病毒感染的诊断与防治ppt第26章立克次氏体和衣原体.ppt

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1、第26章立克次氏体和衣原体 第一节第一节 立克次体立克次体 对人致病的立克次体有五个属立克次体属、对人致病的立克次体有五个属立克次体属、柯克斯体属、东方体属、埃立克体属和巴柯克斯体属、东方体属、埃立克体属和巴通体属。通体属。共同特点共同特点大多是人畜共患病原体，引起人类发热和出大多是人畜共患病原体，引起人类发热和出疹性疾病；疹性疾病；以节肢动物为传播媒介或为储存宿主；以节肢动物为传播媒介或为储存宿主；大小介于细菌与病毒之间，光镜下呈多形态大小介于细菌与病毒之间，光镜下呈多形态性，主要为微，杆状或球杆状，革兰阴性；性，主要为微，杆状或球杆状，革兰阴性；除了少数外全是专性活细胞内寄生；除了少数外全

2、是专性活细胞内寄生；菌体内同时含有菌体内同时含有DNADNA和和 RNARNA两类核酸；两类核酸；以二分裂方式进行繁殖；以二分裂方式进行繁殖；对抗生素敏感。对抗生素敏感。一、斑疹伤寒立克次体(一一)临床意义临床意义 1普氏立克次体是流行性斑疹伤寒普氏立克次体是流行性斑疹伤寒(又称虱传又称虱传 斑疹伤寒斑疹伤寒)的病原体。的病原体。病人是惟一的传染源，体虱是主要传播媒介，病人是惟一的传染源，体虱是主要传播媒介，而非储存宿主。而非储存宿主。传播方式为虱传播方式为虱-人人-虱，体虱仅是传染媒介。虱，体虱仅是传染媒介。莫氏立克次体莫氏立克次体n地方性斑疹伤寒地方性斑疹伤寒(又称鼠型斑疹伤寒又称鼠型斑疹

3、伤寒)的病原的病原体。啮齿类动物是主体。啮齿类动物是主宿主，传播媒介是鼠宿主，传播媒介是鼠蚤或鼠虱。蚤或鼠虱。n鼠蚤叮咬人体时，常排粪于皮肤上，斑疹伤鼠蚤叮咬人体时，常排粪于皮肤上，斑疹伤寒立克次体从抓破的伤口进入人体。若有人寒立克次体从抓破的伤口进入人体。若有人虱寄生，可通过人虱为传播媒介，继发性地虱寄生，可通过人虱为传播媒介，继发性地在人群中传播。在人群中传播。致病物质致病物质n有两种，其一是内毒素，主要成分为脂多糖有两种，其一是内毒素，主要成分为脂多糖(LPS)；其二为磷脂酶其二为磷脂酶A,能损伤宿主细胞膜能损伤宿主细胞膜及溶解胞内吞噬体膜，以利于病原体穿入宿及溶解胞内吞噬体膜，以利于病

4、原体穿入宿主细胞并在其中生长。主细胞并在其中生长。n普氏和莫氏立克次体所致的斑疹伤寒症状相普氏和莫氏立克次体所致的斑疹伤寒症状相似，以高热、头痛、全身皮疹为主要特征。似，以高热、头痛、全身皮疹为主要特征。伴有神经系统、心血管系统等症状和实质性伴有神经系统、心血管系统等症状和实质性器官损伤。器官损伤。(二二)微生物特性微生物特性1.比细菌小，呈多形态性，在感染细胞内聚比细菌小，呈多形态性，在感染细胞内聚 集成团集成团,分布在胞质内分布在胞质内,Gimenez法染色后法染色后 呈红色，外表含有微荚膜结构。呈红色，外表含有微荚膜结构。2.必须在真核细胞内才能生长繁殖，培养时必须在真核细胞内才能生长繁

5、殖，培养时 需需要要C02。通通常常采采用用5-9日日龄龄鸡鸡胚胚作作卵卵黄黄囊囊接接种种，于于32-35孵孵育育413d内内死死亡亡，鸡鸡胚胚死死亡亡时时间间与与接接种种剂剂量量大大小小呈呈直直接接相相关关。普普氏氏和和莫莫氏氏立立克克次次体体能能在在多多种种单单层层细细胞胞上上生生长长繁殖。豚鼠可作立克次体的初代分离。繁殖。豚鼠可作立克次体的初代分离。3.有有群群特特异异性性和和种种特特异异性性两两种种抗抗原原。大大部部分分立立克克次次体体与与普普通通变变形形杆杆菌菌X菌菌株株的的菌菌体体耐耐热热多多糖糖抗抗原原有有共共同同的的抗抗原原性性，故故可可用用这这些些菌菌株株代代替替立立克克次次

6、体体抗抗原原进进行行凝凝集集反反应应去去检检测测抗抗体体，这这种种交交叉叉凝凝集集试试验验被被称称为为外外斐斐反反应，可供辅助诊断。应，可供辅助诊断。外斐反应外斐反应 立克次体病立克次体病 变形杆菌变形杆菌 OX19OX19变形杆菌变形杆菌 OX2OX2变形杆菌变形杆菌 OXkOXk流行性斑疹伤寒流行性斑疹伤寒+-地方性斑疹伤寒地方性斑疹伤寒+-斑点热斑点热+/+/+/+/+-恙虫病恙虫病-+腺热腺热-+(三三)微生物检验微生物检验1.1.标本采集标本采集(1)(1)病人血液标本：发热期均有立克次体血症，病人血液标本：发热期均有立克次体血症，在急性期较易检出立克次体。争取在用抗生在急性期较易检

