微生物学实验教案-新乡医学院理论课教案首页.pdf

《微生物学实验教案-新乡医学院理论课教案首页.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《微生物学实验教案-新乡医学院理论课教案首页.pdf（72页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、新乡医学院实验课教案首页课程名称：澈金麴等授课教师姓名及职称：小蕙想一、授课题目实舱一佃雷的荷阜器电和草呈氏累色二授课对象2005级生物技术专业本科生三、实验教学目标与课时分配1、学习微生物涂片、染色的操作技术；2、掌握细菌单染色和革兰氏染色的方法；3、初步掌握无菌操作技术；4、掌握革兰氏染色反应原理、操作步骤和意义。3 课时四、授课重点1、微生物涂片、染色的基本技术；2、无菌操作技术五、授课难点1、微生物涂片、染色的基本技术；2、无菌操作技术六、授课形式实验课讲授七、授课方法与课前准备授课方法：启发式教学，讨论式教学；课前准备：做预实验，准备示教材料，写教案八、教材与参考文献沈萍、范秀荣、李

2、广武主编。微生物学实验（第三版），高等教育出版社。九、思考题1 .你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？2.当你对一株未知菌进行革兰氏染色时，怎样能确证你的染色技术操作正确，结果可靠？优秀教案教 研 室 主 任（签字）课 程 负 责 人（签字）十、教研室主任及课程负责人签年 月 日年 月 日字课程名称：松金物号 任课教师：基本内容教学手段和教学优秀教案优秀教案优秀教案细菌的简单染色和革兰氏染色一、实验目的1、学习微生物涂片、染色的操作技术；2、掌握细菌单染色和革兰氏染色的方法；3、初步掌握无菌操作技术；4、掌握革兰氏染色反应原理、操作步骤和意义。二、实验内容和原理

3、细菌的涂片和染色是微生物学实验中的一项基本技术。细菌个体微小，且较透明，必须借助染色法使菌体着色，与背景形成鲜明的对比，以便在显微镜下进行观察。此法操作简便，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。碱性染料的离子带正电荷，能和带负电荷的物质结合。因细菌蛋白质等电点较低，当它生长于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷，所以通常采用碱性染料（如美蓝、结晶紫、碱性复红或孔雀绿等）使其着色。酸性染料的离子带负电荷，能与带正电荷的物质结合。当细菌分解糖类产酸使培养基p H下降时，细菌所带正电荷增加，因此易被伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料着色。中

4、性染料是前两者的结合物又称复合染料，如伊红美蓝、伊红天青等。根据实验目的不同，可分为简单染色法、鉴别染色法和特殊染色法等，本实验主要做前面两种。（-）简单染色法原理：这是最基本的染色法，由于细菌在中性环境下一般带负电荷，所以通常采用一种碱性染料如美蓝、碱性复红、结晶紫进行染色。简单染色法是只用一种染料使细菌着色以显示其形态，简单染色不能辨别细菌细胞的构造。（二）革兰氏染色法原理革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的。革兰氏染色法是细菌学上最常用的鉴别染色法，因为通过此法染色，可将细菌鉴别为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-）两大类。革兰氏染色过程所用四种不同溶液和作用

5、：强调实验课的要求和规则简单复习理论知识过渡到本实验目的结合理论知识讲解实验原理优秀教案优秀教案1、碱性染料：这在简单染色中已讨论过，此处用结晶紫。2、媒染剂：其作用是增强染料与细菌的亲和力，更好地加强染料与细胞的结合。常用的媒染剂是碘液。3、脱色剂：帮助染料从被染色的细胞中脱色。利用细菌对染料脱色的难易程度不同，而将细菌加以区分。革兰氏阳性细菌不易被脱色剂脱色，而革兰氏阴性细菌则易被脱色。常用的脱色剂是丙酮或乙醇，这里所用的是95%的乙醇。4、复染液：也是一种碱性染料，目的是使脱色的细菌重新染上另一种颜色，以便与未脱色菌进行比较。这里用的是蕃红花红溶液。近年来由于对细菌细胞壁的结构有了较深入

6、的了解，对革兰氏染色的机制提出不同的看法。一般认为革兰氏阳性细菌的肽聚糖层较厚，经乙醇处理后使之发生脱水作用而使孔径缩小，结晶紫与碘的复合物保留在细胞内而不被脱色；而革兰氏阴性细菌的肽聚糖层很薄，脂肪含量高，经乙醇处理后部份细胞壁可能被溶解并改变其组织状态，细胞壁孔径大，不能阻止溶剂透入，因而将结晶紫与碘的复合物洗去而被脱色。虽然如此，革兰氏染色的差异并不能完全认为是化学的差别，也有物理结构不同的结果，因为酵母菌细胞壁的成份完全和细菌不同，但具有革兰氏染色阳性反应。三、实验器材1 活材料：培养12-16h的枯草杆菌(Bacillus subtilis),培养24小时的大肠杆菌(Escheric

