(7.7)--4.乳鼠窦房结细胞_心房肌细胞及心室肌细胞动作电位比较.pdf
![资源得分’ title=](/images/score_1.gif)
![资源得分’ title=](/images/score_1.gif)
![资源得分’ title=](/images/score_1.gif)
![资源得分’ title=](/images/score_1.gif)
![资源得分’ title=](/images/score_05.gif)
《(7.7)--4.乳鼠窦房结细胞_心房肌细胞及心室肌细胞动作电位比较.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《(7.7)--4.乳鼠窦房结细胞_心房肌细胞及心室肌细胞动作电位比较.pdf(5页珍藏版)》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。
1、乳鼠窦房结细胞、心房肌细胞及心室肌细胞动作电位比较摘要:目的研究乳鼠窦房结细胞、心房肌细胞及心室肌细胞的动作电位。方法选 只新生 内的 大鼠乳鼠,分离培养窦房结细胞、心房肌细胞和心室肌细胞,运用全细胞膜片钳技术记录动作电位。结果窦房结细胞体积小,细而长,呈长梭形,搏动频率为();心房肌细胞体积亦较小,梭形或三角形,搏动频率为();心室肌细胞体积较大,可伸出伪足并交织成网,呈短梭形、多角形或不规则形,搏动频率为(),种细胞的搏动频率差别均有统计学意义()。种细胞的静息电位分别为(),()及(),差别无统计学意义()。心室肌细胞的 ,和 均较心房肌细胞延长,差别具有统计学意义()。结论种细胞形态各
2、异,窦房结细胞具有自发性搏动,心室肌细胞动作电位时程较心房肌细胞长。关键词:窦房结;肌细胞,心脏;动作电位;电生理学中图分类号:;文献标志码:文章编号:()收稿日期:基金项目:福建省自然科学基金();福建省卫生和计划生育委员会医学创新课题()作者单位:福建省立医院,福建医科大学省立临床医学院 重症医学四科,福州 ;福建省立医院,福建医科大学省立临床医学院 干部特诊一科,福州 ;福建省立医院,福建医科大学省立临床医学院 心内科,福州 ;中国人民解放军总医院 心内科,北京 作者简介:陈茜,女,医师,医学硕士通讯作者:张建成 :心脏实现泵血功能是以心肌的收缩和舒张为基础的,心脏之所以能不停地进行有序
3、的、协调的收缩与舒张交替的活动,归根结底都是由心肌细胞动作电位(,)的规律性发生与扩布引起的。窦房结是心脏正常窦性节律的起搏点,窦房结细胞具有强大的自律性,可以自发、有节律地搏动。心脏的正常搏动由窦房结组织产生,并按传导组织的顺序依次通过结间束抵达房室结及心房肌,后通过希氏束、浦肯野纤维使全部心室肌几乎同时被激动,从而引起心肌细胞有节律地收缩和舒张。已知心肌细胞主要由类细胞组成,包括心室肌细胞(,)、心房肌细胞(,)、窦房结细胞(,)包括移行细胞(细胞)和起搏细胞(细胞)和浦肯野纤维。前二者是工作细胞,具有稳定的静息电位,主要执行收缩功能,在相的静息期无自动去极化功能。而窦房结细胞是自律性细胞
4、,它们组成心内特殊传导系统,这类细胞大多没有稳定的静息电位,在相的最大舒张期可以发生缓慢自动去极化,并可自动产生节律性兴奋。目前,乳鼠和成年大鼠心肌细胞被用于药物干预、缺氧复氧损伤、疾病模型离子通道改变等方面的研究,但成年大鼠心肌细胞分离后无法传代和长时间培养,只能用于即时及短时间研究,限制了干预,而乳鼠心肌细胞由分离培养后获得,数量多,对乳鼠心肌细胞膜 的认识有利于今后进行模型构建、药物干预等较长时间的研究。为此,本研究采用全细胞膜片钳技术,观察乳鼠窦房结细胞、心房肌细胞及心室肌细胞的 ,并进行比较。材料与方法 材料 动物新生 内 大鼠 只,清洁级,雌雄不拘,级 斯贝福(北京)实验动物科技有