7、出立克次体。争取在用抗生 素前采血，立即床侧接种。素前采血，立即床侧接种。(2)(2)活检或尸检材料：肺、肝、脾、淋巴结、心活检或尸检材料：肺、肝、脾、淋巴结、心 瓣膜等标本。瓣膜等标本。2.2.标本直接检查标本直接检查(1)免免疫疫荧荧光光检检测测 用用于于脏脏器器检检查查。制制备备标标本本片片薄薄而而均均匀匀，组组织织结结构构清清晰晰，固固定定后后用用荧荧光光抗抗体体染染色色,常常见见脾脾、肺肺及及心心瓣瓣膜膜中中有有立立克克次次体体，也可在肝、肾及皮疹活检组织中检出。也可在肝、肾及皮疹活检组织中检出。(2)核核酸酸检检测测 PCR敏敏感感性性高高，所所需需样样品品量量只只需需ELISA实

8、实验验的的15。以以编编码码17kD蛋蛋白白的的基基因因和和编编码码普普氏氏和和莫莫氏氏立立克克次次体体169kD蛋蛋白白的的基基因因作为扩增靶区。作为扩增靶区。n引引物物R17-1、-2在在65条条件件下下能能扩扩增增普普氏氏和和莫莫氏氏立立克克次次体体DNA。在在琼琼脂脂凝凝胶胶上上产产生生一一条条340bp的核酸带；的核酸带；n引引物物R169-1、-2仅仅能能扩扩增增普普氏氏立立克克次次体体DNA，产产生生一一条条432bp的的核核酸酸带带。两两种种引引物物同同时时使使用用，扩扩增增后后普普氏氏可可产产生生340bp和和432bp两两条条带带，而莫氏只产生而莫氏只产生340bp一条带。

9、一条带。n该该法法敏敏感感性性可可达达005ngDNA水水平平，重重复复性性好好，操操作作方方便便，对对两两型型立立克克次次体体早早期期、鉴鉴别别诊诊断断以以及及自自然然生生态态宿宿主主调调查查研研究究具具有有较较大大价价值。值。3 3分离培养分离培养(1)动物接种动物接种 选选用用健健康康雄雄性性豚豚鼠鼠接接种种以以便便观观察察阴阴囊囊肿肿胀胀现现象象。每每日日测测体体温温，至至40发发热热时时采采血血或或脏脏器器悬悬液液、接接种种鸡鸡胚胚卵卵黄黄囊囊或或细细胞胞培培养养以以分分离离立立克次体；克次体；感感染染莫莫氏氏立立克克次次体体豚豚鼠鼠在在发发热热12日日内内出出现现阴阴囊囊红红肿肿，

10、解解剖剖可可见见腹腹股股沟沟淋淋巴巴结结肿肿大大、充充血血、脾脾大大2-3倍倍，有有腹腹水水；有有阴阴囊囊反反应应者者，睾睾丸丸有有小小出出血血点点，鞘鞘膜膜充充血血并并有有浆浆液液性性渗渗出出物物等。鞘膜涂片可查到立克次体。等。鞘膜涂片可查到立克次体。(2)(2)鉴定鉴定n用用免免疫疫荧荧光光法法鉴鉴定定感感染染动动物物脏脏器器、鸡鸡胚胚卵卵黄黄囊囊、细细胞胞培培养养物物中中的的特特异异性性抗抗原原以以已已知知抗抗原原测测定定动动物物恢恢复复期期血血清清中中的的相相应应抗抗体体。必必要要时时用用补补体体结结合合试试验验、微微量量凝凝集集试试验验等等，作群和种的鉴定。作群和种的鉴定。(3)(3

11、)分离株繁殖及保存分离株繁殖及保存鸡胚卵黄囊培养鸡胚卵黄囊培养 收获卵黄囊，经涂片染收获卵黄囊，经涂片染色镜检色镜检,含立克次体较多而又未发现细菌含立克次体较多而又未发现细菌的卵黄囊膜，或将其作成适当浓度的悬的卵黄囊膜，或将其作成适当浓度的悬液置液置-70冰箱保存，或冰冻干燥保藏；冰箱保存，或冰冻干燥保藏；细胞培养：选鸡胚、成纤维、人羊膜、细胞培养：选鸡胚、成纤维、人羊膜、HeLa等细胞，接种培养、鉴定后将立克等细胞，接种培养、鉴定后将立克次体大量繁殖的感染细胞置次体大量繁殖的感染细胞置-70储存。储存。4 4抗体检测抗体检测立克次体病常用的血清学诊断方法除外斐立克次体病常用的血清学诊断方法除

12、外斐反应、间接免疫荧光反应、间接免疫荧光(IFA)试验、酶联免试验、酶联免疫吸附试验疫吸附试验(ELISA)外，还有补体结合外，还有补体结合(CF)试验、微量凝集试验、微量凝集(MA)试验、间接血凝试验、间接血凝(IHA)试验、胶乳凝集试验、胶乳凝集(LA)试验等试验等。(1)(1)外斐反应外斐反应除除Q热、立克次体痘及罗沙利马体感染为阴性热、立克次体痘及罗沙利马体感染为阴性外，其他为阳性。外，其他为阳性。患者患者OX凝集素上升较晚，在病程凝集素上升较晚，在病程2周左右方出周左右方出现阳性，病程中双份血清试验，若效价有现阳性，病程中双份血清试验，若效价有4倍倍增长，方有诊断意义。增长，方有诊断