7、hia coli)2、染色液和试剂：草酸铉结晶紫染液、卢哥氏碘液、95%酒精、蕃红染液、复红、乙酸酒精溶液、香柏油、无菌水3、器材：废液缸、洗瓶、载玻片、接种杯、酒精灯、擦镜纸、显微镜等。四、实验方法1、简单染色：(1)涂片：取干净载玻片一块，在载玻片的左、右各加一滴无菌水，按无菌操作法从菌种斜面挑取少量菌体与水滴充分混匀，并涂成薄膜，涂布面积约1 1.5cm2,左边涂枯草杆菌，右边涂大简单介绍本次实验所用器材重点介绍制片方法，强调无菌操作优秀教案优秀教案肠杆菌。注意取菌不要太多，图片要均匀。(2)干燥：让涂片自然晾干。(3)固定：手执玻片一端，让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定。在火上固定时，

8、用手摸涂片反面，以不烫手为宜。不能将载片在火上烤，否则细菌形态毁坏。(染色前必须固定细菌。其目的有-：一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上；二是增加其对染料的亲和力。常用的有加热和化学固定两种方法。固定时尽量维持细胞原有的形态。)(4)染色：将固定过的涂片放在废液缸上的搁架上，加草酸镀结晶紫染液I-2 m i n。(5)水洗：倾去染色液，斜置载片，用自来水的细水流由载片上端流下，不得直接冲在涂菌处，直洗至从载片上流下的水中无染色液的颜色为止。(6)干燥：将洗过的涂片放在空气中晾干或用吸水纸吸干。(7)镜检：先低倍观察，再高倍观察，并找出适当的视野后，将高倍镜转出，在涂片上加香柏油一滴，将油镜头浸入

9、油滴中仔细调焦观察细菌的形态。2、革兰氏染色：(1)涂片：涂片方法与简单染色涂片相同。(2)晾干：与简单染色法相同。(3)固定：与简单染色法相同。(4)结晶紫染色：将玻片置于废液缸玻片搁架上，加适量(以盖满细菌涂面)的结晶紫染色液染色1分钟。(5)水洗：倾去染色液，用水小心地冲洗。(6)媒染：滴加卢哥氏碘液，媒 染I m i n。(7)水洗：用水洗去碘液。(8)脱色：将玻片倾斜，连续滴加9 5%乙醇脱色2 0-2 5 S至流出液无色，立即水洗。(9)复染：滴加蕃红复染2 m i n。(1 0)水洗：用水洗去涂片上的蕃红染色液。(1 1)晾干：将染好的涂片放空气中晾干或者用吸水纸吸干。(1 2)

10、镜检：镜检时先用低倍，再用高倍，最后用油镜观察，并判断菌体的革兰氏染色反应性。(1 3)实验完毕后的处理：边讲解边演示，并强调实验注意事项通过提出问题加强学生对实验原理的理解优秀教案将浸过油的镜头按下述方法擦拭干净：a.先用擦镜纸将油镜头上的油擦去；b.用擦镜纸沾少许乙酸酒精溶液将镜头擦2-3次；c.再用干净的擦镜纸将镜头擦2-3次。注意擦镜头时向一个方向擦拭。强调实验后处理的重看后的染色玻片用废纸将香柏油擦干净。五、注意事项1.载玻片要洁净无油迹，否则菌液涂不开。涂片时，滴水不要过多，挑菌量宜少，涂片要均匀，菌膜宜薄。要性2.革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色

11、而染成阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。脱色时间的长短还受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影响，难以严格规定。3.染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后，应吸去玻片上的残水，以免染色液被稀释而影响染色效果。4.选用幼龄的细菌。G礴 培 养12h-16h,E.c。培养24h。若菌龄太老，由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。六、实验作业（一）绘图绘出Bacillus subtilis和Escherichia coli革兰氏染色视野图。（二）问题和思考通过正反两方面再次强调实验注意事项1 .你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？其中最布置本次实验报告和关键的环

12、节是什么？2.当你对一株未知菌进行革兰氏染色时，怎样能确证你的染色技术操作正确，结果可靠？思考题新乡医学院实疆课教案首页课程名称：松金麴等 授课教师姓名及职称：丰总旅 硒一、授课题目 实般工 佃杳的野跑和莫豚染包优秀教案优秀教案二、授课对象2005级生物技术专业本科生三、实验教学目标与课时分配1、继续学习微生物标本的制作方法；2、掌握芽泡、荚膜染色的基本原理及方法；3、巩固无菌操作技术。3 课时四、授课重点1、微生物标本的制作方法；2、芽苑1、荚膜染色的方法及注意事项五、授课难点1、微生物标本的制作方法；2、芽抱、荚膜染色的方法及注意事项六、授课形式实验课讲授七、授课方法与课前准备授课方法：启

13、发式教学，讨论式教学；课前准备：做预实验，准备示教材料，写教案八、教材与参考文献沈萍、范秀荣、李广武主编。微生物学实验（第三版），高等教育出版社。九、思考题1.若涂片中观察到的只是大量游离芽泡，很少看到芽泡囊及营养细胞，你认为这是什么原因？2.组成荚膜的成分是什么？涂片一般用什么固定方法，为什么？十、教研室主任及课程负责人签字教 研 室 主 任（签字）课 程 负 责 人（签字）年 月 日 年 月 日新乡医学院实验课教案课程名称：做金物考 授课教师姓名及职称：丰惠旅 福基本内容教学手段和教学组织优秀教案优秀教案优秀教案细菌的芽抱和荚膜染色法一、实验目的1、继续学习微生物标本的制作方法；2、掌握芽

