动物实验基础知识系列.pdf

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1、动物实验基础知识系列之一：剂量换算关于剂量换算的问题最近不少战友询问关于不同实验动物之间或者实验动物与人之间的剂量如何作“等效”换算的问题。这个问题对学习药理的战友来讲，可能是非常熟悉了。但对于非药理专业但又需做药理实验的战友来说，仍然是令人困扰的问题。下面我们分以下几点来探讨这个问题.第一、等效剂量系数折算法换算第二、体表面积法换算第三、系数折算法与体表面积法的比较第四、系数折算法的相对误差第五、小孩与成人的剂量换算第六、少常用实验动物剂量间的换算第七、不同给药途径间的剂量换算第八、LD50与药效学剂量间的换算下面我来简单说一下这个问题。我们在实验中估算一种药物或化合物的使用剂量的时候，差不

2、多是来源于两条途径：一是查文献，参考别人使用的剂量。有时有现成的，可直接用。有时没有我们所用动物的剂量，但有其它实验动物的。也有的是有临床用量的，但没有实验动物的。这样，我们就得进行换算。这是我们今天要谈的这种方法。另一种方法就是根据自己或文献上有关急性毒性的数据来进行估算，以期采用合适的剂量。一般参考数据是LD50。至于该选择LD50的多少分之一来作为参考剂量，众说纷纭。这个我们再另题讨论。下面我来说一说用第一种方法进行如何换算。目前我们大多数人用的方法，是参考徐叔云教授主编的 药理实验方法学。在其附录中有一个表，列出了人和动物间按体表面积折算的等效剂量比值。这个表，几乎被药理专业的人们奉为

3、经典，一直在科研中沿用。表如下所示：附表11-8人和动物间按体表面物f算的等疫眼比值小限(20g)大依(200g)豚曜(400)(14电猫(2 010.2时，函数丫2 在 Y1的下方。如下图所示：我们知道，一般用于实验的大鼠，其体重大多在150 350g之间。常常选用的是180 220g的大鼠。如下图矩形框所示。.5.OS。.5。.53322fL&8=LLSX;0.：03 O.1 0.SX Axis Title下面我们来计算误差。这个误差应为相对误差。令：按折算系数计算的剂量=人按实际体表面积计算的剂量=B相 对 误 差=(A-B)/Bx100%=A/B-1很显然，这个相对误差是有正负的。当

4、X0.2时，误差为正。因 A=Y1=6.3X,B=Y2=3.66(X)2/3这样，我们就可以以X 为自变量，以相对误差为因变量，再构筑一个函数丫3。Y 3=6.3X/3.66(X)2/3-1=1.72(X)1/3-1现在我们得到了这样一个简单的函数关系式。有什么用呢？我们可以这个来估算按折算系数计算的剂量与实际相差多少。如果相差不大，我们认为是可以接爱的。从图上我们可以直观地看出，当大鼠体重在200300g时，误差不到20%.在 200g以下，是负的误差。体 重(k g)相对误差0.1-0.2016467210.11-0.1758757850.12-0.1516230460.13-0.1286

5、829130.14-0.1068910140.15-0.0861136310.16-0.066240340.17-0.047178780.18-0.0288508180.19-0.0111897020.2 0.0058621020.21 0.0223545760.22 0.0383314470.23 0.0538312160.24 0.0688879820.25 0.0835321030.26 0.0977907390.27 0.11168830.28 0.1252468110.29 0.1384862230.3 0.1514246740.31 0.1640787060.32 0.176463

6、4510.33 0.1885927960.34 0.2004795120.35 0.2121353820.36 0.2235712970.37 0.2347973490.38 0.2458229080.39 0.2566566950.4 0.2673068360.41 0.2777809210.42 0.2880860510.43 0.2982288780.44 0.3082156470.45 0.3180522240.46 0.3277441320.47 0.3372965770.48 0.3467144690.49 0.3560024480.5 0.365164905从以上数据可知：当大鼠

7、体重在170 230g范围内，按折算系数计算剂量的相对误差在5%以内；当大鼠体重在150 260g范围内，按折算系数计算剂量的相对误差在10%以内；当大鼠体重在120 300g范围内，按折算系数计算剂量的相对误差在15%以内；当大鼠体重在100 340g范围内，按折算系数计算剂量的相对误差在20%以内。我们大多数情况下，大鼠在实验期间的体重在180 250g。这样，我们按折算系数算出来的剂量，其相对误差不会超过10%.基本上能接受。如果比较均匀，在 180 2 20 g,则相对误差在5%以内。这是完全可以接受的。至此，我们是否明白了？那就是说:药理实验方法学所编的等效剂量折算表，按体重给药，只