13、意义。有些病例在病程中效价不见上升，约有些病例在病程中效价不见上升，约15的的经疫苗接种后感染斑疹伤寒的病例。有些经疫苗接种后感染斑疹伤寒的病例。有些轻症斑疹伤寒或某些发病严重者，其他血轻症斑疹伤寒或某些发病严重者，其他血清学试验阳性，但外斐反应可为阴性。清学试验阳性，但外斐反应可为阴性。斑点热病人外斐反应效价通常为斑点热病人外斐反应效价通常为OX19高于高于OX2，但也有但也有OX2较高者。若仅出现较高者。若仅出现OX2阳性，则对诊断斑点热有特殊意义。阳性，则对诊断斑点热有特殊意义。(2)IFA试验试验为为现现在在诊诊断断立立克克次次体体病病常常用用的的方方法法。用用已已知知立立克克次次体体

14、抗抗原原(感感染染鸡鸡胚胚卵卵黄黄囊囊或或细细胞胞培培养养悬悬液液)制制片片，以以低低稀稀释释度度的的病病人人血血清清初初筛筛，有有呈呈典典型型立立克克次次体体形形态态的的明明亮亮荧荧光光颗颗粒粒者者，判判为为阳阳性性。再再将将病病程程早早期期及及晚晚期期血血清清分分别别作作双双倍倍或或4 4倍倍稀稀释释以以测测效效价价，如如呈呈4 48 8倍倍增增长长者可明确诊断。者可明确诊断。(3)ELISAn检测检测IgMIgM抗体对早期诊断有价值。抗体对早期诊断有价值。n立立克克次次体体抗抗原原吸吸附附于于载载体体。泛泛影影葡葡胺胺梯梯度度离离心心纯纯化化抗抗原原为为优优，检检出出血血清清的的抗抗体体

15、效效价价高高，纸纸上上ELISAELISA测测定定抗抗体体，方方法法简简便便。将将感感染染卵卵黄黄囊囊悬悬液液加加于于玻玻片片(经经氯氯仿仿甲甲醇醇洗洗净净)上上，凉凉干干、固固定定，加加稀稀释释血血清清于于抗抗原原点点上上，每每张张玻玻片片上上包包括括阳阳性性和和阴阴性性对对照照，加加酶酶标标兔兔抗抗人人IgM/GIgM/G于于抗抗原原血血清清点点作作用用后后，将将浸浸透透新新鲜鲜配配制制的的底底物物无无灰灰滤滤纸纸覆覆盖盖在在玻玻片片上上约约4-64-6minmin，可可见见滤滤纸纸条条上上阳阳性性对对照照点点位位置置显显紫紫棕棕色色，取取下下滤滤纸纸条条(即即终终止止反反应应)，观观察察

16、是是否否显显色色，与与对对照照比比较较判判定定结果。此法简便，并可保存实验记录。结果。此法简便，并可保存实验记录。(4)CF试验试验 CF试验原来是立克次体病血清学诊断的试验原来是立克次体病血清学诊断的经典试验，虽然敏感性不如经典试验，虽然敏感性不如IFA和和 ELISA，但非常特异。一般在立克次体病发病一周内，但非常特异。一般在立克次体病发病一周内，血清中即有血清中即有CF抗体出现，以后逐渐上升，抗体出现，以后逐渐上升，至第至第3周达最高峰，然后逐渐降至较低的效周达最高峰，然后逐渐降至较低的效价，并可保持几年不消失，但也有在病后几价，并可保持几年不消失，但也有在病后几周即转阴性者。病人恢复期

17、血清与斑疹伤寒周即转阴性者。病人恢复期血清与斑疹伤寒群及斑点热群立克次体可溶性抗原试验的阳群及斑点热群立克次体可溶性抗原试验的阳性结果，只能说明该群立克次体的感染性结果，只能说明该群立克次体的感染。三、恙虫病立克次体三、恙虫病立克次体 又名东方立克次体是恙虫病的病原体，由恙又名东方立克次体是恙虫病的病原体，由恙螨叮咬侵入人体，对人体致病性很强，释放螨叮咬侵入人体，对人体致病性很强，释放的毒素样物质是主要致病因素，引起发热皮的毒素样物质是主要致病因素，引起发热皮疹全身中毒症状，以及全身淋巴结肿大及各疹全身中毒症状，以及全身淋巴结肿大及各组织器官的血管炎病变。虫咬处溃疡形成黑组织器官的血管炎病变。

18、虫咬处溃疡形成黑色焦痂，周围有红晕等为其特征。为自然疫色焦痂，周围有红晕等为其特征。为自然疫源性疾病。源性疾病。(一一)微生物特性微生物特性1具有多形性，但以短杆状为常见。具有多形性，但以短杆状为常见。G-,姬姆姬姆 萨染色呈紫红色萨染色呈紫红色,Gimenez染色呈暗红色，染色呈暗红色，背景为绿色。可以鉴别恙虫病立克次体和背景为绿色。可以鉴别恙虫病立克次体和 其他立克次体。分布在细胞质内，密集于其他立克次体。分布在细胞质内，密集于 细胞核旁。细胞内寄生细胞核旁。细胞内寄生。2培养特性培养特性(1)动动物物接接种种：小小鼠鼠最最敏敏感感，刮刮取取腹腹膜膜上上的的粘粘液液涂涂片片检检查查，可可见

19、见细细胞胞质质内内有有大大量量立立克克次次体体，尤尤以以腹腹膜膜上上皮皮细细胞胞内内多多见见，常常密密集集于细胞核旁。于细胞核旁。(2)细细胞胞培培养养：恙恙虫虫病病立立克克次次体体可可以以在在多多种种细细胞胞内内生生长长、繁繁殖殖，多多采采用用Vero、L929细细胞胞进进行行培培养养。细细胞胞感感染染需需要要适适宜宜的的温温度度和和吸吸附附时时间间，通通常常以以37吸吸附附1h，培培养养32为为宜宜，繁繁殖殖缓缓慢慢，用用Vero细细胞胞培培养养89d，在在细细胞胞质质内内生生长长繁繁殖殖，在在细细胞胞核核旁旁高高度度密密集，但不侵入细胞核。集，但不侵入细胞核。3 3抗原成分抗原成分n恙恙