14、抱、荚膜染色的基本原理及方法；3、巩固无菌操作技术。二、实验内容和原理芽抱、荚膜染色法都是利用细菌各部位（分）的构造不同，它们对染料的亲和力也不同。因此，可以采用各种特殊染色方法，使细菌细胞的不同构造能在显微镜下显示出来，便于观察和区别。（一）芽酒染色法：芽抱又称内生狗子（endospore）,是某些细菌（革兰氏染色阳性杆菌）生长到一定时间（对数期后期），在细胞内形成一个圆形、椭圆形或圆柱形的结构。芽抱有的长在中央或近中央，圆形或椭圆形，芽抱的大小，位置，在分类鉴定上有一定的意义，它仅仅是芽抱细菌生活史的一个环节，它还是检验培养基灭菌彻底不彻底的依据。芽抱壁厚、透性低，着色和脱色均较困难，当用

15、弱碱性染料（孔雀绿）在加热的情况下进行染色时，使染料不仅进入菌体也可进入芽胞内，进入菌体的染料经水洗后被脱色，当用对比度大的复染色剂（蕃红液）染色后，芽抱仍保留初染剂的颜色，是芽抱和菌体更易区分。菌体呈红色而芽徇呈绿色。（二）荚膜染色法荚膜是包围在细菌细胞外的一层粘液状或胶状物质，其成分为多糖、糖蛋白或多肽。由于荚膜与染料的亲和力弱、不易着色；而且可以溶于水，易在用水冲洗时被除去。荚膜虽不是细胞的主要结构，但它是细胞外碳源和能源性贮藏物质，并能保护细胞免受干燥的影响，同时能增加某些病原菌的致病能力，使之抵御宿主吞噬细胞的吞噬。由于荚膜与染料的亲和力弱、不易着色；而且可以溶于水，易在用水冲洗时被

16、除去。通常用负染色法染色，使细菌和背景着色，背景与菌体之间形成一透明区即荚膜，便于观察，由于荚膜很薄，容易变形，在制片是一般不用加热固定。先点评上次实验作业结合理论知识讲解实验原理优秀教案优秀教案三、实验器材1、菌种：蜡样芽抱杆菌约 2 d 营养琼脂斜面培养物；褐球固氮菌（A z o t o b a c t e r c h r o o c o c 2 d无氮营养基琼脂斜面培养物。2、染色液和试剂：5%孔雀绿水溶液、0.5%蕃红溶液、碳素墨水、甲醇、生理盐水等3、器材：试管夹、酒精灯、接种针、载玻片、显微镜、香柏油、乙醛酒精、擦镜纸等。四、实验方法1、芽抱染色：（1）制片：按常规涂片、干燥、固定

17、；（2）染色：用试管夹夹住玻片的一端，在涂片上滴加孔雀绿3-4滴，维持5 m i n；（3）水洗：待玻片冷却、用细水流冲洗至流出的水为无色；（4）复染：蕃红溶液复染2-3 m i n,水洗；（5）镜检：干后，先低倍镜观察，再高倍镜观察，并找出适当的视野后，将高倍镜转出，在涂片上加香柏油一滴，将油镜头浸入油滴中仔细调焦观察。2、荚膜染色（湿墨水法）：（1）制备菌和墨水混合液：加一滴墨水于洁净的载玻片上，然后挑取少量褐球固氮菌与之充分混合均匀：（2）加盖玻片：将一洁净盖波片盖在混合液上，然后在盖波片上放一张滤纸，轻轻按压以吸去多余的混合液；（3）镜检：用低倍镜和高倍镜观察。五、注意事项1、供芽泡染

18、色用的菌种应控制菌龄，使大部分芽狗仍保留在菌体上为宜。2、染色加热过程要及时补充染液，切勿让涂片干涸。3、荚膜染色涂片不要用加热固定，以免荚膜皱缩变形。4、涂片不要用力过猛，不要滴加水，以防破坏其荚膜原形。六、实验作业（一）绘图1.绘出表示芽抱杆菌的形态特征，注意芽抱的形状、着生位置及芽抱囊的形态特征。2 .绘图说明你所观察到的细菌的菌体和荚膜的形态。（二）问题和思考1.若涂片中观察到的只是大量游离芽抱，很少看到芽抱囊及营养细胞，简单介绍本次实验所用器材再次介绍制片方法，强调无菌操作边讲解边演示，并强调实验注意事项再次强调实验注意事项布置本次实验报告和思考题优秀教案你认为这是什么原因？2.组成