8、要大鼠体重相差不是很大，其误差是可以接受的。这个表的编制，就是为了方便广大科研工作者。如果大鼠体重达3 00 g 以上，尤其是达3 50 g 以上的时候，我们可以选择用实际体表面积来算。我们知道，要把体重转化成体表面积，要用到计算器。这在我们给药的时候带来很大的不便。那么，如果我们真的一定要很严谨，坚持要按实际体表面积给药的话，我们如何快速、简便地算出剂量呢？其实很简单，我们可以根据上述理论的结果来进行修正。凡体重在250 300g之间的，误差按10%计算。即：A B/B=0.1。我们可以直接按折算系数，算出A 的值。而 B才是我们需要的真正最接近实际体表面积的值。易知：B=0.9A.那就是说

9、，在这个体重范围内的大鼠，剂量打九折就行了。凡体重在300350g之间的,误差按15%来算。B=0.87A,剂量为八点七折。凡体重在350400g之间的,凡体重在400450g之间的,凡体重在450 500g之间的,误差按20%来算。B=0.83A误差按25%来算。B=0.8A误差按30%来算。B=0.77A这只是理论推算，除极少数情况外，实际体重太大的恐怕不能用于实验。此前，不少战友对于剂量到底是按体重算还是按体表面积算，是有过一番争论的。在此，当我们了解了其中的相对误差后，就会有选择依据了。我们可以根据上面提到的误差，权衡一下用哪一种方法。除了这些误差之外，我们在实验中常有不少人为误差。给

10、药的剂量常会因为人为的操作而出现偏差。而那样的偏差达10%我想是很常见的。而我们这个折算系数公式算出来的剂量误差在15%以内的话，是不足为虑的。因此，在说了这么多之后，我想说的是：不要把简单的事情弄复杂。按折算系数算出来，剂量是八九不离十的。按照前面我所编制的简表，大家都可以非常方便的算出剂量来。也就不必经常来论坛里问剂量了咯 多一句很笨笨的话：有人会问，那我要算大、小鼠之间的剂量比呢，要算大鼠和豚鼠的呢？在鼠和兔的呢？这就很简单了。我们知道它们之间与人的剂量比，相比一下就知道它们之间的比了。至此，我们对于这个折算系数换算剂量的方法基本解析完全。附：为了这一个小小的剂量的问题，花大量的篇幅来讲

11、，其实目的只有一个：就是论证 药理实验方法学上那个等效剂量折算表的权威性。按此表来计算，结果不会差到哪里去。而如果一定要用实际体表面积来算，一则相差无几，二则繁琐，令人不胜其烦。看了以上的论述种种，您是否已有了上述感受呢？现在，您就可以放心地用我编的那个简表了。很简单的几个数字：小鼠：9.1 倍 大鼠：6.3 倍 豚鼠：5.42倍兔：3.2 7 倍 猫：2.73倍 猴：1.05倍 狗：1.87倍。欢迎大家多多探讨！本人意见仅供参考。又附：在此对那个 药理实验方法学中的折算关系表再提一点自己的看法。与大家共商榷。我觉得，此表中，人的体重设为70kg,是有点不妥的。我们国人的平均体重是否能达 到7

12、0kg?难道我们都能吃得这么好？这恐怕不是太合理。如果设为60kg或55kg,则能为大多数人接受。这样一来，这个表就得进行修正。如果为60kg,则人的体表面积为1.55m2左右。那么，这样一来，折算系数表的中数字，全部要修正。最后一行的数字要乘以1.72/1.55=1.11而表最右上端的人的体重改为60kg.如此一来，我所编的那个简表就要修正了。按人体重60kg计算：这样，计算各种实验动物与人的剂量的倍数时就是这样了：实验动物用剂量=人的剂量*6 0*1.1 1*折算系数/动物体重.而原有的计算方法为：实验动物用剂量=人的剂量*7 0*折算系数/动物体重。这样，相当于简表中的数字都要乘以60*

13、1.11/70=0.95结果如下：小鼠：8.65倍 大鼠：5.98倍 豚鼠：5.15倍兔：3.1 1倍 猫:2.59倍 猴：0.998倍 狗：1.78倍。同理，按人体重55kg计算：简表中数字乘以55*1.175/70=0.92小鼠：8.37倍 大鼠：5.80倍 豚鼠：4.82倍兔：3.01倍 猫：2.51倍 猴：0.97倍 狗：1.72倍。同理，按人体重50kg计算，简表中数字乘以50*1.25/70=0.89小鼠：8.1倍 大鼠：5.61倍 豚鼠：4.82倍兔：2.91倍 猫：2.43倍 猴：0.93倍 狗：1.66倍此结果与大家共探讨。如有不同看法，请与我交流。说完了实验动物的，我们下面

14、来谈谈人的。毕竟，临床才是最重要的。我们知道，老人和小孩的用药剂量与成人通常是不一样的。目前，我们对于成人的剂量常常是没有考虑体表面积的。无论高矮、无论胖瘦，一律是用XX mg/天 这样的剂量。从临床应用来说，是不妥的。但是，对药品生产厂家来说，他们也只能如此。他们在说明书所说的剂量，在大多数人通常的剂量。当然，成人自己或医生可以根据疗效调整用药剂量。那么小孩的剂量该如何来算呢？实际上，仍然是沿袭了体表面积的折算法。成人体重一般按70kg算，体表面积一般按1.72m2算。下面介绍常用方法：1按体重计算：在成人体重70kg计，小儿剂量=小儿体重(Kg)/70*成人剂量2 按体表面积算：小儿剂量=