20、虫虫病病立立克克次次体体具具有有耐耐热热性性多多糖糖抗抗原原和和特特异异性抗原。性抗原。n恙恙虫虫病病立立克克次次体体和和变变形形杆杆菌菌OXk株株有有共共同同的的抗抗原原成成分分，在在Weil-Felex反反应应中中，血血清清与与OX，抗原发生凝集而不与抗原发生凝集而不与OX19、OX2发生凝集。发生凝集。(二二)微生物检验微生物检验(1)抗抗原原检检测测：ELISA间间接接法法是是检检测测标标本本的的特特异异性抗原或抗体的最常用方法。性抗原或抗体的最常用方法。(2)PCR：可可检检出出20ng恙恙虫虫病病立立克克次次体体DNA；套套式式PCR法法可可检检出出200pg，是是目目前前最最为为

21、快快速速、特特异异、敏敏感感的的实实验验室室诊诊断断方方法法，可可用用于于急急性性期期患患者的早期诊断。者的早期诊断。依据依据56KD蛋白抗原基因或蛋白抗原基因或58KD蛋白抗原基因蛋白抗原基因序列选择引物，进行目的序列选择引物，进行目的 DNA 扩增，然后用扩增，然后用15琼脂糖电泳法检出特异性琼脂糖电泳法检出特异性DNA带。带。(3)分离培养分离培养 接接种种小小鼠鼠分分离离病病原原。将将标标本本接接种种腹腹腔腔O5ml，一一般般多多在在718天天死死亡亡，感感染染小小鼠鼠有有明明显显症症状状，濒濒死死前前解解剖剖，可可见见皮皮下下淋淋巴巴结结肿肿大大充充血血，脾脾肿肿大大，有有粘粘稠稠的

22、的腹腹腔腔渗渗出出液液，以以Giemsa染染色色镜镜检检，在在靠靠近近细细胞胞核核旁旁边边可可见见成成堆堆排排列列的的立立克克次次体体。也也可可接接种种Vero细细胞胞、L929细细胞胞进进行行立立克克次次体体分分离离培培养养。细细胞胞培培养养1015天天，取取细细胞胞涂涂片片，Giemsa染染色镜检。色镜检。(4)抗体检测抗体检测n外外斐斐试试验验：临临床床血血清清学学诊诊断断方方法法，血血清清抗抗体体OXk效效价价达达l：160以以上上有有意意义义，病病程程中中双双份份或或多多份份血血清清试试验验，若若效效价价有有4倍倍增增高高，有有诊诊断断意意义义。由由于于外外斐斐试试验验特特异异性性、

23、敏敏感感性性低低，容容易易造造成成误误诊诊或或漏漏诊诊，不不应应作作为为恙恙虫虫病的诊断方法。病的诊断方法。n免免疫疫荧荧光光试试验验：快快速速敏敏感感特特异异，可可分分别别检检测测患患者者血血清清中中的的抗抗恙恙虫虫病病立立克克次次体体lgG、IgM抗抗体体，效效价价在在1：80以以上上有有诊诊断断意意义义。双份血清有双份血清有4倍或以上增长可以确诊。倍或以上增长可以确诊。四、贝纳柯克斯体四、贝纳柯克斯体n又又称称Q Q热热立立克克次次体体，是是引引起起Q Q热热(疑疑问问热热，指指最最初不明病因的发热初不明病因的发热)的病原体。的病原体。n传传染染源源主主要要是是受受染染的的牛牛、羊羊等等

24、家家畜畜，以以蜱蜱为为传传播播媒媒介介，对对人人感感染染力力特特别别强强，通通过过接接触触、呼吸道、消化道等途径使人及动物发生感染。呼吸道、消化道等途径使人及动物发生感染。nQ Q热热除除有有发发热热、头头痛痛及及肌肌肉肉痛痛外外，以以出出现现肺肺炎炎和肝炎为其临床特征。和肝炎为其临床特征。n慢性慢性Q Q热主要表现为心内膜炎。热主要表现为心内膜炎。（一）微生物特性（一）微生物特性1.形形态态与与结结构构 个个体体较较小小，多多为为短短杆杆状状，常常排排列列成成对对，Gimenez法法染染色色呈呈红红色色，背背景景呈呈绿绿色色，用用Giemsa法法染染色色呈呈紫紫红红色色。有有荚荚膜膜，在在鸡

25、鸡胚胚卵黄囊或细胞培养内均可有芽胞形成。卵黄囊或细胞培养内均可有芽胞形成。2.基基因因组组与与抗抗原原成成分分 基基因因组组分分子子量量为为大大肠肠杆杆菌菌的的13；编编码码代代谢谢酶酶、表表面面抗抗原原与与毒毒力力因因子子有有关关基基因因。有有两两相相抗抗原原，相相为为光光滑滑型型LPS，相为粗糙型短链相为粗糙型短链LPS。3培养特点培养特点鸡胚是培养的极好宿主。一般经培养鸡胚是培养的极好宿主。一般经培养1012d，1g卵黄囊膜常可获得约卵黄囊膜常可获得约1000g纯净纯净的立克次体能在多种人和动物的原代或传的立克次体能在多种人和动物的原代或传代细胞内繁殖。一般不引起明显的细胞病代细胞内繁殖