19、荚膜的成分是什么？涂片一般用什么固定方法，为什么？优秀教案优秀教案新乡医学院实验课教案首页课程名称：於士物学授课教师姓名及职称：郭伟A讲师一、授课题目实龄三 数 钱t的 彬 林/察二、授课对象2005级生物技术专业本科生三、实验教学目标与课时分酉 己1、学习并掌握观察放线菌形态的基本方法；2、初步了解放线菌带形态特征。3 课时四、授课重点1、放线菌的制片方法及其注意事项五、授课难点1、放线菌的制片方法及其注意事项六、授课形式实验课讲授七、授课方法与课前准备授课方法：启发式教学，讨论式教学；课前准备：做预实验，准备示教材料，写教案八、教材与参考文献沈萍、范秀荣、李广武主编。微生物学实验（第三版）

20、，高等教育出版社。九、思考题1.试比较三种培养和观察放线菌方法的优缺点。2.镜检时，你如何区分放线菌的基内菌丝和气生菌丝？十、教研室主任及课程负责人签字教 研 室 主 任（签字）课 程 负 责 人（签字）年 月 日 年 月 日优秀教案优秀教案新乡医学院实验课教案课程名称：微生物学实验 授课教师姓名及取称：郭伟云 讲师优秀教案基本内容教学手段和教学组织一、实验目的1、学习并掌握观察放线菌形态的基本方法；先点评上次实2、初步了解放线菌带形态特征。二、实验内容和原理验作业放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体带一类革兰氏阳性细菌。结合理论知识常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基表面或深入培养基内生长带

21、叫基和图片讲解实内菌丝(简称“基丝”)，基丝生长到一定阶段还能向空气中生长出气生菌丝(简称“气丝,)，并进一步分化产生刑子丝及刑子。放线菌的他子丝形状和抱子排列情况是放线菌分类的重要依据，为了不打乱抱子的排列情况，常用印片染色法和胶带纸粘菌染色法进行制片观察。为了观察放线菌的形态特征，人们设计了各种培养和观察方法，这些方法的主要目的是为了尽可能保持放线菌自然生长条件下的形态特征，本实验介绍其中几种常用的方法。(1)杆片法将放线菌接种在琼脂平板上，托上灭菌盖玻片后培养，使放线菌丝沿着培养基表面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻上，观察时，轻轻取出盖玻片，置于载玻片上直接镜检。这种方法可以观察到放线

22、菌自然生长状态下的特征，而且便于不同生长期的形态。(2)玻璃纸法玻璃纸是一种透明的半透膜，将灭菌的玻璃纸覆盖在琼脂平板表面，然后将放线菌接种于玻璃纸上，经培养，放线菌在玻璃纸上生长形成菌苔。观察时，揭下玻璃纸，固定在载玻片上直接镜检。这种方法既能保持放线菌的自然生长，也便于观察不同生长期的形态特征。(3)印片法验原理优秀教案将要观察带放线菌带菌落或菌苔，先印在载玻片上，经染色后观察。这种方法主要用于观察抱子丝带形态、抱子带排列及其形状等。该方法简便、但形态特征可能有所改变。我们本次实验主要采用印片法来观察放线菌的基本形态。三、实验器材1.菌种：细黄链霉菌加又 称5 4 0 6或青色链霉菌（S.

23、glaucus）,弗氏链霉菌（S.fradiae）；2.染色液：石炭酸复红染色液；3.器材：载玻片，玻璃纸，小刀，接种环，吸水纸，擦镜纸，酒精灯，香柏油，乙酸-乙醇混合液，显微镜。四、实验方法（1）印片：用解剖刀取放线菌培养体一块，将菌面朝上放在一载玻片上，另取一洁净载玻片置于火焰上微热后，盖在菌苔上，轻轻按压，使培养物（气丝、抱子丝或抱子）粘 附（“印”）在后一块教玻片的中央，有印迹的一面朝上，通过火焰2-3次固定；（2）染色：用碳酸复红覆盖印迹，染色约I m i n后水洗；（3）镜检：干后先用低倍镜后用高倍镜，最后用油镜观察抱子丝、徇子的形态及抱子排列情况。五、注意事项1、铲菌苔时注意不要

24、将琼脂铲得太厚，以免影响压片；2、玻片不要太热，以免琼脂融化，干扰放线菌的附着；3、制片过程中切不可涂片，以免破坏菌丝形态；4、印片完毕后注意将印有放线菌的一面朝上进行固定，印片不要用力过大压坏琼脂培养基，也不要挪动，以免改变放线菌的自然形态；5、观察时宜采用略暗的光线。六、实验作业（一）绘图绘出说明你所观察到的放线菌的主要形态特征。（二）问题和思考1.试比较三种培养和观察放线菌方法的优缺点。2.镜检时，你如何区分放线菌的基内菌丝和气生菌丝？简单介绍本次实验所用器材边讲解边演示印片方法，并强调实验注意事项再次强调实验注意事项布置本次实验报告和思考题优秀教案优秀教案新乡医学院实验课教案首页课程名