15、小儿体表面积/成人体表面积*成人剂量成人体表面积一般按1.72m2来算。按经验公式：小儿体表面积=(4*体 重(kg)+7)/9 0+体重例如：小孩重8 k g,折 算 剂 量=(4*8 +7/9 0)/I.72*成人剂量=0.231成人剂旦里此方亦非常简便，可操作性强。实际上，因为成人与小儿体型系数是一样的，所以其体表面积就是他们体重比的2/3 次方。那我们来验算一下上面这个例子：(8/7 0)2/3=0.233,可以看出，与上述结果相差无几。再算一例：小儿体重1 2 kg.经验法：4*1 2 +7/90+1 2/1。7 2=0.313直接法：(1 2/7 0)2/3=0.306可以看出，经

16、验法基本准确。另有计算体表面积的经验公式如下：体表面积(m2)=0.0061 x身 高(cm)+0.0128x体重(kg)-0.1529这是较为适合我国人的公式。一般用于计算成人。还有些其它方法，因计算稍微复杂，在临床上不实用。不再列出。在此，我推荐体表面积法。按经验公式计算体表面积，非常方便，笔算甚至口算可得出答案。当然，有计算器在身边的，也可直接把体重的比输入，求其2/3 次方也可很快得出。值得注意的是：以上所述是按照成人与小孩的等效剂量来刻板地计算的。如前所述，这种换算的前提是：小孩与成人对此药的敏感程度是一致的。但是，小孩由于发育不完全，尤其是肝脏这一承担主要药物代谢的器官发育不完全，

17、实际上小孩比成人要敏感。因此，在此剂量基础上还要酌减。本人认为，减至等效剂量的3/4 4/5 较为适宜。而且，儿童用药要“摸石头过河”，不可盲目用较大剂量。以上只是原则性的谈了一下小孩与成人剂量的换算。在临床上还要牵涉到配药的问题。那则是护士们拿手的了。在此不再讨论。5楼在做动物实验的时候，我们通常要用到不同的给药途径。而且，有时候我们想知道不同的给药途径之间的效果相差有多大？以什么样的比例给予能使不同给药途径之间的效果差不多呢？比如：某药，可静脉注射，也可以腹腔注射，我们想把静脉途径改为腹腔，到底给多少药比较合适呢？或者，把静脉的改成口服，又大概是多少呢？这些问题，许多实验书上并没有定论。大

18、多数是我们在实践中根据经验总结出来的。下面我们就来谈谈这个问题。说到这个问题，我们不得不谈到生物利用度。按照经典的定义，生物利用度是指药物吸收的速度和程度。吸收的速度反反与药物的达峰时间相关联。而吸收的程度与发挥作用的药量是相关的。而我们常常主要关注的是吸收程度。因而，生物利用度尸=药物吸收量/经静脉给药的量，这就是绝对生物利用度。我们谈到不同给药途径之间的换算，就是要用到绝对生物利用度。通常我们以静脉为参照，来比较其它途径给药能达到静脉的百分之几来衡量。关于不同途径给药的问题，在不少的药理及相关的书上，有如下的叙述：以口服量为100时，皮下注射量为30 5 0,肌肉注射量为20 3 0,静脉

19、注射量为25。这些是我们实验时所得到的一般的经验。从以上的数字我们可以看出，人们常常把口服生物利用度估计为25%左右。认为肌注相当于静脉的80%,皮下相当于静脉的50%。应该说，这样的估计是比较合理的。口服一般生物利用度可有30 4 0%,高者也可达70%,低者在15%以下。估计为25%,有点偏于保守，本人倾向于估计为30%。除此之外，在动物实验中，还有一种重要的给药途径，就是：腹腔注射。它可达到不错的效果，而又比静注要简单方便，因此常常采用。除了有吸收不太规则的缺点之外，其余方面很不错。而且吸收一般可达静注的80 85%。因此，我们可以将上述结果列于下：不同给药途径之间剂量换算估计值筒表给药

20、途径阱脉口服皮下注射矶 峨 射副腔注射生物利用度全部入血传环.无吸收过程25 30%4 0-5。左右80%左右80 85%与酢脉的剂量之比3.X倍2 2.5倍左右1.25倍左右1.18-1.25 倍与口服的剂量之比0 25-0 330 5-060 32-040.3-0 35 /r*1 1对此简表需要说明的是：笫一，给药剂量可参照经验，但最好亲自实验。因为每种药物的生物利用度是不一样的。简表中所示只是一种多数情况下的估计。可能与实际会有较大出入。第二，能够不改给药途径时，尽量不改。实验药量足够的情况下，尽量不要改给药途径。一则是各给药组间要剂同对比；二是给药途径改后效果不好对比。尤其是口服和静注