26、。一般不引起明显的细胞病变。变。4抵抗力抵抗力n贝纳柯克斯体抵抗力强，贝纳柯克斯体抵抗力强，70-90加热加热3060min尚难杀死。尚难杀死。n1%福尔马林作用福尔马林作用24小时也不能完全灭活。小时也不能完全灭活。对氯霉素和四环素类抗生素敏感。对氯霉素和四环素类抗生素敏感。(二二)微生物检验微生物检验(1)标本直接抗原检测：免疫荧光法进行检测。标本直接抗原检测：免疫荧光法进行检测。(2)标标本本直直接接核核酸酸检检查查：按按16SrRNA非非保保守守区区序序列列合合成成寡寡核核苷苷酸酸探探针针，能能检检出出5pgrRNA，如如将将非非保保守守区区特特异异性性扩扩增增，其其敏敏感感性性可可达

27、检出达检出110个贝纳柯克斯体的水平。个贝纳柯克斯体的水平。用用贝贝纳纳柯柯克克斯斯休休质质粒粒DNA片片段段制制备备的的探探针针，不不仅仅能能快快速速检检出出病病原原体体，且且能能鉴鉴别别含含QpHI或或QpRS质质粒粒分分离离株株，与与呼呼吸吸道道感感染染病病原原体体DNA无无交交叉叉反反应应。试试验验仅仅需需812h即即可可得得到结果。到结果。3分离培养分离培养n病原体分离只是在该地区尚未证明有病原体分离只是在该地区尚未证明有Q热存在，病情特别严重有必要。将标本热存在，病情特别严重有必要。将标本接种于豚鼠或培养细胞，观察其发病与接种于豚鼠或培养细胞，观察其发病与否或生长情况，经形态学、血

28、清免疫学否或生长情况，经形态学、血清免疫学等鉴定后作出结论等鉴定后作出结论。4抗体检测抗体检测 用间接免疫荧光试验、用间接免疫荧光试验、ELISA和和CF试验。试验。CF试验中抗原相的选择对结果影响极大，对试验中抗原相的选择对结果影响极大，对现症诊断主要看现症诊断主要看相抗体逐渐上升，若相抗体逐渐上升，若相相抗体保持较高水平，则往往说明慢性感染或抗体保持较高水平，则往往说明慢性感染或隐性感染。隐性感染。五、埃立克体五、埃立克体(一一)临床意义为埃立克体病病原体。临床意义为埃立克体病病原体。1.人腺热埃立克体病人腺热埃立克体病 可能由蜱传播，也可能由蜱传播，也 可能由于摄食生鱼引起。临床表现为发

29、可能由于摄食生鱼引起。临床表现为发 热头痛、淋巴细胞数增加，并出现非典热头痛、淋巴细胞数增加，并出现非典 型淋巴细胞。型淋巴细胞。2.人单核细胞埃立克体人单核细胞埃立克体(HME)病，主要侵病，主要侵 染人的单核细胞和巨噬细胞。传播媒介染人的单核细胞和巨噬细胞。传播媒介 为蜱。为蜱。3人粒细胞埃立克体人粒细胞埃立克体(HGE)病病 主要侵犯人主要侵犯人 粒细胞。硬蜱是传播媒介。也是莱姆病粒细胞。硬蜱是传播媒介。也是莱姆病 病原体的携带和传播者，故与莱姆病的病原体的携带和传播者，故与莱姆病的 相重叠。相重叠。（二）微生物特性二）微生物特性1为为G-小球菌，呈多形性，小球菌，呈多形性，Romano

30、ws染染 色呈兰色和紫色。吞噬细胞以内吞的方色呈兰色和紫色。吞噬细胞以内吞的方 式将埃立克体摄入胞内，在胞质内以二式将埃立克体摄入胞内，在胞质内以二 分裂的方式繁殖，形成包涵体。称为桑分裂的方式繁殖，形成包涵体。称为桑 椹体。椹体。2基因组基因组 埃立克体的埃立克体的16SrRNA基因极保守，基因极保守，但但5端的端的50100碱基为高变区，适合设计碱基为高变区，适合设计 PCR引物或核酸杂交探针。人粒细胞埃立引物或核酸杂交探针。人粒细胞埃立 克体的外膜蛋白克体的外膜蛋白44kDa蛋白被克隆，可用蛋白被克隆，可用 作探针。作探针。3抗原成分抗原成分 在埃立克体属内的各种埃立克在埃立克体属内的各

31、种埃立克 体均可有血清学交叉反应。体均可有血清学交叉反应。(三三)微生物检验微生物检验 1.标本直接显微镜检查标本直接显微镜检查 采采集集病病人人的的外外周周血血制制备备血血片片，经经Giemsa或或Wright染染色色，在在光光镜镜下下发发现现粒粒细细胞胞及及单单核核细细胞胞质质或或血血小小板板内内有有圆圆形形、深深紫紫色色的的桑桑椹椹体体，可可作作为为急急性性期期埃埃立立克克体体病病的的一种简便和有效的辅助诊断方法。一种简便和有效的辅助诊断方法。2.核酸检测核酸检测 PCR是最有效的埃立克体病的病原学诊断方是最有效的埃立克体病的病原学诊断方法，可用于埃立克体病的早期诊断。大约法，可用于埃立