25、称：松士物学 授课教师姓名及职称：郭伟及 讲师一、授课题目实徐四 器 专 才 的 杉 各 机 察&无 活 物 舱 的 鳌 刷二、授课对象2005级生物技术专业本科生三、实验教学目标与课时分酉 己1、观察酵母菌的细胞形态及出芽生殖方式；2、学习掌握区分酵母菌死、活细胞的染色方法；3、掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。3课时四、授课重点1、酵母菌的形态特征2、酵母菌死活细胞鉴别的原理五、授课难点1、酵母菌的形态特征2,酵母菌死活细胞鉴别的原理六、授课形式实验课讲授七、授课方法与课前准备授课方法：启发式教学，讨论式教学；课前准备：做预实验，准备示教材料，写教案八、教材与参考文献沈萍、范秀荣、

26、李广武主编。微生物学实验（第三版），高等教育出版社。九、思考题1、吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响？试分析其原因。2、在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌？十、教研室主任及课程负责人签字教 研 室 主 任（签字）课 程 负 责 人（签字）年 月 日 年 月 日优秀教案优秀教案新乡医学院实验课教案课程名称：微生物学实验 授课教师姓名及职称：郭伟云 讲师优秀教案基本内容教学手段和教学组织一、实验目的1、观察酵母菌的细胞形态及出芽生殖方式；先点评上次实2、学习掌握区分酵母菌死、活细胞的染色方法；验作业3、掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。二、实验内

27、容和原理酵母菌是多形的、不运动的单细胞微生物，细胞核与细胞质已有明显的分化，结合理论知识菌体比细菌大。繁殖方式也较复杂，无性繁殖主要是出芽生殖，仅裂殖酵母属是和图片讲解实以分裂方式繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊抱子。验原理本实验通过用美蓝染色浸片来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。美蓝是一种无毒性染料，它的氧化型是蓝色的，而还原型是无色的，用它来对酵母的活细胞进行染色。由于细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色，而对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，用美蓝水浸

28、片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。三、实验器材1、菌种：酿酒酵母（Saccharomyces c e r e v i s i a e）培养约2 d 的麦芽汁斜面培养物；2、染色液和试剂：0.0 5%和 0.1%吕氏碱性美蓝染液；简单介绍本次实验所用器材3、器材：废液缸、载玻片、盖玻片、酒精灯、擦镜纸、显微镜等。四、实验方法（1）在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液，用接种环挑取少量酵边讲解边演示母菌苔放入上述液滴里，混合均匀；（2）用锻子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上；实验方法，并强调实验注意事项（3）将制片放置约3 m i n,先低倍

29、镜后高倍镜观察酵母形态和出芽情况，并优秀教案根据颜色区别死活细胞。(4)染色30min后再次观察，注意死活细胞数量的变化；(5)用 0.05%的吕氏碱性美蓝染色液重复上述操作。五、注意事项1、加染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡而影响观察；再次强调实验注意事项2、盖玻片不宜平着放下，以免产生气泡影响观察。六、实验作业(一)绘图绘图说明你所观察到的酵母菌的细胞结构及出芽生殖方式。(二)问题和思考1、吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响？试分析其原因。2、在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌？布置本次实验报告和思考题优秀教案优

30、秀教案新乡医学院实验课教案首页课程名称：於士物学 授课教师姓名及职称：剑磕语一、授课题目实徐，、幅基某的周各易更雷二、授课对象2005级生物技术专业本科生三、实验教学目标与课时分酉 己1、明确培养基的配制原则；2、掌握配制培养基的一般方法和步骤；3、了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围；4、掌握高压蒸汽灭菌技术，了解几种常用灭菌方法。6课时四、授课重点1、掌握配制培养基的一般方法和步骤；2、了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围；五、授课难点掌握配制培养基的一般方法和步骤六、授课形式实验课讲授七、授课方法与课前准备授课方法：启发式教学，讨论式教学；课前准备：做预实验，准备示教材料，写教案八、教材

31、与参考文献沈萍、范秀荣、李广武主编。微生物学实验（第三版），高等教育出版社。九、思考题为什么微生物培养需要不同的培养基？十、教研室主任及课程负责人签字教 研 室 主 任（签字）课 程 负 责 人（签字）年 月 日 年 月 日优秀教案优秀教案新乡医学院实验课教案课程名称：澈金畅学宴般 授课教师姓名及职称：利浦涛 副敬裁优秀教案某 洋 佝 家一，卖龄日的1、明确培养基的配制原则；2、掌握配制培养基的一般方法和步骤；3、了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围；4、掌握高压蒸汽灭菌技术，了解几种常用灭菌方法。二、实舱及理培养基是按照微生物生长繁殖或积累代谢产物所需的各种营养物质，用人工方法配制而成的一种

32、基质。它包括碳源、氮源、能源、生长因子、无机盐和水六类营养要素。由于不同微生物细胞组成不同，因而所需营养基质不同，为了分离、培养和鉴定不同的微生物，必须根据其需要，配制合适的培养基。培养基的种类繁多，根据培养基的成分、物理性状不同，可分为天然培养基、合成培养基、半合成培养基、固体培养基、半固体培养基和液体培养基。灭菌是指应用物理或化学的方法，杀灭物体表面和内部一切微生物营养体、芽泡和抱子。灭菌方法很多，可分为加热、过滤、照射和化学药品法等。常用加热灭菌法：1、干热灭菌：这种灭菌法是利用热空气使物体升温，而导致物体上所带的微生物由于干热脱水而死亡。常用于空玻璃器皿、金属用具等的灭菌，对于带胶皮的