21、之间有时按上述折算给药时，血药浓度相差太大。主要是口服影响因素多。第三，有时实验操作熟悉程度影响很大。尤其是静注。而口服途径一般来说，较易实现相对准确。以上所述，仅 供 参 考！欢迎大家和我交流-附：关于局部给药的剂量折算问题有时候，我们做的虽然是在体实验，却是局部给药。如：想考察一种药物对烧伤的作用。一般用兔子做实验。那么，在多大的面积上给多少药才与临床差不多等效呢？关于这个问题，我们只讨论皮肤给药的。我个人认为，如果只是看药物在局部的作用（如：烧伤），就和人体用相同的剂量。即用于人体多少面积涂多少药，动物也是多少面积涂多少药。不过，要注意一点，这是我们设想实验动物对此药敏感程度与人相同的情

22、况下。那么，如果是透皮吸收的呢？也就是说，把皮肤只当作一个给药途径，最终在体内发挥作用的呢？那实际上就相当于体内给药了，仍然按前面所述的等效剂量给药。在前面的贴子中，我们讨论了常用实验动物的剂量换算的问题。但有时候，我们可能会使用一些其它的动物。如；金黄地鼠、鹤鹑、来亨鸡、小型猪、鸭子等等。那么，对于这样一些在这个表中无法找到折算系数的动物，我们怎样来折算它们与人或其它动物的等效剂量呢？对此，很多人会感到茫然。其实，只要知道等效剂量折算的原理，我们照样可以很好地估算出来。与其它实验动物的剂量折算相似，方法如下：第一，能找到有参考文献的，可以用现成的剂量。但这样的情况不多。第二，有临床用量的，折

23、算到动物。这就要我们去找到相应的动物的体型系数。通过查文献我们可以找到。LD50与药效学实验剂量的换算面对一个全新的化合物，无任何资料可参照的情况下，我们如何去设置剂量？我想，首先至少我们会做一个急性毒性实验。在急毒中，我们可以得到一个LD50,或者是最大耐受量（MTD）。这可能成为我们选择剂量的一个重要依据。那么，如何根据LD50或 MTD来选择剂量呢？要注意些什么问题呢？下面我来跟大家探讨一下。在不少的药理书上，都是讲测出药物或化合物的LD50以后，取其1 /10,1 /20,1 /3 0 的剂量作为药效学的高、中、低剂量。对此，我们差不多也是这样做的。只是有个预试过程。在预试中摸索并调整

24、剂量。但上述剂量的设置似乎没有一个定量的、理论的依据。那么，我们如何来估计药效学实验的剂量呢？在此，我提出一个自己的想法。我们知道，药物是安全性和有效性并存的。在达到很好的药效的时候，可能已经产生毒性了。我们既要控制毒性，又要在这个基础上尽量最大地发挥药效。那么，什么样的情况下可以满足这样一个要求呢？我觉得，就是：当药物差不多刚刚引起毒性反应时的剂量设为药效学的最高剂量，再往下以等比递减。如果要给一个定量的数字，我觉得取LD5比较好。就是说，把引起5%实验动物死亡的剂量定为药效学最高剂量。如果这样，那接下来的问题就是：寻找LD50与LD5之间的关系。下面，我们就运用药理学与数学的知识来探讨这个

25、问题。为此，我们先来了解一下相关的基础知识。我们知道，药理效应跟剂量（或药物浓度）之间存在一定的关系。这种关系不是完全地成比例，可能是效应与浓度的对数成比例，也可能效应与浓度的对数亦不成比例，而是表现出一种这样的规律：浓度较小时，增加浓度药效增加不很明显；浓度中等时，增加浓度药效有较明显地增加；浓度较大时，增加浓度药效增加又不太明显；直到出现最大效应。这就是所谓的“量一效关系”或“浓度一效应关系，如何用数学的模型或是公式来描述这样一种“浓度一效应关系”呢？早已有人对此进行了研究。其中比较为大家所公认的是由A.V.Hill提出的一个方程：E=Emax.Cs/ECs50+Cs这就是著名的Hill方

26、程。式中，Emax表示药物的最大效应；EC50表示达到50%的Emax时的药物的浓度；C表示药物的浓度；上标S是表示浓度一效应关系曲线形状的参数。毒理效应可以看作是一种特殊的药理效应。因此，我们将这一公式移植到急毒实验中来进行一些应用。对于一定大小的动物而言，一定的剂量与一定的血药浓度基本上成正比的。所以，我们就以剂理来代替浓度进行计算。上式中，以LD50代替EC50,以LD代替C,则得：E=Emax.LDs/LDs50+LDs很显然，在毒理实验中，Emax就是死亡率为100%时的效应。相应地，LD5则为死亡率为5%时的效应；LD1则为死亡率为1%时的效应：LD50贝I 为死亡率为50%时的效