32、克体病的早期诊断。大约80-87HME和和43-75的的HGE患者的血标患者的血标本被本被PCR检测为阳性。检测为阳性。特异性几乎为特异性几乎为100，主要依赖引物的特异性。，主要依赖引物的特异性。可用可用16SrRNA基因设计引物或做基因探针。基因设计引物或做基因探针。有极高的敏感性，感染后数天就可检出阳性有极高的敏感性，感染后数天就可检出阳性结果。结果。3.细胞培养细胞培养n查查菲菲埃埃立立克克体体可可用用犬犬巨巨噬噬细细胞胞系系(DH82)，腺腺热热埃埃立立克克体体用用小小鼠鼠的的巨巨噬噬细细胞胞系系(P388D1)，人人粒粒细细胞胞埃埃立立克克体体则则用用人人的的粒粒细细胞胞白白血血病

33、病细细胞系胞系(HL-60)作它们的体外培养的宿主细胞。作它们的体外培养的宿主细胞。n将将3ml抗抗凝凝血血的的白白细细胞胞层层，接接种种细细胞胞单单层层，置置 37的的5C02孵孵育育箱箱中中培培养养，每每隔隔3-4天天换换一一次次细细胞胞维维持持液液，并并刮刮少少许许细细胞胞涂涂片片，用用Giemsa染色，在光镜下检查埃立克体包涵体。染色，在光镜下检查埃立克体包涵体。4.小鼠接种小鼠接种 从蜱体内分离埃立克体让蜱叮咬小鼠和吸血。从蜱体内分离埃立克体让蜱叮咬小鼠和吸血。或将病人或动物的抗凝血的白细胞注入小鼠或将病人或动物的抗凝血的白细胞注入小鼠腹腔。观察小鼠发病。腹腔。观察小鼠发病。定时采小

34、鼠血作涂片染色、定时采小鼠血作涂片染色、IFA、PCR等证明等证明小鼠被埃立克体感染，用腹腔液涂片染色镜小鼠被埃立克体感染，用腹腔液涂片染色镜检包涵体。检包涵体。5.抗体检测抗体检测(1)间接免疫荧光间接免疫荧光(1FA)：将感染血清作倍比稀释，加入抗原孔内，将感染血清作倍比稀释，加入抗原孔内，置湿盒置湿盒37孵育孵育lh；玻片冲洗后，用玻片冲洗后，用 Evans蓝作背景染色，然后每孔加一滴固蓝作背景染色，然后每孔加一滴固 定液，加盖玻片，在荧光显微镜下检查感定液，加盖玻片，在荧光显微镜下检查感 染细胞内的带荧光的包涵体，通常血清中染细胞内的带荧光的包涵体，通常血清中 抗体滴度抗体滴度 1：2

35、0为阳性。若获双份血清效为阳性。若获双份血清效 价增高价增高4倍以上即可明确诊断。倍以上即可明确诊断。(2)(2)免疫印迹免疫印迹 采采用用免免疫疫印印迹迹检检测测埃埃立立克克体体病病患患者者血血清清 中中抗抗埃埃立立克克体体主主要要抗抗原原组组分分的的抗抗体体，可可 以以改改善善血血清清学学检检测测的的特特异异性性。经经免免疫疫印印 迹迹分分析析发发现现H HM ME E患患者者血血清清中中含含有有抗抗查查菲菲 埃埃立立克克体体的的4 44 4k kD Da a抗抗原原组组分分的的I Ig gG G抗抗体体。但不能用于埃立克体病的早期诊断。但不能用于埃立克体病的早期诊断。六、汉赛巴通体六、汉

36、赛巴通体 n引引起起杆杆菌菌性性血血管管瘤瘤杆杆菌菌性性紫紫癜癜(BAP)和和猫猫抓抓病病(CSD)的的病病原原体体。常常在在免免疫疫缺缺陷陷病病毒毒(HIV)感感染染者者发发生生，也也感感染染有有免免疫疫潜潜能能的的人人群群，与与接接触触猫猫有有关关。为为G-营营养养要要求求苛刻的需氧杆菌，为兼性胞内寄生菌。苛刻的需氧杆菌，为兼性胞内寄生菌。n猫猫抓抓病病有有与与猫猫接接触触史史，抓抓咬咬部部位位形形成成丘丘疹疹脓脓疱疱，继继而而出出现现淋淋巴巴结结肿肿大大，约约10病病例例有有肉肉芽芽肿肿性性结结膜膜炎炎、骨骨质质溶溶解解、肺肺炎及中枢神经系统损害等。炎及中枢神经系统损害等。杆菌性血管瘤杆

37、菌性血管瘤-杆菌性紫癜杆菌性紫癜n常常在在免免疫疫低低下下者者发发生生。与与猫猫抓抓伤伤咬咬伤伤有有关关，主主要要表表现现为为皮皮肤肤损损害害和和内内脏脏发发生生紫紫癜癜。在在病病变变处处能能发发现现杆杆菌菌状状小小体体。开开始始皮皮肤肤出出现现红丘疹，偶有溃疡。皮下出现肉色结节。红丘疹，偶有溃疡。皮下出现肉色结节。n杆杆菌菌性性血血管管瘤瘤可可发发生生在在任任何何实实质质性性器器官官，很很难难与与分分枝枝杆杆菌菌和和真真菌菌感感染染或或恶恶性性肿肿瘤瘤鉴鉴别。别。(一一)微生物特性微生物特性1为为G-弯曲的杆状小体，常呈多形性；初弯曲的杆状小体，常呈多形性；初 分离有菌毛，发现有噬菌体。分离