5、限公司,许可证号:(京),质量检测单位:中国食品药品检定研究院。试剂与溶液 细胞培养基、磷酸盐缓冲液(美国 公司);胎牛血清(美国 公司);缓冲液(美国 公司);青链霉素混合液(北京索莱宝科技有限公司);(中 国 公 司);,及葡萄糖(美国 公司)。记录单细胞 的细胞外液()配方:,;值用 调至 。记 录 单 细 胞 的 电 极 内 液()配 方:,;值用调至 。方法 乳鼠心肌细胞的急性分离与培养方法()取材:乳鼠体表用 酒精反复浸泡数秒后,呈仰卧位固定四肢于泡沫上,消毒胸腹部皮肤,沿胸骨右缘剪开并去除前胸壁,暴露心脏,置于解剖显微镜下分离心包膜,将心脏向右下方轻轻牵拉,轻移右心耳,看清上腔静
6、脉,于界嵴中部静脉窦侧、前腔静脉根部取 的组织块,同时剪取心房组织及心室中下处,立即置于预冷的不含血清的 培养液;()冲洗:将组织培养皿置于超净台中,用滴管反复轻柔吹打组织,洗去部分残留血液后,再次将组织块移入 液中反复吹打冲洗,直至洗净;()消化:将清洗后的组织块移入消毒过的青霉素小瓶内,用眼科剪将组织块剪碎成 的乳糜状小块,加入体积为组织块 倍 的 的 胰 酶,用 吸 管 轻 柔 吹 打 ,自然沉淀后弃上清液。再加入 的胰酶(体 积 同 上),置 于 水 浴 中 轻 轻 振 荡 ,吹打 ,自然沉淀,吸取上清液,加入等体积的 培养基终止消化,重复消化次,至基本消化成单细胞为止;()过滤、离心
7、:将细胞悬液用 目金属滤网过滤后分装于 的离心管中离心,下离心 ,弃上清液;()接种培养:每根 离心管用含 培养基重悬后,将单细胞悬液接种于 的培养皿内,置于、体积分数为 的 孵箱中孵育 ;()采用差速贴壁法分离技术,因成纤维细胞贴壁快,培养皿中的细胞悬液即为较纯化的心肌细胞,轻轻吸出培养皿内的细胞悬液,分装于个 的培养皿内,放回培养箱继续孵育,每天换液次,以备膜片钳记录用。膜片钳记录方法及刺激参数的设置选取细胞膜完整、表面光滑、横纹清晰的心肌细胞检测。采用全细胞膜片钳记录的方法,将膜片钳放大器(,美国 公司)与计算机连接,应用数模转换器(,美国 公司)采 集 刺 激 信 号 及 电 压 输
8、入 信 号,此 过 程 由 软件控制调节。玻璃毛坯经微电极拉制仪(,日本 公司)经两步法拉制成电阻为 的微电极,常规安装电极并调整方向,调节三维微操纵器,使微电极头端进入细胞外液,在显微镜下观察电极的位置,缓慢移动,使 其 与 细 胞 膜 进 行 封 接,电 极 电 阻 上 升 时停止移动,通过注射器给电极施加负压,使封接电阻达 或以上,吸破细胞膜成为全细胞记录模式,信号经截止频率为 的四阶贝塞尔低通滤波器,采样频率为 。将膜片钳设定为电流钳模式,记录窦房结细胞 时不给予刺激,记录心房肌及心室肌细胞膜 时给予 、的外向电流,诱导并记录心室肌单细胞。统 计 学 处 理数 据 以表 示,采 用 进
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 7.7 乳鼠窦房结 细胞 心房 心室 动作电位 比较
![提示](https://www.taowenge.com/images/bang_tan.gif)
限制150内