的研究。有助于泌尿系统结石形成机制的研究。有助于泌尿系统结石形成机制的研究。有助于泌尿系统结石形成机制的研究。第十三页，共十九页。六、尿液酶测定六、尿液酶测定(cdng)尿液酶的来源：尿液酶的来源：血液的酶：血液的酶：淀粉酶、溶菌酶淀粉酶、溶菌酶肾实质肾实质(shzh)的酶：的酶：肾小管刷状缘肾小管刷状缘（-GT、AAP、LAP、ALP、-GLU）、）、溶菌体溶菌体（NAG、ACP、-葡萄糖醛酸苷酶）、葡萄糖醛酸苷酶）、胞浆胞浆（LDH）及线粒体及线粒体（AST）尿路及生殖系统的酶：尿路及生殖系统的酶：前列

18、腺前列腺（ACP、NAG）、）、精液精液（LDH、hyaluronic acid）、）、肿瘤细胞肿瘤细胞第十四页，共十九页。尿液酶测定时尿液标本的处理方法：尿液酶测定时尿液标本的处理方法：v尿液通常为弱酸性，且蛋白质浓度较低，不利于尿酶尿液通常为弱酸性，且蛋白质浓度较低，不利于尿酶活力的保存，因此必须活力的保存，因此必须(bx)及时测定和处理及时测定和处理。v大部分尿酶活性比血浆酶活性低，在测定时适当加大标大部分尿酶活性比血浆酶活性低，在测定时适当加大标本用量或延长酶作用时间。本用量或延长酶作用时间。v尿液中含有较高浓度的低分子物质，如尿素、尿酸、肌尿液中含有较高浓度的低分子物质，如尿素、尿酸

19、、肌酐、硫酸盐、磷酸盐等，他们可能是某些酶的抑制剂，因酐、硫酸盐、磷酸盐等，他们可能是某些酶的抑制剂，因此必须对尿液标本进行预处理：此必须对尿液标本进行预处理：超滤法、透析法、凝胶过超滤法、透析法、凝胶过滤法滤法第十五页，共十九页。1.N-乙酰乙酰-D-氨基氨基(nj)葡萄糖苷酶葡萄糖苷酶(N-acetyl-D-glucosaminidase,NAG）NAG是一种位于溶酶体内的酸性水解酶，存在于所有组是一种位于溶酶体内的酸性水解酶，存在于所有组织中，以前列腺和肾近球肾小管溶酶体含量最高。织中，以前列腺和肾近球肾小管溶酶体含量最高。临床应用：临床应用：各种肾脏疾病：急慢性肾功能不全、肾病综合症各

20、种肾脏疾病：急慢性肾功能不全、肾病综合症肾移植排斥反应：早期诊断肾移植排斥反应：早期诊断药物性肾损害：药物性肾损害：其他系统疾病：糖尿病肾病、高血压肾病其他系统疾病：糖尿病肾病、高血压肾病第十六页，共十九页。2.-葡萄糖苷酶（葡萄糖苷酶（-glucosdiase,-GLU）-GLU主要主要(zhyo)存在于存在于肾小管上皮细胞刷状缘，肾小管上皮细胞刷状缘，在血在血清中的含量极低，且分子量大（清中的含量极低，且分子量大（9万），不易通过肾小球，万），不易通过肾小球，因而尿中的因而尿中的-GLU主要来自肾小管上皮细胞。主要来自肾小管上皮细胞。测定：用麦芽糖做底物，经测定：用麦芽糖做底物，经-GLU

21、的水解作用生成葡萄的水解作用生成葡萄糖，再用葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖的生成率。糖，再用葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖的生成率。临床意义：临床意义：肾小管损伤的敏感指标肾小管损伤的敏感指标第十七页，共十九页。3.谷氨酰转移酶（谷氨酰转移酶（-glutamyl transferase，-GT）q-GT广泛存在于人体各组织中，以肾、肝、胰等组织含量广泛存在于人体各组织中，以肾、肝、胰等组织含量(hnling)最高。最高。q尿中尿中-GT浓度较高，原尿无需预先浓缩。浓度较高，原尿无需预先浓缩。q用用-谷氨酰对硝基苯胺做底物，测定游历的对硝基苯胺量。谷氨酰对硝基苯胺做底物，测定游历的对硝基苯胺量。q临床意义：临床意义：-GT常作为药物性肾损害的诊断指标。常作为药物性肾损害的诊断指标。-GT在急性肾炎、肾盂肾炎、肾结石时升高在急性肾炎、肾盂肾炎、肾结石时升高 -GT在慢性肾衰、肾癌时降低。在慢性肾衰、肾癌时降低。第十八页，共十九页。内容(nirng)总结尿液蛋白质检查。蛋白电泳时可在2至球蛋白区带间的某个部位出现M区带。免疫扩散实验：用特异的L链血清进行免疫扩散实验。卟啉尿是指尿中排出过多的卟啉或者其前体。其他系统疾病：糖尿病肾病(shn bn)、高血压肾病(shn bn)。用-谷氨酰对硝基苯胺做底物，测定游历的对硝基苯胺量。-GT在慢性肾衰、肾癌时降低第十九页，共十九页。