38、有菌毛，发现有噬菌体。2培养特性培养特性 营养要求苛刻的需氧杆菌，用营养要求苛刻的需氧杆菌，用 含新鲜血的琼脂或脑心浸液于含新鲜血的琼脂或脑心浸液于355 C02环境下培养环境下培养25周才长出灰色凸起周才长出灰色凸起 并嵌入琼脂内的菌落。并嵌入琼脂内的菌落。3基因组基因组 约为约为2005kb。已经测序的基因已经测序的基因 有有16SrRNA和和 glt A基因序列包括基因序列包括1293 核苷酸，始于核苷酸，始于ATG起始密码子，终于起始密码子，终于 两两TAA终止密码子。终止密码子。(二二)微生物检验微生物检验1.标本染色直接检查标本染色直接检查 活检病理标本和淋巴结活检用活检病理标本和

39、淋巴结活检用Warthin-Starry染色能查见多形性菌体。染色能查见多形性菌体。2.核酸检测核酸检测 依依16S rRNA或或gltA基因设计引物，对临床标基因设计引物，对临床标 本作本作 PCR，其扩增产物经序列测定或用特异其扩增产物经序列测定或用特异 性性DNA探针鉴定，可直接作出病原诊断。探针鉴定，可直接作出病原诊断。3.分离培养分离培养可将血液标本先经溶血和离心处理，待长出可将血液标本先经溶血和离心处理，待长出菌落后作生化反应，分析其细胞脂肪酸和菌落后作生化反应，分析其细胞脂肪酸和16SrRNA序列等加以鉴定。于培养序列等加以鉴定。于培养1周仍不见生周仍不见生长，应继续培养至长，应

40、继续培养至4周。周。4.抗体检测抗体检测(1)IFA：双双份份血血清清滴滴度度呈呈4倍倍增增长长为为阳阳性性；单单份份 血清滴度至少达血清滴度至少达1：64方可考虑诊断。方可考虑诊断。(2)ELISA：用用 17KD重组体抗原作重组体抗原作 ELISA检测检测 人血清抗体人血清抗体IgG，有助于诊断。有助于诊断。(3)免疫印迹试验：可显示免疫印迹试验：可显示 485kDa 蛋白质组蛋白质组 分，而非巴通体感染病人血清则不能与此蛋分，而非巴通体感染病人血清则不能与此蛋 白组分反应，以此作为确证试验。白组分反应，以此作为确证试验。第二节 衣 原 体 n是一类专性细胞内寄生、有独特发育周是一类专性细

41、胞内寄生、有独特发育周期、能通过细菌滤器的原核细胞型微生期、能通过细菌滤器的原核细胞型微生物。归属于广义的细菌范畴。物。归属于广义的细菌范畴。n衣原体科包括沙眼衣原体、肺炎衣原体、衣原体科包括沙眼衣原体、肺炎衣原体、鹦鹉热衣原体和家畜衣原体等四种。鹦鹉热衣原体和家畜衣原体等四种。一、沙眼衣原体一、沙眼衣原体n不仅可致眼部感染，而且可引起生殖泌尿系不仅可致眼部感染，而且可引起生殖泌尿系统感染、性病淋巴肉芽肿以及其他器官疾病。统感染、性病淋巴肉芽肿以及其他器官疾病。n近年沙眼衣原体的感染率和危害性已超过淋近年沙眼衣原体的感染率和危害性已超过淋球菌而居性传播疾病之首，因而日益受到医球菌而居性传播疾病

42、之首，因而日益受到医学界的重视。学界的重视。n沙眼衣原体有沙眼生物变种、性病淋巴肉芽沙眼衣原体有沙眼生物变种、性病淋巴肉芽肿生物变种（肿生物变种（LGV）和鼠生物变种等和鼠生物变种等3个生个生物变种。物变种。1沙眼亚种沙眼亚种(1)沙眼：沙眼：通过眼通过眼-手手-眼途径直接或间接密切接触传眼途径直接或间接密切接触传 播。由播。由A、B、Ba和和C血清型引起。结膜引血清型引起。结膜引 起局部炎症。有滤泡增生。后期出现瘢痕起局部炎症。有滤泡增生。后期出现瘢痕 及角膜血管翳，影响视力。及角膜血管翳，影响视力。(2)(2)包涵体结膜炎：包涵体结膜炎：由由B B、BaBa、D D、DaDa等血清型引起。

43、婴儿通过等血清型引起。婴儿通过 产道感染，引起滤泡性结膜炎，不出现角产道感染，引起滤泡性结膜炎，不出现角 膜血管翳。膜血管翳。(3)(3)泌尿生殖道感染：泌尿生殖道感染：由由D-KD-K血清型引起。在性接触传播引起的血清型引起。在性接触传播引起的 非淋菌性泌尿生殖道感染（非淋菌性泌尿生殖道感染（50506060）。）。易发展为持续感染或无症状携带者。易发展为持续感染或无症状携带者。2.2.性病淋巴肉芽肿亚种，由性病淋巴肉芽肿亚种，由L L血清型引起血清型引起性病淋巴肉芽肿。侵犯腹股沟淋巴结，性病淋巴肉芽肿。侵犯腹股沟淋巴结，引起化脓性淋巴结炎和慢性淋巴肉芽肿。引起化脓性淋巴结炎和慢性淋巴肉芽肿

44、。3.3.鼠生物变种为鼠间传播，不侵犯人，与鼠生物变种为鼠间传播，不侵犯人，与鼠肺炎有关。鼠肺炎有关。微生物特性微生物特性1发育周期与形态染色发育周期与形态染色 衣原体具有特殊的发衣原体具有特殊的发育周期。育周期。原体是细胞外存在形式，卵圆形，原体是细胞外存在形式，卵圆形，有胞壁和拟核有胞壁和拟核,是发育成熟的衣原体，具有高是发育成熟的衣原体，具有高度感染性，能吸附于易感细胞特异受体，增度感染性，能吸附于易感细胞特异受体，增大形成网状体；大形成网状体；网状体或称始体，圆形，网状体或称始体，圆形，二分裂增殖为繁殖型，无感染性。于感染二分裂增殖为繁殖型，无感染性。于感染24h后浓缩形成原体，最后细