33、物品、液体及固体培养基等不能使用此法灭菌。2、高压蒸汽灭菌法此种灭菌方法的原理是在一密闭容器中，煮沸时形成的蒸汽不能扩散到容器外面去，而堆积在密闭的容器内，使蒸汽压力升高；随着水的煮沸，温度也就相应增高。利用过热的蒸汽来使细菌及其耐热芽抱蛋白质凝固变性，以致失去生命力，从而达到彻底灭菌的效果。高压蒸汽灭菌是最有效的灭菌方法。一般在1.05kg/cm2（15磅/英寸2）,121.30C保 持 1530分钟进行灭菌，就可杀死一切微生物细胞及其芽抱或抱子。进行高压蒸汽灭菌的仪器叫高压蒸汽灭菌锅。灭菌对象是培养基、玻璃器皿和各种不因高温处理而变质的物品材料。但对一些不耐高温、高压的溶液或培养基不宜用此

34、种方法。三、餐就和用晶1.1000ml刻度分装搪瓷缸、200ml烧杯、角匙、天平、称量纸或小烧杯、pH 试纸、500ml三角瓶，18mmxl80mm试管、纱布、棉花、10ml移液管等。2.牛肉膏、蛋白腺、NaCl、10%NaOH溶液、10%盐酸溶液。教学手段和教学组织先点评上次实验作业结合理论知识讲解实验原理简单介绍本次实验所用器材边讲解边演示，优秀教案题、方依布步窿并强调实验注1.培养基配方：牛 肉 膏 5.0g,蛋 白 陈 10.0g,NaC15.0g,琼 脂 20.0g,蒸储水1000ml,pH7.02.操作步骤（1）用称量纸分别称取牛肉膏5.0g、蛋白麻10.0g,把牛肉膏连同称量纸与

35、蛋白陈一起放入200ml的烧杯中，然后加入100ml水，置电炉上加热搅拌至其完全溶解。用玻璃棒把称量纸挑出冲净（用洗瓶洗，冲洗液流入烧杯）。（2）将溶解的混合液倒入1000 m l搪瓷缸中，称取5.0gNaCl加入，洗涤烧杯 23 次，洗液倒入缸中，补足自来水到1000ml（液体培养基制成，即可分装），搅拌加热煮沸。（3）称 取 2 0 g 琼脂，放入煮沸的溶解液中，继续加热至琼脂完全溶解，加热过程中要不断搅拌以防琼脂沉淀糊底或溢出杯外。（4）待琼脂完全融化后，再补足自来水，趁热用玻璃棒蘸少许液体点在pH试纸上测定酸碱度并用NaOH或 HC1溶液调整pH 值至7.27.4。（5）趁热分装入15

36、mmX 150mm试管中，每管5m1（斜面用）18mm义180mm试管，每管分装15ml（平板用）。（6）将余下的分装在500ml三角 瓶 中（每 瓶 约 300ml）。（7）将上述分装在各种容器中的培养基，塞好棉塞，捆扎好。意事项（8）O.IMPa高压蒸汽灭菌30分钟。（9）摆斜面灭菌后，需做斜面的试管，应待培养基冷却至5060（温度不能过高，以防斜面上冷凝水太多）后，摆成斜面。斜面的斜度要适当，斜面的长度不超过试管长度的二分之一。摆放时注意不要使培养基沾污棉塞，冷凝过程中不要移动试管，待斜面完全凝固后，再收起使用或贮臧。A,整量事项1、称取药品时严防药品混杂，一把牛角匙称一种药品；2、蛋白

37、陈极易吸湿，称取时动作要迅速；3、配制固体培养基时，先将其他药品加热溶解到快沸时，再将称好的琼脂加入，继续加热至琼脂完全熔化，此过程要不断搅拌，以免琼脂糊底，并控制火力，防止沸腾外溢；4、分装量根据试管大小和实际需要而定，固体培养基装量约为管高的1/5,液体培养基的装量约为管高的1/4,三角瓶的装量不超过瓶体的1/2；5、分装过程中注意不要将培养基沾在管（瓶）口上，以免沾污棉塞而引起污染。强调注意事项优秀教案优秀教案新乡医学院实验课教案首页课程名称：松金物学 授课教师姓名及职称：布角篇 讲师一、授课题目实 徐 幺 梯1*麴的令离与轮牝二、授课对象2005级生物技术专业本科生三、实验教学目标与课

38、时分配1、了解微生物分离和纯化的原理2、掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化接种培养的基本操作技术，掌握微生物的无菌操作技术。6课时四、授课重点微生物分离和纯化的基本原理五、授课难点微生物分离和纯化的基本原理六、授课形式实验课讲授七、授课方法与课前准备授课方法：启发式教学，讨论式教学；课前准备：做预实验，准备示教材料，写教案八、教材与参考文献沈萍、范秀荣、李广武主编。微生物学实验（第三版），高等教育出版社。九、思考题1.在你所实验的三种培养基平板上长出的菌落属于哪个类群？简述它们的菌落形态特征。2.稀释分离时，为什么要将已融化的琼脂培养基冷却到455OC左右才能倾入到装有菌液的培养皿内？3.划