27、应。我想对此大家应无异议。如此，我们来看，当剂量为LD5时，LD5与LD50之间的关系如何呢？E5=5%Emax=Emax.LD5s/LDs50+LD5s得：0.05=LD5s/LDs50+LD5s化简，得:LD5s=0.05/0.95X LDs50=1/19X LDs50同样地，LD1s=1/99X LDs50如果S=1,则LD5大约为LD50的1/20;LD1贝U为LD50的1/100.如果S=2,则LD5大约为LD50的0.229;LD1则为LD50的0.1.如果 S=3,贝ij LD5 大约为 LD50 的 0.378；LD1 贝ij为 LD50 的 0.219.如果S=4,则LD5大

28、约为LD50的0.479;LD1则为LD50的0.317.如果S=5,则LD5大约为LD50的0.555；LD1则为LD50的0.399.如果S=6,则LD5大约为LD50的0.612;LD1则为LD50的0.464.S是决定药效随血药浓度增加而变化的趋势的程度的参数。当S6时，药效是随血药浓度呈突进式的；而当S介于二者之间时，药效是呈过渡式的。很多药物的S值在2以下，一部分在2 5之间，大于6的极少。也就是说，大多数药物的效应随血药浓度增加是渐进式的，或近于渐进式的。那么，根据以上的计算结果，我们是否可以初步地得到一个结论呢？那就是说，当我们知道一个化合物的LD50以后，我们可以得到一点关于

29、它的LD5或LD1的信息。我们希望在做药效学实验时，动物的死亡率不要超过5%,最好不要超过1%。也就是说，药效学的最高剂量是否可以估计为LD5或者LD1呢？我觉得是可以的。而且，我更趋向于保守地估计。那就设为1%吧。剂量就给到LD1的样子。同理，虽然我们知道有些药物的S值是大于2的，这样量一效曲线比较陡，算出来的LD1与LD50接近了许多，但为保守起见，我们仍取比较小的剂量作为药效学的实验剂量。这样我们就得到了药效学剂量的一个最保守的估算值：大约取L D 5 0 的 1/100.但，不可否认的是，这是一个相当保守的估计。如果药物的S值是大于2 的，则这个剂量可能要高好几倍。因此，药效学的剂量高

30、的可以取到L D 5 0 的 1/1 0,甚至1/5。因此，这些是需要我们去摸索的。因为，毕竟毒理反应和药理效应的机理可能不同，其量一效关系的变化规律可能不一样。我们通常给的剂量大概是L D 5 0 的 1/5 0 1 /2 0 之间。在新药研究指南中，并没有规定剂量取LD50的多少分之一。而是给出了一些基本的原则。只要遵循了这些原则就可以了。长毒实验中规定低剂量不能有毒性反应，中剂量有轻微毒性反应，高剂量要有一定的毒性反应。是否可以考虑将LD50的1 /100作为长毒试验的低剂量？我觉得上式有一定的参考意义。对化学合成药而言，剂量在100mg/kg以上就是相当大的剂量了。多数药效学实验的剂量

31、在10100mg/kgo甚至在10mg/kg以下。如果LD50超过5g/kg,那样化合物的毒性就是相当低了。对于中草药而言，可能很多时候测不到LD50,而是用最大耐受量来表示。在MTD时，还没有出现一只动物死亡。那可以这样说，此药的LD1肯定是比这个MTD要大的。因此，从理论来上说，药效学的最高剂量可以达到MTD。当然，这个思维的出发点是，在这个剂量点基本上还没有动物出现严重的毒性反应。但不能忽略的一点是，没有死亡不能就推定没有毒性。因此，实际操作中，我们常常会以MTD的几分之一来定药效学剂量。1 /2或1 /3是常用的。在实践中观察效果。为什么可以这样做呢？因为，当剂量达到MTD时，可能药效

32、早已达到了最高点。从量一效曲线的规律我们也知道。所以，没有必要用那么高的剂量。一家之言，仅 供 参 考！希望大家多多探讨。附：由于上面的公式有点看不清。上传一张图片。厂 Em axCsE=-AQO+CSaH i l l方程l EmaxLDsE=-L D；+L DS毒理效应与剂量备 的关系b 一一近1 1方程的衍变动物实验基础知识系列之二：试剂如何配制？做一个动物实验，要涉及要许多方面。从实验设计到实验操作，再到实验数据的整理及统计，以及论文的撰写，需要各个方面综合的、零零散散的知识和经验。而泛泛而谈，虽能总括一般的规律，但也许战友们得不到最贴心、最具实用价值的信息。为此，本版将陆续推出一些最基

33、础的专题，从一般到特殊，从抽象到具体，从已知到未知，逐步地深入讨论。希望大家踊跃参与。下面，我们来讨论在动物实验中的试剂的配制的问题。分以下几个方面来讨论：一、用于实验的试剂的类型及用途二、用于实验的试剂原料的贮存方式三、用于实验的试剂的溶解度及常用配制方法四、配制试剂的常用溶剂及适用范围五、配制和使用试剂时的量器、衡器的选择六、配制好的试剂的使用和保存方式七、配制好的试剂的常见问题及解决方式八、有毒、危险性试剂的配制及保存九、试剂配制的优化十、如何追溯实验中试剂导致的问题？十一、常用缓冲液的配制十二、生物类试剂的配制杂谈十三、如何找到自己需要的试剂？十四、Do it yourself?还是买