45、胞破裂释放原体，后浓缩形成原体，最后细胞破裂释放原体，再感染其他细胞，每个发育周期约需再感染其他细胞，每个发育周期约需4872h。抗原结构抗原结构复杂，有属、种、型等特异性抗原。复杂，有属、种、型等特异性抗原。(1)属特异性抗原：为胞壁属特异性抗原：为胞壁LPS，属特异性补属特异性补 体结合抗原，应用于血清学诊断。体结合抗原，应用于血清学诊断。(2)种特异性抗原：位于主要外膜蛋白种特异性抗原：位于主要外膜蛋白 （MOMP）上，可用补体结合试验和中和上，可用补体结合试验和中和 试验检测。试验检测。(3)型特异性抗原：也位于型特异性抗原：也位于MOMP上，用单上，用单 克隆抗体作微量免疫荧光试验能

46、识别沙眼克隆抗体作微量免疫荧光试验能识别沙眼 体的体的18个型别。个型别。培养特性培养特性n沙眼衣原体专性活细胞内寄生，用沙眼衣原体专性活细胞内寄生，用68d龄龄鸡胚卵黄囊及各种传代细肋培养。一般培鸡胚卵黄囊及各种传代细肋培养。一般培养养4872h后可在细胞内查到包涵体及原体后可在细胞内查到包涵体及原体和始体颗粒。和始体颗粒。n近近年年多多采采用用细细胞胞培培养养衣衣原原体体，常常用用的的细细胞胞株为株为Hela-299和和McCoy。抵抗力抵抗力n沙眼衣原体感染材料在沙眼衣原体感染材料在37条件下，经条件下，经48h左右即失去活力，左右即失去活力，566 min灭活。灭活。-70可保存数年，

47、冷冻干燥可保存可保存数年，冷冻干燥可保存30年以上仍年以上仍有活性。有活性。O.1甲醛或甲醛或O.5石炭酸溶液石炭酸溶液24h杀死沙眼衣原体，杀死沙眼衣原体，2来苏仅需来苏仅需5min。n红霉素、四环素、强力霉素或青霉素对衣红霉素、四环素、强力霉素或青霉素对衣原体有抑制作用。原体有抑制作用。沙沙眼眼和和包包涵涵体体结结膜膜炎炎病病人人，用用拭拭子子在在结结膜膜上上穹穹窿窿涂涂擦擦或或取取结结膜膜刮刮片片。性性病病淋淋巴巴肉肉芽芽肿肿：采采淋淋巴巴结结脓脓汁汁，也也可可取取直直肠肠拭拭子子或或活活检检材材料料送检。送检。用用光光学学显显微微镜镜观观察察包包涵涵体体有有诊诊断断意意义义，特特别别在

48、在眼眼结结膜膜、尿尿道道及及子子宫宫颈颈上上皮皮细细胞胞内内发发现现典型包涵体更有沙眼衣原体感染的参考。典型包涵体更有沙眼衣原体感染的参考。免疫学方法免疫学方法1)免免疫疫荧荧光光检检查查：用用荧荧光光抗抗体体检检测测上上皮皮细细胞胞内内衣衣原原体体抗抗原原。标标记记抗抗衣衣原原体体LPS抗抗体体，可可与与所所有有衣衣原原体体反反应应；而而抗抗MOMP抗抗体体有有种种、型型特特异异性性。可可在在1h内内即即作作出出诊诊断断并并可可分型。分型。2)酶免疫检测：能在数小时内检测出衣原体酶免疫检测：能在数小时内检测出衣原体可溶性抗原，并适用于同时检测大量标本。可溶性抗原，并适用于同时检测大量标本。核

49、酸检测核酸检测1)核核酸酸杂杂交交：用用125I标标记记的的衣衣原原体体rDNA探探针针检检测测宫宫颈颈标标本本的的敏敏感感性性和和特特异异性性，与与培培养养相相比比分别为分别为82.8和和99.4。2)PCR：具有高度敏感性和特异性。一般按沙具有高度敏感性和特异性。一般按沙眼衣原体眼衣原体75kb质粒、质粒、MOMP序列及序列及16SrRNA基因序列设计引物。基因序列设计引物。分离培养分离培养n将将标标本本拭拭子子，用用含含抗抗生生素素的的稀稀释释液液制制成成10-20悬悬液液。分分离离的的细细胞胞有有McCoy、HeLa-229细胞等。置细胞等。置5CO2下培养。下培养。n初初代代分分离离

50、培培养养72-96h后后传传代代或或盲盲传传。有有症症状状病病人人90标标本本第第1代代即即可可见见包包涵涵体体，而而无无症症状病人需传代后才得到阳性。状病人需传代后才得到阳性。n敏敏感感性性为为80-90，特特异异性性100，是是目目前前确确诊诊最最可可靠靠的的方方法法，而而且且是是评评价价实实验验室室诊诊断断法的标准。法的标准。鸡胚培养鸡胚培养n有细菌污染的临床标本加适当的抗生素有细菌污染的临床标本加适当的抗生素(如链霉素、庆大霉素和制霉菌素等如链霉素、庆大霉素和制霉菌素等)肉肉汤，在室温中作用汤，在室温中作用lh后，接种后，接种3-4只孵育只孵育7天的鸡胚卵黄囊，天的鸡胚卵黄囊，35孵育