39、线分离时，为什么每次都要将接种环上多余的菌体烧掉？划线为何不能重叠？十、教研室主任及课程负责人签字教 研 室 主 任（签字）课 程 负 责 人（签字）年 月 日 年 月 日优秀教案优秀教案新乡医学院实验课教案课程名称：微生物学实验 授课教师姓名及职称：高启禹 讲师优秀教案某洋佝家教学手段和教学组织一，卖龄日的先点评上次实1、了解微生物分离和纯化的原理2、掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化接种培养的基本操作技术，掌握微生物的无菌操作技术。验作业二、实龄藁理结合理论知识在自然界中，不同种类的微生物绝大多数都是混杂生活在一起的，为了生产和科学研究的需要，当我们希望获得某一种微生物时，就必须从混杂的

40、微生物类群中分离出它，以得到只含有这一种微生物的纯培养物，这种获得纯培养物的方法称为微生物的分离与纯化。为了获得纯种的微生物，一般根据该微生物营养或培养特点，或对某种抑制剂的耐受性不同，或对某种环境条件要求不同，从而制作或设置一些选择性培养基，或选择性培养条件，再用稀释涂布平板法或稀释混合平板法或划线法分离，纯化该微生物，直至得到该纯种菌株。土壤是微生物生活的大本营，在这里生活的微生物数量和种类都极其丰富，因此，土壤是我们开发利用微生物资源的重要来源，可以从其中分离纯化到许多有用的菌株。讲解实验原理简单介绍本次三、果新和用品实验所用器材1.样 品 土 样2.培养基 牛肉膏蛋白陈琼脂培养基、马铃

41、薯葡萄糖琼脂培养基、豆芽汁培养基。3.其它 盛9m l无菌水的试管、盛90ml无菌水并带有玻璃珠的三角瓶、无菌玻璃涂棒、无菌吸管、接种环、无菌培养皿。四 方法和步惠（一）、稀释混合平板法1.细菌的分离（1）土壤稀释液的制备 称 取 土 样1 0 g,放入盛90m l无菌水三角瓶中，振 荡15 20分钟，使微生物细胞分散，静置约20 30秒，即 成10的土壤悬液。另 取 装 有9m l无菌水的试管,编号为1。2、10-3、10-4、10-5、10-6及10-7,用无菌吸管吸取10土壤悬液1 m l,加入编号10-2的无菌试管中，吹吸三次，使之混合均匀，即 成10-2的土壤稀释液。再用另一支吸管吸

42、取10-2试管中的土壤稀释液1 m l,加入编号10-3的无菌试管中，轻轻摇动，使之混合均匀，即成10.3的土壤稀释液，一定要每次更换一支无菌吸管（连续稀释）。同法依次分别稀释成10-4,10-5和10-6等一系列稀释度菌悬液（见图1）。边讲解边演示，并强调实验注意事项优秀教案（2）平板制作将无菌培养皿编上10”、10一5、10一6号码，每一号码设三个重复，用1m l无菌吸管按无菌操作要求吸1。6稀释液各1 m l,分别放入编号106的三个培养皿中。同法吸取10-5稀释液各1 m l,分别放入编号10-5的三个培养皿中。再吸取10/稀释液各1 m l,分别放入编号10-4的三个培养皿中。然后在

43、9个培养皿中分别倒入15m l已融化并且冷却至450c左右的牛肉膏蛋白陈琼脂培养基，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布，平置于桌面上，待凝固后即成平板，整个操作过程应严格按照无菌操作（见实验1）。图 1从土壤中分离微生物操作过程（3）培养与移植待平板完全冷凝后，将平板倒置37恒温箱中培养244 8小时，检查分离结果。将培养后长出的单个菌落分别挑取接种到牛肉膏蛋白陈培养基的斜面上，然后置于37。恒温箱中培养，待菌苔长出后，检查菌苔是否单纯，也可用显微镜涂片染色检查是否是单一的微生物，若有其它杂菌混杂，就可再一次进行分离、纯化，直至获得纯培养.2.放线菌的分离 由于放线菌在培养基上蔓延生长不如

44、真菌快，其繁殖速度又比细菌慢，故分离这类微生物时要特别注意防止细菌和霉菌的蔓延，以免妨碍放线菌的生长。为了保证放线菌的优势生长，可对样品做如下处理：（1）为了除去部分细菌，可先将土壤进行风干。因为细菌营养体遇干燥环境容易死亡，而放线菌比细菌的抗干燥能力强。风干的土壤与少量CaCC3混合，于28培养数天，更能进一步减少细菌和增加放线菌的数量。（2）选用的土壤稀释度要根据放线菌的多少来决定，可用10-3、10一4或其它稀释度。在所选用的稀释液中加入10（）8%酚10滴，充分混匀，可进一步减少细菌和霉菌的生长。一般放线菌生长的适宜温度为2528,培 养57天，培养基为高氏一号培养基。具体操作过程见“