34、现成的试剂？十五、实验中购买试剂的成本一效用分析十六、不稳定试剂的配制此系列贴主要是从大的方向、原则方面来讲述的。对于某一试剂的具体细节问题没有作过深的探讨。各位参与讨论的战友，请着重讲述某具体试剂你是如何配制的？要注意些什么细节问题。希望本贴能长期不断地深入下去。系列贴子中如有不当之处，请各位不吝指出！首先，我们来了解一下动物实验中需要用到的试剂的类型按照其贮存状态来分：试剂有己配好的即用型试剂和需要配制的试剂。前者，如：一些性质较稳定的、或单剂量包装的试剂。像Western中 的DAB显色试剂就有现成的可直接用。后者，如：大多数的药物、试剂。当然，要配制的占大部分。按其用途来分，可分为：药

35、物：通常就是我们要考察其药效或机制的化合物或中草药提取物。又可分为原料药和制剂。原料药一般可直接应用。制剂有的要进行提取，有的可直接用。动物模型用试剂：如：造糖尿病的STZ、造肝损伤的氨基半乳糖胺、四氯化碳、造睾丸损伤的镉剂、造成肺损伤的博来霉素、造成肾损伤的腺喋吟、造成炎症的角叉菜胶等等。动物模型用饲料：这个一般是固体状态。也有半固体的。液体状态的较少。如：高脂饲料中要配以胆固醇、丙基硫氧嗒咤、胆酸盐、鸡蛋黄、猪油等。动物基本操作用试剂：如：麻醉用试剂、动物除毛的试剂硫化钠、动物标记的试剂苦味酸、取血或插管用的试剂肝素、消毒用的75%乙醇、碘伏、新洁尔灭、动物手术后护理的抗生素等。各类缓冲液

36、或基础分散介质：如：PBS、生理盐水、柠檬酸缓冲液、克氏液、任氏液、配难溶性药物用的0。5%CMCNa液、DMS。液、增溶剂泊洛沙姆（与药物混匀后再加入溶剂中）保存标本的试剂：如：10%福尔马林、中性福尔马林、4%多聚甲醛、Bouin“液等。清洗液：如：稀盐酸液、重铭酸钾洗液。检测试剂：这个因实验而异。不同的实验有不同的方法。可以另开专题讨论。按其使用时限来分：即配即用型：如：STZ极易分解，配制后要迅速全部用完，不然完全失效。一些酶类的试剂，配制后也要尽快用完。已配好的显色剂，通常也是较短时间内用完。对水不稳定的药物，如：青霉素。尽快用完。可在一周内使用短效型：主要是一些亚稳定状态的溶液。可

37、随温度、氧气的作用而逐渐分解而达不到使用的要求。如：蛋白电泳中的过硫酸镂，是一种促进氧自由基产生的辅助试剂，促进凝胶的形成，时间久了就不能产生自由基，故而一般在一周内使用，最多两周。有些缓冲液，尤其是做离体实验的，一般低温保存下尽快地用完。不然可影响实验结果。一个月以内的中效型：许多试剂在配好后，如果能低温保存，能用一个月以上。三个月以上的长效型：不少性质稳定，且对浓度准确度要求不是太高的溶液，可长期保存使用。像福尔马林、生理盐水、CMC-Na溶液。按其纯度可分为：化学纯:一般化学实验用的，含少量杂质.纯度一般应在98%以上.分析纯:做分析实验用的，含微量杂质，纯度一般应在99%以上.缩写：A

38、.R色谱纯:液相流动相的要求.据本人理解应是不出现杂峰.纯度可能在99.9%.生化纯:好像在一些生化试剂里有这么写的.缩写:B.R要注意的是，有些厂家有标明优级纯（G.R）的，实际上，可认为相当于分析纯的级别.还有就是级别最高的:标准品、对照品。其实这二者差别不大。我们通常混用这两个词。按药典规定，我们通常用的基准物质称为对照品。而抗生素类（注意，不是合成抗菌药）的基准物质则称为标准品。而事实上，我们似乎总是把“标准品”当作最高级别，而把 对照品 当作一个比“标准品”低一点的级别。事实并非如此，这两个词应是一样的。只是标准品特指抗生素或其它生物制品。特此将二者区分如下：对照品、标准品系指用于鉴

