【高中生物】基因工程的基本操作程序第3课时课件 2022-2023学年高二下学期生物人教版选择性必修3.pptx

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1、第三章第三章 基因工程基因工程第第2 2节节 基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序01DNADNA片段的扩增及电泳鉴定片段的扩增及电泳鉴定1 1、DNADNA体外扩增的原理体外扩增的原理 PCR PCR利用了利用了DNADNA热变性的原理，通过调节温度来控制热变性的原理，通过调节温度来控制DNADNA双链的解聚与结合双链的解聚与结合 PCR PCR仪实质上就是一台能够自动调控温度的仪器，一次仪实质上就是一台能够自动调控温度的仪器，一次PCRPCR一般要经历一般要经历3030次循环次循环2 2、DNADNA片段电泳鉴定的原理片段电泳鉴定的原理 DNADNA分子具有可解离的基团，在一定的分

2、子具有可解离的基团，在一定的PHPH下，这些基团可以下，这些基团可以带上正电荷或负电荷。在电场的作用下，这些带电分子会向着带上正电荷或负电荷。在电场的作用下，这些带电分子会向着与它所带电荷相反的电极移动，这个过程就是电泳与它所带电荷相反的电极移动，这个过程就是电泳 在凝胶中在凝胶中DNADNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNADNA分子的大分子的大小和构像等有关小和构像等有关 凝胶中的凝胶中的DNADNA分子通过染色，可以在波长为分子通过染色，可以在波长为300nm300nm的紫外灯的紫外灯下被检测出来下被检测出来3 3、材料仪器、材料仪器PCRPCR仪仪微量离心管

3、微量离心管微量移液器微量移液器电泳装置电泳装置4 4、实验材料、实验材料 4 4种脱氧核苷酸的等量混合液、种脱氧核苷酸的等量混合液、2 2种引物种引物 耐高温的耐高温的DNADNA聚合酶、模板聚合酶、模板DNA DNA 扩增缓冲液、无菌水扩增缓冲液、无菌水 电泳缓冲液、凝胶载样缓冲液电泳缓冲液、凝胶载样缓冲液 琼脂糖、核酸染料等琼脂糖、核酸染料等PCRPCR反应体系的配方反应体系的配方1010倍浓缩的扩增缓冲液倍浓缩的扩增缓冲液5ul5ul20mmol/l 20mmol/l 的的4 4种脱氧核苷酸的等量混合液种脱氧核苷酸的等量混合液1ul1ul20umol/l 20umol/l 的引物的引物I

4、 I2.5ul2.5ul20umol/l 20umol/l 的引物的引物IIII2.5ul2.5ulH H2 2O O28-33ul28-33ul1-5U/ul 1-5U/ul 的的Taq DNATaq DNA聚合酶聚合酶1-2U1-2U模板模板DNA DNA 5-10ul5-10ul总体积总体积50ul50ul5 5、实验步骤、实验步骤加加样样离离心心扩扩增增配配置置琼琼脂脂糖糖溶溶液液制制备备凝凝胶胶电电泳泳加加样样电电泳泳、观观察察6 6、注意事项、注意事项 PCR PCR实验中使用的微量离心管、枪头和蒸馏水等在使用前必须进行高实验中使用的微量离心管、枪头和蒸馏水等在使用前必须进行高压灭

5、菌处理压灭菌处理 缓冲液和酶使用前，将所需试剂从冰箱拿出，放在冰块上缓慢融化缓冲液和酶使用前，将所需试剂从冰箱拿出，放在冰块上缓慢融化 在向微量离心管中添加反应组分时，每吸取一种试剂后，移液器上在向微量离心管中添加反应组分时，每吸取一种试剂后，移液器上的枪头都必须更换的枪头都必须更换 在进行操作时，一定要戴好一次性手套在进行操作时，一定要戴好一次性手套 PCRPCR扩增不能随意加大试剂用量扩增不能随意加大试剂用量你是否成功扩增出你是否成功扩增出DNADNA片段？判断的依据是什么？片段？判断的依据是什么？可以在紫外灯下直接观察到可以在紫外灯下直接观察到DNADNA条带的分布及粗细程度来条带的分布

6、及粗细程度来评价扩增的结果。进行电泳鉴定的结果应该是一条条带，评价扩增的结果。进行电泳鉴定的结果应该是一条条带，该片段大小约为该片段大小约为750bp750bp你进行电泳鉴定的结果是几条条带？如果不止一条条带，请分你进行电泳鉴定的结果是几条条带？如果不止一条条带，请分析产生这个结果的可能原因？析产生这个结果的可能原因？如果扩增不成功，可能的原因有：漏加了如果扩增不成功，可能的原因有：漏加了PCRPCR的反应成分，各的反应成分，各反应成分的用量不当，反应成分的用量不当，PCRPCR程序设置不当等。程序设置不当等。如果扩增结果不如果扩增结果不止一条条带，可能的原因有：引物设计不合理，它们与非目止一条条带，可能的原因有：引物设计不合理，它们与非目的序列有同源性或容易形成二聚体；退火温度过低；的序列有同源性或容易形成二聚体；退火温度过低；DNADNA聚合聚合酶的质量不好等酶的质量不好等课后作业：课后作业：1 1、记背相关知识点、记背相关知识点2 2、课时练大本、课时练大本3 3、课时练小本、课时练小本