45、细菌的分离”。3.霉菌的分离大多数霉菌为好氧微生物，必须有充足的氧气才能很好地生长。霉菌能耐受较酸性环境，所以一般分离霉菌时取偏酸性、含有机质较丰富的接近表层的土壤，特别是森林土壤中含有较多霉菌。如果用特定的材料为培养基分离霉菌，经培养后，长出的菌种可能较为单一。比如用新鲜的桔皮保温培养，容易长出青霉。分离方法具体操作过程见“细菌分离”，只是将稀释度向前移2位数。采优秀教案优秀教案用马丁氏（Martin）琼脂培养基，在培养基中加1/3000的孟加拉红水溶液，使用时 每 10ml培养基再加0.03%链霉素溶液1ml（含链霉素30 u g/ml）,用 28 30下培养3 5 天，待菌落长出后，检查

46、结果。（-）稀释涂布平板法此法与稀释混合平板法基本相同，无菌操作也一样，所不同的是先将牛肉膏蛋白陈培养基，高氏一号培养基，马丁氏培养基融化，在火焰旁注入培养皿，摇匀后制成平板，然后用三 支 1ml无菌吸管分别由104、10.5、106三管土壤稀释液中各吸取0.2m l对号放入已写好稀释度的平板中，用无菌玻璃涂棒在培养基表面轻轻地涂布均匀，然后分别倒置于2 8 c 和 37温箱中培养后，再挑取单个菌落，直至获得纯培养。（三）平板划线分离法图2平板划线操作图1.将各种固体培养基融化后制成平板，并用记号笔标明培养基名称。2.划 线 在 近 火 焰 处，左手拿皿底，右手拿接种环，挑 取 上 述 10的

47、土壤稀释液一环在平板上划线（如 图 2）,划线方法很多，但无论哪种方法划线，其目的都是通过划线将样品在平板上进行稀释，使形成单个菌落。常用划线方法有下列三种:（1）交叉划线法 用接种环以无菌操作挑取土壤悬液一环，先在平板培养基的一边作第一次平行划线3 4 条，再转动培养皿约70。角，并将接种环上的残菌烧掉，待冷却后通过第一次划线部分作第二次平行划线，再用同法通过第二次平行划线部分作第三次平行划线和通过第三次平行划线部分作第四次平行划线（如图3）,划线完毕后，盖上皿盖，倒置于温箱培养。（2）连续划线法用接种环挑取样品在平板培养基上作连续划线（如图l4-3b）,划线完毕后，盖上皿盖，倒置温箱培养。

48、图 3划线分离图左为交叉划线法 右为连续划线法（3）挑 菌 同 稀释平板法，一直到菌分纯为止。A,作业1 在你所实验的三种培养基平板上长出的菌落属于哪个类群？简述它们的菌落形态特征。优秀教案优秀教案2.稀释分离时，为什么要将已融化的琼脂培养基冷却到455(TC左右才能倾入到装有菌液的培养皿内？3.划线分离时，为什么每次都要将接种环上多余的菌体烧掉？划线为何不能重叠？4 .培养时为什么要将培养皿倒置培养？优秀教案优秀教案新乡医学院实验课教案首页课程名称：做金物等 授课教师姓名及职称：速帮 助教一、授课题目实徐七 徵或物裁步的涮炙二、授课对象2005级生物技术专业本科生三、实验教学目标与课时分酉

49、己1、了解显微镜计数的原理；2、学习并掌握使用血球计数板进行微生物直接计数的方法3课时四、授课重点用血球计数板进行微生物直接计数的方法五、授课难点用血球计数板进行微生物直接计数的方法六、授课形式实验课讲授七、授课方法与课前准备授课方法：启发式教学，讨论式教学；课前准备：做预实验，准备示教材料，写教案八、教材与参考文献沈萍、范秀荣、李广武主编。微生物学实验（第三版），高等教育出版社。九、思考题计数时，格线上的菌体如何计数？优秀教案优秀教案十、教研室主任教 研 室 主 任（签 字）课 程 负 责 人（签 字）及课程负责人签年 月 日年 月 日字新乡医学院实验课教案课程名称：微生物学实验 授课教师姓

50、名及职称：康静 助教泉漳向客做金曲猿步的例煲单细胞微生物个体生长时间很短，很快进入繁殖阶段，生长和繁殖难以分开，个体生长很难测定，而且实际应用意义不大。因此，它们的生长不是依据细胞大小，而是以群体的生长作为单细胞微生物生长的指标。测定微生物生长的方法很多，但不外乎是总菌计数和活菌计数两大类。常用计数板作微生物的镜检直接计数，其计得的是死菌和活菌的总和，故称总菌计数法。而平板菌落计数法因能计教学手段和教学组织先点评上次实验作业测样品中的活菌数，故称活菌计数法。一，卖建日的1、了解显微镜计数的原理；2、学习并掌握使用血球计数板进行微生物直接计数的方法二,我 舱 原 理显微镜直接计数法适合于含单细胞