39、别、检查、含量测定的基准物质。其中，标准品特指用于生物检定、抗生素或生化试剂中含量或效价检定的基准物质，按效价单位计，与国际标准品标定。如:青霉素的基准物质称为标准品，而氧氟沙星的基准物质则称为对照品。但在所发表的论文中，我们所看到的绝大部分情况是二者混用。称青霉素为对照品的、标准品的，都有。那么这些基准物质要达到什么样的要求？我想，纯度至少要达到99.99%吧。生物制品或抗生素则不一定了，因为有的抗生素实际上就是混合物的。只能用效价来评定。在配制标准品或对照品时，尤其注意要准确。通常，我们在称量10mg以下的物质时，是很难准的。因此，我们在配某些试剂时，可考虑先称10mg以上的物质配成较大的

40、浓度，再逐步稀释,所得浓度要准确一些。每一种试剂对不同级别的规定和要求是不同的.我们可以看到论文中要标明试剂的纯度。通常有写到化学纯、分析纯、色谱纯、纯度达到多少？含标示物多少？等等。这需要在做实验之前了解我们所要用的试剂的纯度要求是怎样的。不然难以得到满意的结果。如：需要用色谱纯的试剂用了分析纯，可能会得到失败的实验结果。动物实验中，用到分析纯及以上级别的比较多。做药动学实验，液相检测时要注意，要用色谱纯试剂，不然严重影响实验结果。按其毒性，有无毒、低毒、中等毒性、剧毒几种。要注意毒性试剂的保存，以及实验过程中自身的防护。首先，我们来了解一下动物实验中需要用到的试剂的类型第三，试剂的溶解度。

41、这是对大多数固体试剂而言。如果是液体试剂，则就要看它能否有溶剂中混匀或者分散。一般而言，我们可以把试剂分为易溶性和难溶性的两大类。又可分为脂溶性的亲水性两大类。下面我们就来谈谈如何配制这些试剂。易溶性的：像绝大多数的酸、碱、盐类试剂，都是易溶性，且一般是水溶性的。这类试剂很多是用双蒸水配制的。难溶性的：难溶性的有的是脂溶性比较高的，可以用油来配制。但有时候不能用油，但又要混匀，这时我们只好加助悬剂或者增溶剂，或者用潜溶剂。助悬剂，如 I：竣甲基纤维素钠（CMC-Na）；增溶剂，如：泊洛沙姆188；潜溶剂，如：乙醇。也有少数用DMS。来配的。DMS。号称万能溶剂。但实际使用时，要考虑可能引起一些

42、药理效应，从而对实验结果产生干扰。能不用尽量不用。在配制难溶性物质的时候，有的可以加加热，有的可以搅拌，有的可以用超声。要特别注意不要盲目加热。一是有些物质一加热就变质了，产生了分解产物；二是有些物质加热就失效了，如一些酶或蛋白质类的物质。有些物质的溶解性是我们所熟知的。配这类物质的时候自然就轻车熟路了。但是，有些试剂我们并不知道。该如何弄呢？方法有三。一是查看试剂包装的说明。一般上面会有一些信息。二是上网查询。google上找到的网页或是论文都可以。三是要试。可以用小剂量的试试。看看溶解度如何。我曾经一次用丙酸睾酮注射液，想要稀释，便用双蒸水来做。结果发现根本不混溶。因说明书上没说明是什么溶

43、剂配的，当时看到是十分澄清的，没有细想。后来改用植物油稀释，效果不错。有时候，我们学药理的中可能有些化学好一点，觉得从结构上来看就知道其溶解性的规律。但往往会因为过于自信而忽略了一些特例。像盐酸小嬖碱，从结构上看，应是水溶性很好的。然而，实际却基本不溶。淫羊蕾甘，想一想，昔类都有糖基，极性大，总是能溶的吧？却几乎不溶于水，而溶于乙醇、甲醇中。因此，物质的溶解度如何，除了查阅相关的资料外，其实很重要的一点还是要自己动手配制一点预试一下。值得注意的是，乙醇是一种非常好的溶剂。通常与水以不同浓度混合，有时可达到比较满意的效果。第四，我们来谈谈配制试剂的常用溶剂或者分散介质。应该说，这是大家比较熟悉的

44、一个问题。常用的溶剂或分散介质不外乎以下几种：水、有机溶剂、复合溶媒、缓冲液。水，是用得最广泛的溶剂。配制试剂，当然不能用自来水，至少也是蒸储水。最好是用双蒸水。双蒸水实际上就相当于注射用水的要求了。双蒸水可以达到无菌、无热原的要求。配制水溶性的试剂时，要注意相关容器的洗涤、灭菌。注意量器不能高温烘烤，不然可致形变而量得不准。如：量筒、量杯、容量瓶。这类玻璃容器一般都是用重铭酸液浸泡，再洗涤。有机溶剂，是许多试剂中必不可少的。用理较多的是乙醇、甲醇、丙酮、氯仿这三种。除有时候用到乙醇外，其余很少用来作为动物口服药物的溶剂。多用分析纯。当然，做液相检测时，要用色谱纯。有时候，这些溶剂不需任何配制

45、，本身就作为试剂来使用。如：用甲醇沉淀蛋白。做PCR时，用氯仿除蛋白。用乙醇进行洗涤等。要注意有机溶剂的易燃性和毒性。一是防操作不当而起火；二是要进行一定的防护，如I：带口罩、一次性手套等。要注意甲醇对眼睛的毒性，氯仿对肝脏的毒性。尽管这些毒性远不如致癌的试剂毒性大，但也不可忽视。复合溶媒，通常是指乙醇等亲水性较强的溶剂与水互溶形成的混合物。丙酮亦可，但少用。有些试剂用一定浓度的乙醇来配效果比较好。注意，如果要较为精确地测定乙醇浓度，最好还是使用酒精比重计。缓冲液，严格来说，算不上溶剂，只能算一种分散介质。但在药理实验中，又是广泛使用的。这是因为，有些试剂必须在一定的PH值条件下才能稳定。最常

46、用的莫过于磷酸缓冲液（PBS）了。而且PBS又可配成不同的PH值。此外，就是醋酸一醋酸钠缓冲液、柠檬酸缓冲液了。前面述及的S T Z,必须在PH44.5之间才能稳定，故而要用缓冲液配制。同时，一些缓冲液是用于洗涤或暂时保存组织的溶液系统。如：取组织标本时，通常要用生理盐水或PBS来洗涤血迹。还有，像电泳缓冲液，是进行蛋白电泳或DNA电泳不可少的介质。配制缓冲液时，要注意如下事项：1。严格按照说明进行。主要是加入溶液中的物质的顺序。因为顺序错了可能产生沉淀或其它现象而导致不能使用。二是要准确测量PH值。三是一定要写好牢固的标签。本人配制蛋白电泳缓冲液时，有一次将浓缩胶缓冲液与分离胶缓冲液恰好弄反

47、了，导致失误。二者仅仅是因为其组分的比例不同，而PH不同。贴上醒目而牢固的标签就容易识别。第五，我们来谈谈配制试剂中衡器、量器及其它器具的选择。我们知道，试剂的原料大多数情况下是固体，少数的一部分是液体。固体的配制要用到衡器和量器，而液体原料的配制需要量器，也有少数要用衡器。在配制过程中，要使试剂符合我们的要求，还要用到如：玻棒、磁力搅拌器、PH试纸、分液漏斗、滤纸等器具。下面我们就来谈谈这方面的问题。A衡器的使用试剂中一大部分是固体。将固体配制成试剂时，通常要用到衡器。衡器一般是天平。尽管有比较准确的量程小的杆秤，但那是药店里用的。天平有不同的工作方式的，如：普通托盘天平、扭力托盘天平、光电

48、机械天平、电子天平。普通天平一般用于粗略的称量，大家都很熟悉；扭力天平也使用简单；光电分析天平现在用得较少。下面着重介绍一下电子天平。天平有不同的精密度的，如：准确到1g的、0.1g,1/lOOg,l/1000g,l/10000g,l/100000g的。这样，我们要注意所称量的原料要达到什么样的要求，选择合适精密度。要求精确到0.01g的选择0.1g的显然不当，选 择1/1000的尚可，但要用1/10000的就没必要，也不太合适了。天平的量程。每一个天平都有它的量程范围。超过或接近最大量程，都是不妥的。当然，小于其最小量程是称不出来的。这在使用之前一定要看清。天平的调水平。调水平是在使用天平之

49、前必须要做一个工作。其大前提是：放置天平的房间要控制温湿度，放置天平的台子要平。要认真阅读说明书来调平。看了说明书再来调可以使我们省去不少时间。水平仪在天平的正后方,视线要与其垂直,视水平仪水泡置于正中之时，即可。要细心、耐心地调好。切忌动作粗暴。天平的使用注意事项。除去上面对精密度、量程、调水平的了解外，我们还要注意称量过程中的一些总是。一是预先插电几分钟，至电子天平的屏幕显示稳定后再称量。二是配制时，除极少数特殊情况外，一般是从侧面加入试剂原料。三是称量辅助器具。称固体一般可用称量纸,也可用容器;称液体要用容器。四是称量剩余的固体及不小心洒落的液体要清除干净。固体以毛刷刷去；液体可用吸水纸

50、吸干，并更换纸轻拭。对于固体，一般要尽量以小勺捣至成粉末或小颗粒，再以牛角勺轻抖至称量纸上或容器中。对吸湿性强的固体，尤其注意环境中的湿度，并迅速完成称量。对于少数液体需称量的，多以滴管或移液器来添加。固体有的是结晶状的，结晶有多种形态，像针晶、柱晶、小鳞片状晶等等。有的是颗粒状的；有的是块状的。其中，针晶、柱晶等流动性比较好，倾倒出来称量的时候比较方便一点。而鳞状的、颗粒状的要注意小心称量。因为一般倒出来的试剂是不允许倒回原瓶的。而多余的另装则可能保质期难以保证。所以,称量原料时要注意小心谨慎，不能浪费太多。B量器的使用量器主要有：带刻度烧杯、带刻度试管、带刻度吸管、量杯、量筒、容量瓶、移液